徐穎 肖紅梅

[摘要] 目的 探討lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細胞癌中的表達和化療對其影響。 方法 收集2018年6月至2020年12月遵義醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院確診的頭頸部鱗狀細胞癌患者45例及同期化療患者30例。分析腫瘤組織中l(wèi)ncRNA MALAT1的表達及在不同臨床病理特征的表達情況，并分析化療對lncRNA MALAT表達的影響。 結果 lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細胞癌腫瘤組織中表達顯著增加（P<0.05），且腫瘤>2 cm、TNM Ⅲ～Ⅳ期、組織分化差以及淋巴結轉移患者中的lncRNA MALAT表達增加（P<0.05）。化療后可顯著降低lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細胞癌腫瘤組織中表達（P<0.05）。結論 lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細胞癌腫瘤組織中表達顯著增加，且在不同臨床病理特征中表達不同，預示較差臨床預后;化療可降低其表達。

[關鍵詞] lncRNA;MALAT1;頭頸部鱗狀細胞癌;化療;TNM分期

[中圖分類號] R739.91? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）09-0012-04

Expression of lncRNA MALAT1 in head and neck squamous cell carcinoma and analysis of the effect of chemotherapy on it

XU Ying? ?XIAO Hongmei

Department of Head and Neck Oncology， the Second Affiliated Hospital of Zunyi Medical University， Zunyi? ?563000， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of lncRNA MALAT1 in head and neck squamous cell carcinoma and the effect of chemotherapy on it. Methods A total of 45 patients with head and neck squamous cell carcinoma diagnosed in the Second Affiliated Hospital of Zunyi Medical University and 30 patients treated with chemotherapy from June 2018 to December 2020 were collected. The expression of lncRNA MALAT1 in tumor tissue and different clinicopathological characteristics as well as the effect of chemotherapy on the expression of lncRNA MALAT was analyzed. Results The expression of lncRNA MALAT1 significantly increased in head and neck squamous cell carcinoma tumor tissue （P<0.05）， and the tumor increased in volume， with TNM staging Ⅲ-Ⅳ， poor tissue differentiation. The expression of lncRNA MALAT in patients with lymph node metastasis increased （P<0.05）. The expression of lncRNA MALAT1 in head and neck squamous cell carcinoma significantly decreased after chemotherapy （P<0.05）. Conclusion The expression of lncRNA MALAT1 significantly increases in head and neck squamous cell carcinoma tumor tissues， and varies in different clinicopathological features， which predicts poor clinical prognosis. Chemotherapy is able to reduce the expression.

[Key words] lncRNA; MALAT1; Head and neck squamous cell carcinoma; Chemotherapy; TNM staging

頭頸部鱗狀細胞癌（head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC）是頭頸部表皮最常見的惡性腫瘤，每年報告超過60萬例新病例[1]。HNSCC是異質性、實體性和惡性腫瘤，患者總體生存率較低，主要原因是診斷晚、治療反應率低、復發(fā)和轉移率高[2-3]。因此，闡明與HNSCC相關的遺傳和表觀遺傳分子改變對于改善HNSCC患者的診斷、適當治療和預后至關重要。各種研究表明，HNSCC的發(fā)生和發(fā)展與長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNAs）密切相關[4]。lncRNAs（>200 nt長度，無蛋白質編碼功能）通過在轉錄、轉錄后和翻譯后水平參與基因調控，作為關鍵調節(jié)因子，并影響許多生物過程[5-6]。lncRNAs在HNSCC的發(fā)展中具有復雜和廣泛的功能，包括與腫瘤生長、復發(fā)和轉移相關的功能，因為其在HNSCC中的不規(guī)則和特異性表達模式[7]。盡管lncRNAs與HNSCC之間的關系尚不清楚，但有報道稱一些lncRNAs異常表達，并有助于HNSCC的發(fā)生和發(fā)展。lncRNA MALAT1在多種腫瘤中表達異常[8]。本研究擬分析lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細胞中的表達和化療對其影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年6月至2020年12月遵義醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院確診頭頸部鱗狀細胞癌患者45例。根據(jù)2002年國際癌癥控制聯(lián)盟（UICC）制訂的標準進行分級。在手術過程中收集腫瘤組織和正常鄰近組織（距腫瘤邊緣>1 cm），其中正常鄰近組織作為癌旁組。將切除的組織立即保存在手術室中的冰箱（-20℃）。納入標準：①經病理檢查為頭頸部鱗狀細胞癌者;②首次接受手術治療者;③術前未接受放療或化療等抗腫瘤治療;④臨床資料完整。排除標準：①臨床和病理信息，如性別、年齡、腫瘤分期、治療效果和復發(fā)相關的信息不完整者;②同時合并其他類型腫瘤者;③既往接受手術、放療或化療治療者;④入院時患者合并其他疾病，如感染性疾病、嚴重糖尿病等器官衰竭性疾病、全身免疫性疾病以及惡性腫瘤并發(fā)癥等。本研究納入的45例患者作為未化療組，另外選取30例術前接受化療的頭頸部鱗狀細胞癌患者作為化療組進行比較研究。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會的批準，患者或其家屬均知情同意。

