嚴(yán)慧婕 何金美

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院藥劑科，廣東 廣州 510360）

甘草總黃酮具有抗炎、保肝、殺菌、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、抗氧化等[1，2]，在多種臨床疾病中都有很好的治療作用，廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院在臨床治療痤瘡和防治肝損傷的過(guò)程中也證實(shí)了其良好的臨床效果。但甘草總黃酮口服生物利用度低；對(duì)痤瘡等表面病癥可通過(guò)皮膚給藥，但治標(biāo)不治本；注射給藥不僅患者順應(yīng)性低，還涉及安全性等問(wèn)題。鑒于此，為了提高甘草總黃酮的溶解度并促進(jìn)吸收，本文將甘草總黃酮以自微乳液形式口服給藥，考察其對(duì)痤瘡和肝損傷的療效。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑 磁力攪拌器（艾卡廣州儀器設(shè)備有限公司）；超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技有限公司）；CP225D 和BS210S 型電子天平（Sartorius，Germany）；控溫?fù)u床（艾卡廣州儀器設(shè)備有限公司）。自制甘草總黃酮自微乳液（高劑量及低劑量）；其他試劑為分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF 級(jí)雄性昆明種小鼠60 只，體質(zhì)量20～25 g。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 甘草總黃酮自微乳液的制備 取甘草飲片，粉碎后過(guò)20 目篩。80%乙醇回流提取3 次，每次1.5 h，合并提取液，減壓濃縮，所得浸膏中加入8 倍量純水，攪拌后靜置12 h，上清液過(guò)M130 大孔樹(shù)脂，純水洗除雜質(zhì)后，用60%乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫液合并、濃縮，備用。取2 g 甘草黃酮提取物、1.65 g 磷脂、16.5 g 油酸乙酯，以適量無(wú)水乙醇溶解后，40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，所得溶液加入15 g 吐溫80 和7.5 g 聚乙二醇400，1000 r/min（離心半徑16 cm）室溫條件下攪拌，得甘草總黃酮自微乳化液。

1.3.2 甘草總黃酮自微乳液對(duì)痤瘡的藥效考察 SPF 級(jí)昆明種小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、甘草總黃酮自微乳液組、陽(yáng)性對(duì)照組，每組10 只。各組小鼠連續(xù)灌胃給藥14 d，每天2 次，每次灌胃劑量如下：甘草總黃酮自微乳液組給予甘草總黃酮自微乳液15 mL·kg-1，空白對(duì)照組給予生理鹽水15 mL·kg-1，陽(yáng)性對(duì)照組按1.82 g·kg-1給予金花消痤丸（昆明中藥廠有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z53021120，規(guī)格：4 g×12 袋）。第14 天給藥后，于每只小鼠左耳的固定位置處，兩面均勻涂布0.02 mL 二甲苯，以致其耳部腫脹形成炎癥，右耳則不做處理（作為正常對(duì)照）。于涂布二甲苯45 min 后斷頸處死小鼠，繼而分別在左、右耳相同部位用9 mm 打孔器打下圓片（左耳涂布二甲苯處），稱重。以右耳所剪圓片的重量作為參照，腫脹度為左右耳圓片重量差值；腫脹抑制率為：空白對(duì)照組平均耳腫脹度與給藥組平均耳腫脹度的差值，與空白組平均耳腫脹度的比值百分?jǐn)?shù)。進(jìn)一步剔除小鼠腹部的被毛，取下側(cè)腹部的皮脂腺斑組織，立即放入10 倍體積的中性福爾馬林組織固定液中，做HE 染色切片，并在顯微鏡下觀測(cè)其組織結(jié)構(gòu)[3]。

1.3.3 甘草總黃酮自微乳液對(duì)肝損傷的藥效考察 SPF級(jí)昆明種小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、甘草總黃酮自微乳液組，每組10 只。于末次給藥2 h 后，模型組和甘草總黃酮自微乳液組腹腔注射對(duì)乙酰氨基酚（500 mg·kg－1），空白對(duì)照組則腹腔注射等體積的生理鹽水15 mL·kg－1；12 h 后各組摘眼球取血，所得血樣在室溫下靜置30 min 后，離心（4500 r/min）10 min，取血清，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)中的步驟，分別測(cè)定谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）的含量；繼而將小鼠斷頸處死，迅速取出肝臟，各肝臟取等同質(zhì)量混合勻漿，稱取總量10%的肝臟勻漿液，離心（4500 r/min）10 min 后，取上清液，按試劑盒說(shuō)明書(shū)中步驟分別檢測(cè)超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量。

