王 慶，曾憲軍，樊志紅，何佳楠，康樺華，何叔年，陳 杰，彭新宇

（1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，廣東 廣州 510225；2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物衛(wèi)生研究所/廣東省畜禽疫病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸用藥物與診斷技術(shù)廣東科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站/廣東省中獸藥工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510640；3.廣州市江豐實(shí)業(yè)股份有限公司，廣東 廣州 510510；4.廣州市江豐實(shí)業(yè)翁源有限公司，廣東 韶關(guān) 512600）

【研究意義】雞球蟲(chóng)病是由一種或多種艾美爾球蟲(chóng)（Eimeriaspp.）寄生于雞腸道引起的寄生蟲(chóng)病，是集約化、規(guī)?；B(yǎng)雞場(chǎng)常見(jiàn)的疾病之一［1］。其致病機(jī)理主要是球蟲(chóng)寄生在雞腸道粘膜內(nèi)，破壞雞腸道粘膜的完整性，引起腸道出血，造成腸道消化吸收機(jī)能障礙，而且腸道粘膜損傷致使其他條件性致病菌感染幾率提高，易繼發(fā)其他細(xì)菌感染［2-4］。該病一般暴發(fā)于3～6 周齡雛雞，死亡率可高達(dá)80%，幸存下來(lái)的雞只生產(chǎn)性能也會(huì)嚴(yán)重受損［1］。據(jù)估計(jì)，全世界養(yǎng)雞業(yè)每年因雞球蟲(chóng)損失高達(dá)20 億美元［5］。我國(guó)是世界第二養(yǎng)雞大國(guó)，雞肉產(chǎn)量約占世界總量的12%。因此，有效防治雞球蟲(chóng)病發(fā)展對(duì)雞養(yǎng)殖業(yè)具有重大意義。

【前人研究進(jìn)展】目前控制雞球蟲(chóng)病的主要手段，一是在飼料中添加抗球蟲(chóng)藥，二是幼齡雞口服活卵囊疫苗［6-7］。常用球蟲(chóng)藥大致包括兩類，一類為聚醚類離子載體抗生素，如莫能霉素、鹽霉素、那拉霉素、森杜拉霉素、馬杜拉霉素、拉沙洛霉素和海南霉素等；另一類為化學(xué)合成類抗球蟲(chóng)藥，如克球粉、尼卡巴嗪、氨丙啉、地克珠利、球痢靈等。然而隨著抗球蟲(chóng)藥的廣泛應(yīng)用，球蟲(chóng)耐藥性也隨之出現(xiàn)［7-9］。為延緩耐藥性的產(chǎn)生，常采用在肉雞不同批次間或不同生長(zhǎng)階段使用作用機(jī)制不同的藥物（即輪換用藥或穿梭用藥），但是球蟲(chóng)耐藥性發(fā)展形勢(shì)仍未得到緩解［9-10］。雞球蟲(chóng)活卵囊疫苗免疫原理是雞低水平多次感染球蟲(chóng)產(chǎn)生免疫力，即口服疫苗球蟲(chóng)在雞體內(nèi)繁殖產(chǎn)生蟲(chóng)卵排出體外，之后雞再次從墊料中攝取孢子化蟲(chóng)卵而再次感染，如此循環(huán)2～3 次，使雞對(duì)同類球蟲(chóng)產(chǎn)生免疫力［7］。但由于球蟲(chóng)免疫為帶蟲(chóng)免疫，使用球蟲(chóng)疫苗往往會(huì)降低雞群生產(chǎn)性能，造成飼料消耗增加，對(duì)經(jīng)濟(jì)效益造成消極影響［8］，而且目前仍不能準(zhǔn)確控制球蟲(chóng)疫苗接種后雞群從墊料攝入孢子化卵囊的數(shù)量，致使有部分雞攝入卵囊過(guò)多出現(xiàn)拉血等癥狀；此外，使用球蟲(chóng)卵囊疫苗也會(huì)增加雞產(chǎn)氣莢膜梭菌感染的幾率，促使壞死性腸炎的發(fā)生［11-12］。由于球蟲(chóng)耐藥性普遍且球蟲(chóng)疫苗免疫技術(shù)仍有待完善，因此目前防治雞球蟲(chóng)病仍面臨巨大挑戰(zhàn)。為了在耐藥情況嚴(yán)峻的形勢(shì)下有效控制雞球蟲(chóng)病，同時(shí)考慮到食品安全因素，人們不再只是依賴抗球蟲(chóng)藥物，而是尋求更加安全有效的方法。目前已有很多養(yǎng)殖場(chǎng)采用抗球蟲(chóng)藥和球蟲(chóng)疫苗聯(lián)合應(yīng)用的方法以充分發(fā)揮球蟲(chóng)疫苗的優(yōu)勢(shì)、延長(zhǎng)抗球蟲(chóng)藥的有效使用期。

