張靖，李瀟

目前，米非司酮聯(lián)合米索前列醇為終止早孕常用的藥物流產(chǎn)方案，然而，該方案仍可能引起不完全流產(chǎn)［1-2］。子宮內(nèi)膜是妊娠成功的關(guān)鍵因素，易受感染、藥物及各種宮腔操作的影響。異常子宮出血（abnormal uterine bleeding，AUB）是不完全流產(chǎn)常見的嚴(yán)重不良反應(yīng)，如不盡早治療極易引發(fā)貧血，造成子宮內(nèi)膜纖維化、宮腔粘連，進(jìn)而導(dǎo)致反復(fù)流產(chǎn)、月經(jīng)異常出血和其他婦科并發(fā)癥［3-4］。因此，預(yù)防和治療不完全流產(chǎn)引起的AUB 具有重要意義。三七是一味傳統(tǒng)中藥，具有活血化瘀、鎮(zhèn)定止痛的功效，又有止血功效?！侗静菥V目》記載三七可治“崩中經(jīng)水不止，產(chǎn)后惡血不下”。有研究顯示，三七對(duì)AUB有較好的療效［5-6］，但其發(fā)揮作用的具體成分及機(jī)制尚不明確。三七總皂苷是從三七根中提取的重要化合物，長(zhǎng)期以來被用作止血藥［7-8］。有關(guān)三七總皂苷對(duì)AUB保護(hù)作用的相關(guān)研究鮮見。本研究旨在探討三七總皂苷對(duì)流產(chǎn)大鼠子宮出血的影響及潛在作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)雌性SD大鼠70只，7～8周齡，平均體質(zhì)量（240±20）g；雄性 SD 大鼠 30 只，7～8 周齡，平均體質(zhì)量（280±20）g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證為SCXK（京）2019-0009。大鼠飼養(yǎng)于溫度（20±2）℃、濕度45%～55%、12 h光照/12 h黑暗周期條件下，自由飲水和攝食。實(shí)驗(yàn)經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用3R原則給予人道關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器 三七總皂苷（純度≥98%，成都普菲德生物技術(shù)有限公司，批號(hào)JOT-11108）；米索前列醇（華潤(rùn)紫竹藥業(yè)有限公司，批號(hào)43171106，規(guī)格0.2 mg×3片/盒）；米非司酮（湖北葛店人福藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)180102，規(guī)格25 mg×60片/盒）；斷血流片（回音必集團(tuán)安徽制藥有限公司，批號(hào)14000433810，規(guī)格0.42 g×60 片/盒）；大鼠血漿雌二醇（estradiol，E2）、孕酮（progesterone，P）、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-6、6-酮前列腺素F1α（6-keto-prostaglandin F1α，6-keto-PGF1α）、血栓素B2（thromboxane B2，TXB2）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinked immuno sorbent assay，ELISA）試劑盒均購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；兔抗大鼠CD31抗體、羊抗兔IgG 二抗均購(gòu)自英國(guó)abcam 公司；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative PCR，qPCR）引物由上海GenePharma 公司設(shè)計(jì)合成。NanoDrop 2000分光光度計(jì)（美國(guó)Thermo Scientific）；ABI7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司）；iMark680多功能酶標(biāo)儀、蛋白轉(zhuǎn)膜裝置（美國(guó)Bio-Rad 公司）；BZ-X800E一體化熒光顯微成像系統(tǒng)（日本Keyence公司）。

1.3 模型制備及分組 按隨機(jī)數(shù)字表法抽取10只雌性大鼠為空白對(duì)照組，將其余處于動(dòng)情周期的雌性和雄性大鼠按照雌∶雄=2∶1的比例進(jìn)行合籠交配，成功交配后，次日清晨對(duì)雌性大鼠進(jìn)行陰道涂片，并置于顯微鏡下觀察，若鏡下（×400）可見陰栓或游動(dòng)精子，則為受孕成功大鼠，記為妊娠第1天，參考文獻(xiàn)［9］采用米非司酮（8.3 mg/kg）和米索前列醇（100μg/kg）誘導(dǎo)建立AUB 模型。將50 只模型制作成功大鼠隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性組（斷血流片，0.45 g/kg）以及三七總皂苷低（25 mg/kg）、中（50 mg/kg）、高（100 mg/kg）劑量組［10］，每組10只。陽(yáng)性組給予斷血流片0.45 g/kg灌胃，三七總皂苷各劑量組給予相應(yīng)劑量的三七總皂苷灌胃，空白對(duì)照組和模型組給予等體積生理鹽水灌胃，1次/d，共7 d。

