施 磊 郭磊磊 楊 丹 楊 青

（復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系 上海 200438）

吲 哚 胺2，3雙 加 氧 酶1（indoleamine 2，3-dioxygenase 1，IDO1）是 沿 犬 尿 氨 酸 通 路（kynurenine pathway，KP）分解代謝人體必需氨基酸 色 氨 酸（tryptophan，Trp）生 成 犬 尿 氨 酸（kynurenine，Kyn）等中間代謝物及終產(chǎn)物輔酶NAD（nicotinamide adenine dinucleotide）的首個限速酶［1］。IDO1在哺乳動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)、附睪、腸、胸腺、呼吸道、脾臟等組織中均有表達［2］。KP異常與神經(jīng)退行性疾病、抑郁、心血管疾病和惡性腫瘤等疾病的病理機制密切相關(guān)，在上述疾病患者中IDO1高表達或過度活化伴KP上調(diào)多見［3-6］。阿爾茲海默癥（Alzheimer’s disease，AD）患者以及抑郁癥患者血清中IDO1活性高于健康個體［7-8］；IDO1活性與動脈粥樣硬化的早期標志物頸動脈內(nèi)膜/中層厚 度（intima media thickness，IMT）呈 顯 著 正 相關(guān)［9］。IDO1高表達還與多種腫瘤的不良預(yù)后正相關(guān)［10］。近年，IDO1在腫瘤免疫逃逸中的作用也受到關(guān)注。在腫瘤微環(huán)境中，高表達的IDO1消耗Trp，蓄積Kyn，誘導(dǎo)效應(yīng)T細胞凋亡及功能障礙［11］，活化調(diào)節(jié)性T細胞（regulatory T cells，Tregs）［12］，營造免疫抑制的微環(huán)境，進而造成腫瘤免疫逃逸。因此，IDO1是AD、抑郁、動脈粥樣硬化、腫瘤等疾病治療的重要靶標。

開發(fā)IDO1抑制劑靶向IDO1阻斷KP是疾病治療的重要策略。研究發(fā)現(xiàn)抑制IDO1可改善AD小鼠認知行為，具有一定的治療作用［13］。IDO1抑制劑1-甲基色氨酸（1-methyl-tryptophau，1-MT）可下調(diào)抑郁小鼠血清中IDO1活性，減輕抑郁行為［14］。IDO1抑制劑在多種腫瘤小鼠模型中展現(xiàn)出良好的抗腫瘤作用。對黑色素瘤B16荷瘤小鼠連續(xù)14天腹腔注射75 mg/kg IDO1抑制劑5I，腫瘤抑制率達到75%［15］；灌胃給予30或100 mg/kg IDO1抑制劑INCB024360均能顯著抑制大腸癌CT 26荷瘤小鼠的腫瘤生長［16］。多個IDO1抑制劑單用或聯(lián)合其他藥物用于癌癥治療的研究也已進入臨床試驗階段，如Indoximod、PF-06840003、Epacadostat、Nnavoximod、KHK 2455和BMS-986205等。

IDO1抑制劑的研發(fā)必須開展藥效動力學(xué)評價，即研究IDO1抑制劑對KP的阻斷作用。有研究以Kyn水平的降低作為IDO1活性被抑制的衡量標準［15］，更多研究以Kyn與Trp的比值（即Kyn/Trp）減小作為標準，后者能更準確地反映IDO1活性的改變?，F(xiàn)有的用于IDO1抑制劑藥效動力學(xué)評價的動物模型有na?ve鼠［15］和荷瘤小鼠［17］。使用na?ve鼠進行IDO1抑制劑藥效動力學(xué)評價一般采用單次給藥，故實驗耗時短。但是na?ve鼠處于正常生理狀態(tài)，本底IDO1水平較低，使用抑制劑后引起Kyn濃度或（Kyn/Trp）×100的改變非常有限，不能準確反映IDO1抑制劑對IDO1活性的抑制效力。荷瘤小鼠的IDO1活性高于na?ve鼠的IDO1活性，但用于IDO1抑制劑藥效動力學(xué)評價實驗周期較長。乳腺癌4T 1荷瘤小鼠和肺癌LLC荷瘤小鼠用于實驗需耗時21天和18天［18-19］。因此，有必要對現(xiàn)有的IDO1抑制劑藥效動力學(xué)評價的動物模型進行改進，建立短時間內(nèi)顯著上調(diào)體內(nèi)IDO1活性的動物模型，以提高實驗效率和結(jié)果準確性。

脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）可誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，通過激活TLR4/NF-kB信號通路上調(diào)小鼠體內(nèi)IDO1活性［20-21］。LPS的給藥方式主要有腹腔注射［22］、尾靜脈注射［23］、鼻飼［24］等。本文選用昆明鼠及C57BL/6小鼠，通過尾靜脈注射及腹腔注射兩種不同的給藥方式給予小鼠LPS。造模以后，對模型小鼠灌胃給予IDO1抑制劑TQ016，給藥后不同時間點取血，HPLC檢測小鼠血清中Kyn和Trp含量，用（Kyn/Trp）×100反映IDO1活性。研究LPS誘導(dǎo)的炎癥小鼠模型用于IDO1抑制劑藥效動力學(xué)評價的可行性，評價IDO1抑制劑TQ016的藥效動力學(xué)。

材料和方法

動物選取昆明鼠45只和C57BL/6鼠225只（5周齡，雌性，上海杰思捷實驗動物有限公司），飼養(yǎng)過程及實驗過程符合標準。

試劑和藥品羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）（上海昌為醫(yī)藥輔料有限公司），L-1-MT、LPS（美國Sigma-aldrich公司），L-Trp、L-Kyn、色譜級甲醇、色譜級乙腈（阿拉丁試劑上海有限公司），TQ016、乙酸鈉（上海文旻生化科技有限公司），冰醋酸（國藥集團化學(xué)試劑有限公司），高氯酸（鑫源化工有限公司），小鼠飼料及墊料（上海斯萊克實驗動物有限公司）。

儀器和設(shè)備渦旋儀（美國Thermo Scientific公司），電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司），超聲波細胞粉碎儀（寧波海曙科生超聲設(shè)備有限公司），立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海博訊實業(yè)有限公司），SW-CJ-1FD潔凈工作臺（蘇州凈安泰空氣技術(shù)有限公司），Legend Micro 17R高速離心機（美國Thermo Scientific），高效液相色譜儀、C18柱（美國Agilent公司）。

溶液及藥物配制

LPS溶液 配制0.9%NaCl溶液（生理鹽水），用0.22μm水相濾頭過濾。將5 mg/mL LPS母液用生理鹽水稀釋后用于尾靜脈注射和腹腔注射。

0.5%CMC-Na溶液 100 mL生理鹽水經(jīng)0.22μm水相濾頭過濾，50℃水浴加熱，稱取0.5 g CMC-Na加入其中，完全溶解后于4℃保存。

L-1-MT溶液 稱取34.2 mg L-1-MT置于4 mL EP管中，加入2 mL 0.5%CMC-Na溶液，于超聲波細胞粉碎機中超聲10 s，冰浴冷卻，循環(huán)操作，直至L-1-MT完全溶解，補加0.5%CMC-Na溶液至3.8 mL，封口膜封口，于超聲波清洗器中超聲10 min，4℃保存。按小鼠體重18 g給藥0.2 mL計算，劑量為100 mg/kg。

TQ016溶液 配制方法同L-1-MT。按小鼠體重20 g給藥0.2 mL計算，劑量分別為25、50和100 mg/kg。

炎癥小鼠模型構(gòu)建昆明鼠尾靜脈注射0.66 mg/kg LPS，24 h后用于給藥實驗。C57BL/6小鼠腹腔注射5或8 mg/kg LPS，24 h后用于給藥實驗。

小鼠給藥昆明鼠隨機分為4組：1個對照組和3個LPS造模組（給藥劑量約為0.66 mg/kg）。對照組（5只）和LPS組（16只）灌胃給予0.5%CMC-Na，LPS+L-1-MT組（6只）和LPS+TQ016組（18只）分別灌胃給予100 mg/kg L-1-MT和100 mg/kg TQ016。各組小鼠于給藥后40 min、2 h和4 h摘眼球取血。

