葉麗云，程 冰，馬水麗，郝金斌，孟國良，傅俊生，吳小平

（福建農(nóng)林大學生命科學學院，福建 福州 350002）

中國酒文化源遠流長，如今在先進的制造工業(yè)、富裕的生活水平、多樣的交際娛樂生活等多方面影響下，經(jīng)常性飲酒已成為現(xiàn)代人的常態(tài)。在酒桌交際中，偏好高乙醇體積分數(shù)白酒易造成一次性大量飲酒。短時間大量飲酒會對肝臟造成嚴重損害，罹患急性酒精性肝?。╝lcoholic liver disease，ALD）的危險性高[1]。氧化應(yīng)激反應(yīng)是導(dǎo)致ALD的重要原因，乙醇攝入機體內(nèi)后會促進超氧陰離子、過氧化氫等活性氧的大量產(chǎn)生，并且導(dǎo)致體內(nèi)谷胱甘肽（glutathione，GSH）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）等抗氧化成分減少，從而促發(fā)氧化應(yīng)激[2]。這個過程會引起肝細胞大分子物質(zhì)過氧化等毒性作用而導(dǎo)致肝細胞的壞死。為此，人們開發(fā)了多種合成藥用于治療該類疾病，然而這些合成藥物在ALD臨床研究中沒有實質(zhì)療效，并且伴隨著不可預(yù)測的副作用。所以，尋找具有良好的保肝活性且副作用很小的天然抗氧化藥物對酒精性肝病的預(yù)防和治療具有十分重要的意義。

靈芝（Ganoderma lingzhi）是多孔菌科（Polyporaceae）真菌[3-4]，又名赤芝、仙草等。靈芝含有多糖、三萜、不飽和脂肪酸、生物堿、甾醇類物質(zhì)等多種活性物質(zhì)[5]。科學研究證實，作為靈芝主要活性成分之一的多糖能夠有效降血糖，抑制癌細胞增殖，提高機體免疫力等[6-8]，因此多糖含量成為靈芝品質(zhì)評估的重要指標之一。靈芝多糖作為一種天然提取成分，安全、無毒副作用且成本低，常用于臨床癌癥的輔助治療、治療病毒性肝炎、治療神經(jīng)衰弱與失眠等神經(jīng)性疾病[9-10]。

轉(zhuǎn)錄組測序是最近幾年發(fā)展起來的利用深度測序技術(shù)進行轉(zhuǎn)錄分析的方法，可以對全轉(zhuǎn)錄組進行系統(tǒng)的研究，為作用機制方面的研究提供有效手段。余賢美等[11]通過全轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)涉及植物-病原互作、細胞凋亡和類黃酮生物合成相關(guān)的基因在蘋果苦痘病發(fā)生過程中發(fā)揮著重要的作用；田甜甜等[12]基于轉(zhuǎn)錄組學解析釀酒酵母耐酸機制，確定了8 個與耐酸性有關(guān)的重要基因。基于轉(zhuǎn)錄組測序，Ding Xiaomeng等[13]研究指出黑靈芝多糖在腸上皮與其免疫細胞作用時，細胞因子相互作用、核因子（nuclear factor，NF）-κB和絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號通路是3 條重要作用通路；Wang Hui等[14]發(fā)現(xiàn)黑靈芝多糖刺激樹突狀細胞受到免疫應(yīng)答和免疫功能的調(diào)節(jié)，其中PI3K/Akt和NF-κB通路起重要作用。本實驗以赤芝102為研究材料，利用轉(zhuǎn)錄組技術(shù)探索赤芝多糖對小鼠急性酒精性肝損傷的預(yù)防作用機制，為天然保肝藥物的挖掘提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

昆明種雄性小鼠50 只，由海王福藥制藥有限公司提供，體質(zhì)量18～22 g，使用許可證號為SYXK（閩）2019-0004。

赤芝102 福建農(nóng)林大學菌物研究中心；無水乙醇、氯仿、正丁醇（分析純） 國藥集團化學試劑有限公司；丙二醛（malondialdehyde，MDA）、過氧化氫酶（catalase，CAT）和SOD測定試劑盒 南京建成有限公司；E.Z.N.A. Total RNA Kit I試劑盒 美國Omega Bio-Tek公司；2100 RNA Nano 6000試劑盒 美國安捷倫公司；Top Green qPCR SuperMix熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）、TransScript All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR試劑盒 北京全式金有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

