陸濤峰， 吳延軍， 趙 海， 李 倩， 王士勇， 吳曙光

(貴州中醫(yī)藥大學，貴州貴陽550025)

畜禽種質資源是畜牧業(yè)發(fā)展最基本的生產資料，也是人類生存發(fā)展最根本的物質基礎和進行科學研究的寶貴素材，關系到國家安全以及經濟的可持續(xù)發(fā)展。貴州香豬是貴州省特有的動物遺傳資源，集中分布在貴州從江、劍河、榕江等地。貴州香豬具有肉質鮮美、抗逆性強、體型小、性成熟早、基因純合度高等優(yōu)點，不僅有重要的經濟價值，而且可以作為良好的實驗動物素材用于生命科學研究[1～3]。隨著我國經濟社會的快速發(fā)展，交通條件不斷改善，養(yǎng)殖動物的流動性日益頻繁，與此同時也給動物疫病防控工作帶來巨大挑戰(zhàn)。我國生豬疫病流行情況復雜，具有病種多、病情復雜、流行范圍廣等特點，防控形勢異常嚴峻[4，5]。豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬瘟病毒(CSFV)、豬O型口蹄疫病毒(FMDV-O)、非洲豬瘟(ASFV)是豬的重要傳染性病毒，一旦豬群發(fā)生感染會對貴州香豬資源帶來毀滅性打擊。目前除了非洲豬瘟尚無有效疫苗進行免疫外，疫苗免疫是豬疫病防控的主要手段，及時接種疫苗并開展免疫水平監(jiān)測可以為豬疫病防控提供精準的決策依據[6，7]。另外，對動物資源群體及時開展重要疫病的血清抗體監(jiān)測，可以及時了解病原感染狀況，特別是對于非免疫群體具有更重要的意義。因此，本研究對貴州香豬資源保種場開展主要疫病的血清抗體監(jiān)測，以了解貴州香豬主要疫病的免疫或感染狀況，為貴州香豬資源疫病防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源根據貴州香豬資源保種場的規(guī)模，按照我國農業(yè)行業(yè)標準《實驗用豬微生物學等級及監(jiān)測》(NY/T 3466—2019)對樣品采集數量的要求，于2021年6月采集貴陽(A場)、從江(B場)、榕江(C場)、劍河(D場)4個貴州香豬資源保種場的香豬血清樣品分別為19、16、12、20份，共計67份。疫苗免疫情況：貴陽(A場)于2021年3月集中免疫了PRRSV、CSFV、FMDV-O疫苗；從江(B場)于2021年4月免疫了PRRSV疫苗；榕江(C場)、劍河(D場)于2021年3月免疫了PRRSV、CSFV疫苗；各場均未免疫ASFV疫苗。

1.1.2 主要試劑和儀器PRRSV、CSFV血清抗體ELISA檢測試劑盒，購自愛德士(IDEXX)生物公司；FMDV-O、ASFV血清抗體ELISA檢測試劑盒，購自北京金諾百特科技有限公司；生物安全柜(HR40-IIA2)，購自青島海爾公司；多功能冷凍離心機(ALLegra X-30R)，購自德國貝克曼公司；酶標儀(ReadMax 1900)，購自上海閃譜生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血清分離在動物空腹情況下采集前腔靜脈血10 mL，放入盛有冰袋的保溫箱中(約4 ℃)，運輸到實驗室，1 500 r/min離心10 min分離血清，分裝后置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｋ袑嶒炇也僮骶谏锇踩裰羞M行。

1.2.2 抗體檢測檢測前將待檢血清置于60 ℃恒溫金屬浴中20 min進行病原滅活。PRRSV、CSFV、FMDV-O、ASFV血清抗體檢測按照各ELISA試劑盒說明書進行，用酶標儀讀取數值，按照各試劑盒判定標準對結果進行判定。若已免疫相關疫苗，則檢測抗體為免疫抗體；若未免疫相關疫苗，則檢測抗體為病毒感染抗體。

