祁 娜，白田妹，徐天朝

0 引 言

精神分裂癥是臨床上常見(jiàn)的重性精神障礙，患者可能存在嚴(yán)重的認(rèn)知功能損傷[1]。我國(guó)精神分裂癥12月患病率和終生患病率分別為0.6%和0.7%[2]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一段經(jīng)RNA域轉(zhuǎn)錄、長(zhǎng)度>200個(gè)核苷酸的RNA片段，在表觀遺傳學(xué)調(diào)控和細(xì)胞周期調(diào)控中起到重要作用[3]。lncRNA在精神分裂癥中的作用近年來(lái)受到廣泛關(guān)注。既往研究證實(shí)，lncRNA在精神分裂癥早期診斷、病情及療效評(píng)價(jià)中有重要價(jià)值[4-5]。lncRNA與精神分裂患者認(rèn)知功能 的關(guān)系既往少有報(bào)道。精神分裂癥患者認(rèn)知功能損傷與炎癥損傷密切相關(guān)[6]，而lncRNA又與炎癥損傷的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)[3]，因此我們推測(cè)lncRNA與精神分裂癥患者的認(rèn)知功能有關(guān)。lncRNA TMEVPG1由位于干擾素基因附近的基因編碼，可影響干擾素γ的表達(dá)水平，進(jìn)而介導(dǎo)免疫炎癥[7]。lncRNA NRON已被證實(shí)與造血和免疫密切相關(guān)[8]。TMEVPG1和 NRON已證實(shí)在精神分裂癥患者中高表達(dá)，并且與血清炎癥因子白細(xì)胞介素6的表達(dá)呈正相關(guān)[9]，但是兩者在精神分裂癥中的臨床價(jià)值既往少有報(bào)道。本研究采用熒光定量PCR檢測(cè)首發(fā)精神分裂癥患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中TMEVPG1、NRON的表達(dá)水平，用MATRICS 公認(rèn)認(rèn)知成套測(cè)驗(yàn)(MATRICS consensus cognitive battery，MCCB)評(píng)價(jià)認(rèn)知功能，分析兩者關(guān)系，旨在為理解精神分裂癥患者的認(rèn)知功能障礙提供新思路。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象選擇2016年6月至2018年6月本院門(mén)診收治的68例精神分裂癥患者(精神分裂癥組)，全血標(biāo)本凍存于-80 ℃冰箱。納入標(biāo)準(zhǔn)：①首發(fā)精神分裂癥患者，符合美國(guó)精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)(第五版)的診斷[10]；②未服用抗精神病藥、抗抑郁藥和精神活性藥物等；③可配合完成MCCB測(cè)驗(yàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①急慢性感染性疾?。虎诰癜l(fā)育遲滯；③腦器質(zhì)性疾病；④內(nèi)分泌或免疫系統(tǒng)疾病。同期來(lái)自本院體檢中心的50例健康人作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①無(wú)精神疾病或精神疾病家族史；②可配合完成MCCB測(cè)驗(yàn)；③無(wú)重大軀體疾病。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)[批準(zhǔn)號(hào)：倫審K(2015)12號(hào)]，所有受試者簽署知情同意書(shū)。

1.2 檢測(cè)方法樣本檢測(cè)于2019年1-9月完成。用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，F(xiàn)icoll分離液購(gòu)于華雅再生醫(yī)學(xué)生物工程技術(shù)有限公司，貨號(hào)為17-5442-02。用Trizol法提取細(xì)胞總RNA，隨后反轉(zhuǎn)錄為cDNA。總RNA提取試劑盒和反轉(zhuǎn)錄試劑盒均購(gòu)于上海聯(lián)邁生物工程有限公司，貨號(hào)分別為L(zhǎng)M18-75400和BC4075。用SYBR Select Master Mix試劑盒進(jìn)行熒光定量PCR，試劑盒購(gòu)于上海聯(lián)邁生物工程有限公司，貨號(hào)為L(zhǎng)M3812A。TMEVPG1和 NRON引物均由蘇州泓迅生物科技股份有限公司設(shè)計(jì)并提供，TMEVPG1引物序列：上游5′- CCCAAGCTTGCGTTCTTTTCGAGGTCGGC-3′，下游5′- CCGGAATTCTGACGGTAGTTTCCCAAGTT-3′；NRON引物序列：上游5′-AGUUUUGCAUAGUUGCACUCAC-3′；下游5′-GCTCACTGCAACCTCCTCCTCC-3’。 內(nèi)參β-actin：上游 5′-TGGAATCCTGTGGCATCCATGAAAC-3′；下游5′- ACGCAGCTCAGTAACAGTCCG-3′。反應(yīng)條件為：50 ℃ 120 s；95 ℃ 120 s；95 ℃ 15 s；60 ℃ 60 s，共40個(gè)循環(huán)。用2-△△Ct法計(jì)算TMEVPG1和 NRON相對(duì)表達(dá)量。