CP214分析天平 上海奧豪斯儀器有限公司；UV-vis 1800紫外-可見吸收光譜儀 島津（上海）實驗器材有限公司；HL-2S恒流泵 上海青浦滬西儀器廠；ST16R高速冷凍離心機、Nicolet iS 50傅里葉變換紅外光譜儀、Varioskan Flash多功能酶標儀 美國賽默飛世爾科技公司；N-001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海艾郎儀器有限公司；HWS12電熱恒溫水浴鍋 上海一恒科技儀器有限公司；熒光qPCR儀CFX96 美國Bio-Rad公司。

1.3 方法

1.3.1 赤芝多糖的制備與鑒定

稱15 g的赤芝菌絲體粉末，置于500 mL離心瓶，加300 mL蒸餾水并封口。90 ℃熱水浸提4 h后，3 000 r/min離心10 min并收集上清液。重復(fù)上述浸提操作，合并兩次上清液[15-16]，加入3 倍體積無水乙醇進行醇沉12 h。5 000 r/min離心10 min，棄去上清液。向沉淀中加入200 mL蒸餾水振蕩使沉淀充分溶解得到粗多糖溶液，分裝到50 mL離心管中，每管加入3 倍體積的Sevag試劑除去粗多糖中的蛋白質(zhì)。將多糖溶液裝入透析袋并封口，用流水（去離子水）透析2 d除去多糖中的小分子雜質(zhì)。透析完畢后將多糖溶液凍干，得到赤芝菌絲體多糖（Ganoderma lingzhimycelia polysaccharide，GLMPS）。赤芝子實體多糖（Ganoderma lingzhifruiting body polysaccharide，GLFPS）的制備方法相同，由赤芝子實體制備得到GLFPS。取適量赤芝多糖和干燥溴化鉀粉末按照質(zhì)量比1∶200混勻研磨后壓片，用傅里葉變換紅外光譜儀在4 000～500 cm－1范圍內(nèi)掃描并鑒定所得多糖[17]。

1.3.2 小鼠分組及模型建立

飼養(yǎng)條件為通風良好，照明與黑暗各12 h，溫度22 ℃，每3 d進行一次常規(guī)消毒。墊料、飲水瓶和籠子要根據(jù)情況換洗，保持小鼠生存環(huán)境干凈和干燥[18]。適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周。為探明赤芝多糖對小鼠酒精肝損傷的預(yù)防效果，將50 只小鼠隨機分為5 組，包括空白組（CK）、模型組（Model）、GLMPS組（200 mg GLMPS/kgmb）、GLFPS組（200 mg GLFPS/kgmb）和陽性組（300 mg聯(lián)苯雙酯/kgmb），每組10 只。空白組和模型組小鼠每天定時灌胃0.3 mL蒸餾水；GLMPS組、GLFPS組和陽性組小鼠每天分別定時灌胃200 mg GLMPS/kgmb、200 mg GLFPS/kgmb和300 mg聯(lián)苯雙酯/kgmb（溶解在去離子水中，每只小鼠灌胃體積為0.3 mL溶液）。連續(xù)灌胃1 周，整個實驗中保持正常進食和飲水[19]，每天20點禁食，第2天定時空腹灌胃樣品再飼喂飼料。在最后一次灌胃4 h后，空白組灌胃12 mL/kgmb的蒸餾水，其他4 組灌胃12 mL/kgmb體積分數(shù)50%的乙醇溶液，灌胃后12 h內(nèi)禁食不禁水。

1.3.3 小鼠醒酒時間和醉酒時間測定

將醉酒小鼠腹部向上放置。若30 s內(nèi)小鼠沒有調(diào)換姿勢，變成腹部朝下，說明此時小鼠處于醉酒狀態(tài)，即翻正反射消失，乙醇溶液灌胃開始到翻正反射消失的時長為醉酒時間；若30 s內(nèi)小鼠調(diào)換姿勢變成腹部朝下則說明醒酒，將翻正反射消失到恢復(fù)的時長記為醒酒時間[20]。記錄小鼠的醒酒時間與醉酒時間。