1.4 子宮出血量測(cè)定 除空白對(duì)照組外，其余各組大鼠在給藥的同時(shí)將1 個(gè)稱取質(zhì)量后的棉球（85～100 mg）放入陰道。分別于8：00和18：00將棉球取出，放入密閉EP管中于4 ℃保存，取出舊棉球的同時(shí)將新棉球放入陰道內(nèi)，以上操作連續(xù)7 d 至給藥結(jié)束。給藥結(jié)束后，采集大鼠眼眶靜脈血20μL，用4 mL 5%NaOH 溶解。將收集的每只大鼠的棉球置于EP管內(nèi)，加5 mL 5%NaOH浸漬提取24 h，并充分?jǐn)D壓棉球血漬至血液完全浸出，過濾后在546 nm波長(zhǎng)處測(cè)定浸提液以及大鼠靜脈血溶解液的吸光度（A）值，子宮出血量（μL）=［靜脈血量（μL）×A棉球血浸提液×浸泡棉球血所用 NaOH 體積（mL）］/［A靜脈血×溶解靜脈血所用NaOH體積（mL）］。

1.5 ELISA 檢測(cè)血漿炎性因子、E2、P、TXB2 以及 6-keto-PGF1α 水平 給藥結(jié)束后，戊巴比妥鈉麻醉大鼠，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血2 mL，靜置后1 500 r/min離心10 min，分離血漿，按照ELISA 試劑盒說明書檢測(cè)血漿TNF-α、IL-6、E2、P、TXB2、6-keto-PGF1α水平。

1.6 子宮內(nèi)膜病理?yè)p傷觀察 取大鼠子宮，分為2 部分，一部分-80 ℃冰箱保存；另一部分置于4%多聚甲醛中固定過夜，包埋在石蠟中,切4 μm 厚切片，分別進(jìn)行HE 染色和Masson 染色觀察子宮內(nèi)膜的病理?yè)p傷和膠原蛋白的積累。每張切片均隨機(jī)讀取4個(gè)高倍鏡視野，計(jì)數(shù)子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量，并用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件測(cè)量子宮內(nèi)膜的厚度和子宮內(nèi)膜的纖維化面積比。子宮內(nèi)膜厚度為子宮漿膜層和子宮腔表面之間的垂直距離。纖維化面積比=子宮內(nèi)膜間質(zhì)的纖維化面積/子宮內(nèi)膜的間質(zhì)以及腺體總面積（不包括子宮腔）×100%。

1.7 免疫熒光染色法檢測(cè)子宮內(nèi)膜組織中微血管密度（MVD） 取1.6 制備的子宮組織石蠟塊，切取子宮內(nèi)膜組織5μm，微波修復(fù)后用10%正常山羊血清封閉1 h，加入一抗兔抗大鼠CD31 抗體（1∶100），4 ℃過夜，洗去一抗，滴加二抗羊抗兔lgG-FITC（1∶200），室溫孵育1 h，DAPI 復(fù)染細(xì)胞核，甘油封片，于熒光顯微鏡下（×400）取3個(gè)視野，計(jì)算微血管數(shù)，取平均值作為該組織切片的MVD。子宮內(nèi)膜組織中CD31標(biāo)記的內(nèi)皮細(xì)胞呈紅色熒光，DAPI重染細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光，合并圖像中的亮色是微血管。

