■王婉瑩 權(quán)志中 楊 寧 梁麗萍 高啟明 劉小剛 張書(shū)浩 呂秋鳳*

（1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與醫(yī)學(xué)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110866；2.沈陽(yáng)市康普利德生物科技有限公司，遼寧 沈陽(yáng) 110161；3.遼寧康普利德生物科技有限公司，遼寧 鐵嶺 112600）

豆粕具有氨基酸組成較平衡、蛋白質(zhì)和脂肪含量較高、富含異黃酮等多種活性成分、產(chǎn)量大、成本低、便于儲(chǔ)存等優(yōu)點(diǎn)，一直以來(lái)被廣泛用作畜禽飼料[1]。但是，豆粕中存在著多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，會(huì)對(duì)動(dòng)物的腸道健康產(chǎn)生不良影響，降低動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和利用效率[2]；而且目前我國(guó)畜牧業(yè)所需的豆粕嚴(yán)重短缺，長(zhǎng)期依賴(lài)于進(jìn)口[3]。與傳統(tǒng)的玉米-豆粕飼料相比，低蛋白飼料可有效減少豆粕等蛋白原料的使用量，還具有減少氮排放、降低飼料成本等一系列的優(yōu)點(diǎn)[4]。但是在設(shè)計(jì)低蛋白飼料時(shí)往往無(wú)法準(zhǔn)確設(shè)計(jì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)比例，而且替代品的營(yíng)養(yǎng)成分不足，還含有抗?fàn)I養(yǎng)因子[5]。

預(yù)消化蛋白是以豆粕為主要原料，采用飼料預(yù)消化技術(shù)制成的功能性飼料。飼料預(yù)消化技術(shù)，是采取體外模擬動(dòng)物機(jī)體消化過(guò)程，針對(duì)不同原料的具體特性進(jìn)行一定的處理加工，使其轉(zhuǎn)變成動(dòng)物易于消化吸收的營(yíng)養(yǎng)成分，同時(shí)去除原料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子和有毒有害雜質(zhì)，以達(dá)到提高能量、蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收利用率目的的新型飼料加工技術(shù)[6]。有研究表明，加酶飼料經(jīng)預(yù)消化處理后，均提高了雞對(duì)飼料中蛋白質(zhì)、能量、鈣和磷的代謝利用率[7]。楊洋等[8]研究發(fā)現(xiàn)預(yù)消化蛋白可以顯著提高小鼠的生長(zhǎng)性能和免疫性能。目前，預(yù)消化蛋白質(zhì)在配制低蛋白日糧應(yīng)用方面研究較少，因此，本研究旨在通過(guò)觀察預(yù)消化蛋白對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、免疫器官指數(shù)、免疫球蛋白IgA、IgG、IgM、促炎癥因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12等免疫指標(biāo)以及對(duì)腸道形態(tài)學(xué)的研究，為預(yù)消化蛋白在畜禽生產(chǎn)中的合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料和試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選用180只1日齡健康A(chǔ)A肉仔雞，隨機(jī)分為5個(gè)處理組，每個(gè)處理組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)9只雞。試驗(yàn)期42 d。各重復(fù)組初始體重?zé)o顯著差異（P＞0.05），分組情況如表1所示。

表1 試驗(yàn)分組

預(yù)消化蛋白由某公司提供，試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2。肉仔雞自由采食，充足飲水，按正常免疫程序進(jìn)行免疫接種。

1.2 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.2.1 生長(zhǎng)性能的測(cè)定

試驗(yàn)期內(nèi)觀察試驗(yàn)雞只生長(zhǎng)和健康狀況，每日記錄各欄飼料消耗量，死亡雞只數(shù)，死亡雞只重，并觀察糞便情況。分別在21、42 日齡，空腹4 h 后稱(chēng)重。最后計(jì)算平均日采食量、平均日增重和料重比。

1.2.2 免疫器官指數(shù)的測(cè)定

于42日齡每組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取1只肉雞進(jìn)行采樣，稱(chēng)取胸腺、法氏囊和脾臟的重量，計(jì)算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)（mg/g）=免疫器官質(zhì)量（mg）/體重（g）