1.3.4 肝臟指數(shù)與生化指標測定

用頸椎脫臼法處死小鼠后立即解剖，取出肝臟后放入含50 mL生理鹽水的離心管中，搖晃多次清洗血液，重復(fù)3 次。用干凈濾紙吸干生理鹽水，拍照記錄并測定質(zhì)量。計算肝臟指數(shù)（肝臟質(zhì)量/體質(zhì)量×100%）。切下肝臟組織，一部分肝臟組織放入體積分數(shù)10%的福爾馬林溶液固定，制作肝臟病理切片[21-23]；剩余肝臟組織保存于－80 ℃冰箱中備用，分別參考MDA、CAT和SOD測定試劑盒說明書檢測肝臟中的MDA、CAT和SOD水平。

1.3.5 轉(zhuǎn)錄組分析

利用E.Z.N.A. Total RNA Kit I試劑盒提取實驗小鼠肝組織中的RNA，用NanoDrop ND-1000型DNA檢測儀檢測各組肝臟的RNA濃度，用2100 RNA Nano 6000試劑盒進行質(zhì)量檢測。將質(zhì)量良好的RNA樣品送至中國新科技有限公司，利用Illumina測序平臺進行轉(zhuǎn)錄組測序。將測序所得的clean data利用HISAT2軟件比對到參考基因組進行序列比對，獲取在參考基因組或基因上的位置信息[24]。每個樣本的基因表達水平用每千個堿基的轉(zhuǎn)錄每百萬映射讀取的碎片（fragments per kilobase of exon model per million mapped fragments，F(xiàn)PKM）表示。以P＜0.05和log2（差異倍數(shù)）的絕對值大于1作為差異顯著性標準，篩選差異表達基因（differentially expressed genes，DEGs）[25]。在線數(shù)據(jù)分析平臺OmicShare（http://www.omicshare.com/tools）上對DEGs進行基因本體（gene ontology，GO）與京都基因和基因組（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）數(shù)據(jù)庫的富集分析。

1.3.6 熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)

將1.3.5節(jié)得到的質(zhì)量良好的肝組織RNA利用TransScript All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以GADPH基因為內(nèi)參基因，在CFX96 PCR儀上進行熒光qPCR檢測，引物序列見表1。

表1 熒光qPCR引物序列Table 1 Primer sequences used for fluorescence qPCR

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

每組處理設(shè)計3 個重復(fù)，結(jié)果以平均值±標準偏差表示。采用SPSS 22.0軟件進行單因素方差分析，采用Duncan檢驗進行顯著性分析，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。采用GraphPad Prism 6.01軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 赤芝多糖的傅里葉變換紅外光譜分析結(jié)果

將提純后的GLMPS與GLFPS用紅外光譜進行鑒定分析，結(jié)果如圖1所示。兩光譜分別在3 408.22 cm－1和3 406.39 cm－1處的吸收峰是由于游離的O－H伸縮振動形成的，該峰為多糖的羥基吸收峰；GLMPS與GLFPS分別在2 929.81 cm－1和2 925.95 cm－1處呈現(xiàn)的吸收峰是由于C－H非對稱伸縮振動引起的，1 654.89cm－1和1 639.46cm－1處的吸收峰是羧基的C＝O伸縮振動引起，1 386.79 cm－1和1 415.72 cm－1處是C－H的變角振動特征吸收峰，在1 200～1 000 cm－1間也都出現(xiàn)吸收峰，這些都是糖類物質(zhì)的特征吸收峰，由此可見，提取得到的GLMPS與GLFPS確為多糖。

圖1 GLMPS（A）和GLFPS（B）的傅里葉變換紅外光譜圖Fig. 1 FTIR spectra of GLMPS (A) and GLFPS (B)

2.2 赤芝多糖對急性酒精性肝損傷小鼠翻正時間的影響

翻正反射的出現(xiàn)和消失是判斷小鼠乙醇中毒情況的重要依據(jù)。如表2所示，陽性組、GLMPS組與GLFPS組翻正反應(yīng)消失與恢復(fù)的時間都與模型組有極顯著差異（P＜0.01），說明赤芝多糖能夠延長小鼠醉酒時間并縮短醒酒時間，有效的緩解小鼠急性乙醇中毒情況。

表2 赤芝多糖對急性酒精性肝損傷小鼠翻正時間的影響Table 2 Effects of G. lingzhi polysaccharides on righting reaction time in mice with acute alcoholic liver injury