【本研究切入點(diǎn)】目前球蟲(chóng)疫苗和抗球蟲(chóng)藥物的聯(lián)合使用方式有兩種，一種是穿梭使用方案（也稱生物穿梭方案），即同一批養(yǎng)殖雞群，在雛雞階段接種球蟲(chóng)疫苗，之后使用抗球蟲(chóng)藥；另一種為輪換使用方案，即一批或多批雞群養(yǎng)殖均采用球蟲(chóng)疫苗控制球蟲(chóng)病，之后一批雞再使用抗球蟲(chóng)藥控制球蟲(chóng)病。研究表明，采用輪換使用方案，對(duì)恢復(fù)球蟲(chóng)藥物敏感性產(chǎn)生積極影響并取得良好經(jīng)濟(jì)效益［13-14］。而生物穿梭方案國(guó)內(nèi)外均有使用，但其對(duì)球蟲(chóng)耐藥性的相關(guān)研究報(bào)道很少。為探討生物穿梭方案對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)中球蟲(chóng)耐藥性的影響，本研究從前期使用球蟲(chóng)疫苗、中后期使用預(yù)防抗球蟲(chóng)藥（即采用生物穿梭方案）的肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)采集糞便，分離球蟲(chóng)蟲(chóng)株，測(cè)試其耐藥性，同時(shí)在只使用抗球蟲(chóng)藥物預(yù)防的雞場(chǎng)分離球蟲(chóng)進(jìn)行對(duì)比測(cè)試?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】通過(guò)對(duì)比分析僅使用球蟲(chóng)藥物雞場(chǎng)內(nèi)分離得到的球蟲(chóng)和使用生物穿梭方案雞場(chǎng)分離得到的球蟲(chóng)的耐藥性，以評(píng)價(jià)生物穿梭方案對(duì)球蟲(chóng)的藥物敏感性恢復(fù)是否能夠產(chǎn)生積極作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試蟲(chóng)株 供試球蟲(chóng)蟲(chóng)株于2021 年4 月分離自廣州市花都區(qū)和清遠(yuǎn)英德市。兩地所有采樣雞場(chǎng)各5 個(gè)，均使用廣州某飼料廠同種飼料，飼養(yǎng)同一品種麻黃肉雞?；ǘ疾蓸与u場(chǎng)均在4 日齡雛雞的飲水中添加1 頭份某品牌球蟲(chóng)活疫苗，30日齡后飼料中添加抗球蟲(chóng)藥，至采樣時(shí)為止，雞場(chǎng)均已連續(xù)采用上述生物穿梭方案12 個(gè)月。而英德采樣雞場(chǎng)長(zhǎng)期在飼料中僅添加抗球蟲(chóng)藥預(yù)防球蟲(chóng)病，未曾使用過(guò)球蟲(chóng)疫苗。

雛雞30 日齡時(shí)對(duì)每個(gè)雞場(chǎng)采集雞糞，用飽和鹽水漂浮法分離蟲(chóng)卵，孢子化后用單卵囊法分離。每個(gè)雞場(chǎng)分別得到2 個(gè)柔嫩艾美爾球蟲(chóng)蟲(chóng)株，存于2.5%重鉻酸鉀溶液中，置于4 ℃保存。攻蟲(chóng)前將同一來(lái)源地分離所得球蟲(chóng)分別等比例混合，分別標(biāo)記為花都蟲(chóng)株和英德蟲(chóng)株。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 供試肉雞為1 日齡麻黃肉雞公雞苗，購(gòu)自廣州市江豐實(shí)業(yè)股份有限公司，飼養(yǎng)在嚴(yán)格消毒無(wú)球蟲(chóng)的動(dòng)物房和金屬籠內(nèi)，自由飲水，自由采食。

