陳立剛

（本溪滿族自治縣農(nóng)業(yè)綜合發(fā)展服務(wù)中心高官動(dòng)監(jiān)所，遼寧本溪 117100）

豬流行性腹瀉病（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由豬流行性腹瀉病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）感染引起的一種仔豬的急性疾病[1]。豬流行性腹瀉病毒是冠狀病毒科Alphacoronavirus屬的成員，與豬傳染性胃腸炎屬于同一屬。豬流行性腹瀉病毒可在豬腸道中定殖，導(dǎo)致仔豬腸絨毛萎縮、壞死和脫落，影響營(yíng)養(yǎng)吸收，進(jìn)而造成仔豬出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、體重減輕、厭食和精神沉郁等癥狀[2]。2010年豬流行性腹瀉病毒高致病性突變株在我國(guó)出現(xiàn)，隨后在全世界范圍內(nèi)廣泛傳播，給世界生豬養(yǎng)殖企業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[3]。因此，在生豬養(yǎng)殖中加強(qiáng)對(duì)豬流行性腹瀉病毒的防控，尤其是豬流行性腹瀉病毒疫苗接種在豬流行性腹瀉病的防控中具有重要的作用。本文對(duì)豬流行性腹瀉病毒的病毒學(xué)、流行病學(xué)特點(diǎn)以及疫苗研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為豬流行性腹瀉病的防控和疫苗研發(fā)工作提供理論參考。

1 豬流行性腹瀉病毒的病毒學(xué)特征

豬流行性腹瀉病毒直徑為95～190 nm，具有囊膜18 nm的纖突，病毒粒子具有多形性。豬流行性腹瀉病毒的基因組為單股正鏈RNA基因組，基因組大小約為28 kb，編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白，即刺突蛋白（S）、包膜蛋白（E）、膜蛋白（M）和核衣殼（N）；以及4種非結(jié)構(gòu)蛋白，即1a、1b、3a和3b[4]。豬流行性腹瀉病毒在蔗糖中的浮密度為1.18 g/mL。豬流行性腹瀉病毒很容易被乙醚或氯仿滅活，在4～50℃時(shí)，病毒相對(duì)穩(wěn)定，在50℃以上高溫下豬流行性腹瀉病毒容易被滅活，71℃10 min即可被滅活[5]。

2 豬流行性腹瀉病毒在全球的分布情況

豬流行性腹瀉病毒最早于20世紀(jì)70年代初期在英國(guó)和比利時(shí)被報(bào)道，1977年比利時(shí)首次分離出豬流行性腹瀉病毒，并被歸類為冠狀病毒科。隨后，在20世紀(jì)80～90年代，豬流行性腹瀉病毒被確定為日本和韓國(guó)嚴(yán)重的豬流行疫病。在20世紀(jì)末，豬流行性腹瀉病在歐洲很少出現(xiàn)，但多以隱性感染形式持續(xù)存在，在歐洲發(fā)生過(guò)4次豬流行性腹瀉病，即1989—1991年，荷蘭發(fā)生豬流行性腹瀉?。?995年、1998年分別在匈牙利和英格蘭發(fā)生了豬流行性腹瀉病；此外，2005—2006年在意大利發(fā)現(xiàn)了典型的豬流行性腹瀉病[6]。2007—2008年，泰國(guó)報(bào)告了幾次嚴(yán)重的豬流行性腹瀉病的發(fā)生，其中泰國(guó)豬流行性腹瀉病毒分離株與中國(guó)毒株JS-2004-2在系統(tǒng)發(fā)育上屬于同一進(jìn)化支，當(dāng)前，新的豬流行性腹瀉病毒毒株在泰國(guó)養(yǎng)豬場(chǎng)中呈現(xiàn)零星發(fā)病[7]。

