安琦，曹亞彬，牛彥波，原韜

黑龍江省科學(xué)院微生物研究所，哈爾濱150010

因抗生素類藥物濫用而產(chǎn)生的超級細菌嚴重威脅人類與動物的健康，為了保證人類食品安全，我國已出臺一系列法律法規(guī)嚴格控制使用抗生素，養(yǎng)殖行業(yè)對抗生素的管理已經(jīng)上升到法律層面［1-2］。然而，一些養(yǎng)殖業(yè)由于整體設(shè)施、技術(shù)、營養(yǎng)、管理等方面還不夠完善，各類動物發(fā)病率、死亡率居高不下，造成嚴重的經(jīng)濟損失［3-4］。鵝養(yǎng)殖業(yè)是我國畜牧業(yè)生產(chǎn)的傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)，鵝肉中脂肪含量低，蛋白質(zhì)含量高，深受消費者喜愛。肉鵝具有生長快、飼耗量少、抗病力強等特點，既適合于放牧，也適合圈養(yǎng)和工廠化養(yǎng)殖。但在日常肉鵝養(yǎng)殖中，呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)和寄生蟲疾病多發(fā)，成為限制肉鵝養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸之一［5-8］。

目前市場化的青貯飼料質(zhì)量差異較大，根據(jù)青貯原料和收獲季節(jié)，青貯飼料可分為玉米青貯、玉米秸青貯、牧草青貯、葉菜類青貯和混合青貯等。相對于混合青貯，添加劑青貯的研究尚處于起步階段［9-10］。關(guān)于添加劑的研究多集中在營養(yǎng)型添加劑方面，而關(guān)于青貯中添加中藥的研究相對較少［11-12］。連翹最早記載于東漢的《神農(nóng)本草經(jīng)》中，以果實入藥，含有連翹苷、連翹脂苷A和揮發(fā)油等多種有效成分，能夠清熱解毒，還具有廣譜抗菌作用，對多種革蘭氏陽性及陰性細菌均有抑制效果［13］，在治療呼吸道疾病、病毒性疾病方面有很好的效果。在人用藥上連翹藥用部分為果實，在連翹種植中，為提高果實產(chǎn)量，每年需修剪枝條，由此產(chǎn)生了大量枝條、葉片等園林廢棄物［14-15］。研究表明，連翹枝條和葉片中也含有比較豐富的功效成分，是一種廉價的中藥資源。連翹苷和連翹酯苷A是連翹中的主要功效成分。研究發(fā)現(xiàn)，在連翹葉中含有較高的連翹苷和連翹酯苷A，仍具有一定的藥用價值［16］。

雖然連翹枝條在治療草食動物疾病中價值較高，但其適口性較差。為了改善其適口性，本研究嘗試將連翹枝條與玉米秸稈混合后接種乳酸菌與宇佐美曲霉孢子懸液，經(jīng)過發(fā)酵后制備成青貯飼料，其苦味被濃重的青貯發(fā)酵氣息遮蔽，使連翹可以隨青貯飼料一起飼喂，檢測其飼喂效果，旨在制備一種具有預(yù)防與治療禽類疾病作用的青貯飼料，提高肉鵝的生長性能與健康水平。

1 材料與方法

1.1 材料

植物乳桿菌1426（Lactobacillus plantarum）分離自玉米秸稈青貯物料，具有自主知識產(chǎn)權(quán)；宇佐美曲霉3.2926（Aspergillus usamil）為黑龍江省科學(xué)院微生物所保存。培養(yǎng)基配制試劑使用化學(xué)純及以上等級，分析檢測試劑使用國產(chǎn)分析純。乳熟期玉米秸稈由黑龍江蓬勃牧草有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 乳酸菌液淀粉液制備 植物乳桿菌1426，基礎(chǔ)培養(yǎng)基為MRS 乳酸菌專用培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為恒溫30 ℃，靜止培養(yǎng)，培養(yǎng)18～24 h，逐級擴大培養(yǎng)，有效活菌數(shù)達到1×108～1×109CFU·mL-1，使用前加入5%淀粉，混勻使用。

1.2.2 宇佐美曲霉孢子懸液的制備 以麥麩、玉米粉為主要原料，采用固體淺層發(fā)酵技術(shù)方法，培養(yǎng)基經(jīng)過配料、滅菌、冷卻、接種宇佐美曲霉3.2926 種曲后，培養(yǎng)48～72 h 形成孢子，培養(yǎng)結(jié)束。低溫（55℃以下）干燥后粉碎、篩分，過80目篩分裝備用，制備好的霉菌種子孢子數(shù)達到1×1011個·g-1以上，使用前進行10 倍稀釋制成孢子液。