C57BL/6小鼠隨機分為5組：1個對照組和4個LPS造模組（給藥劑量為5或8 mg/kg）。對照組（6只）、5 mg/kg LPS組（8只）和8 mg/kg LPS組（8只）灌胃給予0.5%CMC-Na，5 mg/kg LPS+L-1-MT組（8只）和8 mg/kg LPS+L-1-MT組（8只）灌胃給予100 mg/kg L-1-MT。各組小鼠于給藥后4和12 h摘眼球取血。

C57BL/6小鼠隨機分為3組：1個對照組和2個LPS造模組（給藥劑量為5 mg/kg）。對照組（20只）和LPS組（21只）灌胃給予0.5%CMC-Na，LPS+TQ016組（27只）灌胃給予100 mg/kg TQ016。各組小鼠于給藥后1、6、12、24和30 h摘眼球取血。

C57BL/6小鼠隨機分為5組：1個對照組和4個LPS造模組（給藥劑量為5 mg/kg）。對照組（20只）和LPS組（21只）灌胃給予0.5%CMC-Na，LPS+25 mg/kg TQ016組（26只）、LPS+50 mg/kg TQ016組（26只）和LPS+100 mg/kg TQ016組（26只）分別灌胃給予25、50和100 mg/kg TQ016。各組小鼠于給藥后1、6、12、24和30 h摘眼球取血。

小鼠血清制備小鼠全血室溫靜置1 h，4℃下900×g離心10 min，吸取上清，得粗血清。將粗血清按上述條件再次離心10 min，吸取上清，得純血清。加入等體積5%高氯酸溶液，渦旋混勻30 s，室溫靜置15 min，室溫下16 200×g離心10 min。取上清，加入1/2體積的色譜級甲醇，渦旋混勻2 min，室溫下16 200×g離心10 min。取上清，用0.22μm水系濾膜過濾，向標記好的內(nèi)襯管中加入200μL處理好的血清，4℃保存，待HPLC檢測。

HPLC檢測條件C18柱（250 nm×4.6 mm，5μm），柱溫25℃，流動相為15 mmol/L乙酸-乙酸鈉溶液（pH=3.6）∶乙腈=94∶6，流速1 mL/min，進樣量20μL。檢測波長：Trp為280 nm，Kyn為360 nm。

統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用GraphPad Prism6.0軟件，所有數(shù)據(jù)均以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

尾靜脈注射LPS小鼠的IDO1活性上調(diào)昆明鼠尾靜脈注射0.66 mg/kg LPS造模24 h后用于給藥實驗（圖1）。模型小鼠血清中Trp含量下調(diào)（2 h：P=0.012 9，4 h：P=0.022 7），Kyn含量［40 min：P=0.038 6，2 h：F（4，4）=4.871，P=0.026 3］及IDO1活性上調(diào)［40 min：P=0.032 8，2 h：P=0.002 1，4 h：F（2，11）=3.94 1，P=0.042 3］。尾靜脈注射0.66 mg/kg LPS可上調(diào)小鼠血清中IDO1活性，造模成功。

IDO1抑制劑對尾靜脈注射LPS小鼠IDO1活性的抑制作用模型小鼠灌胃給予IDO1抑制劑L-1-MT 2 h后，被LPS下調(diào)的Trp含量略恢復(fù)（圖1A），被LPS上調(diào)的Kyn含量［F（4，5）=4.399，P=0.030 0］（圖1B）和IDO1活性［F（4，5）=6.377，P=0.006 8］，（圖1C）顯著降低。說明L-1-MT在灌胃給藥2 h后具有明顯的IDO1活性抑制作用。

模型小鼠灌胃給予IDO1抑制劑TQ016 40 min后，被LPS下調(diào)的Trp含量略恢復(fù)；2、4 h后，被LPS下調(diào)的Trp含量顯

著上調(diào)［2 h：P=0.027 9，4 h：F（3，4）=1.389，P=0.005 2］（圖1D）。TQ016對Kyn含量無明顯影響（圖1E）。模型小鼠灌胃給予TQ016 40 min、2 h和4 h后，被LPS上調(diào)的IDO1活性降低且在TQ016灌胃2 h后差異有統(tǒng)計學(xué)意義［F（4，5）=2.585，P=0.035 3］（圖1F）。尾靜脈注射0.66 mg/kg LPS可構(gòu)建IDO1活性上調(diào)的模型小鼠，IDO1抑制劑L-1-MT和TQ016灌胃給藥2 h后可顯著抑制模型小鼠體內(nèi)被LPS上調(diào)的IDO1活性。