1.3 臨床評(píng)估

1.3.1 精神分裂癥的癥狀嚴(yán)重程度用陽(yáng)性與陰性癥狀量表(Positive and Negative Syndrome Scale，PANSS)評(píng)價(jià)精神分裂癥的癥狀嚴(yán)重程度，評(píng)分包括陽(yáng)性分量表7項(xiàng)(妄想、概念紊亂、幻覺(jué)、興奮、夸大、猜疑/被害、敵對(duì))、陰性分量表7項(xiàng)(情感遲鈍、情感退縮、交流障礙、退縮、抽象思維困難、交談缺乏自發(fā)性和流暢性、刻板思維)、精神病理分量表16項(xiàng)(焦慮、自罪感和緊張等)，分值越高癥狀越重。該量表標(biāo)準(zhǔn)化Cronbach α值為0.8707，信效度較好[11]。

圖1 TMEVPG1、NRON單獨(dú)以及聯(lián)合診斷精神分裂癥的ROC曲線(xiàn)

1.3.2 認(rèn)知功能用MCCB對(duì)認(rèn)知功能進(jìn)行評(píng)價(jià)，該系統(tǒng)用于精神分裂癥患者認(rèn)知功能評(píng)估有較好的敏感性，與功能評(píng)定和臨床評(píng)定量表之間具有較高的一致性[12]。MCCB共包含9個(gè)分測(cè)驗(yàn)，評(píng)估7個(gè)認(rèn)知維度。①信息處理加工速度：連線(xiàn)測(cè)驗(yàn)、符號(hào)編碼測(cè)驗(yàn)、語(yǔ)義流暢測(cè)驗(yàn)；②注意/警覺(jué)：持續(xù)操作測(cè)驗(yàn)；③工作記憶：空間廣度測(cè)驗(yàn)；④言語(yǔ)學(xué)習(xí)：霍普金斯詞語(yǔ)學(xué)習(xí)測(cè)驗(yàn)；⑤視覺(jué)學(xué)習(xí)：空間記憶測(cè)驗(yàn)；⑥推理/問(wèn)題解決：迷宮測(cè)驗(yàn)；⑦社會(huì)認(rèn)知：情緒管理測(cè)驗(yàn)。將評(píng)分的粗分轉(zhuǎn)化成標(biāo)準(zhǔn)T分(均數(shù)為50，標(biāo)準(zhǔn)差為10)后進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1 一般資料比較2組性別、年齡和受教育年限等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性，見(jiàn)表1。

2.2 精神分裂癥患者外周血單個(gè)核細(xì)胞TMEVPG1、NRON的表達(dá)水平及其診斷價(jià)值精神分裂癥組單個(gè)核細(xì)胞TMEVPG1、NRON的相對(duì)表達(dá)量分別為(4.80±1.12)和(3.14±1.24)，對(duì)照組分別為(2.06±0.89)和(1.67±0.73)，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。TMEVPG1、NRON診斷精神分裂癥的AUC分別為0.801和0.719，當(dāng)截?cái)嘀禐?.15、2.94時(shí)，約登指數(shù)最大(分別為0.539和0.541)，此時(shí)靈敏度分別為80.56%和72.95%，特異度分別為73.33%和81.10%，兩者聯(lián)合檢測(cè)可將AUC提高至0.854，見(jiàn)圖1。

表1 入組受試者一般資料比較

2.3 精神分裂癥的癥狀嚴(yán)重程度和認(rèn)知功能精神分裂癥患者PANSS量表陽(yáng)性癥狀評(píng)分為(25.60±3.08)分，陰性癥狀評(píng)分為(23.14±3.41)分，精神病理癥狀評(píng)分為(40.03±4.81)分，總分為(89.13±12.14)分。MCCB測(cè)驗(yàn)評(píng)分結(jié)果見(jiàn)表2。與對(duì)照組比較，精神分裂癥患者信息處理加工速度、注意警覺(jué)性、工作記憶、言語(yǔ)學(xué)習(xí)、視覺(jué)學(xué)習(xí)、推理問(wèn)題解決和社會(huì)認(rèn)知均較差(P<0.01)。

表2 入組受試者M(jìn)CCB測(cè)驗(yàn)結(jié)果比較分)

2.4 TMEVPG1、NRON與精神分裂癥患者癥狀嚴(yán)重程度的關(guān)系相關(guān)性分析結(jié)果顯示，TMEVPG1和NRON水平均與PANSS量表陰性癥狀評(píng)分和總分呈正相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 TMEVPG1、NRON與精神分裂癥患者癥狀嚴(yán)重程度的關(guān)系

2.5 TMEVPG1、NRON與精神分裂癥患者認(rèn)知功能的關(guān)系相關(guān)性分析結(jié)果顯示，TMEVPG1與精神分裂癥患者信息處理加工速度和工作記憶呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，NRON水平與注意警覺(jué)性呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 TMEVPG1、NRON與精神分裂癥患者認(rèn)知功能的關(guān)系

