楊 靜，曹 靜，趙亞寧，賈 健，楊永康

(陜西中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院產一科，陜西 咸陽 712000)

子癇前期(preeclampsia，PE)指妊娠20周后出現新發(fā)高血壓、蛋白尿或其他終末器官損害，是妊娠過程中的主要并發(fā)癥，全球約4%～5%的妊娠會受其影響，可導致胎兒早產和母親長期心血管疾病，給母子健康帶來巨大負擔[1,2]。目前，關于PE的研究取得了重大進展，但其潛在發(fā)病機制仍不清楚。子癇前期涉及多種遺傳、結構、血管生成和代謝途徑，包括螺旋動脈重塑、胎盤氧合、母體-胎兒界面的氧化還原和免疫耐受、血管生成和抗血管生成因子的平衡等[3]。對于PE的預防和治療仍需要尋找新的生物標志物，以提高診療的便捷性和準確性。微小RNA(micorRNA，miRNA)是一類短鏈非編碼RNA分子，長度約為22個核苷酸，參與基因表達的轉錄后調節(jié)[4]。研究表明，體內miRNA機制失活可導致胎盤畸形[5]，體外胎盤外植體中敲除miRNA會導致滋養(yǎng)層細胞異常增殖[6]，可見miRNA在胎盤發(fā)育中起關鍵作用。此外，靈長類動物特異性19號染色體miRNA簇的成員在PE患者中表達顯著失調，是PE的潛在生物標志物[7]。分析比較PE患者的miRNA表達譜，可以評估m(xù)iRNA作為PE治療新方案的潛在靶點。因此，本研究旨在分析PE患者和正常妊娠婦女血液和胎盤組織中miR-217的表達差異，評價其臨床意義，為臨床診療提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2020年1月至2021年12月在我院擇期剖宮產結束分娩的32例PE患者和24例正常妊娠者為研究對象。納入標準：未進入產程；剖宮產結束分娩；無妊娠合并癥；PE的診斷參照子癇診斷標準[8]。排除標準：合并糖尿病、慢性高血壓等基礎疾??；合并貧血、血小板降低或其他血液系統(tǒng)疾??；既往心腦血管病史等。

1.2 研究方法

1.2.1血清收集

清晨空腹采集所有受試者外周靜脈血4mL，室溫自然凝固30min后，3 000r/min快速離心10min取上層血清待檢測。

1.2.2胎盤組織收集

正常妊娠婦女和PE患者胎盤娩出后5min內，在其母體面中央避開鈣化區(qū)，剪去1cm×1cm×1cm的組織塊，生理鹽水吸去血跡，吸干表面水分，將組織塊剪碎放入凍存管中，-80℃保存。所有器具及耗材均經過高溫烘干處理，凍存管用0.1‰ DEPC水浸泡后放入烤箱，去除RNA酶。

1.2.3血壓測量

利用醫(yī)院電子血壓計(OMRONHEM-7012)準確測量受試者的收縮壓和舒張壓，每天早上九點安靜狀態(tài)下測量并詳細記錄。

1.2.4miR-217檢測

采用半定量逆轉錄-聚合酶鏈技術(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測研究對象血清和胎盤組織中的miR-217表達。采用RNA提取試劑盒(SolarBio，中國北京)提取血清和胎盤組織中的總RNA，逆轉錄試劑盒(Thermo Fisher Scientific，美國)將RNA逆轉錄為cDNA。采用qRT-PCR儀(Bio-Rad，美國)對miR-217表達水平進行分析，包括40個循環(huán)，95℃ 30s，95℃ 5s以及60℃ 30 s。單基因相對表達水平用2-△△CT法計算。以U6為內部參照，引物信息為miR-217正向F：5′-TCGGCAGGGTACTGCATCAGGAA-3，反向R：5′-CT-CAACTGGTGTCGTGGA-3′；U6正向F：5′-CTC-GCTTCGGCAGCACA-3′，反向R：5′-AACGCTTCACGAATTTG-3′

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 兩組患者一般臨床資料的比較

兩組患者的年齡和孕周間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。子癇前期組患者的收縮壓、舒張壓、尿蛋白平均含量均顯著高于正常妊娠組，差異有統(tǒng)計學意義(t值分別是2.193、3.932、4.024，P<0.05)，詳見表1。

表1 兩組患者一般臨床資料的比較

2.2 兩組血清和胎盤組織中miR-217的表達水平

利用RT-PCR法分析兩組患者血清和胎盤組織中miR-217相對表達量，結果顯示子癇前期組患者血清和胎盤組織中miR-217相對表達水平都顯著高于正常妊娠組，差異有統(tǒng)計學意義(t值分別是3.225、2.813，P<0.05)，見圖1。這表明miR-217在子癇前期組表達上調，可能與疾病進展有關。