1.2.3 血清生化指標(biāo)的測(cè)定

于42日齡對(duì)肉雞進(jìn)行靜脈采血，采血量為5 mL，之后傾斜45°放置2 h，低速離心機(jī)3 000 r/min 離心20 min，操作動(dòng)作要輕，避免溶血。離心后收集血清，-80 ℃保存。測(cè)定血清IgA、IgG、IgM、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-12水平，試劑盒均購(gòu)于江西寶萊生物科技有限公司。

1.2.4 十二指腸腸道組織形態(tài)學(xué)指標(biāo)測(cè)定與觀察

于42 日齡采樣后，將十二指腸剪去大約5 cm 的長(zhǎng)度，固定在4%多聚甲醛溶液中，采用H.E染色方法制作石蠟切片，使用萊卡相機(jī)于目鏡10倍，物鏡40倍的度數(shù)下測(cè)量十二指腸的絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度，計(jì)算絨毛長(zhǎng)度與隱窩深度比值（V/C）。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各試驗(yàn)處理組中的數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，對(duì)方差分析顯著者做Duncan’s多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 預(yù)消化蛋白對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.1.1 預(yù)消化蛋白對(duì)1～21日齡肉雞生長(zhǎng)性能的影響（見(jiàn)表3）

從表3可見(jiàn)，預(yù)消化蛋白組的平均日增重與對(duì)照組相比顯著升高（P＜0.05）；預(yù)消化蛋白組的料重比與對(duì)照組相比顯著降低（P＜0.05）。其他各組平均日采食量、平均日增重、料重比均差異不顯著（P＞0.05）。說(shuō)明在飼糧中添加預(yù)消化蛋白后，可以降低1～21 日齡肉雞的平均日采食量和料重比，提高平均日增重；對(duì)1～21 日齡肉雞而言，用預(yù)消化蛋白配制低蛋白日糧效果沒(méi)有普通飼料明顯，無(wú)法顯著提高生長(zhǎng)性能。

表3 預(yù)消化蛋白對(duì)1～21日齡肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.1.2 預(yù)消化蛋白對(duì)22～42 日齡肉雞生長(zhǎng)性能的影響（見(jiàn)表4）

表4 預(yù)消化蛋白對(duì)22～42日齡肉雞生長(zhǎng)性能的影響

從表4可見(jiàn)，預(yù)消化蛋白組、低蛋白1、2組的平均日采食量與對(duì)照組相比均顯著下降（P＜0.05）；預(yù)消化蛋白組、低蛋白1、2組的平均日增重與對(duì)照組相比顯著升高（P＜0.05）；預(yù)消化蛋白組、低蛋白1、2、3組的料重比與對(duì)照組相比顯著下降（P＜0.05），其他各組平均日采食量、平均日增重均差異不顯著（P＞0.05）。說(shuō)明在飼糧中添加預(yù)消化蛋白或使用預(yù)消化蛋白配制降低0.5%、1.0%蛋白的低蛋白日糧，可以顯著降低22～42日齡的肉雞平均日采食量和料重比，顯著提高平均日增重。

2.1.3 預(yù)消化蛋白對(duì)1～42日齡肉雞生長(zhǎng)性能的影響（見(jiàn)表5）

表5 預(yù)消化蛋白對(duì)1～42日齡肉雞生長(zhǎng)性能的影響

從表5可見(jiàn)，預(yù)消化蛋白組、低蛋白1、2組的平均日采食量與對(duì)照組相比顯著降低(P＜0.05)；預(yù)消化蛋白組、低蛋白1、2組的平均日增重與對(duì)照組相比顯著升高（P＜0.05）；與對(duì)照組相比，預(yù)消化蛋白組、低蛋白1、2組的料重比顯著降低（P＜0.05）。其他各組平均日采食量、平均日增重、料重比均差異不顯著（P＞0.05）。說(shuō)明在飼糧中單獨(dú)添加預(yù)消化蛋白或使用預(yù)消化蛋白配制降低0.5%、1.0%蛋白的低蛋白日糧，可以顯著降低1～42日齡肉雞的平均日采食量和料重比，提高平均日增重。

2.2 預(yù)消化蛋白對(duì)肉雞免疫指標(biāo)的影響

2.2.1 預(yù)消化蛋白對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響（見(jiàn)表6）

