亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        玫瑰花復(fù)合煎劑的毒性及免疫活性研究

        2022-04-23 22:22:48鄭小娟
        醫(yī)學(xué)食療與健康 2022年3期
        關(guān)鍵詞:急性毒性免疫黃精

        鄭小娟

        [摘要]目的:玫瑰花復(fù)合煎劑的急性毒性反應(yīng)及對(duì)小鼠免疫活性的研究。方法:采用最大耐受劑量法,以15000.mg/(kg·BW)劑量玫瑰花復(fù)合煎劑給予小鼠灌胃,觀察動(dòng)物在一周內(nèi)的活動(dòng)及中毒情況,考察小鼠是否有死亡現(xiàn)象,并進(jìn)行大體解剖觀察病理改變;在加S9與不加S9混合液的條件下進(jìn)行Ames試驗(yàn),以2.5、5.0、.10.0.g/(kg·BW)玫瑰花復(fù)合煎劑灌胃小鼠,進(jìn)行小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)。保健功能試驗(yàn):以300、600、1200.mg/(kg·BW)劑量組連續(xù)灌胃小鼠30天,另設(shè)玫瑰花組和蒸餾水陰性對(duì)照組,測(cè)定臟器/體重比值,小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(耳腫脹法),小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)(Jerne改良玻片法)以及NK細(xì)胞活性(乳酸脫氫酶測(cè)定法),以考察其增強(qiáng)免疫力的作用。結(jié)果:急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)中,小鼠一般表現(xiàn)和行為均未見(jiàn)異常且無(wú)死亡;三項(xiàng)遺傳試驗(yàn)結(jié)果均為陰性,未見(jiàn)遺傳毒性;增強(qiáng)免疫力實(shí)驗(yàn)中,與陰性對(duì)照組相比,玫瑰花復(fù)合煎劑300、600、1200.mg/(kg·BW)各劑量組的小鼠左右耳片重量差值、溶血空斑數(shù)有顯著性差異(P<0.05);600、.1200.mg/(kg·BW)劑量組小鼠NK細(xì)胞活性均有顯著性差異(P<0.05);玫瑰花組小鼠左右耳片重量差值、溶血空斑數(shù)與陰性對(duì)照組相比均有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論:玫瑰花復(fù)合煎劑無(wú)明顯的急性毒性反應(yīng),屬無(wú)毒級(jí),且無(wú)遺傳毒性;玫瑰花與黃精組成配伍聯(lián)合應(yīng)用其增強(qiáng)免疫功能較玫瑰花單方更加顯著。

        [關(guān)鍵詞]玫瑰花;黃精;急性毒性;遺傳毒性;免疫

        [中圖分類號(hào)]R392.11.

        [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A.

        [文章編號(hào)]2096-5249(2022)03-0184-03

        玫瑰花是薔薇科植物玫瑰的干燥花蕾[1],《本草綱目拾遺》載:“玫瑰花活血、行血、健脾降火、理氣調(diào)經(jīng)、滋補(bǔ)養(yǎng)顏”。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為,玫瑰花甘、微苦,具有行氣解郁、止痛和血及活血散瘀等功效,常用于肝胃氣痛、月經(jīng)不調(diào),跌撲傷痛等,常被用來(lái)當(dāng)作茶飲。

        黃精為百合科黃精屬(Liliaceae)的干燥根莖,主要包括滇黃精Polygonatum kingianum Coll.Et Hemsl、黃精Polygonatum sibiricum Red或多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua[2]。主要化學(xué)成分有多糖、皂苷、蒽醌等[3]。藥典記載,黃精性平、味甘,具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、益腎健脾的功效。李時(shí)珍引《神仙草芝經(jīng)》云:“黃精寬中益氣,使五臟調(diào)和,肌肉充盈,骨髓堅(jiān)強(qiáng),其力倍增,多年不老,顏色明顯,發(fā)白更黑,齒落更生”。我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為,黃精可長(zhǎng)期用于治療脾胃虛弱、精血不足、腎虛虧損、倦乏無(wú)力等,自古以來(lái)就被認(rèn)為是補(bǔ)益類中藥中的上品[4]。

        玫瑰花在免疫方面的試驗(yàn)研究較少,本研究主要探討以玫瑰花及玫瑰花配伍黃精后對(duì)小鼠免疫指標(biāo)的影響,同時(shí)對(duì)其毒理學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià),為臨床應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

        1材料與對(duì)象

        1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

        昆明種小鼠420只,選用蘇州大學(xué)昭衍新藥研究中心培育的SPF級(jí)小鼠(合格證編號(hào)201900963)。雌雄各半,體重18~22g。

        1.2受試物與試劑

        玫瑰花組:取玫瑰花300g,加入12倍量水提取2次,每次2h,濾過(guò),合并2次提取液減壓濃縮至1g/mL。

        玫瑰花復(fù)合煎劑:取玫瑰花、黃精各300g分別加入12倍量水提取2次,每次2h,濾過(guò),合并2次提取液減壓濃縮至1g/mL。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制,冷藏保存。