1.2 頭頸部鱗狀細胞癌患者資料收集

分別記錄頭頸部鱗狀細胞癌患者的性別、年齡、病程等一般資料以及腫瘤大小、組織分化、TNM分期、有無淋巴結轉移的臨床病理特征資料。見表1。

1.3 Real time PCR分析

按照Trizol試劑盒說明從組織中提取總RNA，并在紫外分光光度計上檢查其濃度和純度。通過第一鏈cDNA逆轉錄試劑盒將RNA反向轉錄成cDNA。RT-PCR試劑盒用于擴增cDNA，95℃持續(xù)5 min，95℃ 10 s，40個循環(huán);60℃循環(huán)45 s。應用的PCR反應系統(tǒng)（20 μl）：2.0 μl cDNA、0.4 μl上游引物（10 μmol/L）、0.4 μl下游引物（10 μmol/L）、10.0 μl SYBR和7.2 μl雙蒸水。MALAT-1（正義鏈：5′-CAGACCACAGTTACAG-3′，反義鏈：5′-AGACACATCCAATGCTTCA-3′）和GAPDH（正義鏈：5′-TGACACACACAGGCCACA-3′，反義鏈：5′-CACCCTGTGCTAGCAAA-3′）引物由上?；蛴邢薰咎峁?。以GAPDH作為內參，通過2-ΔΔCT法計算MALAT-1的表達水平。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗;計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 MALAT1在頭頸部鱗狀細胞癌中的表達

Real time PCR分析lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細胞癌腫瘤組織中表達情況，結果顯示MALAT1表達顯著增加（P<0.05），提示其可能在頭頸部鱗狀細胞癌發(fā)揮促癌因子作用。見圖1。

2.2 頭頸部鱗狀細胞癌不同臨床特征患者中MALAT1表達情況

根據(jù)MALAT1表達情況，將頭頸部鱗狀細胞癌患者進一步分為MALAT1高表達組（>MALAT1表達中值，n=31）和MALAT1低表達組（≤MALAT1表達中值，n=14）。MALAT1在不同腫瘤大小（≤2 cm、>2 cm）、有無淋巴結轉移、不同組織分化情況（良好、差）以及不同TNM分期（Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ）的表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），腫瘤>2 cm、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、組織分化差以及淋巴結轉移患者中l(wèi)ncRNA MALAT表達增加。見表2。

2.3 化療對頭頸部鱗狀細胞癌中MALAT1表達的影響

化療組頭頸部鱗狀細胞癌中MALAT1表達顯著降低，與未接受化療的患者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表3。

3 討論

大量研究表明，lncRNA的異常表達與多種癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關。此外，lncRNA被視為癌癥診斷和預后的重要標志物，也是癌癥治療的治療靶點[7]。MA- LAT1在哺乳動物中高度保守，在正常人體組織和細胞中廣泛表達，并具有明顯的組織特異性和時間表達模式，具有很強的組織特異性，其表達水平和功能在不同細胞類型之間可能存在很大差異[8]。MALAT1最初在人類非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）中被證實大量存在，其與肺癌轉移呈正相關、與預后呈負相關。隨后發(fā)現(xiàn)，MALAT1在多種腫瘤組織中的表達顯著高于正常組織，且與腫瘤轉移相關[9-10]。

MALAT1可以調節(jié)多種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，也在轉錄、細胞周期調節(jié)、表觀遺傳學和腫瘤轉移中發(fā)揮作用[11]。近年來，關于MALAT1對多種腫瘤的惡性進展作用的研究越來越多，凸顯出MALAT1對腫瘤診斷、預后評估和靶向治療的重要性。頭頸部鱗狀細胞癌是世界上排名居前的主要癌癥類型，由于區(qū)域淋巴結轉移、隨后復發(fā)的趨勢和對治療的抵抗，導致頭頸部鱗狀細胞癌死亡率很高[12]。多項研究表明，不同非編碼RNA的去調控對HNSCC病理學有重要影響，其可以作為個體化藥物中的特異性生物標記物以改善治療[13]。因此，MALAT1具有廣泛而重要的臨床應用前景，值得進一步研究。但是MALAT1在頭頸部鱗狀細胞癌中的表達和臨床意義尚未闡明。本研究證實MALAT1在頭頸部鱗狀細胞癌中表達增加，且MALAT1的高表達與頭頸部鱗狀細胞癌患者臨床特征顯著相關，包括腫瘤大小（>2 cm）、組織分化差，晚期TNM分期（Ⅲ～Ⅳ）和淋巴結轉移，提示其可能作為癌基因發(fā)揮作用，可能通過調節(jié)頭頸部鱗狀細胞癌的生長、凋亡、侵襲和轉移，并與不良預后相關。因此，MALAT1有望成為早期腫瘤診斷和預后的標志物。

本研究進一步研究化療對MALAT1表達的影響，結果證實在接受紫杉醇和順鉑等化療藥物治療后，頭頸部鱗狀細胞癌患者中發(fā)現(xiàn)MALAT1表達下降，提示MALAT1與頭頸部鱗狀細胞癌藥物敏感性相關。MALAT1是研究較為廣泛的與多種人類癌癥相關的lncRNAs之一[14]。相關研究認為，MALAT1失活可抑制基因表達調節(jié)因子，這些調節(jié)因子可改變腫瘤的特征，阻斷MALAT1表達可抑制腫瘤的進展[15]。lncRNA MAL- AT1可通過促進腫瘤細胞轉移和抑制凋亡觸發(fā)腫瘤對化療藥物的耐藥性。MALAT1基因敲除通過靶向miRNA抑制腫瘤的惡性生物行為，MALAT1有望成為頭頸部鱗狀細胞癌新的治療靶點，并有利于為化療的療效和預后進行評估[16]。目前本研究的患者例數(shù)收集較少，需擴大樣本量，并深入補充體外實驗進行相關作用機制研究，從而支撐MALAT1在頭頸部鱗狀細胞癌的靶點作用的研究。

綜上所述，lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細胞癌腫瘤組織中表達顯著增加，且與臨床病理特征相關，化療可降低其表達，為頭頸部鱗狀細胞癌臨床治療和機制研究提供相關思路。

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（收稿日期：2021-12-01）