3 討 論

精神分裂癥嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量[13]。隨著全基因組關(guān)聯(lián)研究的進(jìn)展，近年來(lái)精神分裂癥分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)的信息激增。越來(lái)越多研究顯示，lncRNA參與了精神分裂癥的發(fā)生和發(fā)展[5,14-15]。lncRNA多位于細(xì)胞核，在哺乳動(dòng)物大腦和基因組中高表達(dá)[16]。腦組織和外周血白細(xì)胞的基因表達(dá)有共同調(diào)節(jié)通路，腦組織中高表達(dá)的lncRNA在外周血中也有明顯表達(dá)[17]。通過(guò)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞lncRNA表達(dá)水平可以反映腦組織水平變化[17]。本研究采用熒光定量PCR檢測(cè)了外周血單個(gè)核細(xì)胞TMEVPG1、NRON的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)精神分裂癥患者TMEVPG1、NRON表達(dá)水平明顯高于健康人。本研究結(jié)果顯示，TMEVPG1、NRON表達(dá)水平與精神分裂癥患者病情嚴(yán)重程度和認(rèn)知功能有關(guān)。

lncRNA與精神分裂癥的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，其機(jī)制可能涉及以下幾個(gè)方面：①調(diào)控與精神分裂癥相關(guān)的基因[18]，另外lncRNA異常甲基化會(huì)增加精神分裂癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[19]；②通過(guò)介導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)促進(jìn)精神分裂癥的發(fā)生和發(fā)展[9]；③影響大腦結(jié)構(gòu)(如杏仁核和海馬)和神經(jīng)突觸可塑性[20]。總之，lncRNA在精神分裂癥中的作用機(jī)制目前尚未明確，值得深入探究。本研究檢測(cè)的TMEVPG1、NRON可能是通過(guò)影響免疫炎癥參與精神分裂的發(fā)生[9]。TMEVPG1可以增強(qiáng)CD4 T淋巴細(xì)胞活性，提高干擾素γ水平，參與免疫炎癥性損傷[7]。NRON已被證實(shí)可通過(guò)介導(dǎo)免疫炎癥，參與某些風(fēng)濕性疾病的進(jìn)展[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，精神分裂癥患者外周血單個(gè)核細(xì)胞TMEVPG1、NRON呈高表達(dá)水平，這與既往報(bào)道一致[9]。目前精神分裂癥主要依靠癥狀學(xué)進(jìn)行診斷，缺乏有效的生物學(xué)標(biāo)志物。本研究發(fā)現(xiàn)，TMEVPG1、NRON以及兩者聯(lián)合診斷精神分裂癥的AUC分別為0.801、0.719、0.854，提示診斷價(jià)值較高。lncRNA診斷精神分裂癥的實(shí)用性和有效性值得未來(lái)深入研究。

免疫炎癥損傷與精神分裂癥中陽(yáng)性癥狀維度、陰性癥狀維度、認(rèn)知癥狀維度密切相關(guān)，但是與陽(yáng)性癥狀維度關(guān)系不大[21]。本研究顯示，TMEVPG1和NRON水平均與PANSS量表陰性癥狀評(píng)分和總分呈正相關(guān)，而與陽(yáng)性癥狀無(wú)關(guān)，這在一定程度上印證TMEVPG1和NRON可能是通過(guò)影響免疫炎癥而發(fā)揮作用的。精神分裂癥患者認(rèn)知功能損傷的研究一直是臨床研究重點(diǎn)，免疫炎癥損傷在認(rèn)知功能中的作用近年來(lái)引起廣泛重視，炎癥損傷可能通過(guò)影響五羥色胺水平、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和突觸可塑性等影響認(rèn)知功能[22]。本研究發(fā)現(xiàn)，TMEVPG1與精神分裂癥患者信息處理加工速度和工作記憶呈負(fù)相關(guān)，NRON水平與注意警覺(jué)性呈負(fù)相關(guān)，提示不同lncRNA涉及的認(rèn)知維度可能不同，這可能與其作用機(jī)制不同和精神分裂癥病理機(jī)制復(fù)雜有關(guān)。

本研究的局限性為：①本研究以免疫炎癥損傷為出發(fā)點(diǎn)，選擇TMEVPG1和NRON進(jìn)行研究，但是未直接檢測(cè)患者炎癥損傷程度；②未分析TMEVPG1和NRON不同病程階段的表達(dá)水平變化；③未對(duì)患者進(jìn)行隨訪，TMEVPG1和NRON與治療應(yīng)答、預(yù)后的關(guān)系需要未來(lái)進(jìn)一步分析。

綜上所述，外周血單個(gè)核細(xì)胞TMEVPG1、NRON的表達(dá)與精神分裂癥患者的陰性癥狀及認(rèn)知功能有關(guān)。