張濤濤，任志敏，呂祥瑞

（1.焦作市人民醫(yī)院病理科，河南 焦作 454350；2.鄭州市婦幼保健院病理科，河南 鄭州 450000）

子宮內(nèi)膜癌是女性最常見(jiàn)的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅患者生命健康。目前關(guān)于子宮內(nèi)膜癌發(fā)生機(jī)制尚未完全明確，可能與分子調(diào)控機(jī)制有關(guān)。Toll樣受體4（toll-like receptor 4，TLR4）是最早發(fā)現(xiàn)的Toll樣受體亞型之一，與炎癥感染、組織纖維化疾病、惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展有關(guān)［1-2］。黑色素瘤核蛋白18（melanoma nuclear protein 18，Mel-18）是PcG家族重要成員之一，在惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用。HMBOX1是2006年從人胰腺cDNA文庫(kù)分離出來(lái)的新基因，是一種潛在的核轉(zhuǎn)錄因子，能發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制活性［3-4］。目前我國(guó)關(guān)于HMBOX1研究較少，其與惡性腫瘤的研究尚處于探索中［5］。本研究選取子宮內(nèi)膜癌患者作為研究對(duì)象，分析TLR4、Mel-18、HMBOX1表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理分期、組織學(xué)分級(jí)的關(guān)系，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取焦作市人民醫(yī)院2018年6月至2020年1月收診的42例子宮內(nèi)膜癌患者。子宮內(nèi)膜癌病理分期Ⅰ期23例，Ⅱ期10例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例。組織學(xué)分級(jí)G1級(jí)30例，G2級(jí)8例，G3級(jí)4例。年齡21～69歲，中位年齡為43.58歲。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)病理診斷確診為子宮內(nèi)膜；（2）首次確診；（3）未接受治療；（4）既往病史清晰。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他惡性腫瘤；（2）抑郁癥；（3）妊娠期、哺乳期或有計(jì)劃妊娠；（4）全身免疫性疾??；（5）活動(dòng)性出血。

1.3 研究方法

1.3.1 收集患者年齡、病理分期和組織學(xué)分級(jí)。

1.3.2 Mel-18表達(dá) 獲取患者子宮內(nèi)膜癌組織，常規(guī)處理標(biāo)本，構(gòu)建Mel-18過(guò)表達(dá)細(xì)胞系及對(duì)照組細(xì)胞系，PBS洗滌3次，更換培養(yǎng)基，使用Western blot法檢測(cè)Mel-18在細(xì)胞中的表達(dá)量。

1.3.3 TLR4表達(dá) 石蠟包裹子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本，進(jìn)行4μm連續(xù)切片，室內(nèi)孵育20 min，PBS洗滌3次，加入二抗，使用免疫組化法檢測(cè)TLR4水平。

1.3.4 HMBOX1表達(dá) 子宮內(nèi)膜癌組織常規(guī)處理后，建立HMBOX1細(xì)胞系（北京生物有限公司），使用免疫組化法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)HMBOX1表達(dá)。

1.3.5 TLR4、Mel-18、HMBOX1表達(dá)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn) 選擇5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例和著色情況積分［6］判斷。1分為陽(yáng)性細(xì)胞比例≤25%；2分為陽(yáng)性細(xì)胞比例為26% ～50%；3分為陽(yáng)性細(xì)胞比例＞50%。著色程度：無(wú)為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；深棕色為3分。二者乘積≥2分為陽(yáng)性（+），≤1分為陰性（-）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.00統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。TLR4、Mel-18、HMBOX1、分期和分級(jí)以例數(shù)和百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；采用Spearman相關(guān)性分析進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 子宮內(nèi)膜癌患者TLR4表達(dá)不同組織學(xué)分級(jí)和病理分期的子宮內(nèi)膜癌患者TLR4陽(yáng)性和陰性率表達(dá)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 子宮內(nèi)膜癌患者TLR4表達(dá)比較［n（%）］

2.2 子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)el-18表達(dá)不同組織學(xué)分級(jí)的子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)el-18表達(dá)陽(yáng)性和陰性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同病理分期的子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)el-18陽(yáng)性和陰性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)el-18表達(dá)比較［n（%）］

2.3 子宮內(nèi)膜癌患者HMBOX1表達(dá)不同組織學(xué)分級(jí)的子宮內(nèi)膜癌患者HMBOX1陽(yáng)性和陰性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同病理學(xué)分期的子宮內(nèi)膜癌患者HMBOX1陽(yáng)性和陰性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 子宮內(nèi)膜癌患者HMBOX1表達(dá)比較［n（%）］

