馬玉星 韓勇

(1，山東省日照市莒縣動物疫病預(yù)防控制中心 276500；2，山東省日照市動物疫病預(yù)防控制中心 276800）

非洲豬瘟（African Swine fever,ASF）是由非洲豬瘟病毒（African Swine fever virus,ASFV）感染家豬和野豬引起的一種出血性病毒病[1]。ASFV 感染豬的臨診表現(xiàn)為呼吸障礙、皮膚及臟器廣泛出血等，對養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重，被納入世界動物衛(wèi)生組織(OIE) 通報性疾病名錄中[2]。自2018 年8 月中國發(fā)生第一例非洲豬瘟疫情以來，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

為做好非洲豬瘟防控工作，了解日照市豬非洲豬瘟感染情況，日照市動物疫病預(yù)防控制中心組織各區(qū)縣動物疫病預(yù)防控制中心進(jìn)行采樣，通過實(shí)驗(yàn)室檢測，掌握了日照市非洲豬瘟流行情況，為日照市非洲豬瘟防控提供了重要的技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)

2020 年1～12 月，本試驗(yàn)在日照市、各區(qū)縣動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室開展。

1.2 監(jiān)測范圍和對象

在全市開展監(jiān)測，監(jiān)測對象主要是種豬場、規(guī)模養(yǎng)豬場。另外，對部分豬屠宰場、動物無害化處理場、生豬產(chǎn)品運(yùn)輸車輛也進(jìn)行監(jiān)測。

1.3 監(jiān)測方法及抽樣數(shù)量

采用流行病學(xué)的分階段抽樣方法。采用先抽取場點(diǎn)，在場點(diǎn)內(nèi)再抽取個體的抽樣方式開展監(jiān)測。病原學(xué)每個場點(diǎn)按照群內(nèi)預(yù)期陽性率10%，置信水平95%、可接受誤差10%，預(yù)計每個場點(diǎn)采集樣品30 份，不足30 份的全采。每年進(jìn)行2 次，全市共抽檢212 個場2502 份樣品。

1.4 實(shí)驗(yàn)室檢測

對豬全血、扁桃體、淋巴結(jié)、脾臟等采用熒光PCR 方法檢測非洲豬瘟病原。

1.5 檢測試劑和方法

非洲豬瘟熒光PCR 試劑盒購自凱杰生物公司，核酸提取試劑盒購自西安天隆公司。方法采用熒光實(shí)時定量PCR。

1.6 儀器設(shè)備

實(shí)時熒光定量PCR 儀為ABI 公司、西安天隆公司生產(chǎn)。核酸提取儀為西安天隆公司生產(chǎn)移液器為Thermo 公司和ependof 公司生產(chǎn)。

1.7 檢測主要步驟和結(jié)果判定

試驗(yàn)前根據(jù)要求先對樣品進(jìn)行滅活，核酸提取采用西安天隆公司的自動提取儀，試劑盒也采用西安天隆公司。先按照反應(yīng)液23ul、Taq 酶0.25ul 配制總PCR 反應(yīng)液，每個反應(yīng)管中加上述PCR 反應(yīng)液23ul，樣品2ul 或?qū)φ?，總體積25ul，放入儀器中。熒光PCR 反應(yīng)：95℃3min；95℃5s，60℃30s (收集熒光)，45 個循環(huán)。陰性對照無Ct 值并且無擴(kuò)增曲線。同時陽性對照的Ct 值應(yīng)≤32.0，并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線，試驗(yàn)成立。當(dāng)樣品無Ct 值并且無擴(kuò)增曲線，表明樣品中無病毒。當(dāng)樣品Ct 值≤42.0，且出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線，表示樣品中存在病毒。當(dāng)樣品Ct值大于42.0 需重做，重做仍為None 的為陰性，否則為陽性。

2 結(jié)果

2020 年全市共對2502 份樣品進(jìn)行了非洲豬瘟病原檢測，結(jié)果均為陰性（見附表）。

附表 2020 年全市共對2502 份樣品進(jìn)行了非洲豬瘟病原檢測結(jié)果（單位：個、份）

3 討論與分析

3.1 非洲豬瘟風(fēng)險評估

根據(jù)檢測結(jié)果，未檢出非洲豬瘟病原學(xué)陽性樣品，說明日照市非洲豬瘟防控形勢良好，發(fā)生非洲豬瘟疫病風(fēng)險較低。

3.2 抽樣方法的選擇

本次采用先抽取場點(diǎn)，然后在場點(diǎn)內(nèi)再抽取個體的抽樣方式開展監(jiān)測采樣。但由于資金和人力的限制，養(yǎng)殖場抽樣數(shù)量較少，不能最大限度地反映全市非洲豬瘟感染情況。下步要繼續(xù)加大監(jiān)測力度，擴(kuò)大監(jiān)測范圍和數(shù)量，重點(diǎn)對屠宰場、無害化處理場進(jìn)行監(jiān)測。

3.3 加強(qiáng)生物安全體系建設(shè)

非洲豬瘟防控的關(guān)鍵措施是要加強(qiáng)生物安全體系建設(shè)，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，定期進(jìn)行消毒，選擇敏感消毒藥，制定科學(xué)的消毒程序。對病豬進(jìn)行隔離和淘汰，對死亡生豬做好無害化處理。

3.4 非洲豬瘟凈化技術(shù)研究

探索適合日照地區(qū)的凈化路線，以凈化創(chuàng)建場為抓手，以點(diǎn)帶面，以點(diǎn)促面，推進(jìn)非洲豬瘟凈化向無疫小區(qū)和無疫區(qū)發(fā)展。