        1.3主要儀器和試劑

        100μL微量注射器、電子分析天平、手術(shù)器械、723分光光度儀、RPMI1640玻片架、顯微鏡、離心機(jī)、二氧化碳培養(yǎng)箱、SRBC、Hank’s液、DNFB、丙酮、乳酸脫氫酶、恒溫水浴等。

        1.4實(shí)驗(yàn)方法

        急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn):采用最大耐受劑量法,設(shè)玫瑰花復(fù)合煎劑15000mg(/kg·BW)一個(gè)劑量組,小鼠20只,雌雄各半,隨機(jī)分為給藥組和對(duì)照組,均按20mL(/kg·BW)經(jīng)口灌胃。灌胃前動(dòng)物禁食12h,不限飲水。對(duì)照組灌胃等體積的生理鹽水,期間試驗(yàn)小鼠正常飲食和飲水。連續(xù)觀察一周,觀察外表體征、精神狀態(tài)等,每天記錄小鼠的體重、飲水量、進(jìn)食量的變化以及動(dòng)物的中毒表現(xiàn)以及是否有死亡現(xiàn)象發(fā)生,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物做大體解剖[5]。

        遺傳毒性試驗(yàn):(1)Ames試驗(yàn)。將受試物高壓滅菌后置于4°C冰箱保存,試驗(yàn)前用無(wú)菌去離子水等比例進(jìn)行稀釋,設(shè)立濃度為8、40、200、1000、5000μg/皿5個(gè)劑量組,采用平板摻入法,在加與不加體外活化系統(tǒng)(S9混合液)的條件下進(jìn)行。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)立溶劑對(duì)照組、未處理對(duì)照組(自發(fā)回變組)和陽(yáng)性對(duì)照組。若受試物的回變菌落數(shù)高于自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍以上,且具有一定的劑量反應(yīng)關(guān)系,則表明細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)結(jié)果為陽(yáng)性,整個(gè)試驗(yàn)在相同的條件下重復(fù)進(jìn)行一次。(2)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)。小鼠雌雄各半,隨機(jī)分成5組(n=10),即2.5、5.0、10.0g(/kg·BW)劑量組,陽(yáng)性對(duì)照組注射環(huán)磷酰胺40mg/kg,陰性對(duì)照組灌服等體積蒸餾水。給藥2次,間隔24h,第2次給藥后6h,將動(dòng)物處死,制骨髓涂片、晾干、甲醇固定、Giemsa染色。鏡檢PCE,計(jì)算微核率。(3)小鼠精子畸形試驗(yàn)。雄性小鼠隨機(jī)分成5組(n=10),即2.5、5.0、10.0g(/kg·BW)劑量組,陰性對(duì)照組和環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組(40mg/kg)。按20mL(/kg·BW)容量灌胃5d,繼續(xù)喂養(yǎng)1個(gè)月,35d后處死,取出其兩側(cè)睪丸、附睪,放入生理鹽水離心管中,制成精子懸液,過(guò)濾、濾液涂片,用體積分?jǐn)?shù)1%的伊紅染色,晾干,油鏡下檢查精子形態(tài),記錄畸形精子數(shù),計(jì)算精子畸形率。

        1.5增強(qiáng)免疫力實(shí)驗(yàn)

        劑量選擇:玫瑰花復(fù)合煎劑設(shè)300、600、1200mg(/kg·BW)三個(gè)劑量組,另設(shè)玫瑰花組和蒸餾水陰性對(duì)照組。各組小鼠每日灌胃量均為0.2mL/10(g·BW),連續(xù)灌胃30d。

        脾臟/體重比值、胸腺/體重比值:試驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱量動(dòng)物體重,于處死動(dòng)物后,取出脾臟和胸腺,并進(jìn)行稱重,計(jì)算脾臟/體重比值、胸腺/體重比值。

        二硝基氟苯誘導(dǎo)小鼠DTH試驗(yàn)(耳腫脹法):在小鼠右耳兩面均勻涂抹DNFB溶液,以此進(jìn)行攻擊。攻擊后24h頸椎脫臼處死小鼠,剪下左右耳殼,按要求進(jìn)行稱重。用左右耳重量之差表示DTH的程度。方法參照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版)試驗(yàn)方法進(jìn)行[7]。