我國(guó)自1973年就有關(guān)于豬流行性腹瀉病相關(guān)的病例報(bào)道，但直到1984年才確定病原體。自20世紀(jì)80年代初以來(lái)，我國(guó)出現(xiàn)了豬流行性腹瀉病的地方性流行。對(duì)1987—1989年我國(guó)26個(gè)省份內(nèi)豬場(chǎng)中豬流行性腹瀉病流行情況的普查進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)豬流行性腹瀉病造成仔豬的死亡率占36種豬病中總死亡率的1.74%，而豬傳染性胃腸炎占9.53%。2010年冬季，我國(guó)南方的養(yǎng)豬場(chǎng)發(fā)生豬流行性腹瀉病，此后立即蔓延到全國(guó)。該病在華南地區(qū)造成超過(guò)100萬(wàn)頭仔豬死亡，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成毀滅性打擊。即使接種過(guò)疫苗的乳仔豬，也未能幸免，豬流行性腹瀉病的發(fā)病率和死亡率幾乎為100%[8]。患病仔豬主要表現(xiàn)出嚴(yán)重腹瀉、排出黃色水樣糞便、體重減輕和急性脫水死亡。通過(guò)對(duì)分離的病毒基因組進(jìn)行測(cè)序，鑒定該次疫情的病原體是一種變異的新型豬流行性腹瀉病毒毒株[8]。直到2010年10月出現(xiàn)變異株前，豬流行性腹瀉病毒滅活或減毒二價(jià)疫苗在我國(guó)的廣泛使用，使得豬流行性腹瀉病在全國(guó)范圍內(nèi)得到控制，但由于變異株的出現(xiàn)使得豬流行性腹瀉病毒感染急劇增加，嚴(yán)重?fù)p害了養(yǎng)豬業(yè)。

3 豬流行性腹瀉病毒的流行病學(xué)

患病仔豬或攜帶豬流行性腹瀉病毒的豬是豬流行性腹瀉病的主要傳染源，而糞口傳播是豬流行性腹瀉病毒的主要傳播方式。豬流行性腹瀉病毒可通過(guò)受感染豬的糞便或嘔吐物進(jìn)行水平傳播[9]。豬流行性腹瀉病毒還可以通過(guò)豬場(chǎng)的運(yùn)輸車(chē)輛、養(yǎng)殖人員的手、鞋子和衣服、飼料及飼料添加劑等進(jìn)行養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)部或不同養(yǎng)殖場(chǎng)間的間接傳播，被豬流行性腹瀉病毒污染豬的飼料原料也是重要的傳染源。Niederwerder等[10]證明，“糞—鼻”途徑也是豬場(chǎng)內(nèi)部和不同豬場(chǎng)之間的重要傳播途徑，糞便中的豬流行性腹瀉病毒可形成帶有病毒的氣溶膠顆粒，該顆粒具有感染能力，通過(guò)空氣最遠(yuǎn)傳播10英里以上。臨床研究表明，與患病豬飼養(yǎng)有一定距離的健康豬鼻腔內(nèi)可檢測(cè)出豬流行性腹瀉病毒的RNA。此外，豬流行性腹瀉病毒不僅可感染豬的腸道，還可感染豬鼻腔的上皮細(xì)胞，造成豬鼻黏膜或淋巴組織固有層中的樹(shù)突狀細(xì)胞攜帶豬流行性腹瀉病毒，并將病毒轉(zhuǎn)移到CD3+T細(xì)胞[10,11]。豬流行性腹瀉病的臨床癥狀嚴(yán)重程度及其病毒的傳播性取決于豬群的整體免疫狀況和健康狀況以及養(yǎng)殖場(chǎng)的生物安全水平[12]。

4 豬流行性腹瀉病毒疫苗的研究進(jìn)展

4.1 滅活疫苗

豬流行性腹瀉病毒傳統(tǒng)疫苗主要是滅活疫苗和減毒活疫苗等全病毒疫苗。早在1993年，豬流行性腹瀉病毒組織滅活疫苗就可以為仔豬提供長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月的免疫保護(hù)。為控制該病，我國(guó)于1995年引進(jìn)TGEV-PEDV二價(jià)滅活疫苗。2016年，Baek等[13]使用韓國(guó)流行的豬流行性腹瀉病毒KNU-141112毒株研發(fā)了一種滅活的豬流行性腹瀉病毒疫苗，在母豬分娩前6周和3周用含佐劑的滅活單價(jià)疫苗對(duì)懷孕母豬進(jìn)行肌肉免疫，在毒株攻擊后，接種疫苗的仔豬存活率能夠達(dá)到約92%，并且腹瀉嚴(yán)重程度顯著降低。

