亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        木香烴內(nèi)酯對糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用

        2022-04-21 12:49:58宋冬林王玉良
        武警醫(yī)學(xué) 2022年4期
        關(guān)鍵詞:性反應(yīng)腎小球氧化應(yīng)激

        宋冬林,王玉良

        糖尿病腎臟疾病(diabetic kidney disease,DKD)是最常見的糖尿病慢性并發(fā)癥之一,是導(dǎo)致終末期腎衰竭的主要原因,其中氧化應(yīng)激與慢性炎性反應(yīng)被認(rèn)為是DKD發(fā)病的關(guān)鍵所在,目前DKD的治療方法主要以低蛋白飲食、控制血糖血壓、調(diào)節(jié)血脂水平等為主。傳統(tǒng)中醫(yī)藥具有多層次、多環(huán)節(jié)、多途徑、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn),木香為常用中藥材,其所含木香烴內(nèi)酯(costunolide,CS)具有抗氧化應(yīng)激和抗炎作用,可抑制一氧化氮(nitric oxide,NO)及活化κ基因結(jié)合核因子(nuclear factor-κ-gene binding,NF-κB),產(chǎn)生抗炎作用。同時(shí)還具有通過核因子E2相關(guān)因子2/抗氧化反應(yīng)元件(nuclear factor erythroid 2-related factor 2/antioxidant responseelement,Nrf2/ARE)依賴途徑,產(chǎn)生抗氧化應(yīng)激作用。本研究旨在探討CS對糖尿病大鼠腎臟損傷的保護(hù)作用。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠70只,雄性、8周齡,體重(260±20)g,清潔級,由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號: SCXK(軍)2012-0004。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,飼養(yǎng)條件:室溫恒定于22~25 ℃,相對濕度55%~60%,光照時(shí)間12 h/d,食物和純凈水可自由攝取。

        1.2 藥物及試劑 鏈脲佐菌素(streptozocin,STZ,Sigma公司);甘精胰島素(賽諾菲安萬特制藥有限公司);木香烴內(nèi)酯(中國藥品生物制品研究所110765-200710);血糖儀及試紙(美國強(qiáng)生穩(wěn)豪倍優(yōu)型血糖儀);超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)測試盒、谷胱甘肽(glutathione,GSH)試劑盒、丙二醛(malondialdehyde,MDA)試劑盒、核蛋白提取試劑盒(南京建成工程研究所);Histone H、GAPDH、 NF-кB p65、κB抑制劑激酶β(inhibitor kappa B kinase β,IKKβ)兔多克隆抗體(美國CST公司);Nrf2、血紅素氧合酶1(hemeoxygenase1,HO-1)兔單克隆抗體(英國Abcam公司);二抗(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司);白細(xì)胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α) ELISA試劑盒(天津潤泰科技發(fā)展有限公司)。

        1.3 實(shí)驗(yàn)方法

        1.3.1 分組及造模 隨機(jī)分出12只設(shè)為正常組,予以普通飼料飼養(yǎng);其余58只大鼠給予高脂高糖飼料(在普通飼料中加入10%豬油和20%蔗糖,混勻干燥后消毒滅菌)8周后,鼠尾靜脈注射STZ(30 mg/kg,溶于0.1 mol/L無菌枸櫞酸緩沖液,pH 4.4),注射后72 h檢測尾靜脈血糖,以連續(xù)3 d 血糖≥16.7 mmol/L為糖尿病大鼠成模標(biāo)準(zhǔn)。共剔除7只,造模過程死亡2只,剩余49只隨機(jī)分為糖尿病組(13只),胰島素組(12只),木香烴內(nèi)酯低、高劑量組(各12只)。其中CS低、高劑量組每天給予CS灌胃10 mg/kg、20 mg/kg,正常組與糖尿病組均給予等量生理鹽水灌胃,胰島素組每天給予甘精胰島素皮下注射,2 U/(kg/d)。各組均給藥8周。