表6 預(yù)消化蛋白對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響(mg/g)

從表6可見(jiàn)，預(yù)消化蛋白組、低蛋白1、2、3組的胸腺指數(shù)與對(duì)照組相比顯著升高（P＜0.05）；低蛋白3 組的法氏囊指數(shù)比預(yù)消化蛋白組顯著降低（P＜0.05）。其余各組脾臟和法氏囊指數(shù)差異不顯著（P＜0.05）。說(shuō)明在飼糧中添加預(yù)消化蛋白或使用預(yù)消化蛋白配置低蛋白日糧，可以提高肉雞的免疫器官指數(shù)。

2.2.2 預(yù)消化蛋白對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響（見(jiàn)表7）

從表7 可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，肉雞血清中低蛋白1、2、3 組的IgA 濃度顯著降低（P＜0.05）；預(yù)消化蛋白組、低蛋白1、2、3 組的IgG 濃度顯著升高（P＜0.05）；低蛋白1、2、3 組的IgM 濃度顯著降低（P＜0.05）。其他各組的IgA、IgM 濃度和IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12 水平均差異不顯著（P＞0.05）。這說(shuō)明在飼糧中添加預(yù)消化蛋白后，可以提高肉雞血清中IgG 的濃度；使用預(yù)消化蛋白配制的低蛋白日糧，可以提高肉雞血清中IgG 的濃度；飼糧中添加預(yù)消化蛋白或者使用預(yù)消化蛋白配制的低蛋白日糧，可以提高肉雞血清中IL-1β、IL-6、IL-8 和IL-12 的水平。

表7 預(yù)消化蛋白對(duì)肉雞血清生化免疫指標(biāo)的影響（ng/mL）

2.3 預(yù)消化蛋白對(duì)肉雞十二指腸腸道組織形態(tài)學(xué)的影響（見(jiàn)表8、圖1）

表8 預(yù)消化蛋白對(duì)肉雞十二指腸道組織形態(tài)學(xué)的影響

圖1 各組肉雞十二指腸H.E染色切片

從表8 和圖1 可知，在目鏡10 倍、物鏡40 倍的度數(shù)下觀察，預(yù)消化蛋白組、低蛋白2 組的十二指腸絨毛長(zhǎng)度與對(duì)照組相比顯著升高（P＜0.05）；預(yù)消化蛋白組、低蛋白1、2、3組的十二指腸隱窩深度與對(duì)照組相比顯著降低（P＜0.05）；預(yù)消化蛋白組和低蛋白1 組的絨毛長(zhǎng)度/隱窩深度值與對(duì)照組相比顯著升高（P＜0.05）。其他各組絨毛長(zhǎng)度和絨毛長(zhǎng)度/隱窩深度比值均差異不顯著（P＞0.05）。這說(shuō)明在飼料中添加預(yù)消化蛋白或者使用預(yù)消化蛋白配制的低蛋白日糧，可以提高肉雞十二指腸絨毛長(zhǎng)度，降低隱窩深度。

3 討論

3.1 預(yù)消化蛋白對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

生長(zhǎng)性能指家畜家禽最經(jīng)濟(jì)有效地生產(chǎn)畜產(chǎn)品的能力，其衡量指標(biāo)包涵家畜家禽的平均日采食量、平均日均增重和料重比。翁洋[9]在黃羽肉雞飼糧中添加酶解產(chǎn)物復(fù)合小肽，結(jié)果發(fā)現(xiàn)添加了小肽的試驗(yàn)組總增重顯著升高，料重比也顯著降低。沈一茹等[10]研究飼糧中添加不同含量大豆酶解蛋白對(duì)肉雞的影響，結(jié)果表明添加大豆酶解蛋白能夠提高肉雞生長(zhǎng)性能。本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，在飼料中添加預(yù)消化蛋白后，肉雞的平均日采食量下降，平均日增重上升，料重比下降，這與翁洋[9]和沈一茹等[10]的研究結(jié)果相一致，可能是由于多肽促進(jìn)了腸道的消化吸收能力，從而提高了肉雞的生長(zhǎng)性能。