2.3 赤芝多糖對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟的影響

分析赤芝多糖對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟指數(shù)的影響，結(jié)果如表3所示，模型組與空白組對比，小鼠肝指數(shù)顯著提高0.95%，說明高劑量乙醇灌胃可能會導(dǎo)致小鼠肝臟受損，引發(fā)肝水腫和脂質(zhì)積累，初步表明此次實驗造模成功。多糖組和陽性組的肝臟指數(shù)與模型組相比降低（0.615±0.115）%，差異顯著（P＜0.05），表明赤芝多糖可一定程度地降低肝臟指數(shù)且GLFPS效果優(yōu)于GLMPS。

表3 赤芝多糖對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟指數(shù)的影響Table 3 Effects of G. lingzhi polysaccharides on liver index in mice with acute alcoholic liver injury

2.4 赤芝多糖對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟相關(guān)酶活性的影響

為證實赤芝多糖對小鼠急性肝損傷的預(yù)防保護功效，進一步檢測肝臟組織中MDA含量、CAT和SOD活力。如圖2所示，乙醇引起的肝損傷會導(dǎo)致模型組中MDA含量升高，CAT和SOD活力降低，進一步證明此次實驗造模成功。與模型組相比，GLMPS組和GLFPS組的MDA含量分別降低37.63%、46.13%，由此發(fā)現(xiàn)GLFPS減少炎癥反應(yīng)中MDA含量的效果最好，更接近于聯(lián)苯雙酯。SOD是清理動物體內(nèi)超氧化自由基的天然內(nèi)源性抗氧化酶，是判斷機體抗氧化水平高低的標志。模型組的CAT和SOD活力均低于空白組，說明肝損傷會導(dǎo)致CAT和SOD的活性下降。與模型組的CAT和SOD水平相比，GLMPS組分別升高53.55%、24.97%，GLFPS組分別升高97.37%、26.40%，說明赤芝多糖能緩解肝損傷所導(dǎo)致的抗氧化能力降低，在提高CAT活力來減輕機體氧化應(yīng)激反應(yīng)方面，赤芝GLFPS功效優(yōu)于GLMPS和聯(lián)苯雙酯。

圖2 赤芝多糖對急性酒精性肝損傷小鼠MDA（A）、CAT（B）、SOD（C）水平的影響Fig. 2 Effects of G. lingzhi polysaccharides on the levels of MDA (A),CAT (B) and SOD (C) in the liver of mice with acute alcohol liver injury

2.5 赤芝多糖對小鼠肝臟病理改變的影響

將小鼠肝臟制成病理切片，如圖3所示，對照組小鼠的肝小葉構(gòu)造非常清晰，界板整齊，細胞索排列井然有序，細胞結(jié)構(gòu)清晰明了，無泡沫狀變異，肝竇無充血現(xiàn)象；模型組小鼠肝小葉的界線變得模糊不清，細胞索排列零亂，肝竇變窄且充血現(xiàn)象十分明顯，細胞呈現(xiàn)濁腫情況，出現(xiàn)泡沫或氣球樣變異且胞漿淡染，說明急性乙醇灌胃會引起明顯的肝損傷；GLMPS、GLFPS以及聯(lián)苯雙酯都顯著改善了肝細胞濁腫和肝細胞索零亂情況，肝小葉界限也變得明顯，沒有發(fā)現(xiàn)明顯細胞壞死。

圖3 肝臟組織病理切片（200×）Fig. 3 Pathological observation of liver tissues (200 ×)

2.6 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)可信度分析

為進一步探究赤芝多糖對酒精性肝損傷的預(yù)防作用，將空白組、模型組和GLFPS組小鼠肝臟樣品進行轉(zhuǎn)錄組測序，樣品基因表達水平相關(guān)性如圖4A所示。各樣品之間的相關(guān)系數(shù)r＞0.930，這說明所測樣品生物學重復(fù)性好，樣品之間表達模式的相似度越高。用主成分分析來判斷組間差異發(fā)現(xiàn)，通過主要差異特征PC1、PC2能夠有效將3 組樣品區(qū)分開（圖4B），表明不同處理組差異明顯。綜上可見，轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)具有較高可信度。

圖4 數(shù)據(jù)可信度分析結(jié)果Fig. 4 Credibility analysis of transcriptome data

2.7 差異表達基因篩選

利用火山圖能夠迅速查看基因在對比的兩組樣品中表達基因差異結(jié)果統(tǒng)計學顯著性。如圖5所示，模型組與空白組共有520 個DEGs，其中211 個基因下調(diào)，309 個基因上調(diào)。GLFPS組與模型組有468 個DEGs，其中227 個基因下調(diào)和241 個基因上調(diào)。以模型組與空白組、GLFPS組與模型組中表達差異趨勢相反為條件篩選差異基因進行下一步富集分析，篩選出94 個滿足條件的DEGs。