圖1 IDO1抑制劑對尾靜脈注射LPS小鼠血清中IDO1活性的抑制作用Fig 1 Effects of IDO1 inhibitors on IDO1 activity in the serum of mice challenged with LPS

腹腔注射LPS小鼠的IDO1活性上調(diào)與對照組相比，腹腔注射5、8 mg/kg LPS均能下調(diào)C57BL 16小鼠血清中Trp含量（圖2A、2D），上調(diào)Kyn含量（圖2B、2E）和顯著上調(diào)IDO1活性［5 mg/kg LPS組（圖2C）：4 h，F(xiàn)（3，2）=8.627，P=0.011 9；12 h，F(xiàn)（2，2）=1.214，P=0.020 8；8 mg/kg LPS組（圖2F）：4 h，F(xiàn)（2，2）=37.900，P=0.000 4；12 h，F(xiàn)（3，2）=11.010，P=0.010 8］。

L-1-MT對腹腔注射LPS小鼠IDO1活性的抑制作用5 mg/kg LPS造模組灌胃給予L-1-MT 4 h后，被LPS下調(diào)的Trp含量可恢復(fù)（圖2A），被LPS上調(diào)的Kyn含量［F（3，3）=1.739，P=0.016 9］（圖2B）和IDO1活性［F（3，3）=5.417，P=0.010 9］（圖2C）顯著降低。灌胃給予L-1-MT 12 h后，血清中Trp、Kyn含量和IDO1活性均無明顯變化（圖2A～2C），可能與L-1-MT的半衰期和藥代動力學(xué)性質(zhì)有關(guān)。

8 mg/kg LPS造模組灌胃給予L-1-MT 4 h后，血清中Trp含量無明顯變化（圖2D），被LPS上調(diào)的Kyn含量顯著降低［F（2，2）=3.647，P=0.026 6］（圖2E），被LPS上調(diào)的IDO1活性降低（圖2F）。灌胃給予L-1-MT 12 h后，血清中Trp和Kyn含量以及IDO1活性均無明顯變化（圖2D～2F）。綜合以上實驗結(jié)果，我們選用5 mg/kg LPS腹腔注射用于評價TQ016的藥效動力學(xué)。

圖2 L-1-MT對腹腔注射LPS小鼠血清中IDO1活性的抑制作用Fig 2 Effect of IDO1 inhibitor L-1-MT on IDO1 activity in the serum of mice challenged with LPS

TQ016對腹腔注射LPS小鼠IDO1活性的抑制作用5 mg/kg LPS造模組小鼠在腹腔注射LPS 24 h后體重下降（1.57±0.57）g，對照組小鼠在腹腔注射生理鹽水24 h后體重增加了（0.64±0.57）g。

與對照組小鼠相比，在給藥后不同時間點，LPS造模組小鼠血清中Trp含量均下降（圖3A），Kyn含量均顯著增長（1 h：P=0.042 8，6 h：P=0.019 4，12 h：P=0.019 4，24 h：P=0.005 3，30 h：P=0.003 5）（圖3B），IDO1活性在給藥后1、6、12、24和30 h分別增長3.47、5.84、1.75、3.69和5.41倍，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（1 h：P=0.014 7，6 h：P=0.003 3，12 h：P=0.014 7，24 h：P=0.003 0，30 h：P=0.003 0）（圖3C）。腹腔注射LPS小鼠灌胃給予TQ016后1、6、12、24和30 h，被LPS上調(diào)的IDO1活性分別下降36.67%、43.46%、51.70%、45.90%和51.61%，在6、12、24和30 h差 異 有 統(tǒng) 計 學(xué) 意 義［6 h：P=0.0159；12 h：F（3，4）=3.971，P=0.005 2；24 h：F（3，5）=1.886，P=0.004 8；30 h：F（5，4）=1.835，P=0.000 5］（圖3C）。以上結(jié)果再次說明腹腔注射LPS用于上調(diào)小鼠血清中IDO1活性的可行性，此小鼠模型適用于IDO1抑制劑的藥效動力學(xué)評價。IDO1抑制劑TQ016具有良好的IDO1活性抑制作用。

