譚婷心　林　洪　羅琨熾　李釗文　

三七藥材提取過程對(duì)雜質(zhì)的控制

譚婷心林洪羅琨熾李釗文

（廣西梧州制藥（集團(tuán)）股份有限公司，廣西 梧州 543000）

目的：探索三七藥材提取過程中對(duì)雜質(zhì)控制的工藝研究。方法：通過控制淀粉等雜質(zhì)的含量，降低后工序的處理難度，提高生產(chǎn)效率，提升中間體產(chǎn)品質(zhì)量。結(jié)果：通過調(diào)整三七藥材提取過程當(dāng)中的提取方法、提取溫度、提取時(shí)間，能確定最佳提取方法，并對(duì)鞣酸、纖維、黃酮類及氨基酸類等雜質(zhì)含量的降低起重要作用，提升三七總皂苷含量。

三七；提取；雜質(zhì)控制；三七總皂苷

引言

三七藥材主要為五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen的干燥根和根莖，具有散瘀止血、消腫定痛[1]等作用。用于咯血、吐血、衄血、便血、崩漏、外傷出血、胸腹刺痛、跌撲腫痛。三七藥材主要活性成分有皂苷、黃酮、氨基酸等，不同的活性成分具有不同的藥理作用[2]。其中三七總皂苷的主要藥理作用為活血祛瘀、通脈活絡(luò)，用于治療瘀血阻絡(luò)、中風(fēng)偏癱、胸痹心痛及視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞癥[3]等。三七總皂苷主要來源于三七主根，主成分分別是三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd[4]。

目前三七藥材常用的提取方法有旋轉(zhuǎn)提取法、超聲提取法、回流提取法、水浸提法等[5]，其中旋轉(zhuǎn)提取法在提取過程當(dāng)中物料與溶媒能接觸充分，能耗小，提取率高；回流提取法主要特點(diǎn)是在提取濃縮過程中，能始終保持藥材與溶劑中含可溶物質(zhì)高梯度的濃度，使有效成分快速析出，提高提取率[6]。

本文主要選取回流提取法以及旋轉(zhuǎn)提取法來研究不同的提取條件及工藝參數(shù)，達(dá)到控制三七藥材提取物中淀粉、鞣酸、纖維、黃酮類及氨基酸等雜質(zhì)含量目的，確定最佳提取方法。本文的提取條件及工藝參數(shù)均通過含量、能耗、效率等進(jìn)行比對(duì)，其中三七藥材提取中，淀粉作為典型存在的非藥效成分幾乎沒有藥理活性，在雜質(zhì)中占比最高，留存在藥液中對(duì)三七總皂苷的含量影響最大，因此選取本提取物中的淀粉含量代表雜質(zhì)總體水平，并以此作為三七藥材提取研究的關(guān)鍵思路和方向。

1　材料與方法

1.1　材料與儀器

三七藥材（文山產(chǎn)地）；三七總皂苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所；批號(hào)170409-201904）；水浴鍋（RE-52AA），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（R-300）；乙醇；淀粉含量檢測(cè)試劑盒（北京索萊寶科技，批號(hào)：20190921）；可見分光光度計(jì)（UV2310II）；Waters高效液相色譜儀（e2695/UV2998）。

1.2　方法與結(jié)果

1.2.1回流提取法

1.2.1.1 條件1 不同固液比方法

（1）稱取文山三七藥材500 g，通過粉碎機(jī)制成大約80目的細(xì)粉，加6倍藥材量的80%乙醇3 L達(dá)到固液比為1∶ 6，浸泡4 h后，再放置水浴鍋中加熱回流1 h，溫度為80℃，重復(fù)回流2次，合并濾液，得三七藥材提取液①。

（2）稱取文山三七藥材500 g，通過粉碎機(jī)制成大約80目的細(xì)粉，加8倍藥材量的80%乙醇4 L達(dá)到固液比為1∶8，浸泡4 h后，再放置水浴鍋中加熱回流1 h，溫度為80℃，重復(fù)回流2次，合并濾液，得三七藥材提取液②。