圖5 DEGs的火山圖（A）與維恩圖（B）Fig. 5 Volcano plots (A) and Venn diagram (B) of DEGs

2.8 差異基因富集分析

首先對篩選的DEGs進行GO富集分析，結(jié)果如圖6A所示。這些DEGs主要涉及生物學功能（biological process）中的脂肪酸代謝過程（fatty acid metabolic process）、一元羧酸代謝過程（monocarboxylic acid metabolic process），分子功能（molecular function）中的胰島素樣生長因子（insulin-like growth factor）、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶活性（glutathione transferase activity）以及細胞成分（cellular component）中的膜攻擊復(fù)合物（membrane attack complex）、外泌體（extracellular exosome）。對DEGs的進行KEGG富集分析挖掘赤芝多糖對酒精性肝損傷作用相關(guān)的通路，發(fā)現(xiàn)所篩選的DEGs主要涉及的通路包括谷胱甘肽代謝、細胞色素P450、視黃醇代謝（圖6B）。

圖6 DEGs的GO（A）與KEGG（B）富集圖Fig. 6 GO (A) and KEGG (B) enrichment analysis of DEGs

2.9 差異表達基因的對比驗證

對富集到通路上的部分基因進行實時熒光qPCR驗證，結(jié)果如圖7所示。Cyp2e1、Cyp1a1、Ugt2b381、Adh1為細胞色素P450通路上基因。在模型組中乙醇使得Cyp2e1顯著上調(diào)表達，Ugt2b381、Adh1顯著下調(diào)表達。與模型組相比，GLFPS組Cyp2e1、Cyp1a1的表達顯著下調(diào)，Ugt2b381、Adh1顯著上調(diào)表達。說明赤芝多糖能夠有效抑制因乙醇作用而產(chǎn)生的細胞色素P450通路上基因的差異表達?；駻ldh1a1、Aldh1a2、Aox1、Rdh9為與視黃醇代謝相關(guān)基因。乙醇使Aox1基因在模型組中顯著上調(diào)表達，Aldh1a1、Aldh1a2、Rdh9基因顯著下調(diào)表達。與模型組相比，Aox1基因呈下調(diào)表達，Aldh1a1、Aldh1a2、Rdh9基因上調(diào)表達，說明赤芝多糖能夠通過調(diào)控視黃醇代謝相關(guān)基因的表達來對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用。這一結(jié)果基本與轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果相一致，從而證明了轉(zhuǎn)錄組分析的準確性。

圖7 GLFPS對急性酒精性肝損傷小鼠基因表達的影響Fig. 7 Effects of GLFPS on gene expression in the liver of mice with acute alcohol liver injury

3 討 論

肝臟是人體最大的腺體器官，極易受有毒化學物質(zhì)損傷，造成肝臟代謝功能紊亂。大量乙醇攝入會導(dǎo)致脂肪肝、肝炎、肝硬化，目前肝損傷已成為尤為突出的全球性健康問題[26]。前期有研究表明，乙醇在攝入機體后在體內(nèi)經(jīng)乙醇脫氫酶、細胞色素P450系統(tǒng)、CAT系統(tǒng)代謝生成乙醛，同時生成大量的羥自由基[27]，從而破壞氧化還原平衡狀態(tài)，導(dǎo)致肝臟氧化應(yīng)激損傷。本研究以體積分數(shù)50%乙醇溶液灌胃小鼠建立急性酒精性肝損傷模型，比較GLFPS與GLMPS對酒精性肝氧化損傷的保護效果。

動物體過氧化脂質(zhì)代謝反應(yīng)的產(chǎn)物為MDA，MDA積累過多會誘導(dǎo)細胞膜產(chǎn)生過氧化反應(yīng)，損壞細胞膜的結(jié)構(gòu)與功能，最終導(dǎo)致細胞壞死和凋亡[28]。SOD是清理動物體內(nèi)超氧化自由基的天然內(nèi)源性抗氧化酶，能夠促使H2O2和O2產(chǎn)生，而CAT則能水解SOD產(chǎn)生的H2O2，從而減少機體超氧陰離子自由基數(shù)目，通過有效抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)來保護機體；因此，肝臟中SOD、CAT、MDA水平是評價肝酒精性氧化損傷的幾大重要指標。本研究結(jié)果表明赤芝菌絲體和子實體多糖對小鼠急性乙醇灌胃所導(dǎo)致的肝損傷有很好的預(yù)防保護效果。赤芝多糖可以緩解小鼠由于酒精性肝損傷引起的肝指數(shù)與MDA水平升高，提高SOD和CAT活性來加快體內(nèi)脂質(zhì)代謝和氧化分解，通過減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)并提高抗氧化能力來保護肝臟。