圖3 TQ016對腹腔注射LPS小鼠血清中IDO1活性的抑制作用Fig 3 Effect of IDO1 inhibitor TQ016 on IDO1 activity in theserum of mice challenged with LPS

不同劑量TQ016對腹腔注射LPS小鼠IDO1活性的抑制作用與對照組相比，LPS組小鼠血清中Trp含量下調(diào)（圖4A），Kyn含量上調(diào)（圖4B），IDO1活性顯著上調(diào)（1 h：P=0.009 0，6 h：P=0.001 4，12 h：P=0.037 7，24 h：P=0.006 1，30 h：P=0.002 1）（圖4C）。TQ016對LPS下調(diào)的Trp含量無明顯影響（圖4A）。當TQ016為100 mg/kg時，灌胃給予1、6、24和30 h后，被LPS上調(diào)的Kyn含量顯著降低［1 h：F（3，3）=10.100，P=0.030 3；6 h：F（3，4）=2.812，P=0.039 4；24 h：F（4，3）=8.392，P=0.0208；30 h：F（5，4）=1.493，P=0.000 2］（圖4B）。不同劑量TQ016灌胃1、6、12、24和30 h后，被LPS上調(diào)的IDO1活性均不同程度下降且呈劑量效應(yīng)。當TQ016為100 mg/kg時，灌胃給予1、6、12、24和30 h后，被LPS上調(diào)的IDO1活性均顯著降低［1 h：P=0.028 6；6 h：F（3，4）=1.662，P=0.008 4；12 h：F（4，2）=2.290，P=0.012 4；24 h：F（4，3）=12.560，P=0.002 0；30 h：F（5，4）=2.114，P=0.000 5］（圖4C）。以上結(jié)果說明IDO1抑制劑TQ016具有良好的IDO1活性抑制作用并呈劑量效應(yīng)。

圖4 不同劑量TQ016對腹腔注射LPS小鼠血清中IDO1活性的抑制作用Fig 4 Dose-dependent effect of TQ016 on IDO1 activity in the serum of mice challenged with LPS

討 論

Na?ve鼠用于IDO1抑制劑藥效動力學(xué)評價一般采用單次給藥，如na?ve C57BL/6小鼠單次皮下注射100 mg/kg IDO1抑制劑5I，血清中Kyn含量從（1.10±0.17）μmol/L下降到（0.45±0.20）μmol/L［15］，na?ve C57BL/6小鼠單次灌胃給予50 mg/kg IDO1抑制劑INCB024360，血清中Kyn含量從給藥前約1.50μmol/L下降到給藥8 h后的0.50μmol/L左右［16］。因此，實驗耗時短。但是，na?ve鼠處于正常生理狀態(tài)，本底IDO1活性較低。LPS可誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，上調(diào)小鼠體內(nèi)IDO1活性。

本研究使用尾靜脈注射和腹腔注射兩種方式給予小鼠LPS。尾靜脈注射需要將老鼠固定、鼠尾拉直，注射時的進針角度盡量平行于鼠尾。與尾靜脈注射相比，腹腔注射相對容易操作。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)尾靜脈注射0.66 mg/kg LPS或腹腔注射5 mg/kg LPS均可顯著上調(diào)小鼠血清中IDO1活性，適用于造模。其中，LPS誘導(dǎo)前昆明鼠本底的Trp、Kyn含量以及（Kyn/Trp）×100為80.00～90.00μmol/L、1.00μmol/L和1.30，誘導(dǎo)后為50.00～60.00μmol/L、1.50～2.00μmol/L和3.00～4.00。LPS誘 導(dǎo) 前C57BL/6小鼠本底Trp、Kyn含量以及（Kyn/Trp）×100為100.00～150.00μmol/L、0.30～1.30μmol/L和0.30～0.90，誘 導(dǎo) 后 為70.00～100.00μmol/L、2.00～4.00μmol/L和2.00～4.00。兩種小鼠本底Trp、Kyn含量以及（Kyn/Trp）×100相近，LPS可上調(diào)兩種小鼠血清中IDO1活性。

