鐘 光 ， 朱沛霽 ， 賈代漢 ， 齊玉凱 ， 施壽榮

（1.江蘇立華牧業(yè)股份有限公司，江蘇常州 231000；2.中國農(nóng)業(yè)科學院家禽研究所，江蘇揚州 225125）

動物在高溫環(huán)境下極易發(fā)生熱應激， 從而造成機體采食下降，生產(chǎn)性能降低，組織器官的正常發(fā)育也受到不同程度的損傷， 如免疫器官的發(fā)育被抑制、腸道絨毛高度降低等，對畜禽生產(chǎn)和繁殖帶來不利影響 （Toghyani 等，2012；Mckee，Sams，1997）。 為緩解熱應激損傷，各種措施被不斷的研究和利用。從營養(yǎng)學角度著手，是一種緩解乃至解決熱應激的兼顧經(jīng)濟性和便利性的措施。 研究表明，元素硒有緩解熱應激的作用。給予熱應激狀態(tài)下的AA 肉雞0.2 mg/kg 的硒元素， 發(fā)現(xiàn)其體重、采食量和飼料轉化率顯著提高 （Ai Wakeel 等，2017；Habibian 等，2015；Niu 等，2009）。 也有研究表明， 給予熱應激狀態(tài)下母豬0.4 mg/kg 的硒元素，發(fā)現(xiàn)添加組母豬的體溫調節(jié)能力、泌乳性能和產(chǎn)仔重顯著提高， 背膘重和負增重顯著降低（Liu等，2017）。黃羽肉雞是華東、華南地區(qū)廣泛分布的配套系，出欄量大，但當前對其抗熱應激添加劑的相關報道較少。 其次， 黃羽肉雞體型較白羽肉雞小，生長速度慢，生理特點與白羽肉雞等商品雞也可能存在差異， 因此研究黃羽肉雞的抗熱應激添加劑， 對其生產(chǎn)有著重要的指導作用。 硒作為GSH-Px 的重要組成部分， 其本身或許也有較強的抗氧化功能。本試驗在飼糧中添加0.3 mg/kg 的硒，研究其對熱應激下黃羽肉雞生產(chǎn)性能、血液指標、器官和腸道發(fā)育的作用，為黃羽肉雞規(guī)模化生產(chǎn)中緩解熱應激損傷提供一定的指導作用。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 黃羽肉雞（中速型，“優(yōu)黃”系列，揚州立華畜禽有限公司提供，江蘇?。?，亞硒酸鈉（Na2SeO3，純度＞96%，Se 含量為 45.66%，購買自江蘇易實生物科技有限公司）。

1.2 試驗設計 選擇體重相近、 健康的32 d 雄性黃羽肉雞180只，隨機分為常溫組（CN）、熱應激組（HS）和硒添加組（HS+Se），每組 6個重復，每重復10只雞。 常溫組和熱應激組飼喂基礎飼糧，硒添加組在基礎飼糧中添加0.3 mg/kg 的硒。常溫組環(huán)境為26 ℃，熱應激組和硒添加組環(huán)境溫度為35 ℃，試驗設計和溫度處理見表1。

表 1 試驗設計與處理

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗共14 d， 采用三層籠養(yǎng)，雞籠規(guī)格為120 cm×80 cm，保證飼養(yǎng)密度在0.1 m2/只左右。 使用北京庫藍科技有限公司生產(chǎn)的動物營養(yǎng)代謝環(huán)控倉控制溫度， 濕度在55% ～60%。為避免高溫環(huán)境（35 ℃）降低肉雞采食量造成硒元素的攝入不足， 正式試驗前7 d 開始飼喂對應的試驗飼糧。 自由采食和飲水，24 h 光照，其他管理措施同黃羽肉雞飼養(yǎng)標準。 配制飼糧時， 按照0.30 mg/kg 的硒（Se）添加量及其試驗用亞硒酸鈉的純度（96%），在飼糧中添加0.70 mg/kg 的亞硒酸鈉（Na2SeO3）。 基礎飼糧按照我國《雞飼養(yǎng)標準》（NY/T33-2004）進行配制并制粒，基礎飼糧組成與營養(yǎng)水平見表2。

表2 基礎飼糧組成與營養(yǎng)水平（風干基礎）

1.4 采樣指標和方法

1.4.1 生產(chǎn)性能 每日喂料時稱料重， 試驗結束時統(tǒng)計每個重復的余料重， 試驗開始和采樣前統(tǒng)計每個重復的體重（BW），計算32 ～45 d 的平均日增重（ADG），平均日采食量（ADFI），料重比（F/G）和死淘率。

1.4.2 血液指標 熱應激14 d，從每個重復中隨機選取2只雞，翅下靜脈采血并置于促凝管中，靜置離心并分離血清。 采用UniCel DxC 800 Synchron 全自動生化分析系統(tǒng) （Beckman Coulter，美國）測定血清中丙氨酸轉氨酶（ALT，又稱谷丙轉氨酶）、天冬氨酸轉氨酶（AST，又稱谷草轉氨酶）、乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）的活力和內毒素（RSE）的含量。 試劑盒購買自中山標佳生物科技有限公司（中國廣東）。