        1.3.2 標(biāo)本獲取與分析 于給藥后每周測定各組大鼠體重、血糖。給藥8周后,全部大鼠予10%水合氯醛麻醉,腹主動(dòng)脈取血分離血清測定肌酐、尿素氮濃度,部分血清-80 ℃凍存作相關(guān)指標(biāo)測定,大鼠頸椎脫臼法處死后快速剝離雙腎,切取部分腎臟組織4%中性甲醛固定做HE染色病理切片,剩余組織-80 ℃凍存作相關(guān)指標(biāo)測定。

        1.3.3 腎組織病理學(xué)觀察 固定的腎組織,石蠟包埋,常規(guī)切片,進(jìn)行HE染色,切片在光鏡下經(jīng)數(shù)字CCD獲取圖像(×100)。

        1.3.4 血清抗氧化指標(biāo)和腎臟組織炎性因子檢測 按照試劑盒說明書步驟檢測大鼠血清SOD、GSH及MDA含量,制取腎臟組織勻漿后采用ELISA法檢測IL-6、TNF-α表達(dá)水平,具體方法依照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行。

        1.3.5 測定腎臟組織中Nrf2、HO-1及NF-кB p65、IKKβ表達(dá) 取低溫冰箱保存的200 mg腎臟組織,用預(yù)冷的生理鹽水沖洗后,在冰上研磨,利用核蛋白提取試劑盒提取總蛋白和核蛋白,BCA蛋白定量法測定蛋白濃度,各組樣本分別取總蛋白100 μg變性后進(jìn)行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳進(jìn)行蛋白質(zhì)分離,后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜,將膜室溫封閉 5 h。與特異性的一抗4 ℃孵育過夜,與二抗室溫孵育2 h后,化學(xué)發(fā)光法顯影于X膠片掃描后,核內(nèi)蛋白以Histone H 作為標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參,胞漿蛋白以GAPDH作為標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參。采用 Quantityone圖像分析軟件對蛋白條帶進(jìn)行分析,蛋白相對表達(dá)含量以目的蛋白條帶的灰度值與內(nèi)參蛋白條帶的灰度值的比值表示。

        2 結(jié) 果

        2.1 一般情況 正常組大鼠一般情況良好,成模鼠逐漸出現(xiàn)飲水、進(jìn)食及尿量增加,皮毛凌亂而無光澤,體重增長緩慢,活動(dòng)減少。藥物干預(yù)后,CS低、高劑量組與糖尿病組比較,上述表現(xiàn)顯著改善。造模過程中死亡2只,CS低劑量組和胰島素組各死亡1只,CS高劑量組未出現(xiàn)動(dòng)物死亡。

        2.2 CS對糖尿病大鼠血糖及腎功能的影響 藥物干預(yù)第2周CS高劑量組血糖低于糖尿病組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(=0.035),第4周CS低劑量組血糖低于糖尿病組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(=0.001)。但CS低、高劑量組血糖水平仍高于胰島素組(<0.01)。CS治療組大鼠血清肌酐、尿素氮濃度均低于糖尿病組,肌酐低于胰島素組(<0.01),CS高劑量組水平較CS低劑量組有降低趨勢,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

        表1 各組大鼠血糖及腎功能變化情況

        2.3 CS對糖尿病大鼠腎臟病理改變的影響 HE染色顯示:正常組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)完整,腎小球囊壁光滑,腎小管上皮排列整齊,系膜細(xì)胞分布正常,毛細(xì)血管管腔清晰,未見增生及纖維化表現(xiàn);糖尿病組大鼠腎小球體積增大,腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)目增多,腎小囊變窄,少數(shù)腎小球出現(xiàn)輕度硬化,部分腎小管上皮細(xì)胞腫脹,空泡變性,系膜細(xì)胞增殖,部分間質(zhì)小血管玻璃樣變性;給藥組尤其是CS高劑量組大鼠上述病變明顯較糖尿病組減輕,表現(xiàn)為腎小球體積輕度增大,未見腎小球囊粘連,腎小管上皮細(xì)胞腫脹較輕,腎小球系膜輕度增寬,基底膜輕度增厚(圖1)。