食用菌中子實體與菌絲的多糖差異較大。冮潔等[29]通過比較4 種食用菌發(fā)現(xiàn)，菌絲體多糖抗氧化活性優(yōu)于子實體多糖；邵麗曉等[30]的研究結(jié)果表明蛹蟲草菌絲體多糖與子實體多糖體外免疫調(diào)節(jié)最佳作用濃度存在一定差異；于華崢等[31]指出靈芝子實體的單糖主要為葡萄糖和半乳糖，菌絲體單糖主要為葡萄糖，作用效果也不相同，在醫(yī)藥保健品使用中應(yīng)區(qū)分。本研究從肝臟指數(shù)、MDA活力、CAT活力以及病理切片上比較發(fā)現(xiàn)GLFPS對小鼠酒精性肝損傷的預(yù)防作用效果優(yōu)于GLMPS。

當前，轉(zhuǎn)錄組分析已成熟地應(yīng)用于各個領(lǐng)域。本研究利用轉(zhuǎn)錄組分析技術(shù)探索了赤芝多糖對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用，篩選出符合條件的DEGs 94 個，進行GO和KEGG富集分析，結(jié)果顯示這些DEGs主要涉及脂肪酸代謝、一元羧酸代謝、胰島素樣生長因子、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶活性等，主要涉及的通路包括谷胱甘肽代謝、細胞色素P450、視黃醇代謝。谷胱甘肽主要通過其功能基團巰基和γ-谷氨酰胺鍵參與體內(nèi)多種生理生化功能與物質(zhì)代謝，能減少氧應(yīng)激性損害及脂質(zhì)過氧化誘致的肝纖維化，解除外源性有毒物質(zhì)的毒性，對肝臟起到保護作用[32-33]。赤芝多糖能夠通過調(diào)節(jié)谷胱甘肽代謝相關(guān)基因的表達來預(yù)防急性酒精肝損傷。

細胞色素P450是一個很大的可自身氧化的亞鐵血紅素蛋白家族，在細胞對抗炎癥反應(yīng)和促進細胞凋亡方面，細胞色素P450家族有著重要作用，主要承擔90%的外源性藥物（環(huán)境毒物、治癌藥物）和內(nèi)源性化合物（類固醇、脂肪酸、激素）的生物轉(zhuǎn)化任務(wù)[34]。大量乙醇代謝反應(yīng)會引起Cyp2e1高度表達，并在肝臟積累大量超過本身調(diào)節(jié)能力的活性氧和活性氮，進而導(dǎo)致自身氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)的平衡被打破，致使細胞膜變薄和通透性過高，最終引起肝臟損傷[35]。在本研究中乙醇使得Cyp2e1顯著上調(diào)表達，在赤芝多糖組中表達下調(diào)，說明細胞色素P450通路在赤芝多糖預(yù)防急性酒精肝損傷中起重要作用。

視黃醇（VA）及其衍生物對細胞生長、細胞分化和凋亡具有深遠的影響。乙醇中毒者肝臟VA水平較低，過量乙醇干擾視黃醇代謝[36]。劉中宏等[37]的研究指出視黃醇參與肝星狀細胞的代謝，從而抑制膠原的釋放，并抑制ALD患者肝臟纖維化的形成。在本研究中發(fā)現(xiàn)赤芝多糖能夠通過調(diào)節(jié)視黃醇相關(guān)基因的表達來預(yù)防急性酒精肝損傷。

此外，本研究還對8 個富集通路上的基因進行qPCR驗證，結(jié)果表明因乙醇作用而上調(diào)或下調(diào)表達的基因在多糖組中表達情況發(fā)生改變。這一結(jié)果基本與轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果相一致，進一步證明了轉(zhuǎn)錄組分析的準確性。綜上所述，赤芝多糖能夠有效預(yù)防急性酒精肝損傷，其機制可能是通過調(diào)節(jié)谷胱甘肽代謝、細胞色素P450、視黃醇代謝相關(guān)基因的表達。