李川皓 趙紅波 申小冉 張相倫 劉曉牧 張文娟 盛清凱

摘要：本試驗(yàn)研究飲用青貯玉米汁對(duì)小鼠生長(zhǎng)、腸道及血液等指標(biāo)的影響，旨在促進(jìn)減抗替抗及玉米資源的利用。144只小鼠隨機(jī)均分為4組，分別飲用蒸餾水（對(duì)照）、5%和10%的玉米汁及60mg/L的抗生素（林可霉素）水溶液，測(cè)定其生長(zhǎng)性能、排便指標(biāo)、小腸推進(jìn)指標(biāo)、血清指標(biāo)等。結(jié)果顯示，和對(duì)照組相比，5%玉米汁處理組和抗生素組小鼠平均日增重顯著升高（P<0.05），血清瘦素、雌激素含量顯著降低（P<0.05）;5%玉米汁處理組小腸重量與小腸長(zhǎng)度的比值顯著高于對(duì)照組和其他處理組（P<0.05），6h內(nèi)排糞粒數(shù)、絨毛長(zhǎng)度與隱窩深度比值均高于其他組。這表明飼喂5%的玉米汁可替代林可霉素。

關(guān)鍵詞：青貯玉米汁;林可霉素;小鼠;腸道;血液

農(nóng)業(yè)農(nóng)村部194號(hào)公告要求自2020年起飼料中禁止添加促生長(zhǎng)類抗生素。如何減抗、替抗成為關(guān)注的熱點(diǎn)。玉米作為糧飼兼用作物，青貯后廣泛用于牛、羊等反芻動(dòng)物，最近幾年開始大量用于生豬[1]。青貯過程中粉碎的全株青綠玉米需要壓實(shí)密封，因此常有5%～10%的玉米汁液流失。玉米汁液含有大量的益生菌、淀粉降解產(chǎn)生的有機(jī)酸[2]、水溶性維生素等物質(zhì)。益生菌、酸化劑等為目前常用的單一替抗飼料添加劑[3，4]。將青貯后的玉米汁液作為復(fù)合替抗飼料添加劑用于養(yǎng)殖，不但有助于全株青綠玉米資源的利用，還可能減抗替抗。本試驗(yàn)以林可霉素為對(duì)照，研究全株青綠玉米青貯后的玉米汁對(duì)小鼠生長(zhǎng)、腸道及血液等指標(biāo)的影響，為減抗替抗及玉米資源開發(fā)利用提供參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

體重（17±0.1）g的雌性無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)昆明雌鼠，購(gòu)買于濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司;SPF小鼠顆粒飼料，北京華阜康生物科技股份有限公司生產(chǎn);林可霉素，山東明發(fā)獸藥股份有限公司提供;青貯玉米汁液，為乳熟期全株青綠玉米添加枯草芽孢桿菌青貯1個(gè)月后產(chǎn)生的汁液，pH=3.50，乳酸菌含量為2.5×106cfu/mL;墨汁由阿拉伯樹膠、蒸餾水及活性碳配制而成，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將144只小鼠隨機(jī)均分為4組：對(duì)照組、5%處理組、10%處理組、抗生素組。每組4個(gè)重復(fù)，每重復(fù)9只，每籠飼養(yǎng)1個(gè)重復(fù)的小鼠。對(duì)照組飲用蒸餾水，3個(gè)試驗(yàn)組分別飲用5%、10%玉米汁水溶液和60mg/L林可霉素水溶液。每2d更換一次蒸餾水、玉米汁和林可霉素。試驗(yàn)期20d。小鼠自由飲食，環(huán)境溫度控制在（25±1）℃，每周更換2次墊料。小鼠飼養(yǎng)過程按照國(guó)家《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》執(zhí)行。

1.3測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1生長(zhǎng)性能指標(biāo) 于試驗(yàn)第1、6、11、16、21d（結(jié)束后1d）8∶00全部小鼠進(jìn)行空腹稱重，記錄采食量，分別計(jì)算小鼠的始重、末重、平均日增重、平均日采食量和料肉比。

1.3.2小鼠排便指標(biāo) 第16d每組每重復(fù)隨機(jī)選取禁食12h的3只小鼠，進(jìn)行墨汁灌胃，然后立即投喂飼料，統(tǒng)計(jì)小鼠首粒黑便排出時(shí)間和6h內(nèi)的排糞粒數(shù)。

1.3.3小腸推進(jìn)指標(biāo) 第21d每組每重復(fù)隨機(jī)選取禁食12h的3只小鼠，進(jìn)行墨汁灌胃，30min后脫頸致死，立即解剖，測(cè)量幽門到回盲部小腸距離（小腸長(zhǎng)度）和幽門到墨水前沿的距離（墨汁長(zhǎng)度），同時(shí)稱重小腸重量。推進(jìn)率（%）=墨汁長(zhǎng)度/小腸長(zhǎng)度×100。