（3）稱取文山三七藥材500 g，通過粉碎機(jī)制成大約80目的細(xì)粉，加10倍藥材量的80%乙醇5 L達(dá)到固液比為1∶10，浸泡4h后，再放置水浴鍋中加熱回流1 h，溫度為80℃，重復(fù)回流2次，合并濾液，得三七藥材提取液③。

1.2.1.2 條件1 不同固液比結(jié)果

（1）含量檢驗(yàn)方法。

按三七總皂苷含量測(cè)定方法測(cè)得下述結(jié)果：

表1 條件1含量結(jié)果

結(jié)果如表1所示：固液比1∶6時(shí)，三七總皂苷含量較低，而固液比1∶8與固液比1∶10，三七總皂苷含量差別不大，由此可見，固液比1∶8時(shí)已能提取充分，能耗更少。

（2）淀粉檢驗(yàn)方法（淀粉含量檢測(cè)試劑盒）。

按淀粉含量測(cè)試盒說明書使用，對(duì)上述提取物的淀粉含量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表2所示。

表2 條件2淀粉含量結(jié)果

結(jié)果顯示：固液比1∶8與固液比1∶10的淀粉含量相差不大時(shí)，而固液比為1∶6時(shí)淀粉含量相對(duì)較高。結(jié)合表2含量數(shù)據(jù)結(jié)果，暫時(shí)認(rèn)為固液比1∶8為最優(yōu)固液比，后續(xù)試驗(yàn)按固液比1∶8進(jìn)行。

1.2.1.3 條件2 不同提取溫度

（1）稱取文山三七藥材500 g，通過粉碎機(jī)制成大約80目的細(xì)粉，加6倍藥材量的80%乙醇3 L達(dá)到固液比為1∶6，浸泡4小時(shí)后，再放置水浴鍋中加熱回流1小時(shí)，溫度為60℃，重復(fù)回流2次，合并濾液，得三七藥材提取液④。

（2）稱取文山三七藥材500 g，通過粉碎機(jī)制成大約80目的細(xì)粉，加6倍藥材量的80%乙醇3 L達(dá)到固液比為1∶6，浸泡4小時(shí)后，再放置水浴鍋中加熱回流1小時(shí)，溫度為70℃，重復(fù)回流2次，合并濾液，，得三七藥材提取液⑤。

（3）稱取文山三七藥材500 g，通過粉碎機(jī)制成大約80目的細(xì)粉，加6倍藥材量的80%乙醇3 L達(dá)到固液比為1∶6，浸泡4 h后，再放置水浴鍋中加熱回流1 h，溫度為80℃，重復(fù)回流2次，合并濾液，得三七藥材提取液⑥。

1.2.1.4 條件2 不同提取溫度結(jié)果

（1）檢驗(yàn)方法同1.2.1.2中的第一種方法。

表3 條件2含量結(jié)果

結(jié)果如表3所示：當(dāng)提取溫度為60℃時(shí)，三七總皂苷含量最低，而提取溫度為80℃時(shí)，三七總皂苷含量最高。

（2）檢驗(yàn)方法同1.2.1.2中的第二種方法。

表4 條件2淀粉含量結(jié)果

結(jié)果如表4所示：當(dāng)溫度越高，對(duì)三七提取液中淀粉的破壞性越強(qiáng)，結(jié)合表4含量數(shù)據(jù)，可暫時(shí)認(rèn)為提取溫度80℃為最佳提取溫度。

1.2.1.5 條件3 不同提取時(shí)間

（1）稱取文山三七藥材500 g，通過粉碎機(jī)制成大約80目的細(xì)粉，加6倍藥材量的80%乙醇3 L達(dá)到固液比為1∶6，浸泡4 h后，再放置水浴鍋中加熱回流1 h，溫度為80℃，重復(fù)回流2次，合并濾液，得三七藥材提取液⑦。

（2）稱取文山三七藥材500 g，通過粉碎機(jī)制成大約80目的細(xì)粉，加6倍藥材量的80%乙醇3 L達(dá)到固液比為1∶6，浸泡4 h后，再放置水浴鍋中加熱回流2 h，溫度為80℃，重復(fù)回流2次，合并濾液，得三七藥材提取液⑧。