1.2.3 青貯發(fā)酵基本流程 將連翹枝條收集、去土、鍘短、柔絲機揉碎后，與鍘短玉米秸稈在混合機內(nèi)以相應(yīng)的比例混合并攪拌均勻，在攪拌過程中加入乳酸菌淀粉液與宇佐美曲霉孢子，攪拌均勻后在打包機中用塑料膜打包密封。每包青貯料500 kg 左右，單批次生產(chǎn)規(guī)模7 t，約14～15 包。青貯包在室溫避雨的環(huán)境中，自然發(fā)酵60 d后，開包檢查品質(zhì)并開展飼喂試驗。

1.2.4 試驗處理方案 添加連翹枝條實驗分為3組，分別在全株玉米青貯原料中加入不同量的連翹枝條。其中處理1 添加10%連翹枝條，處理2 添加5%連翹枝條，處理3 為未添加連翹枝條的對照組。

1.2.5 檢測方法 依據(jù)中國畜牧業(yè)協(xié)會頒布的標準［17］進行質(zhì)量檢測。試驗采用3處理7平行，數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計軟件進行分析。每包青貯飼料“四分法”采樣，樣品冰凍保存。連翹苷、連翹脂苷A采用高效液相色譜法測定，參照孔維潔等［18］的方法。

1.2.6 喂養(yǎng)試驗 選取健康且體質(zhì)量相近的28日齡肉鵝，隨機分為3 組，每組5 個重復(fù)，每個重復(fù)100 只，飼養(yǎng)至70 日齡。玉米豆粕型精料主要營養(yǎng)物質(zhì)含量：代謝能11.2 mJ·kg-1、粗蛋白16.5%、粗纖維6.0%、鈣1.10%、總磷0.8%?；A(chǔ)飼糧：玉米豆粕型精料80%，青貯飼料20%。青貯飼料調(diào)配：以全株玉米制備的青貯飼料，分別加入處理1、處理2、處理3 制備含連翹青貯飼料10%，混合均勻且柔絲后使用。試驗鵝采用舍內(nèi)地面平養(yǎng)，自由采食和飲水，其他免疫和消毒措施按照常規(guī)程序進行，患病肉鵝及時用藥治療。

1.2.7 肉鵝生產(chǎn)性能測定 試驗肉鵝于28 日齡和70 日齡時，每組隨機選取50 只，分別進行空腹稱重，每天記錄各組的供料量和余料量、死亡數(shù)與腹瀉情況，計算其平均日采食量、平均日增重、料重比、成活率。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理與分析 所有數(shù)據(jù)采用Excel 軟件進行前期處理，然后用SPSS 19.0 進行統(tǒng)計分析，LSD 進行多重比較，結(jié)果采用平均值±標準差表示，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 青貯飼料質(zhì)量檢測

根據(jù)行業(yè)標準［17］對含不同比例連翹的青貯飼料進行質(zhì)量檢測，檢測結(jié)果如表1 所示，與對照組相比，處理1 和處理2 青貯飼料的pH 顯著升高（P＜0.05），乙酸含量顯著下降（P＜0.05）；淀粉含量降低，中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量有所升高，氨肽氮/總氮比值降低，青貯飼料的營養(yǎng)指標小幅下降，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。青貯的營養(yǎng)指標雖有小幅下降，但差異不顯著（P＞0.05）。

表1 含不同比例連翹的玉米青貯飼料質(zhì)量檢測Table 1 Quality inspection of corn silage with different proportions of forsythia

2.2 青貯飼料中的功效成分

對青儲飼料中連翹功效成分連翹苷、連翹脂苷A 進行檢測，檢測結(jié)果如表2 所示，添加不同劑量的連翹枝條后，處理1 中連翹苷和連翹脂苷A含量分別可達1.13、2.98 mg·kg-1，顯著高于處理2（P＜0.05）。結(jié)果表明，添加10%連翹枝條的青貯飼料中功效成分顯著高于添加5%連翹枝條的試驗組。