        圖1 各組糖尿病實(shí)驗(yàn)大鼠腎臟組織HE染色結(jié)果(×100)

        2.4 CS對糖尿病大鼠血清SOD、GSH、MDA及腎臟IL-6、TNF-α的影響 糖尿病組大鼠血清SOD、GSH均顯著減少,而CS低、高劑量組SOD、GSH的水平均明顯增高。氧化應(yīng)激產(chǎn)物MDA在糖尿病組中增加,而CS低、高劑量組均顯著降低。CS低、高劑量組腎臟組織中IL-6、TNF-α水平均低于糖尿病組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CS高劑量組GSH水平高于CS低劑量組(=0.024),而IL-6低于CS低劑量組(<0.01),見表2。

        表2 各組糖尿病實(shí)驗(yàn)大鼠血清SOD、GSH和MDA的變化情況

        2.5 CS對糖尿病大鼠腎臟Nrf2、HO-1、NF-кB p65、IKKβ蛋白表達(dá)的影響 糖尿病組腎臟組織中的Nrf2、HO-1蛋白表達(dá)較正常組顯著降低,而CS低、高劑量治療均可以顯著增加糖尿病大鼠腎臟Nrf2,HO-1蛋白的表達(dá),與糖尿病組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(<0.05)。糖尿病組腎臟組織中NF-кB p65、IKKβ蛋白表達(dá)較正常組顯著升高,而CS低、高劑量組均可以顯著下調(diào)糖尿病大鼠腎臟NF-кB p65、IKKβ蛋白的表達(dá),與糖尿病組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(<0.05)(圖2、表3)。

        圖2 各組糖尿病實(shí)驗(yàn)大鼠腎臟組織中NF-кB p65、Nrf2、IKKβ、HO-1蛋白水平

        表3 各組糖尿病實(shí)驗(yàn)大鼠腎臟中的NF-кB p65、IKKβ、Nrf2、HO-1蛋白變化情況

        3 討 論

        糖尿病患者中有20%~40%發(fā)生DKD,是糖尿病患者腎衰竭的主要原因。DKD 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,其中氧化應(yīng)激、炎性反應(yīng)是DKD 發(fā)生發(fā)展的重要原因之一。糖代謝紊亂產(chǎn)生過多的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)可使細(xì)胞外基質(zhì)增加,刺激腎小球系膜細(xì)胞增殖,增加血管通透性,引起基底膜增厚、腎小球肥大和硬化。Nrf2是近年新發(fā)現(xiàn)的機(jī)體抗氧化功能最重要的防御性轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,Nrf2通過調(diào)控Ⅱ相酶的表達(dá),誘導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生自然保護(hù)反應(yīng),目前被認(rèn)為是對抗糖尿病引起的氧化應(yīng)激及炎性反應(yīng)的新通路。HO-1是Nrf2/ARE通路轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的抗氧化蛋白,其表達(dá)與Nrf2具有相關(guān)性。單核/巨噬細(xì)胞浸潤是糖尿病腎病炎性反應(yīng)的特征性表現(xiàn)之一,NF-κB是介導(dǎo)炎性反應(yīng)的核轉(zhuǎn)錄因子,其過度激活可導(dǎo)致多種炎性反應(yīng)因子的表達(dá)分泌異常。炎性細(xì)胞通過分泌TNF-ɑ、IL-1、IL-6 等細(xì)胞因子和炎性介質(zhì),以及產(chǎn)生ROS等造成腎組織結(jié)構(gòu)的破壞,加速腎小球硬化的進(jìn)程。