1.8 qPCR檢測(cè)子宮組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2和MMP-9mRNA的表達(dá) 取-80 ℃冰箱保存的子宮組織，剪碎后使用Trizol 試劑提取總RNA。分光光度計(jì)測(cè)量總RNA 濃度。使用PrimeScriptTMRT 試劑盒將RNA 反轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA（cDNA），進(jìn)行qPCR。反應(yīng)體系（20 μL）：SYBR?Premix Ex TaqTM（2×）10 μL，上下游引物各0.8 μL，cDNA 2 μL，ddH2O 6.4 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性1 min；95 ℃變性18 s，60 ℃持續(xù)55 s，最后72 ℃延伸2 min，40個(gè)循環(huán)。所有反應(yīng)均重復(fù)3 次。mRNA 的表達(dá)量采用2-ΔΔCt方法計(jì)算，β-actin作為內(nèi)參，引物序列見表1。

Tab.1 qPCR primer sequence表1 qPCR引物序列

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism 9.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用SNK-q法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠子宮出血量和TXB2、6-keto-PGF1α水平比較 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血漿TXB2 水 平 降 低 ，6-keto-PGF1α 水 平 增 加（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性組和三七總皂苷高劑量組大鼠子宮出血量、6-keto-PGF1α 水平降低，TXB2水平增加（P＜0.05）；與陽(yáng)性組比較，三七總皂苷高劑量組大鼠上述指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而三七總皂苷低劑量組子宮出血量、6-keto-PGF1α水平均增加，TXB2水平降低（P＜0.05），三七總皂苷中劑量組子宮出血量增加，TXB2 水平降低（P＜0.05），見表2。

Tab.2 Comparison of uterine bleeding and coagulation function of rats between the six groups表2 各組大鼠子宮出血量及凝血功能比較（n=10，）

Tab.2 Comparison of uterine bleeding and coagulation function of rats between the six groups表2 各組大鼠子宮出血量及凝血功能比較（n=10，）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與空白對(duì)照組比較，b與模型組比較，c與陽(yáng)性組比較，d與三七總皂苷低劑量組比較，e與三七總皂苷中劑量組比較，P＜0.05。

組別空白對(duì)照組模型組陽(yáng)性組三七總皂苷低劑量組三七總皂苷中劑量組三七總皂苷高劑量組F子宮出血量（μL）-411.06±45.67 215.84±30.53b 394.52±40.46c 308.64±31.12bcd 220.37±27.80bde 214.603＊＊TXB2（ng/L）503.92±54.08 341.45±42.17a 456.28±49.32b 358.11±40.83ac 390.79±42.61acd 447.66±46.59bd 18.671＊＊6-keto-PGF1α（ng/L）456.47±52.33 593.86±64.29a 480.75±56.32b 583.70±60.01ac 540.24±59.03ad 485.68±55.14bd 9.863＊＊

2.2 各組大鼠血漿炎性因子和雌激素水平比較 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血漿TNF-α、IL-6 水平增加，E2、P 水平降低（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性組和三七總皂苷中、高劑量組大鼠血漿TNF-α、IL-6水平降低，E2水平升高（P＜0.05）；與陽(yáng)性組比較，三七總皂苷高劑量組大鼠上述指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而三七總皂苷中、低劑量組TNF-α、IL-6 水平升高，E2水平降低（P＜0.05），見表3。

Tab.3 Comparison of serum inflammatory factors and estrogen levels of rats between the six groups表3 各組大鼠血清炎性因子和雌激素水平比較 （n=10，μg/L，）

Tab.3 Comparison of serum inflammatory factors and estrogen levels of rats between the six groups表3 各組大鼠血清炎性因子和雌激素水平比較 （n=10，μg/L，）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與空白對(duì)照組比較，b與模型組比較，c與陽(yáng)性組比較，d與三七總皂苷低劑量組比較，e與三七總皂苷中劑量組比較，P＜0.05。