1.1.3 供試藥物 供試藥物6 種：25%尼卡巴嗪預(yù)混劑（江西新鼎科技有限公司）、25%二硝托胺預(yù)混劑（浙江榮耀生物科技股份有限公司）、25%氯羥吡啶預(yù)混劑（廣東省前沿動(dòng)物保健有限公司）、1%馬杜霉素預(yù)混劑（山東齊發(fā)藥業(yè)有限公司）、尼卡巴嗪馬杜霉素合劑（25%尼卡巴嗪預(yù)混劑和1%馬杜霉素預(yù)混劑1 ∶1 混合），拌料用量均為500 g/t；15%甲基鹽霉素預(yù)混劑〔禮藍(lán)（上海）動(dòng)物保健有限公司〕，拌料用量為600 g/t。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)處理 雛雞18 日齡時(shí)，逐羽稱重，剔除體質(zhì)量過(guò)大、過(guò)小、體弱雛雞，隨機(jī)分組，各處理10 羽。試驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照、花都蟲(chóng)株攻蟲(chóng)對(duì)照、英德蟲(chóng)株攻蟲(chóng)對(duì)照、花都蟲(chóng)株攻蟲(chóng)用藥處理、英德蟲(chóng)株攻蟲(chóng)用藥處理，花都、英德蟲(chóng)株攻蟲(chóng)用藥處理各6 個(gè)，各處理飼料中分別添加上述6 種藥物。12 個(gè)攻蟲(chóng)用藥處理分別從18 日齡開(kāi)始給予相應(yīng)抗球蟲(chóng)藥物8 d。除空白對(duì)照外，其余各處理肉雞于19 日齡口服接種5×104個(gè)球蟲(chóng)孢子化卵囊。每天觀察并記錄各處理肉雞的飲水、采食、糞便以及死亡等情況，及時(shí)剖解死亡雞，分析死亡原因。攻蟲(chóng)7 d 后，將雞只脫頸處死，稱重，剖檢，觀察并記錄盲腸病變，收集盲腸內(nèi)容物并刮取盲腸粘膜。

1.2.2 病理顯微觀察 盲腸樣本經(jīng)4%多聚甲醛固定24 h 后，經(jīng)修剪、脫水、包埋、切片、染色、封片等程序制作切片。采用顯微鏡觀察切片，在不同倍數(shù)下觀察組織病變情況。

1.2.3 球蟲(chóng)耐藥性判定與評(píng)價(jià)［15］以抗球蟲(chóng)指數(shù)（Anticoccidial Index,ACI）、最適抗球蟲(chóng)活性百分比（Percent of Optimum Anticoccidial Activity，POAA）、病變記分減少率（Reduction of Lesion Scores，RLS）、相對(duì)卵囊產(chǎn)量（Relative Oocyst Productivity，ROP）4 項(xiàng)指標(biāo)綜合判定球蟲(chóng)耐藥性。

（1）ACI=（存活率+增重率）-（病變值+卵囊值）。ACI ≥180 判為優(yōu)秀，160 ＜ACI ＜179判為良好（記作-），120 ＜ACI ＜159 判為輕度或中度耐藥（記作±），ACI ＜120 判為無(wú)效、嚴(yán)重耐藥（記作+）。

病變值：兩側(cè)盲腸病變不一致時(shí)，以病變嚴(yán)重的一側(cè)記分。0 分：無(wú)明顯病變；1 分：盲腸壁有少量散在瘀點(diǎn)，腸壁不增厚，內(nèi)容物正常；2 分：病變數(shù)量較多，盲腸內(nèi)容物明顯帶血，盲腸腸壁稍增厚，內(nèi)容物正常；3 分：盲腸因充滿大量血液或腸芯而腫大，腸芯內(nèi)含有糞便；4 分：雞只死亡。

卵囊值：收集盲腸內(nèi)容物并刮取盲腸粘膜，加入1%胰蛋白酶，37 ℃消化2 h 后用血小板計(jì)數(shù)法計(jì)算每只雞盲腸勻漿內(nèi)的卵囊百萬(wàn)數(shù)，計(jì)數(shù)結(jié)果＜0.1、0.1～1、2～5、6～10、＞11 對(duì)應(yīng)的卵囊值分別記作0、1、2、3、4。

（2）POAA=（攻蟲(chóng)用藥處理GRS-攻蟲(chóng)對(duì)照GRS）/（空白對(duì)照GRS-攻蟲(chóng)對(duì)照GRS），GRS=籠末重/籠初重。POAA≤50%判為具有耐藥性（記作+），＞50%為敏感（記作-）。