        中藥木香味辛、苦、性溫,入脾、胃、大腸、三焦經(jīng),主治脾、胃、大腸、肝膽病。CS是從木香屬類植物中提取的一類倍半萜內(nèi)酯類化合物,具有廣泛的藥理活性,是中藥木香的主要化學(xué)成分和質(zhì)量控制成分之一,具有抗腫瘤、降血糖、抑制機(jī)體對乙醇的吸收、抑制微生物活性等作用,以及抗炎和抗氧化雙重作用。本研究首次證實(shí),CS對糖尿病大鼠腎臟損傷具有保護(hù)作用,可能與降低血糖及減輕氧化應(yīng)激損傷、抑制慢性炎性反應(yīng)有關(guān)。

        本研究發(fā)現(xiàn),CS治療組大鼠多飲、多尿緩解,體重有所增加,腎臟功能及病理損傷改善明顯;CS具有一定的降糖作用且有量效關(guān)系,但其降糖作用與胰島素治療組相比仍有差距,說明CS緩解糖尿病大鼠癥狀及改善腎臟結(jié)構(gòu)功能可能還有獨(dú)立于降糖作用之外的途徑。Eliza 等報(bào)道了CS的降糖及調(diào)脂作用,最初認(rèn)為是通過抑制NO合成酶的表達(dá)而促進(jìn)胰島β細(xì)胞分泌胰島素,后續(xù)研究證明CS是通過抑制氧化應(yīng)激而起作用。氧化應(yīng)激還能加劇胰島β細(xì)胞的凋亡,降低胰島素的合成與分泌,從而進(jìn)一步加劇糖代謝紊亂。腎臟對氧化應(yīng)激比較敏感,因而也是氧化應(yīng)激的主要靶點(diǎn)。糖代謝紊亂過程中會(huì)產(chǎn)生大量氧自由基,這些產(chǎn)物不僅會(huì)直接導(dǎo)致腎臟組織和細(xì)胞損傷,還可以激活一系列氧化應(yīng)激相關(guān)的損傷信號通路,從而加重氧化損傷。SOD、GSH、維生素E是機(jī)體清除氧自由基的屏障,通過抗氧化治療能夠逆轉(zhuǎn)氧化應(yīng)激對組織的損傷,從而阻止或延緩糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展。

        本研究結(jié)果顯示,糖尿病大鼠的血清中SOD、GSH顯著降低,而氧化應(yīng)激的主要標(biāo)志物MDA顯著增加,CS治療組可以顯著增加SOD、GSH含量,降低MDA的表達(dá),并且CS對糖尿病大鼠血清GSH的影響還具有量效關(guān)系。同時(shí)CS還可以顯著增加氧化應(yīng)激核心轉(zhuǎn)錄因子Nrf2的核內(nèi)表達(dá),增加Nrf2通路中的核心因子HO-1蛋白的表達(dá)。說明CS在改善DKD損傷中可能通過調(diào)節(jié)Nrf2通路來發(fā)揮抗氧化作用。慢性炎性反應(yīng)是DKD發(fā)生與發(fā)展的關(guān)鍵因素之一,轉(zhuǎn)錄因子NF-кB是控制炎性基因表達(dá)的樞紐,NF-кB的過度活化是DKD發(fā)生的重要原因。IKK復(fù)合體在NF-кB的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起著重要作用, 其中IKKβ是IKK復(fù)合體的酶活性亞單位,其激活或者失活將直接影響NF-кB的活化及底物蛋白的磷酸化、降解。