組別空白對(duì)照組模型組陽(yáng)性組三七總皂苷低劑量組三七總皂苷中劑量組三七總皂苷高劑量組F TNF-α 52.18±7.45 116.29±12.14a 81.04±9.38ab 107.84±11.55ac 95.72±12.35abc 84.51±10.69abd 44.834＊＊IL-6 5.44±0.73 17.30±1.10a 8.56±0.92ab 15.58±1.24ac 12.46±1.13abcd 9.21±1.05abde 187.730＊＊E2P 148.15±16.27 93.64±11.50a 133.27±14.96b 102.13±11.65ac 114.52±12.37abc 130.81±13.82bd 23.210＊＊6.35±0.70 5.21±0.63a 5.87±0.66 5.34±0.57a 5.49±0.62a 5.83±0.69 4.211＊＊

2.3 各組大鼠子宮內(nèi)膜病理?yè)p傷情況比較

2.3.1 HE 染色結(jié)果 空白對(duì)照組大鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，排列整齊；模型組大鼠可見子宮內(nèi)膜上絨毛和蛻膜殘留較多，內(nèi)皮細(xì)胞充血水腫，子宮內(nèi)膜缺損。與空白對(duì)照組比較，模型組子宮內(nèi)膜厚度、腺體數(shù)量降低（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性組和三七總皂苷中、高劑量組大鼠子宮內(nèi)膜損傷減輕，子宮內(nèi)膜厚度、腺體數(shù)量增加（P＜0.05）；與陽(yáng)性組比較，三七總皂苷高劑量組大鼠子宮內(nèi)膜厚度、腺體數(shù)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而三七總皂苷中、低劑量組子宮內(nèi)膜厚度、腺體數(shù)量均降低（P＜0.05），見圖1、表4。

Fig.1 HE and Masson staining of endometrium of rats in each group(×200)圖1 各組大鼠子宮內(nèi)膜組織HE、Masson染色（×200）

2.3.2 Masson 染色結(jié)果 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠子宮組織的纖維化面積比增加（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性組和三七總皂苷中、高劑量組大鼠子宮組織的纖維化面積比減少（P＜0.05）；與陽(yáng)性組比較，三七總皂苷高劑量組大鼠子宮組織的纖維化面積比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而三七總皂苷中、低劑量組纖維化面積比增加（P＜0.05），見圖1、表4。

Tab.4 Comparison of pathological damage of endometrium and MVD between the six groups表4 各組大鼠子宮內(nèi)膜病理?yè)p傷和MVD比較（n=10，）

Tab.4 Comparison of pathological damage of endometrium and MVD between the six groups表4 各組大鼠子宮內(nèi)膜病理?yè)p傷和MVD比較（n=10，）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與空白對(duì)照組比較，b與模型組比較，c與陽(yáng)性組比較，d與三七總皂苷低劑量組比較，e與三七總皂苷中劑量組比較，P＜0.05；表5同。

組別空白對(duì)照組模型組陽(yáng)性組三七總皂苷低劑量組三七總皂苷中劑量組三七總皂苷高劑量組F子宮內(nèi)膜厚度（mm）354.82±41.63 186.51±32.94a 312.63±35.17b 201.43±28.69ac 254.78±30.85abcd 307.19±34.34abde 38.175＊＊腺體數(shù)量［個(gè)/高倍鏡視野（HP）］12.70±1.35 4.35±0.82a 10.10±1.13ab 6.65±0.94ac 7.23±0.85abc 9.75±1.06abde 81.235＊＊組別空白對(duì)照組模型組陽(yáng)性組三七總皂苷低劑量組三七總皂苷中劑量組三七總皂苷高劑量組F纖維化面積比（%）20.45±3.36 53.63±5.54a 32.07±4.20ab 48.96±5.12ac 41.25±4.63abcd 36.11±4.15abd 69.245＊＊MVD（個(gè)/HP）27.35±2.81 8.41±1.76a 16.20±1.95ab 9.22±1.34ac 11.37±1.52abc 14.89±1.66abde 134.582＊＊

2.4 各組大鼠子宮內(nèi)膜MVD 比較 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠子宮內(nèi)膜MVD減少（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性組和三七總皂苷中、高劑量組大鼠子宮內(nèi)膜MVD增加（P＜0.05）；與陽(yáng)性組比較，三七總皂苷高劑量組大鼠子宮內(nèi)膜MVD 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而三七總皂苷中、低劑量組子宮內(nèi)膜MVD減少（P＜0.05），見表4、圖2。