1.2.3 數據統計采用Excel 2010軟件統計陽性個體數，計算各場陽性率和總陽性率。

2 結果

2.1 貴州香豬群體4種病毒血清抗體由表1可見：4個貴州香豬資源保種場的PRRSV、CSFV、FMDV-O 免疫抗體合格率(陽性率)分別為100%、74.6%、28.4%，ASFV抗體陽性率為0%。其中PRRSV、CSFV的免疫抗體合格率達到農業(yè)農村部規(guī)定≥70%的要求，FMDV-O的免疫抗體合格率未達到規(guī)定要求；在貴州香豬群體中未檢測到ASFV抗體，表明沒有ASFV感染情況。

表1 貴州香豬群體4種病毒血清抗體檢測結果 %

2.2 不同保種場4種病毒血清抗體分析結合免疫情況分析不同貴州香豬資源保種場4種病毒血清抗體情況：貴陽(A場)保種場均免疫了PRRSV、CSFV、FMDV-O疫苗，且免疫效果良好；從江(B場)保種場只免疫了PRRSV疫苗，沒有免疫CSFV和FMDV-O疫苗，抗體檢測結果與免疫情況一致；榕江(C場)、劍河(D場)保種場只免疫了PRRSV和CSFV疫苗，沒有免疫FMDV-O疫苗，抗體檢測結果與免疫情況一致。除貴陽(A場)外，其他3個貴州香豬資源保種場對豬主要疫病的免疫不夠重視，特別是列入《2021年國家動物疫病強制免疫計劃》的FMDV-O均沒有進行免疫。

3 討論

3.1開展動物免疫抗體水平監(jiān)測是檢驗疫苗免疫效果及動物機體免疫狀況的重要手段，也是養(yǎng)殖場進行補充免疫和防疫措施落實的重要依據，并可以為政府主管部門科學制定動物疫病預防控制規(guī)劃和疫病預警提供決策依據[8～10]。貴州香豬作為貴州特有的動物遺傳資源，逐漸成為貴州特色養(yǎng)殖對外交流合作的名片[11]。本次監(jiān)測結果表明，各香豬資源保種場均能按要求開展PRRSV疫苗免疫，且免疫合格率均為100%，但其他疫病的免疫情況參差不齊。從江(B場)沒有免疫CSFV疫苗，抽檢沒有發(fā)現CSFV抗體陽性樣品，表明香豬群體沒有發(fā)生CSFV感染。從江(B場)、榕江(C場)、劍河(D場)未免疫FMDV-O疫苗，抽檢沒有發(fā)現FMDV-O抗體陽性個體，表明香豬群體沒有發(fā)生FMDV-O感染。所有貴州香豬資源群體中均沒有檢測到ASFV抗體，表明香豬群體沒有發(fā)生ASFV感染，防控效果良好。

3.2本次對貴州香豬資源保種場的監(jiān)測結果發(fā)現最突出的問題是：列入《2021年國家動物疫病強制免疫計劃》的FMDV-O疫苗免疫情況不理想，4個香豬資源保種場中有3個場存在未及時免疫的現象。建議相關保種場及時進行補免，調整免疫程序或者重新設計合理的免疫程序，并定期對豬群開展檢測，提高群體免疫效果。隨著貴州香豬資源保種場防疫意識增強和防疫水平的提高，再加上貴州山區(qū)天然的隔離屏障，個別貴州香豬資源保種場已具備開展非免疫實驗動物豬生產的基本條件，因此貴州香豬實驗動物化將是貴州香豬產業(yè)的1個增長點。

4 結論

本次監(jiān)測結果表明，貴州香豬資源群體中沒有ASFV感染；PRRSV、CSFV的免疫抗體水平達到國家規(guī)定的要求；部分貴州香豬資源保種場對豬主要疫病的免疫不夠重視，特別是對FMDV-O應重視和加強免疫工作。