2.4 TLR4、Mel-18、HMBOX1表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理分期、組織學(xué)分級(jí)的關(guān)系TLR4表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理分期、組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)（P＞0.05）。Mel-18表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理學(xué)分期關(guān)系密切（P＜0.05），與組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)（P＞0.05）。HMBOX1表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理分期、組織學(xué)分級(jí)關(guān)系密切（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 TLR4、Mel-18、HMBOX1表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理分期、組織學(xué)分級(jí)的關(guān)系

2.5 TLR4、Mel-18、HMBOX1陽(yáng)性表達(dá)相關(guān)性分析TLR4、Mel-18、HMBOX1兩兩分析結(jié)果顯示，TLR4、Mel-18、HMBOX1之間呈正相關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表5。

表5 TLR4、Mel-18、HMBOX1陽(yáng)性表達(dá)相關(guān)性分析

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是臨床常見(jiàn)惡性腫瘤，嚴(yán)重影響女性患者生命健康。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生由多種因素共同導(dǎo)致［7-11］。HMBOX1基因通過(guò)同源分子共同來(lái)調(diào)節(jié)其他基因的轉(zhuǎn)錄，從而發(fā)揮其分子生物學(xué)效應(yīng)，與器官發(fā)育關(guān)系密切。其作用機(jī)制是通過(guò)調(diào)控其他部位發(fā)育基因，包括細(xì)胞分裂和紡錘體等，并在惡性腫瘤中表達(dá)［12-13］。TLR是Ⅰ類(lèi)跨膜受體，屬病原相關(guān)分子模式受體，主要分布在中性粒細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞中。TLR4主要分布在各類(lèi)免疫細(xì)胞，介導(dǎo)免疫和炎癥反應(yīng)，在多種惡性腫瘤中高表達(dá)［14］。Mel-18主要表達(dá)于各種來(lái)源的腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞，其基因產(chǎn)物可能與細(xì)胞增殖有關(guān)，可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖［15］。

本研究結(jié)果顯示，不同組織學(xué)分級(jí)和病理分期的子宮內(nèi)膜癌患者TLR4表達(dá)無(wú)差異。不同組織學(xué)分級(jí)的子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)el-18表達(dá)無(wú)差異，但不同病理分期的子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)el-18表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同組織學(xué)分級(jí)和病理分期的子宮內(nèi)膜癌患者HMBOX1表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Mel-18最初是由B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞克隆而來(lái)，主要表達(dá)在各種來(lái)源腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞中，參與細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生及發(fā)展。隨著對(duì)Mel-18研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)Mel-18和Bmi-1基因在功能上存在重疊效應(yīng)，均可發(fā)揮促癌、促炎作用［16-17］。在子宮內(nèi)膜中單獨(dú)抑制Mel-18表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞增殖和克隆形成，進(jìn)而影響病理分期。TLR4表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理分期、組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)，Mel-18表達(dá)與病理學(xué)分期關(guān)系密切。原因可能是Mel-18包含342個(gè)氨基酸，與Bmi-1基因產(chǎn)物結(jié)構(gòu)高度相似，同源性高達(dá)93%，參與細(xì)胞增殖和腫瘤的發(fā)生發(fā)展，主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞中，能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。HMBOX1陽(yáng)性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理分期、組織學(xué)分級(jí)關(guān)系密切。TLR4主要介導(dǎo)內(nèi)毒素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，外來(lái)刺激與靶細(xì)胞會(huì)促使其大量釋放，進(jìn)而引發(fā)炎癥因子的“瀑鏈?zhǔn)健贬尫?，進(jìn)而加重病情。Mel-18、HMBOX1能促使子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，促使細(xì)胞浸潤(rùn)，故而與病理分期關(guān)系密切。TLR4可以介導(dǎo)病毒、炎癥因子、腫瘤細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)。本研究結(jié)果顯示，TLR4、Mel-18、HMBOX1兩兩之間呈正相關(guān)。TLR4介導(dǎo)天然免疫，參與多種疾病發(fā)生和發(fā)展，其在部分惡性腫瘤組織及血清中高表達(dá)，能促使腫瘤細(xì)胞脫離本體，進(jìn)行遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。Mel-18基因在惡性腫瘤組織中表達(dá)異常，其產(chǎn)物會(huì)促使癌細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)。腫瘤細(xì)胞游走能力、增殖能力增強(qiáng)會(huì)促使病情進(jìn)展，使得宮頸組織病變加重，HMBOX1表達(dá)隨之升高。

綜上所述，Mel-18、HMBOX1及TLR4表達(dá)協(xié)同影響子宮內(nèi)膜癌病理分期、組織學(xué)分級(jí)，密切觀察Mel-18、HMBOX1表達(dá)情況可預(yù)測(cè)病情。