尚秀國(guó)等[11]經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)飼喂低蛋白日糧可以降低育肥豬的料重比。飼糧中蛋白質(zhì)含量水平過(guò)低會(huì)抑制肉仔雞的生長(zhǎng)，但是在低蛋白飼糧中補(bǔ)充蛋白酶、復(fù)合酶或者氨基酸可以促進(jìn)肉仔雞的生長(zhǎng)[12]。飼料中的蛋白質(zhì)進(jìn)入機(jī)體的消化系統(tǒng)后，被各器官分泌的酶類(lèi)物質(zhì)反應(yīng)分解，蛋白質(zhì)分子降解為含氨基酸數(shù)目不等的各種多肽。隨后在小腸中，多肽經(jīng)胰腺分泌的羧基肽酶和氨基肽酶等外切酶的作用進(jìn)一步降解為游離氨基酸和小肽，小肽可被腸黏膜直接吸收。食物蛋白質(zhì)被消化后，70%左右是以小肽形式被機(jī)體吸收，只有不到30%以氨基酸形式吸收[13-15]。本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，在22～42日齡階段，在降低飼糧中蛋白含量0.5%和1.0%水平后添加預(yù)消化蛋白，可以降低料重比；在22～42日齡階段，在降低飼糧中蛋白質(zhì)含量1.5%后添加預(yù)消化蛋白，料重比降低趨勢(shì)相比于0.5%和1.0%這兩組有所提高。本次試驗(yàn)結(jié)果與諸位學(xué)者研究結(jié)果相類(lèi)似，可能是因?yàn)榈偷鞍兹占Z中添加了預(yù)消化蛋白，部分彌補(bǔ)了低蛋白飼糧在腸道中分解的小肽數(shù)量的不足；另一個(gè)原因可能是小肽促進(jìn)了氨基酸的吸收，提高了飼糧氨基酸的利用率。這說(shuō)明使用預(yù)消化蛋白配制低蛋白日糧可以提高肉雞的平均日增重，降低其平均日采食量和料重比，從而提高肉雞的生長(zhǎng)性能。

3.2 預(yù)消化蛋白對(duì)肉雞免疫性能的影響

免疫器官指數(shù)和血液免疫球蛋白含量是評(píng)價(jià)家禽免疫機(jī)能的重要指標(biāo)，免疫得到增強(qiáng)后會(huì)導(dǎo)致免疫器官指數(shù)和免疫球蛋白含量升高[16]。IL-1β、IL-6、IL-8和IL-12是由多種細(xì)胞產(chǎn)生并作用于多種細(xì)胞的細(xì)胞因子，在免疫細(xì)胞的成熟、活化、增殖和免疫調(diào)節(jié)等過(guò)程中均發(fā)揮著重要作用[17-18]。孟可愛(ài)等[19]研究發(fā)現(xiàn)大豆肽可以提高育雛雞的免疫器官指數(shù)。李景[20]研究發(fā)現(xiàn)玉米胚芽大分子多肽可以提高小鼠血清中IgG的含量。左倩[21]研究發(fā)現(xiàn)大豆肽可以提高血漿中IgG、IgM、IL-6的含量；王俊麗等[22]經(jīng)過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)深海魚(yú)源活性小肽可以提高鯉魚(yú)的IL-8含量。本次試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼糧中添加預(yù)消化蛋白可以顯著提高肉雞胸腺器官指數(shù)和血清中IgG 的濃度，同時(shí)肉雞的脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)和血清中IgA、IgM濃度和IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12 水平均有上升的趨勢(shì)，與前人結(jié)果相似，可能是由于預(yù)消化蛋白水解產(chǎn)生的小肽促進(jìn)了機(jī)體免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育，同時(shí)小肽促進(jìn)了機(jī)體免疫細(xì)胞的成熟和活化，大量增殖分泌IgA、IgG、IgM、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-12。這說(shuō)明在飼糧中添加預(yù)消化蛋白后，可以提高肉雞免疫器官指數(shù)、免疫球蛋白濃度和炎癥因子水平，從而提高了肉雞的免疫性能。