1.3.4血清指標(biāo) 第21d將剩余小鼠全部脫頸致死，眼緣靜脈采血，3000r/min離心10min，將血清于0～4℃冰箱保存?zhèn)溆?。采用酶?lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）測(cè)定血清胃動(dòng)素、瘦素、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3、酪酪肽等指標(biāo)。ELISA試劑盒為武漢基因美生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.3.5組織切片 每組每重復(fù)隨機(jī)選3只處死小鼠，取回盲部上端的回腸1cm左右腸管，用生理鹽水沖洗后迅速放入4%甲醛固定液中搖勻，采用蘇木精-伊紅染色法制取組織切片，測(cè)定回腸絨毛長(zhǎng)度及隱窩深度，計(jì)算絨毛長(zhǎng)度與隱窩深度的比值。

1.4數(shù)據(jù)處理

采用SASv9.2軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，OnewayANOVA進(jìn)行方差分析，Student-Newmnan-Keuls法進(jìn)行多重比較，P<0.05為差異顯著。

2結(jié)果與分析

2.1玉米汁與抗生素對(duì)小鼠生長(zhǎng)的影響

由表1看出，5%處理組和抗生素組小鼠的末重、平均日增重皆顯著高于對(duì)照組（P<0.05），兩組間差異不顯著。5%處理組小鼠末重高于10%處理組（P<0.05），說(shuō)明玉米汁對(duì)小鼠生長(zhǎng)的影響與劑量有關(guān)。

2.2玉米汁與抗生素對(duì)小鼠腸道的影響

表2顯示，各組小鼠首粒黑糞時(shí)長(zhǎng)、6h內(nèi)排糞粒數(shù)、墨汁長(zhǎng)度以及小腸推進(jìn)率均差異不顯著（P>0.05）。5%處理組小鼠6h內(nèi)排糞粒數(shù)明顯高于其他組，說(shuō)明5%玉米汁可促進(jìn)腸道蠕動(dòng)。

由表3看出，5%處理組小腸重量與小腸長(zhǎng)度的比值顯著高于其他組（P<0.05），顯示5%處理組小鼠腸道可能變粗。5%和10%處理組小鼠絨毛長(zhǎng)度與隱窩深度的比值高于抗生素組和對(duì)照組（表4），表明玉米汁可促進(jìn)小腸黏膜吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

2.3玉米汁與抗生素對(duì)小鼠血液指標(biāo)的影響

由表5看出，5%處理組、10%處理組和抗生素組小鼠的雌激素、瘦素含量皆顯著低于對(duì)照組（P<0.05），催乳素、酪酪肽等指標(biāo)與對(duì)照組無(wú)差異（P>0.05），顯示玉米汁與抗生素的作用效果有相似之處。

3討論與結(jié)論

目前國(guó)內(nèi)外未見用青貯玉米汁替代飼用抗生素的報(bào)道。青貯玉米汁替代抗生素一般應(yīng)著重考慮其安全性和有效性。全株青綠玉米青貯時(shí)，乳酸菌快速擴(kuò)繁，抑制有害菌的生長(zhǎng)，一般蠟熟后期的全株青綠玉米青貯30～40d后可以飼喂牛羊[5]，乳熟期全株玉米青貯7d后可以飼喂生豬[2]。本試驗(yàn)未見小鼠其他異常情況，表明飲用青貯玉米汁比較安全。青貯成功的全株玉米常含有乳酸、乙酸、丙酸[6]、乳酸菌[2，7]等，乙酸、丙酸及乳酸菌等皆為良好的替抗添加劑[8]，由此推測(cè)青貯玉米汁可以作為一種替抗劑。

不同劑量的青貯玉米汁對(duì)小鼠的作用效果存在差別，10%處理組的作用效果和抗生素相似，5%處理組的作用效果優(yōu)于抗生素，推測(cè)玉米汁的作用效果可能與飼喂劑量有關(guān)。任錦帥等[9]報(bào)道全株青綠玉米在配合飼料中的添加比例影響豬的日增重。青貯玉米汁作為一種發(fā)酵產(chǎn)品，其中的有效成分除有機(jī)酸、益生菌外還可能含有水溶性纖維[10]、丁醇等其他物質(zhì)[11]，對(duì)小鼠的影響有待進(jìn)一步研究。

青貯玉米汁與林可霉素作用于小鼠腸道的通路存在差異。腸道變化及黏膜屏障受5-羥色胺、胃動(dòng)素、酪酪肽[12]、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子[13]、瘦素[14]等多種神經(jīng)遞質(zhì)或激素綜合影響。本試驗(yàn)結(jié)果揭示玉米汁、林可霉素可能通過瘦素影響腸道的變化及黏膜屏障。瘦素為脂肪組織表達(dá)的一種調(diào)節(jié)能量代謝的激素，其受體廣泛分布，可以通過多種通路影響生理代謝[14]。盡管玉米汁、林可霉素皆影響瘦素，但5%處理組小鼠小腸重量與長(zhǎng)度比值、6h內(nèi)排糞粒數(shù)、絨毛長(zhǎng)度與隱窩深度比值皆高于抗生素組，表明玉米汁與林可霉素通過瘦素影響腸道的通路不同。玉米汁中的有機(jī)酸[15]、益生菌[16]或纖維[17]等不同物質(zhì)通過瘦素影響腸道的具體通路有待深入研究。