表2 青貯飼料中功效成分Table 2 Effective ingredients in silage

2.3 青貯飼料的飼喂效果

青貯飼料對肉鵝生長性能的影響如表3 所示，未添加連翹的對照組肉鵝出現(xiàn)腸炎癥狀，而添加連翹的試驗組肉鵝健康狀況良好。添加連翹的處理組1 和處理組2 肉鵝的平均日采食量和日增重均顯著高于對照組（P＜0.05），處理組1 和處理組2 的料肉比分別為2.21 和2.25，顯著低于對照組2.38（P＜0.05），處理組1 和處理組2 的成活率最高可達99.07%，顯著高于對照組（P＜0.05）。由結(jié)果可見，飼料中添加連翹的肉鵝試驗組飼喂效果顯著優(yōu)于對照組，而添加了不同比例連翹的青貯試驗組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表3 含連翹青貯飼料的飼喂效果Table 3 Feeding effect of silage containing forsythia

3 討論

抗生素類飼料添加劑的限制對飼料畜牧業(yè)持續(xù)和高質(zhì)量發(fā)展帶來了新的挑戰(zhàn)，無抗養(yǎng)殖下有效的技術(shù)方案成為研究的熱點。中藥與微生態(tài)是眾多技術(shù)方案中重要的組成部分，中獸醫(yī)在我國已經(jīng)有幾千年歷史，大量研究表明，中獸藥具有治療疾病、提高養(yǎng)殖動物健康水平及提高日增重等作用，在養(yǎng)殖業(yè)上有廣闊的應(yīng)用前景［19-20］。目前，中獸藥的市場占有率仍然很低，在實際使用中，還存在著許多不可忽視的問題，如劑量大、成本高、灌服難、適口性差等，嚴重制約了中獸藥的進一步發(fā)展［21-23］。

本研究選用乳酸菌與宇佐美曲霉作為青貯接種劑，宇佐美曲霉可利用全株玉米籽粒中的淀粉進行發(fā)酵，快速消耗青貯飼料中的氧氣而形成厭氧環(huán)境，并隨氧氣的耗竭而死亡；隨后乳酸菌利用青貯飼料中還原糖（包括宇佐美曲霉糖化酶水解淀粉產(chǎn)生的還原糖）生長繁殖并產(chǎn)生乳酸，預(yù)防青貯變質(zhì)。此外，宇佐美曲霉對氧氣的競爭性利用，抑制了一些好氧腐敗微生物的繁殖與生長，降低了青貯飼料腐敗變質(zhì)程度，提高了青貯飼料的有效回收率與產(chǎn)品品質(zhì)。隨著青貯過程的進行，青貯過程中產(chǎn)生的特有酸香氣味，可以顯著遮蔽連翹固有的苦味，提高適口性；微生物代謝所產(chǎn)生的有機酸、酶等活性物質(zhì)，能夠軟化連翹的硬度，打破植物細胞壁，有利于功效物質(zhì)的溶出，進一步提高防病治病效果。

目前關(guān)于肉鵝的營養(yǎng)學(xué)與飼料學(xué)相關(guān)研究仍然較少。研究表明，中草藥飼料添加劑能夠增強動物的抗病力，提高日增重和成活率。吳詩樵等［24］以中草藥為飼料添加劑，飼喂21 日齡揚州鵝35 d，觀察其飼喂效果，結(jié)果顯示，試驗組平均日增重和平均日采食量均顯著增加，料肉比和尿素氮含量顯著降低（P＜0.05），其中添加10 kg·t-1中草藥的飼喂效果最好，料重比可達2.28。孫金艷等［25］用復(fù)合益生菌制劑代替抗生素進行仔鵝飼喂效果試驗，結(jié)果顯示，益生菌劑可顯著提高仔鵝日增重、能量代謝率、粗蛋白消化率（P＜0.05）。在全株玉米青貯原料中加入5%、10%的連翹枝條，經(jīng)過60 d青貯后，物料具有正常的酸甜氣味，顏色比全株玉米青貯略深，秸稈與葉片文理清晰，質(zhì)地疏松，無明顯霉斑與腐敗，實現(xiàn)了正常的青貯保存。飼喂結(jié)果顯示，添加連翹枝條的青貯飼料組，其肉鵝日增重、成活率均顯著高于對照組（P＜0.05），料肉比顯著低于對照組，可達2.21。通過對青貯飼料中連翹功能性成分進行檢測發(fā)現(xiàn)，處理1 和處理2 制備的青貯飼料中連翹苷、連翹脂苷的含量顯著高于對照組（P＜0.05），表明連翹枝條在青貯中具有功能活性成分，能夠發(fā)揮其活性作用。通過肉鵝飼喂試驗初步證實，飼喂含連翹的青貯飼料對肉鵝的生長性能和健康水平具有有益作用。