（3）稱取文山三七藥材500 g，通過粉碎機(jī)制成大約80目的細(xì)粉，加6倍藥材量的80%乙醇3 L達(dá)到固液比為1∶6，浸泡4 h后，再放置水浴鍋中加熱回流3 h，溫度為80℃，重復(fù)回流2次，合并濾液，得三七藥材提取液⑨。

1.2.1.6 條件3 不同提取溫度結(jié)果

（1）檢驗(yàn)方法同1.2.1.2中的第一種方法。

表5 條件3含量結(jié)果

結(jié)果如表5所示：當(dāng)提取時(shí)間為3 h，三七總皂苷含量最高，但從數(shù)據(jù)上看，提取時(shí)間2 h，與提取時(shí)間3 h的三七總皂苷含量差別不大，3 h的提取含量?jī)H比2小時(shí)的高2.06%，而能耗多一倍。

（2）檢驗(yàn)方法同1.2.1.2中的第二種方法。

表6 條件3淀粉結(jié)果

結(jié)果如表6所示：隨著提取時(shí)間的增長(zhǎng)，淀粉含量下降，但比對(duì)提取2 h與提取3 h的淀粉含量，只降低不到10%，結(jié)合表6含量結(jié)果，暫時(shí)可認(rèn)為提取時(shí)間每次2 h，重復(fù)2次為最佳提取時(shí)間。

1.2.2旋轉(zhuǎn)提取法

參數(shù)的選擇與方法均與回流提取法一致，旋轉(zhuǎn)提取法選擇蒸發(fā)儀。

其中條件1（提取溫度為80℃；提取時(shí)間為：每次1 h，重復(fù)2次）結(jié)果如下。

表7 條件1含量結(jié)果

表8 條件1淀粉含量結(jié)果

結(jié)果如表7所示：當(dāng)固液比為1∶8時(shí)，三七總皂苷含量為最高；結(jié)果如表8所示：固液比條件1∶8與1∶10的淀粉含量差別不大，暫時(shí)可認(rèn)為固液比1∶8為最優(yōu)。

其中條件2（固液比為1∶8，提取時(shí)間為重復(fù)2次，每次1小時(shí)）結(jié)果如下。

表9 條件2含量結(jié)果

表10 條件2淀粉含量結(jié)果

結(jié)果為表9所示：當(dāng)提取溫度越高，三七總皂苷含量越高，但在旋轉(zhuǎn)提取法中，提取溫度70℃與提取溫度80℃的三七總皂苷含量差別不大，以節(jié)約能耗的角度，選擇提取溫度70℃更為合理；再比較淀粉含量，結(jié)果見表10：當(dāng)提取溫度升高時(shí)，淀粉含量下降，但是隨著溫度的升高，下降的比例降低，按此推斷，淀粉含量再隨著后續(xù)溫度的升高，可能會(huì)處于一個(gè)穩(wěn)定的數(shù)值，而不會(huì)持續(xù)的降低。從節(jié)約能耗的角度，再結(jié)合三七總皂苷含量的數(shù)據(jù)，暫時(shí)選擇提取溫度70℃為最優(yōu)。

其中條件3（提取溫度為70℃；固液比為1∶8）結(jié)果如下。

表11 條件3含量結(jié)果

表12 條件3淀粉結(jié)果

結(jié)果為表11、表12所示：隨著提取時(shí)間的增加，三七總皂苷的含量升高，淀粉含量降低，但從提取效率來說，提取時(shí)間3 h比提取時(shí)間2 h含量升高的比例及淀粉含量降低的比例并不高，從節(jié)約能耗角度選擇，可暫時(shí)認(rèn)為提取時(shí)間2 h為最優(yōu)。

2　結(jié)果與討論

以上結(jié)果顯示，回流提取法中，工藝條件選擇固液比1∶8，提取溫度80℃，提取時(shí)間2小時(shí)為最優(yōu)選擇；旋轉(zhuǎn)提取法中，工藝條件選擇固液比1∶8，提取溫度70℃，提取時(shí)間2小時(shí)為最優(yōu)選擇；再將回流提取法與旋轉(zhuǎn)提取法比較，兩個(gè)方法的提取時(shí)間與固液比的條件一致，旋轉(zhuǎn)提取法的提取溫度比回流提取法的提取溫度要低，并且通過三七總皂苷的含量數(shù)據(jù)可知，旋轉(zhuǎn)提取法提取的三七總皂苷的含量更高。

