陶淵喆，楊宇敏，尹 丹，張 巍，朱志杰*

（1.通化金馬藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，通化 134003；2.通化市衛(wèi)生學(xué)校，通化 134001）

尿素，又稱脲、碳酰胺，化學(xué)式是CH4N2O，是由碳、氮、氧、氫組成的有機(jī)化合物，是一種白色晶體。最簡(jiǎn)單的有機(jī)化合物之一，是哺乳動(dòng)物和某些魚類體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝分解的主要含氮終產(chǎn)物。

1 尿素的有關(guān)物質(zhì)

1.1 儀器與試藥

尿素（中國食品藥品檢定研究院）；縮二脲（百靈威）；縮三脲（SINCO）；尿素（張家港豐達(dá)制藥有限公司）；沃特世高效液相色譜儀；電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色 譜柱:Dikma Diamonsil Plus C18,（4.6mm×250mm,5μm）;流動(dòng)相：水；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長：195nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量20μl。

2.2 溶液的配制

對(duì)照品溶液的制備：尿素對(duì)照品適量，精密稱定，加水定量制成0.1mg/ml的溶液，作為尿素對(duì)照品貯備液。

縮二脲對(duì)照品適量，精密稱定，加水定量制成0.1mg/ml的溶液，作為縮二脲對(duì)照品貯備液。

縮三脲對(duì)照品適量，精密稱定，加0.05%磷酸溶液-甲醇（50∶50）定量制成0.1mg/ml的溶液，作為縮三脲對(duì)照品貯備液。

精密量取尿素對(duì)照品貯備液1ml、縮二脲對(duì)照品貯備液3ml、縮三脲對(duì)照品貯備液1ml，加水定量制成每1ml中含尿素5μg、縮二脲15μg、縮三脲5μg的溶液。

供試品溶液的制備：取本品約100mg，精密稱定，置20ml量瓶中，加水溶解并稀釋制成,5mg/ml的溶液，搖勻，即得。

空白溶劑：實(shí)驗(yàn)用水。

2.3 專屬性實(shí)驗(yàn)

分別取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白溶劑各20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。由圖可知，在本文建立的色譜條件下，尿素的保留時(shí)間3.086min、尿素中各對(duì)照品和其他組分達(dá)到了完全分離，空白溶劑無干擾。結(jié)果見圖1。對(duì)照品溶液（A）、樣品溶液（B）和空白溶劑（C）色譜圖

圖1

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別精密吸取尿素對(duì)照品貯備液1ml，縮二脲對(duì)照品貯備液3ml，縮三脲對(duì)照品貯備液1ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻作為線性溶液（1）；分別精密吸取尿素對(duì)照品貯備液0.5ml，縮二脲對(duì)照品貯備液1.5ml，縮三脲對(duì)照品貯備液0.5ml，置20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻作為線性溶液（2）；分別精密吸取尿素對(duì)照品貯備液1ml，縮二脲對(duì)照品貯備液3ml，縮三脲對(duì)照品貯備液1ml，置20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻作為線性溶液（3）；分別精密吸取尿素對(duì)照品貯備液1.5ml，縮二脲對(duì)照品貯備液4.5ml，縮三脲對(duì)照品貯備液1.5ml，置20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻作為線性溶液（4）；分別精密吸取尿素對(duì)照品貯備液2ml，縮二脲對(duì)照品貯備液6ml，縮三脲對(duì)照品貯備液2ml，置20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻作為線性溶液（5），精密量取20L注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，尿素在2.054~10.2695μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為A=7697.4C-2498.9（r=0.9993），結(jié)果表明對(duì)照品在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，日內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣3次和日間連續(xù)進(jìn)樣3次（連續(xù)3天，每天1次），記錄色譜圖的峰面積。結(jié)果表明日內(nèi)，日間精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于0、1、3、6、12h，注入液相色譜儀就，記錄色譜圖的峰面積，結(jié)果表明供試品溶液放置12h穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)為200310的尿素6份，按供試品溶液制備方法制備并測(cè)定，記錄色譜圖的峰面積，RSD為0.42%。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的尿素100mg，共6份，依次按照2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。取6份供試品溶液各1ml，精密加入濃度為0.103mg·mL-1尿素對(duì)照品溶液1ml，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 尿素回收率測(cè)定結(jié)果

3 討論

高效液相色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)試驗(yàn)的液相條件下，尿素與各雜質(zhì)峰的分離良好，雜質(zhì)含量均符合要求，切空白溶劑無干擾，表明此方法可行、可滿足實(shí)驗(yàn)要求。