2.5 各組大鼠子宮組織VEGF、MMP-2和MMP-9mRNA 表達(dá) 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠子宮組織MMP-2和MMP-9mRNA 表達(dá)水平增加，VEGFmRNA 表達(dá)水平降低（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性組和三七總皂苷高劑量組大鼠子宮組織VEGFmRNA 表達(dá)增加，MMP-2和MMP-9mRNA 表達(dá)水平降低（P＜0.05）；與陽(yáng)性組比較，三七總皂苷高劑量組大鼠子宮組織上述指標(biāo)表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而三七總皂苷低劑量組MMP-2和MMP-9mRNA 表達(dá)水平增加，VEGFmRNA 表達(dá)降低，三七總皂苷中劑量組VEGFmRNA 表達(dá)水平降低（P＜0.05），見表5。

Fig.2 Immunofluorescence staining of CD31 in endometrium of rats in each group(×400)圖2 各組大鼠子宮內(nèi)膜CD31免疫熒光染色（×400）

Tab.5 Comparison of VEGF,MMP-2 and MMP-9 mRNA expression in uterine tissues of rats between the six groups表5 各組大鼠子宮組織中VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA表達(dá)比較 （n=10，）

Tab.5 Comparison of VEGF,MMP-2 and MMP-9 mRNA expression in uterine tissues of rats between the six groups表5 各組大鼠子宮組織中VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA表達(dá)比較 （n=10，）

組別空白對(duì)照組模型組陽(yáng)性組三七總皂苷低劑量組三七總皂苷中劑量組三七總皂苷高劑量組F VEGF 1.00±0.00 0.64±0.07a 1.32±0.13ab 0.72±0.09ac 0.93±0.10bcd 1.25±0.14abde 75.536＊＊MMP-2 1.00±0.00 1.51±0.15a 1.23±0.14ab 1.45±0.12ac 1.39±0.17a 1.27±0.15abd 18.916＊＊MMP-9 1.00±0.00 1.43±0.16a 1.17±0.12ab 1.38±0.14ac 1.31±0.15a 1.20±0.13abd 15.065＊＊

3 討論

AUB 的主要病理特征是有大量出血、子宮內(nèi)膜損傷、子宮組織炎癥及凝血缺陷。懷孕大鼠在給予米非司酮和米索前列醇灌胃后出現(xiàn)大量月經(jīng)出血和殘留壞死蛻膜，這與AUB 的癥狀一致。TXB2 和6-keto-PGF1α 是影響凝血功能的常見因素，TXB2 由TXA2 轉(zhuǎn)化而來，影響血小板聚集和血管收縮；6-keto-PGF1α 通過抑制血小板聚集而發(fā)揮抗凝作用［11］。藥物引起的不完全流產(chǎn)后機(jī)體激素水平降低可觸發(fā)炎癥細(xì)胞流入子宮內(nèi)膜，導(dǎo)致蛻膜和絨毛的降解和壞死。TNF-α 和IL-6 是與炎癥相關(guān)的常見細(xì)胞因子，TNF-α的過度表達(dá)與著床、胎盤和妊娠相關(guān)的炎癥機(jī)制有關(guān)，對(duì)妊娠有不利影響，可導(dǎo)致流產(chǎn)；過度表達(dá)的IL-6也對(duì)妊娠產(chǎn)生負(fù)面影響［12］。本研究結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組子宮出血量、6-keto-PGF1α、TNF-α、IL-6 水平均增加，而TXB2、E2、P 降低；病理染色可見模型組子宮內(nèi)膜上絨毛和蛻膜殘留較多，內(nèi)皮細(xì)胞充血水腫，子宮內(nèi)膜缺損，表明模型大鼠子宮發(fā)生炎癥和凝血功能障礙，子宮內(nèi)膜損傷，AUB模型構(gòu)建成功。