（3）RLS（%）=（攻蟲(chóng)對(duì)照的平均病變值-攻蟲(chóng)用藥處理的平均病變值）/攻蟲(chóng)對(duì)照的平均病變值×100。RLS ＜50%判為具有耐藥性（記作+），≥50%為完全敏感（記作-）。

（4）ROP（%）=攻蟲(chóng)用藥處理排出的卵囊總數(shù)/攻蟲(chóng)對(duì)照的卵囊總數(shù)×100。ROP ≥15%判定具有耐藥性（記作+），＜15%為敏感（記作-）。

（5）耐藥性綜合評(píng)價(jià)：通過(guò)ACI、POAA、RLS、ROP 指數(shù)對(duì)球蟲(chóng)耐藥性進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)：++++/+++，判定球蟲(chóng)嚴(yán)重耐藥；++，判定球蟲(chóng)中度耐藥；+，判定球蟲(chóng)輕度耐藥。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀和剖檢病變

花都蟲(chóng)株和英德蟲(chóng)株的攻蟲(chóng)對(duì)照肉雞均在感染4～5 d 后排稀便和血便，剖檢病死雞可見(jiàn)盲腸腫大、出血，盲腸內(nèi)血液與腸內(nèi)容物混合凝結(jié)，或呈粘稠狀，或呈干酪樣物質(zhì)凝塊（圖1）；其他各攻蟲(chóng)用藥處理肉雞的盲腸呈現(xiàn)不同程度病變，粘膜出血，腸壁增厚，嚴(yán)重者盲腸明顯腫大、腸壁密布出血點(diǎn)，腸內(nèi)容物與血液混合凝結(jié)。

圖1 死亡肉雞的盲腸病征Fig.1 Cecum lesion characteristics of dead broilers

2.2 盲腸組織病變情況

與空白對(duì)照肉雞的正常盲腸組織切片（圖2A）對(duì)比可見(jiàn)，花都蟲(chóng)株攻蟲(chóng)對(duì)照（圖2B）和英德蟲(chóng)株攻蟲(chóng)對(duì)照（圖2C）肉雞的盲腸組織潰瘍，累及粘膜下層；盲腸粘膜層大量上皮及腸腺喪失，結(jié)締組織增生，伴有較多炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，包括淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞等。粘膜層可見(jiàn)較多卵囊，廣泛存在于腸腺上皮、腺腔以及結(jié)締組織內(nèi)，多處有蟲(chóng)卵透過(guò)粘膜肌層浸潤(rùn)至粘膜下層。粘膜下層有較多淋巴組織和結(jié)締組織增生，局部水腫，致使粘膜下層增寬。

圖2 空白對(duì)照（A）、花都蟲(chóng)株攻蟲(chóng)對(duì)照（B）、英德蟲(chóng)株攻蟲(chóng)對(duì)照（C）肉雞的盲腸組織切片F(xiàn)ig.2 Caecum tissue sections of broilers in blank control (A),Huadu isolates challenge control(B)and Yingde isolates challenge control(C)

2.3 6 種藥物對(duì)不同來(lái)源蟲(chóng)株的ACI 比較

試驗(yàn)各處理的存活率、增重率、病變值、卵囊值以及ACI 指數(shù)值結(jié)果見(jiàn)表1。對(duì)花都蟲(chóng)株，尼卡巴嗪、氯羥吡啶、馬杜霉素3 種藥物均表現(xiàn)為ACI＜120，其他藥物為120＜ACI＜159，據(jù)此判斷花都蟲(chóng)株對(duì)尼卡巴嗪、氯羥吡啶、馬杜霉素嚴(yán)重耐藥，對(duì)其他3 種藥物中度耐藥。而英德蟲(chóng)株對(duì)6 種藥物均表現(xiàn)為120＜ACI＜159，判斷英德蟲(chóng)株對(duì)供試所有藥物均中度耐藥。

表1 6 種藥物對(duì)花都、英德蟲(chóng)株的ACI 比較Table 1 Comparison of ACI of six drugs to Huadu and Yingde isolates