2 結(jié)果

2.1 甘草總黃酮自微乳液對(duì)血清指標(biāo)及肝組織中相關(guān)酶活力的影響 與空白對(duì)照組相比較：模型組小鼠的血清中，ALT、AST 活性含量均有顯著升高（P ＜0.01）；小鼠肝組織中的MDA 含量顯著升高（P ＜0.01），SOD 活性顯著降低（P ＜0.01）。以上結(jié)果表明小鼠肝損傷模型造模成功。甘草總黃酮自微乳液組與模型組相比，能降低小鼠血清中AST 和ALT 活性（P ＜0.05），降低小鼠肝組織中MDA 含量、升高SOD 活性（P ＜0.01）。見(jiàn)表1、表2。

表1 甘草總黃酮自微乳液對(duì)對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷的小鼠血清中ALT和AST活性的影響（，U·L-1）

表1 甘草總黃酮自微乳液對(duì)對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷的小鼠血清中ALT和AST活性的影響（，U·L-1）

注：與空白對(duì)照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05。

表2 甘草總黃酮自微乳液對(duì)對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠肝組織SOD和MDA活性的影響（）

表2 甘草總黃酮自微乳液對(duì)對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠肝組織SOD和MDA活性的影響（）

注：與空白對(duì)照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.01。

2.2 甘草總黃酮自微乳液對(duì)小鼠皮脂腺斑顯微結(jié)構(gòu)的影響 陽(yáng)性對(duì)照組的小鼠皮脂腺體積較大，部分開(kāi)口于毛囊，結(jié)構(gòu)完整?？瞻讓?duì)照組的小鼠皮脂腺體積小于模型組且排列較緊密，但大于甘草總黃酮自微乳液組。由以上結(jié)果可知，甘草總黃酮乳對(duì)皮脂腺組織有一定的影響，可在一定程度上控制皮脂的分泌。見(jiàn)圖1。

圖1 小鼠皮脂腺斑纖維結(jié)構(gòu)

2.3 小鼠耳腫脹抗炎實(shí)驗(yàn) 甘草總黃酮自微乳液組耳腫脹度較空白對(duì)照組明顯降低，腫脹抑制率可達(dá)37.03%，表明甘草黃酮自微乳液口服對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹炎癥具有抑制作用。

3 討論

痤瘡為表現(xiàn)在面部、胸部及腹部的慢性炎癥，表觀體現(xiàn)伴有散在性的粉刺、丘疹、膿皰、囊腫，以及皮脂溢出[1]，常在青少年腎上腺及性腺發(fā)育階段發(fā)生；主要與毛囊皮脂腺導(dǎo)管的異常角化、痤瘡丙酸桿菌的異常增殖以及性激素失衡導(dǎo)致的皮脂異常分泌等因素有關(guān)。人體在進(jìn)入青春期后，雄激素中的睪酮水平將迅速升高，這會(huì)將促進(jìn)皮脂腺發(fā)育、產(chǎn)生大量皮脂；并促進(jìn)毛囊皮脂腺異常角質(zhì)化，從而引起毛囊皮脂腺導(dǎo)管堵塞、皮脂排出困難，表現(xiàn)為形成微粉刺。如果毛囊中的微生物大量繁殖，則將加重炎癥反應(yīng)，尤其是痤瘡丙酸桿菌大量繁殖可產(chǎn)生脂酶，而脂酶能夠?qū)⑵ぶ纸鉃橛坞x脂肪酸，同時(shí)趨化炎癥細(xì)胞和介質(zhì)，最終誘導(dǎo)并加重炎癥反應(yīng)。這些粉刺、丘疹、膿皰、囊腫以及溢出的皮脂，是痤瘡的主要體現(xiàn)。其中發(fā)病的本質(zhì)原因是激素分泌紊亂，癥狀表現(xiàn)的本質(zhì)是炎癥。本研究中，小鼠口服甘草總黃酮自微乳液后，可抑制小鼠皮脂腺組織的增生，且具有一定的抗炎效果。

肝臟是藥物代謝的主要器官，同時(shí)也是藥物的毒性氧化應(yīng)激的一個(gè)重要靶點(diǎn)。對(duì)乙酰氨基酚是一種常見(jiàn)的解熱鎮(zhèn)痛藥物，服用后絕大部分經(jīng)細(xì)胞色素P450 代謝后排出體外，少部分的體內(nèi)轉(zhuǎn)化物會(huì)與肝細(xì)胞蛋白結(jié)合而引起肝細(xì)胞壞死。本文中，對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷的小鼠血清ALT、AST 水平升高，甘草總黃酮自微乳灌胃可有效抑制血清中ALT、AST 水平，同時(shí)增強(qiáng)抗氧化酶活性，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA 的生成，推測(cè)甘草總黃酮自微乳可通過(guò)改善氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過(guò)氧化而發(fā)揮保肝活性。