1.4.3 器官和腸道發(fā)育 熱應激14 d，從每個重復中隨機選取2只雞，稱重并記錄，經(jīng)頸靜脈放血致死，而后打開腹腔，分離心臟、肝臟、胸腺、脾臟、法氏囊并稱重、記錄，計算器官的相對比重。

器官比重/%=器官重/活重×100。

分離整個腸段， 而后懸空剪取空腸和回腸中間約1 cm 腸段并置于4%的甲醛溶液中，快速固定24 h，然后用連續(xù)濃度的乙醇脫水。 標本在二甲苯中清除， 并在56 ℃的熱風爐中放入石蠟中24 h。 石蠟組織塊用切片機 （徠卡手動旋轉切片機，RM-2235 型，德國徠卡微系統(tǒng)有限公司）制備用于橫切片。 在玻片上采集組織切片，脫蠟，蘇木精和伊紅染色，然后分別在光學顯微鏡下（50 倍放大，DM-1000 型，德國徠卡微系統(tǒng)有限公司）檢查組織學特征。 利用Leica X 應用軟件，對每張切片測量絨毛高度和隱窩深度。 絨毛高度是從隱窩-絨毛交界處到絨毛頂?shù)拈L度， 而隱窩深度是從肌肉黏膜到隱窩-絨毛交界處的長度， 因此可以計算絨毛高度：隱窩深度比（V/C）。

1.5 數(shù)據(jù)分析 數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2013 進行統(tǒng)計和簡單處理后， 用 SPSS 20.0 軟件的 One-Way-ANOVA 進行單因素方差分析， 均值顯著性分析用 LSD 和 Duncan’s 法進行多重比較，結果以“平均數(shù)±標準誤”表示，并以P ＜0.05 作為顯著差異水平，同時根據(jù)LSD 的組間顯著性，分別以P1、P2作為“溫度”因素和“硒”因素的顯著性。

2 結果與分析

2.1 硒對熱應激下黃羽肉雞生產(chǎn)性能的作用由表 3 可知，HS組黃羽肉雞的 45 d BW、32 ～ 45 d ADG、ADFI 顯著低于 CN組（P ＜ 0.05），32 ～ 45 d的料重比和死淘率顯著高于對照組（P ＜0.05）；與HS組相比，HS+Se組45 d 黃羽肉雞的體重顯著提高了 12.3%，32 ～ 45 d 的 ADG 和 ADFI 顯著提高了 112.3%、36.1%（P ＜ 0.05）， 料重比顯著降低了 35.6%（P ＜ 0.05）。

表3 硒對熱應激下黃羽肉雞生產(chǎn)性能的作用

2.2 硒對熱應激下黃羽肉雞血液指標的作用由表 4 可知，HS組黃羽肉雞的血清 ALT、AST、LDH、CK 活力和內毒素含量顯著高于 CN組（P ＜0.05）； 與 HS組相比，HS+Se組的 AST、LDH、CK活力和內毒素含量分別顯著降低了38.8%、34.9%、51.5%和 28.5%（P ＜ 0.05）。

表4 硒對熱應激下黃羽肉雞血液指標的作用

2.3 硒對熱應激下黃羽肉雞器官和腸道發(fā)育的作用 由表5 可知，HS組的胸腺比重、脾臟比重和法氏囊比重顯著低于 CN組 （P ＜ 0.05）； 與 HS組相比，HS+Se組的胸腺比重、 脾臟比重和法氏囊比重分別顯著提高了56.3%、30.8%和62.5%（P ＜0.05）。

表5 硒對熱應激下黃羽肉雞器官發(fā)育的作用 %

由表6 可知，HS組空腸和回腸的絨毛高度、絨毛高度/隱窩深度顯著低于對照組 （P ＜0.05）；與HS組相比，HS+Se組的空腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度分別顯著提高了9.5%、13.3%（P ＜0.05），回腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度分別顯著提高了 26.4%、75.1%（P ＜ 0.05）。

表6 硒對熱應激下黃羽肉雞腸道發(fā)育的作用

3 討論

3.1 硒對熱應激下黃羽肉雞生產(chǎn)性能的作用高熱環(huán)境對家禽生長的不良影響已經(jīng)得到大量的研究。 例如，熱應激能夠顯著降低42 日齡的肉仔雞體重和飼料利用效率，給生產(chǎn)帶來不利影響；會改變機體的生理機能，并隨著強度增強，機體代謝發(fā)生紊亂，體重下降甚至發(fā)生負增長，嚴重的會導致死亡 （潘子意等，2020；Sohail 等，2012）。硒緩解熱應激對家禽生產(chǎn)性能的損傷也有研究證實。 研究表明，硒可改善熱應激條件下泰和烏骨雞的生產(chǎn)性能， 適宜的添加水平為0.5 ～0.7 mg/kg，能夠改善熱應激下肉雞的體重、飼料轉化率、 存活率 （許蘭嬌等，2014；Ei-sheikh 等，2006）。 本試驗結果表明，熱應激顯著降低了黃羽肉雞的體重、ADG、ADFI， 顯著升高了料重比和死淘率， 說明本試驗溫度構建的熱應激模型成功。 與熱應激組相比，硒添加組的體重、日增重、日采食量顯著提高，料重比顯著降低，說明飼糧添加0.3 mg/kg 的硒能夠提高熱應激下黃羽肉雞的生產(chǎn)性能， 這與前人研究的結果相一致， 可能是因為硒是三碘甲狀腺原氨酸合成酶的重要輔助因子和活化劑， 能通過活化三碘甲狀腺原氨酸，調控營養(yǎng)物質的吸收和代謝（田金可等，2011）。 此外，與熱應激組相比，硒添加組的死淘率有降低的趨勢， 說明硒有提高熱應激下黃羽肉雞的存活的可能， 這可能與硒的抗氧化作用有關。