        糖尿病相關(guān)高血糖、ROS的生成、基化終末產(chǎn)物與其特異性受體的結(jié)合等途徑均可刺激體內(nèi)NF-кB的激活,活化的NF-кB進(jìn)一步介導(dǎo)下游炎性因子、趨化因子的形成和大量釋放,這些因子的釋放可引發(fā)機(jī)體慢性炎性反應(yīng),造成糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠腎臟中NF-кB p65在核內(nèi)表達(dá)增高,同時(shí)伴有NF-кB輔助活化因子IKKβ增高;同時(shí)還發(fā)現(xiàn),炎性因子IL-6、TNF-α在糖尿病大鼠腎臟組織中也顯著升高,而CS可以顯著抑制這些炎性因子,所有炎性指標(biāo)均較糖尿病組明顯降低,并且CS對糖尿病大鼠IL-6的降低還具有量效關(guān)系。說明CS在緩解DKD損傷中可能通過調(diào)節(jié)NF-кB通路來發(fā)揮抗炎性反應(yīng)作用。有研究發(fā)現(xiàn)CS除抑制NO產(chǎn)生和NF-κB活化外,也能降低MAPKs蛋白激酶的活化和AP-1蛋白的DNA結(jié)合活性,從而抑制單核巨噬細(xì)胞IL-1β基因的表達(dá)。 近期有研究表明,在炎性疾病中CS可下調(diào)過度表達(dá)的NF-κB,降低組織TNF-α水平起到治療炎性疾病的作用。由于NF-кB信號通路在許多炎性疾病過程中發(fā)揮重要作用,所以成為開發(fā)治療炎性疾病藥物的重要靶點(diǎn)。

        綜上所述,CS可以顯著保護(hù)糖尿病大鼠早期腎臟損傷,這種保護(hù)功能可能是通過調(diào)節(jié)Nrf2通路來發(fā)揮抗氧化作用,以及影響NF-кB通路發(fā)揮抗炎的雙重作用來實(shí)現(xiàn)的。本研究結(jié)果為今后CS的臨床應(yīng)用及DKD的防治提供了新的方向,但在CS抗氧化與抗炎作用,以及診斷DKD治療靶點(diǎn)方面還有待進(jìn)一步研究。

        猜你喜歡
        性反應(yīng)腎小球氧化應(yīng)激
        腸道菌群失調(diào)通過促進(jìn)炎性反應(yīng)影響頸動(dòng)脈粥樣硬化的形成
        基于炎癥-氧化應(yīng)激角度探討中藥對新型冠狀病毒肺炎的干預(yù)作用
        中西醫(yī)治療慢性腎小球腎炎80例療效探討
        氧化應(yīng)激與糖尿病視網(wǎng)膜病變
        促?;鞍讓?T3-L1脂肪細(xì)胞炎性反應(yīng)的影響
        腎小球系膜細(xì)胞與糖尿病腎病
        氧化應(yīng)激與結(jié)直腸癌的關(guān)系
        多種不同指標(biāo)評估腎小球?yàn)V過率價(jià)值比較
        中西醫(yī)結(jié)合治療小兒急性腎小球腎炎的療效觀察
        槲皮素及其代謝物抑制氧化應(yīng)激與炎癥
        三级国产高清在线观看| 亚洲aⅴ无码日韩av无码网站| 永久免费毛片在线播放| 免费在线国产不卡视频| 亚洲熟妇色自偷自拍另类| 麻豆亚洲av永久无码精品久久| 欧美日韩中文字幕久久伊人| 青青草绿色华人播放在线视频 | 久久一道精品一区三区| 日本中文字幕一区二区高清在线| 中文字幕在线免费| 日韩极品免费在线观看| 亚洲成人av一二三四区| 无遮挡又爽又刺激的视频| 欧美成人免费看片一区| 日韩亚洲一区二区三区在线 | 中文字幕在线亚洲精品一区| 一本一道vs无码中文字幕| 欲妇荡岳丰满少妇岳 | 久久99国产精品久久| 伦人伦xxxx国语对白| 国产AV秘 无码一区二区三区| 中文字幕一区二三区麻豆| 精品久久久久久久久午夜福利| 欧美三级乱人伦电影| 亚洲精品国产熟女久久| 91自拍视频国产精品| 东北妇女肥胖bbwbbwbbw| 51精品视频一区二区三区| 青青草免费视频一区二区| 欲香欲色天天综合和网| 国产一区二区三区美女| 国产精品一区二区三区色| 中文字幕亚洲精品久久| 大肉大捧一进一出好爽视频mba| 成人精品国产亚洲欧洲| 国产在线观看午夜视频| 亚洲av无码国产精品色软件下戴| 久久九九青青国产精品| 国产精品髙潮呻吟久久av| 成人影院yy111111在线|