大量研究表明飼料中的蛋白水平對(duì)維持機(jī)體的免疫功能起著重要作用，機(jī)體缺乏蛋白質(zhì)會(huì)導(dǎo)致免疫功能下降[23]。Chen等[24]研究發(fā)現(xiàn)，低蛋白日糧中添加蘇氨酸（Thr）可促進(jìn)肉雞免疫器官發(fā)育，從而增強(qiáng)其免疫功能。本次試驗(yàn)結(jié)果表明，在普通玉米-豆粕型日糧中降低0.5%蛋白含量時(shí)添加預(yù)消化蛋白，可以顯著提高肉雞的胸腺指數(shù)和肉雞血清中IgG 的濃度，同時(shí)其脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)、血清中IL-1β、IL-6、IL-8和IL-12的水平均有提高的趨勢(shì)，這與前人研究結(jié)果相類(lèi)似，可能是由于富含生物活性的肽片段在胃腸道酶的作用下發(fā)揮作用，從而調(diào)節(jié)肉雞免疫系統(tǒng)。這說(shuō)明使用預(yù)消化蛋白配制低蛋白日糧可以提高肉雞的免疫性能。但是在使用預(yù)消化蛋白配制的低蛋白日糧中，肉雞血清中IgA和IgM的濃度均顯著下降，需做進(jìn)一步的研究。

3.3 預(yù)消化蛋白對(duì)肉雞十二指腸腸道組織形態(tài)學(xué)的影響

小腸作為動(dòng)物機(jī)體一個(gè)重要的消化器官和免疫器官，具有消化吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的功能和起到抵御外界病原入侵的作用[25]。絨毛高度與隱窩深度可以反映出黏膜上皮成熟細(xì)胞的數(shù)量, 影響機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收作用[26]。V/C值可以綜合反映出小腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力，比值升高則消化吸收功能增強(qiáng)，機(jī)體的生長(zhǎng)性能好[27]。王恬等[28]在小肽營(yíng)養(yǎng)素對(duì)斷奶仔豬小腸發(fā)育的影響中研究表明，小肽能刺激小腸絨毛增生，促進(jìn)幼齡動(dòng)物小腸的發(fā)育成熟。祝平等[29]在植物小肽對(duì)斷奶仔豬腸道形態(tài)的影響中研究表明，植物小肽能夠促進(jìn)仔豬在斷奶后腸道形態(tài)完整性，提高仔豬腸道絨毛高度與隱窩深度的比值，這種趨勢(shì)隨著植物小肽添加量的增加而提高。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼糧內(nèi)添加預(yù)消化蛋白可以顯著提高肉雞十二指腸絨毛長(zhǎng)度和V/C值，顯著降低隱窩深度。本次試驗(yàn)結(jié)果與諸位學(xué)者研究結(jié)果相似，可能是由于預(yù)消化蛋白水解后產(chǎn)生了小肽，促進(jìn)了小腸絨毛的生長(zhǎng)，改善了肉雞的腸道形態(tài)學(xué)。這說(shuō)明預(yù)消化蛋白具有調(diào)節(jié)腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)、促進(jìn)肉雞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收作用。

Yuming等[30]和Opapeju等[31]研究發(fā)現(xiàn)豬采食低蛋白日糧表現(xiàn)出小腸隱窩深度降低和V/C 比值升高的趨勢(shì)，這表明低蛋白日糧能夠有效提高小腸的消化吸收功能。本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，在飼糧中添加預(yù)消化蛋白后，在降低1.0%蛋白含量時(shí)，肉雞十二指腸絨毛長(zhǎng)度增加；在降低0.5%蛋白含量時(shí)，肉雞十二指腸隱窩深度降低，這與前人研究成果相似，說(shuō)明添加預(yù)消化蛋白配制低蛋白日糧，可以提高肉雞十二指腸絨毛高度，降低隱窩深度，促進(jìn)肉雞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。

4 結(jié)論

①在日糧中添加預(yù)消化蛋白，可以提高肉雞的生長(zhǎng)性能和免疫性能，改善肉雞的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。

②添加預(yù)消化蛋白并降低日糧總蛋白水平，可以提高肉雞的生長(zhǎng)性能、免疫性能和抗應(yīng)激性能，改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，其中降低日糧0.5%蛋白效果較為明顯。

③在不影響生長(zhǎng)性能的前提下，預(yù)消化蛋白配制0.5%低蛋白日糧適用于1～21 日齡的肉雞；預(yù)消化蛋白配制1.0%低蛋白日糧適用于22～42日齡的肉雞。