4.2 減毒活疫苗

減毒活疫苗具有高免疫原性，單次免疫通常足以誘導(dǎo)保護(hù)。然而，疫苗毒株的突變性，使得疫苗免疫豬也存在一定感染其他毒株的風(fēng)險(xiǎn)。研制減毒活疫苗的關(guān)鍵是選擇低毒力、高滴度和高免疫原性的毒株，然而，豬流行性腹瀉病毒毒株的體外分離較困難，尤其對(duì)于大流行的突變毒株，即使成功分離出毒株也不一定具有高滴度。2015年3月，由減毒傳染性胃腸炎病毒（H株）、豬流行性腹瀉病毒（CV777株，GI-a亞組）和豬輪狀病毒（NX株）研制的三聯(lián)疫苗在我國(guó)獲批。2015年11月，傳染性胃腸炎病毒（HB08毒株）和豬流行性腹瀉病毒（ZJ08毒株，GI-b亞群）雙聯(lián)減毒疫苗也正式上市。近期，Wang等[14]基于GII基因組內(nèi)的野外豬流行性腹瀉病毒毒株開(kāi)發(fā)了二聯(lián)（豬流行性腹瀉病毒和傳染性胃腸炎病毒）滅活疫苗，試驗(yàn)和臨床數(shù)據(jù)表明，這種新型疫苗對(duì)GII豬流行性腹瀉病毒具有更好的保護(hù)作用。

4.3 亞單位疫苗

與全病毒疫苗相比，亞單位疫苗具有安全性高、無(wú)傳染性病毒核酸、免疫原性低、可提供物質(zhì)明確的統(tǒng)一抗原等優(yōu)點(diǎn)，但需要佐劑或免疫增強(qiáng)劑以提高免疫原性。豬流行性腹瀉病毒S蛋白是開(kāi)發(fā)亞單位疫苗的主要靶點(diǎn)，Zhao等[15]利用不同的表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了包括COE和S1在內(nèi)的部分豬流行性腹瀉病毒S蛋白或全長(zhǎng)S蛋白，通過(guò)口服、肌肉注射、皮下注射或腹膜內(nèi)注射疫苗的方式免疫小鼠或豬，均產(chǎn)生了高水平的抗體。此外，豬流行性腹瀉病毒S2蛋白中的不確定受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RBD）、HR1和HR2區(qū)域也是開(kāi)發(fā)亞單位疫苗的潛在靶標(biāo)[16]。

4.4 核酸疫苗

核酸疫苗包括DNA疫苗和mRNA疫苗，核酸疫苗具有成本低、安全性高等優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)豬流行性腹瀉病毒與輪狀病毒或傳染性胃腸炎病毒組合產(chǎn)生的二價(jià)DNA疫苗已經(jīng)開(kāi)發(fā)出來(lái)，但可能因?yàn)樵撘呙绲拿庖咴暂^差，因此尚未開(kāi)展臨床試驗(yàn)[17]。

5 結(jié)語(yǔ)

目前，豬流行性腹瀉病仍是威脅我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的一大疾病，是制約我國(guó)乃至全世界養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的重要疫病。對(duì)豬流行性腹瀉病毒的突變及相關(guān)致病機(jī)制和防控方法仍存在知識(shí)空白，因此，豬流行性腹瀉疫苗仍受到多種因素影響。豬流行性腹瀉病毒具有的高變異性使得豬流行性腹瀉疫苗的研發(fā)和有效性受到了嚴(yán)重制約，因此，對(duì)國(guó)內(nèi)豬流行性腹瀉病毒基因組的突變情況進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)控，開(kāi)展豬流行性腹瀉病毒基因突變機(jī)制的研究為疫苗研發(fā)提供理論支撐。此外，通過(guò)綜合性的生物防控措施切斷豬流行性腹瀉病毒的傳播途徑也是防控豬流行性腹瀉病的重要方法，因此，防控豬流行性腹瀉病時(shí)，應(yīng)通過(guò)切斷傳播途徑、研發(fā)疫苗和特效藥物等方法實(shí)現(xiàn)。

總之，欲更加有效地防控豬流行性腹瀉病，需科研人員對(duì)豬流行性腹瀉病毒的感染致病機(jī)制、遺傳變異機(jī)制及傳播機(jī)制進(jìn)行更深入的研究，為藥物和疫苗研發(fā)提供靶位和抗原，從而降低豬流行性腹瀉病給全世界生豬養(yǎng)殖業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失。