2.4 6 種藥物對(duì)不同來(lái)源蟲(chóng)株的POAA 比較

試驗(yàn)各處理的體重變化以及POAA 結(jié)果見(jiàn)表2。對(duì)花都蟲(chóng)株，僅尼卡巴嗪馬杜霉素合劑的POAA＞50%、為65.95%，其他藥物的POAA＜50%，判斷花都蟲(chóng)株僅對(duì)尼卡巴嗪馬杜霉素合劑表現(xiàn)敏感，對(duì)其他5 種藥物表現(xiàn)耐藥。英德蟲(chóng)株對(duì)6 種藥物均表現(xiàn)為POAA＞50%，據(jù)此判斷對(duì)供試所有藥物均表現(xiàn)敏感，其中對(duì)二硝托胺、甲基鹽霉素的POAA＞75%。

表2 6 種藥物對(duì)花都、英德蟲(chóng)株的POAA 比較Table 2 Comparison of POAA of six drugs to Huadu and Yingde isolates

2.5 6 種藥物對(duì)不同來(lái)源蟲(chóng)株的RLS 和ROP 比較

試驗(yàn)各處理的RLS 值和ROP 值結(jié)果見(jiàn)表3?；ǘ?、英德蟲(chóng)株對(duì)6 種藥物均表現(xiàn)出RLS＜50%、ROP＞15%，據(jù)此判斷花都蟲(chóng)株和英德蟲(chóng)株對(duì)供試所有藥物均表現(xiàn)耐藥，且花都蟲(chóng)株球蟲(chóng)卵囊產(chǎn)量基本不受抗球蟲(chóng)藥物影響。

表3 6 種藥物對(duì)花都、英德蟲(chóng)株的RLS 和ROP 比較Table 3 Comparison of RLS and ROP of six drugs to Huadu and Yingde isolates

2.6 不同來(lái)源蟲(chóng)株對(duì)6 種藥物的耐藥性綜合評(píng)價(jià)

從ACI、POAA、RLS、ROP 4 個(gè)耐藥性指標(biāo)（表4）綜合判斷，花都蟲(chóng)株對(duì)尼卡巴嗪馬杜霉素合劑中度耐藥，對(duì)其余5 種藥物嚴(yán)重耐藥；英德蟲(chóng)株對(duì)供試的6 種藥物均表現(xiàn)中度耐藥；兩個(gè)來(lái)源蟲(chóng)株均表現(xiàn)出多重耐藥。

表4 花都、英德蟲(chóng)株對(duì)6 種藥物的耐藥性綜合評(píng)價(jià)Table 4 Comprehensive evaluation of resistances of Huadu and Yingde isolates to six drugs

3 討論

評(píng)價(jià)雞球蟲(chóng)耐藥性常用的指標(biāo)有抗球蟲(chóng)指數(shù)（ACI）、最適抗球蟲(chóng)活性百分比（POAA）、病變計(jì)分減少率（RLS）和相對(duì)卵囊產(chǎn)量（ROP）等，這4 個(gè)指標(biāo)從不同側(cè)面反映球蟲(chóng)耐藥性。其中ACI 較為均衡地從存活率、增重、卵囊產(chǎn)量、病變等4 個(gè)方面反映抗球蟲(chóng)藥的效果，而POAA、RLS 和ROP 則分別從增重、病變和卵囊產(chǎn)量反映球蟲(chóng)耐藥性。試驗(yàn)綜合4 個(gè)指標(biāo)對(duì)2 個(gè)來(lái)源的柔嫩艾美爾球蟲(chóng)蟲(chóng)株的耐藥性進(jìn)行判斷，可見(jiàn)花都、英德蟲(chóng)株對(duì)常用6 種藥物均表現(xiàn)出明顯的耐藥性且表現(xiàn)為多重耐藥，這與國(guó)內(nèi)外關(guān)于雞球蟲(chóng)耐藥性形勢(shì)報(bào)道一致［16-23］。試驗(yàn)結(jié)果反映了雞球蟲(chóng)耐藥性的嚴(yán)重性，抗球蟲(chóng)藥在控制球蟲(chóng)病發(fā)展的應(yīng)用中處于嚴(yán)峻困境。