3.2 硒對熱應激下黃羽肉雞血液指標的作用研究表明， 高溫環(huán)境造成的熱應激會改變雞血清中某些酶的活性， 例如 ALT、AST、LDH 和 CK等這類正常情況下僅存在于細胞內的酶， 僅在機體的組織和器官受損時才釋放到血液中（Melesse 等，2011；劉小林等，2008）。 因此，它們在血清中的含量是評估組織和器官受損的重要指標，研究中常用谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶來反映肝臟功能情況。 而內毒素是細菌細胞壁分泌的脂多糖，其含量反映了機體的亞健康程度。 有研究報道， 熱應激能夠顯著升高血清中ALT 和AST 活力，增加組織、細胞的通透性，增加血液中的內毒素含量 （Wan 等；2017；Hosseini-vashan等，2016）。 而硒對血液指標的相關研究報道較少，主要關注硒增強機體抗氧化功能的作用。 研究表明， 硒能參與谷胱甘肽過氧化物酶 （GSHPx）的合成，起到清除機體過量自由基、提高機體抗氧化功能的作用（田金可等，2011）。 本試驗結果表明，HS組的 ALT、AST、LDH、CK 活力和內毒素含量顯著高于對照組， 這與前人研究結果一致，表明本試驗的溫度下，熱應激模型構建成功，其次，硒添加組AST、LDH、CK 的活性和內毒素含量顯著低于熱應激組， 說明飼糧中添加0.3 mg/kg 硒元素能顯著降低機體器官和組織的受損程度，這可能與硒的抗氧化功能有關，具體原因有待進一步的驗證。

3.3 硒對熱應激下黃羽肉雞器官和腸道發(fā)育的作用 器官的功能往往與其大小、形態(tài)相關。 常用器官的重量或相對重量來反映器官的發(fā)育情況。 本試驗結果表明，熱應激顯著降低了黃羽肉雞胸腺、脾臟、法氏囊的相對比重，這與“熱應激能造成機體的器官受損，并發(fā)生免疫抑制，從而抑制胸腺、 脾臟、 法氏囊等免疫器官的正常發(fā)育”的研究結果相一致（阮煒珊，2016）。 而與熱應激組相比，硒添加組的胸腺、脾臟、法氏囊比重顯著增加， 說明在本試驗條件下， 飼糧添加0.3 mg/kg 的硒能促進熱應激下黃羽肉雞的免疫器官發(fā)育， 緩解熱應激對黃羽肉雞器官的發(fā)育抑制。 但本試驗未發(fā)現(xiàn)熱應激對黃羽肉雞心臟、肝臟比重的影響，也未發(fā)現(xiàn)硒對黃羽肉雞心臟、肝臟比重的作用。 這可能與試驗天數(shù)和動物品種的不同有關。

腸道是消化吸收的主要場所，空腸主要負責吸收營養(yǎng)物質， 回腸在發(fā)酵中起著至關重要的作用。 黏膜形態(tài)是營養(yǎng)物質吸收的關鍵，反映了腸道整體健康狀況 （Ducatelle 等，2018；Damron等，2005）。 發(fā)生熱應激時，小腸的結構很容易被破壞，包括絨毛高度縮短、破裂、隱窩變深和黏膜上皮細胞脫落等， 這可能是機體在高溫環(huán)境下會產(chǎn)生過量的氧自由基， 從而嚴重破壞腸道黏膜（Yu 等，2010；Tan 等，2010）。 本試驗結果表明， 熱應激顯著降低了空腸和回腸的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度值， 這與前人研究結果相一致，說明本試驗溫度構建的熱應激模型成功。與熱應激組相比， 硒添加組空腸和回腸的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度值顯著升高， 說明在本試驗條件下，飼糧中添加0.3 mg/kg 的硒能顯著改善熱應激下黃羽肉雞的腸道黏膜形態(tài)，緩解熱應激對腸道黏膜形態(tài)的損傷。

4 結論

在本試驗條件下，飼糧中添加0.3 mg/kg 的硒能提高熱應激下32 ～45 日齡黃羽肉雞的生產(chǎn)性能、器官和腸道發(fā)育，緩解熱應激對黃羽肉雞生產(chǎn)性能、血液指標、器官和腸道發(fā)育的不良影響。