圖1 兩組患者血清和胎盤組織中miR-217相對表達量

2.3 子癇前期患者血清miR-217表達量與收縮壓和舒張壓的相關性分析

相關性分析顯示(圖2)，子癇前期患者血清miR-217相對表達水平與收縮壓和舒張壓均呈正相關(r值分別是0.703和0.720，P<0.01)，表明子癇前期患者血清中miR-217相對表達水平與疾病嚴重程度呈正相關。

圖2 子癇前期患者血清中miR-217相對表達量與收縮壓和舒張壓的相關性

2.4 子癇前期患者胎盤組織中miR-217表達量與收縮壓和舒張壓的相關性分析

相關性分析顯示(圖3)，子癇前期患者胎盤組織中miR-217相對表達水平與收縮壓和舒張壓均呈正相關(r值分別是0.731和0.822，P<0.05)。相比血清miR-217，患者胎盤組織中miR-217相對表達水平與疾病嚴重程度的相關性更大。

圖3 子癇前期患者胎盤組織中miR-217相對表達量與收縮壓和舒張壓的相關性

3 討論

3.1 MiR-217表達水平與子癇前期患者的疾病嚴重程度呈正相關

子癇前期是一種復雜的綜合征，每年造成約16%～18%的孕產婦死亡和約40%的胎兒和新生兒死亡[1]。子癇前期是一種全身性疾病，伴有全身內皮功能障礙和多器官衰竭，影響母嬰健康。孕婦血壓是診斷子癇前期及其嚴重性的重要參考，因此本研究將舒張壓和收縮壓作為子癇前期診斷參考，評估患者血清和胎盤組織中miR-217表達水平與血壓相關性。研究發(fā)現，miR-217在子癇前期患者血清和胎盤組織中的相對表達水平較高，且與疾病嚴重程度呈正相關。

3.2 MiRNA與子癇前期的相關研究

MiRNA不翻譯蛋白質，但可以調節(jié)基因表達，miRNA調節(jié)網絡在許多病理生理過程中發(fā)揮重要作用，如細胞增殖和黏附、血管生成和免疫細胞發(fā)育等[9]。相關研究表明，妊娠期間miRNA可能影響和調節(jié)滋養(yǎng)層細胞的侵襲和遷移、調節(jié)血管生成和抗血管生成因子的表達以及間充質干細胞功能[10]。此外，心腦血管疾病相關的miRNAs在子癇前期者的妊娠中失調，可能在心臟對妊娠和妊娠高血壓的適應中發(fā)揮關鍵作用[11]。Huang等人發(fā)現，與健康對照組相比，miRNA-181a-5p在PE者的胎盤中過度表達，且可通過抑制金屬蛋白酶2、9的活性觸發(fā)抗增殖，抑制細胞周期進展，誘導凋亡，抑制滋養(yǎng)層侵襲[12]。Brkic等人研究了miRNA-218-5p在PE發(fā)生中的作用，發(fā)現其在絨毛外滋養(yǎng)層中高表達，而在PE胎盤中顯著下調，認為miRNA-218-5p的下調可能促進PE的發(fā)生[13]。Hu等人報道，miRNA-144-3p在PE胎盤中的表達降低，且與環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2，Cox-2)的表達呈負相關；Cox-2作為前列腺素合成的限速酶，可能在PE的發(fā)生中起重要作用[14]。綜上，miRNA在PE進展中的作用已有一定研究基礎，但尚未見miR-217與PE的相關報道。

3.3 MiR-217在心血管疾病發(fā)展中的作用

MiR-217可促進血管內皮功能障礙，增加血壓，加劇動脈粥樣硬化。Yebenes等人研究發(fā)現，miR-217的過度表達可誘導動脈粥樣硬化載脂蛋白E中的一氧化氮生成降低，加劇大鼠的動脈粥樣硬化程度；內皮細胞中miR-217表達增加可導致冠狀動脈疾病發(fā)展和左心室心功能改變，誘導心臟舒張和收縮功能障礙[15]。多巴胺D2受體(dopamine D2 receptor，D2R)表達降低與高血壓有關，而miR-217的表達直接受D2R的調控[16]。鑒于上述研究成果，本研究探索了miR-217在PE患者血清和胎盤組織中的表達水平與疾病相關性。結果顯示，PE患者血清和胎盤組織中miR-217相對表達水平均顯著高于正常妊娠組，說明miR-217的表達上調可能與PE疾病有關。此外，PE患者血清和胎盤組織中miR-217相對表達水平與其收縮壓和舒張壓均呈正相關，提示miR-217相對表達水平可能與疾病嚴重程度相關。

本研究不足之處主要為樣本量偏小，且前期研究僅發(fā)現miR-217在子癇前期患者胎盤組織和血清中表達上調，并未對其作用分子機制進行深入研究，后續(xù)研究將進一步重點探討。綜上所述，miR-217在PE患者胎盤組織和血清中呈高表達，且與收縮壓和舒張壓呈正相關。