        抗體生成試驗(yàn)(Jerne改良玻片法):脫纖維綿羊紅細(xì)胞免疫5d處死動(dòng)物,取脾臟制成脾細(xì)胞懸液,將表層培養(yǎng)基加熱溶解后,放45~50°C水浴保溫,與等量中性2倍的Hank’s液混合,分裝小試管,每管0.5mL,向管內(nèi)加入50μL10%SRBC,25μL脾細(xì)胞懸液,迅速混勻,傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上,待凝固后,放入二氧化碳培養(yǎng)箱1.5h,用SA緩沖液稀釋的補(bǔ)體

        (1∶8)加入到片架凹槽內(nèi),繼續(xù)溫育1.5h,計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。

        NK細(xì)胞活性測(cè)定(乳酸脫氫酶LDH測(cè)定法):頸椎脫臼處死小鼠,制備濃度為2×107個(gè)/mL的脾細(xì)胞懸液。將脾細(xì)胞和靶細(xì)胞YAC-1細(xì)胞各100μL分置于96孔培養(yǎng)板中,參考保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范(2003年版)操作,在490nm處測(cè)定OD值,計(jì)算NK細(xì)胞活性率。

        1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        所有數(shù)據(jù)采用SPSS21.0軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資—料用(x±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用[n(%)]表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2結(jié)果

        2.1急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)

        給予玫瑰花復(fù)合煎劑后,小鼠一般表現(xiàn)和行為均未見(jiàn)異常,觀察期內(nèi)未見(jiàn)動(dòng)物死亡,灌胃最大給藥劑量連續(xù)觀察7d小鼠外觀、精神等均無(wú)異常。對(duì)照組和給藥組平日進(jìn)食量和飲水量無(wú)顯著差異,未出現(xiàn)毒性反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死動(dòng)物,大體解剖肉眼觀察未見(jiàn)病理異常改變。說(shuō)明玫瑰花復(fù)合煎劑對(duì)小鼠急性經(jīng)口MTD值均大于15000mg(/kg·BW),按急性毒性分級(jí),該受試物屬于無(wú)毒級(jí)。

        2.2遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果

        對(duì)TA97、TA98、TA100和TA102試驗(yàn)菌株,不同濃度受試物在加和不加S9條件下的回變菌落數(shù)與陰性對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05),而陽(yáng)性對(duì)照組回變菌落數(shù)均高于陰性對(duì)照組回變菌落數(shù)2倍以上(P<0.05)。玫瑰花復(fù)合煎劑細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)檢測(cè)結(jié)果為陰性,重復(fù)試驗(yàn)仍得出相同結(jié)果。

        與陰性對(duì)照組比較,玫瑰花復(fù)合煎劑各劑量組微核率無(wú)顯著性差異(P>0.05);與陰性對(duì)照組比較,環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組微核率有顯著性差異(P<0.01)。

        與陰性對(duì)照組比較,玫瑰花復(fù)合煎劑各劑量組小鼠精子畸形率無(wú)顯著性差異(P>0.05);與陰性對(duì)照組比較,環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組小鼠精子畸形率有顯著性差異(P<0.01)。

        2.3免疫功能試驗(yàn)結(jié)果

        連續(xù)灌胃30d后,玫瑰花組、玫瑰花復(fù)合煎劑300、600、1200mg(/kg·BW)三個(gè)劑量組動(dòng)物的脾臟/體重比值、胸腺/體重比值與陰性對(duì)照組相比,均無(wú)顯著性差異(P>0.05),見(jiàn)表1。

        連續(xù)灌胃30d后,與陰性對(duì)照組相比,玫瑰花復(fù)合煎劑三個(gè)劑量組動(dòng)物的左右耳片重量差值,300、600、1200mg(/kg·BW)三個(gè)劑量組動(dòng)物均有顯著性差異(P<0.05)。玫瑰花片組左右耳片重量差值也明顯增加(P<0.05),見(jiàn)表2。

        連續(xù)灌胃30d后,玫瑰花復(fù)合煎劑三個(gè)劑量組動(dòng)物的溶血空斑數(shù)與陰性對(duì)照組相比,300、600、1200mg(/kg·BW)三個(gè)劑量組動(dòng)物均有顯著性差異(P<0.05)。玫瑰花片組溶血空斑數(shù)也明顯增加(P<0.05),見(jiàn)表3。

        連續(xù)灌胃30d后,玫瑰花復(fù)合煎劑三個(gè)劑量組、玫瑰花組動(dòng)物的NK細(xì)胞活性與陰性對(duì)照組相比均有不同程度的增加,玫瑰花復(fù)合煎劑600、1200mg(/kg·BW)劑量組有顯著性差異(P<0.05),見(jiàn)表4。

        3結(jié)論

        免疫是機(jī)體識(shí)別和排除抗原性異物,維護(hù)自身生理平衡和穩(wěn)定的一種功能。人體的免疫系統(tǒng)由免疫器官(如胸腺、脾臟等)、免疫細(xì)胞(如吞噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等)和免疫分子(如補(bǔ)體、細(xì)胞因子等)所組成,通過(guò)先天性免疫(非特異性免疫)和獲得性免疫(特異性免疫)來(lái)執(zhí)行,發(fā)揮免疫防御、免疫穩(wěn)定和免疫監(jiān)視三大功能。