與na?ve鼠相比，LPS誘導(dǎo)的小鼠具有較高的IDO1活性。與構(gòu)建荷瘤小鼠相比，使用LPS誘導(dǎo)小鼠實驗操作簡單易行，無需進行細胞培養(yǎng)、傳代以及細胞皮下接瘤等實驗操作，只需為小鼠尾靜脈注射或腹腔注射LPS，即可短時間內(nèi)顯著上調(diào)小鼠血清中IDO1活性。實驗耗時明顯短于構(gòu)建荷瘤小鼠所需時間，節(jié)省了大量的時間、人力成本。LPS將體內(nèi)（Kyn/Trp）×100從0.50左右上調(diào)至1.80～2.60，具有與荷瘤小鼠相當甚至較高的IDO1活性。因此，LPS誘導(dǎo)構(gòu)建的急性炎癥小鼠模型適用于IDO1抑制劑藥效動力學(xué)評價。

接下來，我們評價了IDO1抑制劑L-1-MT和TQ016的藥效動力學(xué)。采用尾靜脈注射LPS造模時，我們檢測了IDO1抑制劑在短時間內(nèi)（40 min、2 h、4 h）的藥效動力學(xué)效果；采用腹腔注射LPS建模時，我們檢測了L-1-MT在4、12 h的藥效動力學(xué)效果，以及TQ016在長時間內(nèi)（≤30 h）的藥效動力學(xué)效果。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)L-1-MT和TQ016在灌胃給予2 h后對尾靜脈注射LPS小鼠具有明顯的IDO1活性抑制作用。與此類似，有研究表明na?ve小鼠腹腔注射100 mg/kg IDO1抑制劑5I，給藥后2.5 h達到最大的血清Kyn抑制效果［15］。腹腔注射LPS小鼠灌胃給予L-1-MT 4 h后，被LPS上調(diào)的IDO1活性顯著下降；灌胃給予TQ016后1、6、12、24和30 h，被LPS上調(diào)的IDO1活性分別下降了36.67%、43.46%、51.70%、45.90%和51.61%（37%～50%），并且在6、12、24和30 h這些時間點具有顯著性。一些處于臨床試驗階段的IDO1抑制劑的動物水平的藥效動力學(xué)研究也有報道，如口服20 mg/kg NLG919可將乳腺癌4T 1荷瘤小鼠血清中IDO1活性下調(diào)50%左右［18］，腹腔注射80 mg/kg Epacadostat可將肺癌LLC荷瘤小鼠血清中IDO1活性下調(diào)50%左右［19］。本實驗的結(jié)果表明TQ016和這些IDO1抑制劑具有水平相近的IDO1活性抑制作用。最后，我們選用25、50和100 mg/kg這3種不同的TQ016灌胃劑量。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)TQ016對LPS上調(diào)的小鼠血清中IDO1活性具有抑制作用并呈劑量效應(yīng)。

綜上，尾靜脈注射0.66 mg/kg LPS或腹腔注射5 mg/kg LPS均可短時間內(nèi)顯著上調(diào)小鼠血清中IDO1活性。構(gòu)建該動物模型僅需尾靜脈注射或腹腔注射LPS，實驗操作相較于構(gòu)建荷瘤小鼠簡單易行，實驗耗時短，且LPS上調(diào)的IDO1活性與荷瘤小鼠IDO1活性相當。因此，LPS誘導(dǎo)的小鼠模型適用于IDO1抑制劑的藥效動力學(xué)評價。利用該模型對IDO1抑制劑TQ016進行藥效動力學(xué)評價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TQ016和目前處于臨床試驗的IDO1抑制劑具有相當?shù)腎DO1活性抑制作用，并呈劑量效應(yīng)。本研究可為IDO1抑制劑的研究提供一個科學(xué)、高效的研究工具，有助于IDO1抑制劑的新藥研發(fā)。

作者貢獻聲明施磊 實驗操作，數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析，論文構(gòu)思和撰寫。郭磊磊，楊丹 實驗操作，數(shù)據(jù)收集。楊青 論文構(gòu)思和撰寫。

利益沖突聲明所有作者均聲明不存在利益沖突。