三七總皂苷是一種含有多種不同皂苷的混合物，具有顯著的抗炎和雌激素樣生物活性。研究顯示，三七總皂苷可降低血清TNF-α、IL-6 以及白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，減輕油酸脂多糖所致的大鼠急性肺損傷［13］；可改善小鼠缺血再灌注后白細(xì)胞黏附和腦血管內(nèi)皮屏障破壞［14］；還可抑制TNF-α誘導(dǎo)的骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞衰老和凋亡［15］。因此，三七總皂苷可以用作抗炎劑。Fan 等［16］發(fā)現(xiàn)，三七總皂苷可預(yù)防雌激素缺乏引起的骨質(zhì)流失。本研究結(jié)果顯示，模型大鼠在給予高劑量三七總皂苷干預(yù)后，子宮出血量、6-keto-PGF1α 和炎性因子水平降低，TXB2、E2升高，子宮內(nèi)膜損傷減輕，提示高劑量三七總皂苷可治療流產(chǎn)大鼠子宮出血，其治療作用可能與抑制子宮內(nèi)膜炎癥、促進(jìn)雌孕激素水平和凝血功能恢復(fù)有關(guān)。

合適厚度的子宮內(nèi)膜能夠?yàn)榕咛ブ踩胩峁﹥?yōu)良的場(chǎng)所，是確保妊娠成功的關(guān)鍵，但是人工流產(chǎn)極易損傷子宮內(nèi)膜，使其厚度過薄，內(nèi)膜腺體及間質(zhì)出現(xiàn)萎縮，同時(shí)纖維組織明顯地增生，內(nèi)膜逐漸瘢痕化，影響子宮內(nèi)膜容受性，進(jìn)而導(dǎo)致胚胎著床失敗。子宮內(nèi)膜的厚度、腺體數(shù)量及纖維化程度是衡量子宮內(nèi)膜損傷是否得到修復(fù)的重要指標(biāo)。MMP 可通過基底膜破壞子宮內(nèi)膜間連接，影響子宮內(nèi)膜的重建和修復(fù)。三七總皂苷能降低MMP-9水平，改善心肌梗死大鼠的心功能和纖維化［17］。本研究結(jié)果顯示，高劑量的三七總皂苷能增加模型大鼠的子宮內(nèi)膜厚度和腺體數(shù)量，降低纖維化面積比及MMP-2和MMP-9mRNA表達(dá)水平，減輕子宮纖維化程度，表明高劑量三七總皂苷可促進(jìn)子宮內(nèi)膜損傷后的修復(fù)。

組織的再生修復(fù)依賴于血管的生成及血流灌注情況，因此血管生成情況也是子宮內(nèi)膜修復(fù)評(píng)價(jià)指標(biāo)。MVD是衡量微血管新生的定量指標(biāo)，即子宮內(nèi)膜組織中MVD 值越高，新生毛細(xì)血管越豐富；且與血管生成密切相關(guān)的VEGF被認(rèn)為是子宮內(nèi)膜修復(fù)的關(guān)鍵因素［18］。三七總皂苷也是潛在的血管生成劑，其可通過促進(jìn)骨質(zhì)疏松模型小鼠的血管生成來預(yù)防骨質(zhì)流失［19］，并增加VEGF表達(dá)，促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞血管生成［20］。本研究結(jié)果顯示，模型大鼠子宮MVD和VEGF較正常大鼠降低，而高劑量的三七總皂苷干預(yù)后子宮MVD和VEGFmRNA水平增加，新生血管增多，提示高劑量三七總皂苷可促進(jìn)血管生成。

綜上所述，高劑量三七總皂苷可治療流產(chǎn)大鼠子宮出血，其作用機(jī)制可能是抑制過度纖維化和炎癥，上調(diào)VEGF 表達(dá)，促進(jìn)血管重塑，進(jìn)而促進(jìn)子宮內(nèi)膜修復(fù)，但其通過何種途徑減輕子宮組織炎癥反應(yīng)和纖維化程度，仍有待進(jìn)一步研究。此外，已知三七總皂苷是一種活性化合物的混合物，明確這些化合物中促進(jìn)子宮血管生成的皂苷，以及這些皂苷是否具有協(xié)同作用以驅(qū)動(dòng)血管生成活性，也是今后研究的重點(diǎn)。