        玫瑰花含有黃酮類、多酚、多糖等多種化學(xué)成份,具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗癌抗菌、降血脂和預(yù)防心臟病等生理活性[8]。黃精在臨床中是重要的扶正固本類中藥,常被用于補(bǔ)益脾腎、填精補(bǔ)腎,增強(qiáng)機(jī)體免疫的功效。黃精多糖作為黃精中主要的有效成分,具有多種生物活性[9-10],沈建利等[11]以黃精多糖(100、400、800mg/kg)灌胃環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫抑制模型小鼠,免疫抑制小鼠的臟器指數(shù)、血清溶血素水平及吞噬指數(shù)顯著提高(P<0.05);表明黃精多糖可增強(qiáng)機(jī)體免疫力。葉紹凡[12]的研究顯示,給予黃精多糖,可顯著提高運(yùn)動(dòng)小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、巨噬細(xì)胞吞噬率、吞噬指數(shù),與單純運(yùn)動(dòng)組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且作用呈現(xiàn)劑量相關(guān)性。提示黃精多糖可提高長(zhǎng)期力竭訓(xùn)練小鼠的免疫能力,具有顯著免疫增強(qiáng)效應(yīng)。

        本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明玫瑰花、黃精復(fù)合煎劑連續(xù)灌胃小鼠30d后,能顯著提高小鼠的遲發(fā)變態(tài)反應(yīng)、溶血空斑數(shù)以及NK細(xì)胞活性??沙醪脚卸ǎ倒寤包S精配伍可增強(qiáng)動(dòng)物細(xì)胞免疫、體液免疫和NK細(xì)胞活性,具有增強(qiáng)免疫力的功能,且功效較玫瑰花單用更加顯著。本實(shí)驗(yàn)毒理結(jié)果表明,玫瑰花與黃精復(fù)合煎劑對(duì)小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果MTD值>15000mg(/kg·BW),屬無(wú)毒級(jí),小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)、Ames試驗(yàn)均未見(jiàn)遺傳毒性,為用藥劑量及安全性提供了參考。

        猜你喜歡
        急性毒性免疫黃精
        Qualitative and Quantitative Analysis of Linoleic Acid in Polygonati Rhizoma
        黃精、滇黃精、多花黃精物候期差異化研究
        海南檳榔提取物急性毒性研究及保健飲料開(kāi)發(fā)
        蛹蟲草基質(zhì)多糖的急性毒性及亞慢性毒性研究
        藏藥對(duì)免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用的研究
        早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)對(duì)急性重型顱腦外傷患者免疫及炎癥指標(biāo)的影響
        運(yùn)動(dòng)與機(jī)體免疫能力關(guān)系研究綜述
        人間(2016年24期)2016-11-23 19:12:24
        愛(ài)尚生活(2016年9期)2016-10-21 10:52:39
        對(duì)元腎顆粒急性毒性試驗(yàn)的研究
        黃精新鮮藥材的化學(xué)成分
        日本人妻系列一区二区| 国产精品久久无码一区二区三区网| 国产成人精选在线不卡| 国产亚洲青春草在线视频| 日韩中文字幕不卡在线| 比较有韵味的熟妇无码| 亚洲综合色成在线播放| 40分钟永久免费又黄又粗| 国产一区二区三区 在线观看| 国产欧美日韩精品丝袜高跟鞋 | 亚洲美女毛片在线视频| 帮老师解开蕾丝奶罩吸乳网站| 欧美黑人又粗又大久久久| 国产美女胸大一区二区三区| 中文字幕av人妻少妇一区二区| 国内精品人妻无码久久久影院| 毛片免费在线播放| 国产一区二区三区免费主播| 亚洲精品成人无百码中文毛片| 激情航班h版在线观看| 國产AV天堂| 性色av一区二区三区四区久久| 97se色综合一区二区二区| 吃奶摸下的激烈视频| 精品日韩欧美| 一区二区三区亚洲视频| 欧美乱人伦人妻中文字幕| 国产高清在线观看av片| 欧美疯狂做受xxxx高潮小说| 久久精品国产只有精品96| 日韩精品免费在线视频一区| 日韩一区国产二区欧美三区 | 中文字幕亚洲精品综合| 无码乱肉视频免费大全合集| 曰本女人牲交全视频免费播放 | 天堂a版一区二区av| 老女老肥熟女一区二区| 中文字幕一区二区三区精彩视频| AV熟妇导航网| 日本一区二区三区四区高清不卡| 亚洲va无码手机在线电影|