綜上所述，淀粉含量與三七總皂苷含量呈反比關(guān)系，且淀粉含量減少，三七總皂苷含量呈線性上升。以此為據(jù)，可認(rèn)為，三七藥材提取物中的其他雜質(zhì)含量（如鞣酸、纖維、黃酮類及氨基酸等）也隨淀粉的減少而降低。通過以上實(shí)驗(yàn)中，淀粉含量與三七總皂苷含量的數(shù)據(jù)，確實(shí)證明了這一點(diǎn)。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，三七藥材提取在大生產(chǎn)中應(yīng)選擇旋轉(zhuǎn)提取法，因?yàn)樘崛⌒矢?，不僅能提升三七總皂苷的含量，還能達(dá)到降低淀粉、鞣酸、纖維、黃酮類及氨基酸等雜質(zhì)。但是在提取條件的固液比選擇中，在實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，雖然固液比1∶8在實(shí)驗(yàn)階段是最優(yōu)選擇，而在實(shí)際大生產(chǎn)中，還要結(jié)合后工序進(jìn)行比較，后工序還要進(jìn)行濃縮等工序，當(dāng)固液比太高會(huì)影響后工序的生產(chǎn)效率，在大生產(chǎn)中，可結(jié)合實(shí)際情況選擇固液比1∶6或者1∶7都可以。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)三七總皂苷的含量升高時(shí)，淀粉含量均呈下降趨勢(shì)。為證明是否通過設(shè)計(jì)不同的工藝條件，提高提取液中三七總皂苷的含量，從而提取液中的淀粉、鞣酸、纖維、黃酮類及氨基酸等雜質(zhì)也隨之降低，通過檢測(cè)各個(gè)提取液樣品中總黃酮的含量，確實(shí)存在這個(gè)趨勢(shì)。未來的研究方向可以再針對(duì)更多的工藝條件開展不同的雜質(zhì)含量測(cè)試。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì). 中國(guó)藥典[M]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020.

[2]任平，王遠(yuǎn)征，付博，等. 不同引種地白背三七主要活性成分分析及其對(duì)生態(tài)因子的響應(yīng)[J]. 西北植物學(xué)報(bào)，2018，38(9): 1727-1732.

[3]王瑩，禇揚(yáng)，李偉. 三七中皂苷成分及其藥理作用的研究進(jìn)展[J]. 中草藥，2015，9(10): 1381-1392.

[4]李瑞婷，婁燈吉，姚星宇，等. HPLC法同時(shí)測(cè)定8種三七樣品中5種皂苷成分的含量[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，48(16): 184-187.

[5]葉輝，李華宇，谷應(yīng)麗，等. 三七總皂苷的提取及含量測(cè)定[J]. 南開大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2021，54(3): 54-59.

[6]朱立剛，劉威. 淺析熱回流提取技術(shù)在中藥生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 黑龍江中醫(yī)藥，2013，43(4): 56.

Impurity Control in the Extraction Process of Panax Notoginseng

Objective:To explore the technology of impurity control in the extraction of Panax notoginseng. Methods: By controlling the content of impurities such as starch, the difficulty of post-processing was reduced, the production efficiency was improved and the quality of intermediate products was improved. Results: By adjusting the extraction method, extraction temperature and extraction time in the extraction process of Panax notoginseng, the best extraction method can be determined, which plays an important role in reducing the content of impurities such as tannic acid, fiber, flavonoids and amino acids, and improving the content of total saponins of Panax notoginseng.

Panax notoginseng; extraction; impurity control; total saponins of Panax notoginseng

R284

A

1008-1151(2022)03-0038-03

2022-01-20

譚婷心（1985－），女，廣西梧州制藥（集團(tuán)）股份有限公司工程師，從事藥品技術(shù)研究工作。