本研究球蟲(chóng)蟲(chóng)株樣本來(lái)源的兩地雞場(chǎng)所用的肉雞品種、飼料均相同。其中花都5 個(gè)雞場(chǎng)采用了球蟲(chóng)活卵囊疫苗和抗球蟲(chóng)藥物穿梭方案控制球蟲(chóng)病已有1 年，而英德5 個(gè)雞場(chǎng)長(zhǎng)期只使用抗球蟲(chóng)藥預(yù)防球蟲(chóng)病，從未使用過(guò)球蟲(chóng)疫苗。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，花都蟲(chóng)株和英德蟲(chóng)株均表現(xiàn)為多重耐藥性，這提示生物穿梭方案并不能明顯改善雞場(chǎng)球蟲(chóng)的耐藥性。究其原因，在于球蟲(chóng)活卵囊疫苗和抗球蟲(chóng)藥物穿梭使用過(guò)程中，雞群對(duì)球蟲(chóng)產(chǎn)生抗體從而控制球蟲(chóng)病的發(fā)展，但野生蟲(chóng)株仍在環(huán)境中存活，生長(zhǎng)后期抗球蟲(chóng)藥物的配合使用在消除疫苗對(duì)雞體造成的亞感染狀態(tài)方面起到一定作用，但促進(jìn)生長(zhǎng)的同時(shí)也使得環(huán)境中的球蟲(chóng)蟲(chóng)株再次處于抗球蟲(chóng)藥物的篩選壓力下，不利于雞場(chǎng)內(nèi)球蟲(chóng)蟲(chóng)株藥物敏感性的恢復(fù)。

而有關(guān)球蟲(chóng)活卵囊疫苗和抗球蟲(chóng)藥物輪換使用方案的效果研究表明，輪換使用方案可以改善球蟲(chóng)耐藥性［14,24］。Vereecken 等［24］對(duì)某雞場(chǎng)接種雞球蟲(chóng)疫苗前后分離得到的球蟲(chóng)蟲(chóng)株進(jìn)行藥物敏感性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)接種疫苗后分離所得球蟲(chóng)蟲(chóng)株對(duì)藥物敏感性有所恢復(fù)。通過(guò)對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，輪換方案中使用球蟲(chóng)疫苗的時(shí)間比穿梭方案更長(zhǎng)，可更有效地將野生耐藥蟲(chóng)株占比降到更低。此外，有研究表明采用輪換方案時(shí)，在一批或幾批雞使用疫苗后，出欄時(shí)需要保留一部分墊料，從而使疫苗蟲(chóng)株在環(huán)境中延續(xù)到下一批雞養(yǎng)殖周期，保持敏感蟲(chóng)株在環(huán)境中的種群數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì)。Chapman等［13］提出利用球蟲(chóng)活疫苗與藥物輪換使用，有可能恢復(fù)場(chǎng)地球蟲(chóng)的敏感性，并提出每年三輪換的控制計(jì)劃，即4 個(gè)月采用藥物控制球蟲(chóng)方法養(yǎng)2 批雞，徹底消毒清場(chǎng)；接著4 個(gè)月采用球蟲(chóng)疫苗養(yǎng)2 批雞；再接著4 個(gè)月采用藥物養(yǎng)2 批雞；再4 個(gè)月采用藥物養(yǎng)二批雞，徹底消毒清場(chǎng)……如此循環(huán)，其中，藥物轉(zhuǎn)疫苗前要徹底清欄，而疫苗轉(zhuǎn)藥物前不要徹底清欄。Snyder 等［18］也發(fā)現(xiàn)每批雞出欄后清除墊料會(huì)限制疫苗蟲(chóng)株在場(chǎng)地中形成優(yōu)勢(shì)，也縮短了藥物敏感性提高的持續(xù)時(shí)間。

4 結(jié)論

本研究分離得到的不同來(lái)源雞柔嫩艾美爾球蟲(chóng)蟲(chóng)株，均對(duì)尼卡巴嗪、二硝托胺、氯羥吡啶、馬杜霉素、甲基鹽霉素、尼卡巴嗪馬杜霉素合劑6 種藥物表現(xiàn)出中度到嚴(yán)重耐藥，可見(jiàn)目前雞場(chǎng)的球蟲(chóng)耐藥性仍然很嚴(yán)重，且呈現(xiàn)多重耐藥性。與僅使用抗球蟲(chóng)藥物防制方案的雞場(chǎng)相比，采用球蟲(chóng)疫苗和抗球蟲(chóng)藥穿梭方案雞場(chǎng)分離得到的柔嫩艾美爾球蟲(chóng)對(duì)常見(jiàn)的6 種抗球蟲(chóng)藥仍然表現(xiàn)中度耐藥，蟲(chóng)株對(duì)藥物敏感性未見(jiàn)明顯恢復(fù)，提示疫苗與藥物穿梭使用對(duì)恢復(fù)抗球蟲(chóng)藥物敏感性作用不明顯。