李書(shū)翔，安麗萍，梁德娟，王凱旋，趙建國(guó)

海南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，?？?70228

朊病毒?。╬rion disease）是由體內(nèi)正常朊蛋白（cellular prion protein，PrPC））在一定的條件下構(gòu)象改變而錯(cuò)誤折疊形成的一種具有抗蛋白酶水解特性的致病型羊癢病朊蛋白（pathogenic scrapie prion protein isoform，PrPSc）。PrPSc 主要通過(guò)沉積于人與動(dòng)物的中樞神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)而引發(fā)多種具有高度傳染性與致死性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，包括人庫(kù)魯病、人克雅氏癥、致死性家族型失眠癥、瘋牛病、羊瘙癢癥等，不僅影響畜牧業(yè)產(chǎn)業(yè)發(fā)展，而且威脅人類的生命安全。世界衛(wèi)生組織曾預(yù)言，到2040 年，包括朊病毒病在內(nèi)的神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病率將上升至第2位，僅次于癌癥［1］。目前，臨床上尚無(wú)有效防治朊病毒病的方法，基于此，本文對(duì)目前朊病毒病治療方法進(jìn)行簡(jiǎn)要綜述，旨在為臨床防治朊病毒病提供參考依據(jù)。

1 傳統(tǒng)化學(xué)藥物

自1982 年發(fā)現(xiàn)PrPSc 起，人類即開(kāi)始探尋治療朊病毒病的方法，首先對(duì)直接抑制PrPSc 的化學(xué)藥物進(jìn)行了篩選。早期研究指出多糖類化合物、雜環(huán)類化合物和抗生素等均能在一定程度上抑制PrPSc 增殖［1］。近年來(lái)，有研究者發(fā)現(xiàn)黃芩素［2］、樺褐孔菌乙醇粗提物［3］及白藜蘆醇［4-5］均有抑制PrPSc 的作用；同時(shí)，一些中藥提取物，如淫羊藿提取物［6］、鉤藤提取物［7］也有抑制PrPSc 的作用。但由于動(dòng)物體內(nèi)復(fù)雜的生理生化條件、血腦屏障（blood-brainbarrier，BBB）的阻擋，不同種類的朊病毒株、藥物本身造成的不良反應(yīng)使得以上藥物很大一部分僅停留在體外藥效試驗(yàn)階段，難以進(jìn)入臨床試驗(yàn)；而且大多數(shù)最新發(fā)現(xiàn)的化學(xué)物質(zhì)抑制PrPSc 的原理尚不明確，如黃芩素和樺褐孔菌乙醇粗提物的抗朊病毒作用僅通過(guò)推測(cè)認(rèn)為與細(xì)胞凋亡和抗氧化活性有關(guān)［2-3］，中藥提取物則由于其復(fù)雜的成分使得原理探究的過(guò)程更加困難，因而僅有少數(shù)藥物可以在動(dòng)物模型試驗(yàn)中繼續(xù)發(fā)揮作用，上述物質(zhì)中僅有白藜蘆醇在動(dòng)物模型中進(jìn)行了用藥試驗(yàn)并發(fā)現(xiàn)其作用于腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子上游通路［4］。有研究認(rèn)為，僅消除PrPSc聚集體不會(huì)消除PrPc的神經(jīng)毒性［8］，因此，通過(guò)篩選抗朊病毒化學(xué)物質(zhì)來(lái)獲得朊病毒病治療藥物具有不確定性。值得注意的是，最新發(fā)現(xiàn)的一系列關(guān)于PrPSc 的作用機(jī)制和信號(hào)通路，為朊病毒病藥物篩選提供了潛在靶點(diǎn)，并為化學(xué)藥物指明了新方向。

2 靶向胞內(nèi)信號(hào)通路藥物

2.1 靶向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)通路

目前針對(duì)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊、未折疊蛋白聚集以及鈣離子平衡紊亂的常見(jiàn)措施為上調(diào)未折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein response，UPR）。UPR 功能包括在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能失調(diào)誘發(fā)錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)累積或鈣離子濃度異常時(shí)，關(guān)閉翻譯系統(tǒng)以減少錯(cuò)誤折疊蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)的堆積，并在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)嚴(yán)重受損時(shí)誘導(dǎo)促凋亡蛋白表達(dá)。UPR 主要的傳感器包括RNA 樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白激酶（protein kinase RNA-like ER kinase，PERK），PERK 可以通過(guò)磷酸化真核轉(zhuǎn)錄啟始因子2α（eukaryotic translation initiation factor 2α，eIF2α）下調(diào)蛋白質(zhì)的翻譯。當(dāng)細(xì)胞受到PrPSc 感染時(shí)，胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)遭到破壞，進(jìn)而導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)的破壞和UPR 的激活。有研究顯示，被PrPSc 感染的小鼠體內(nèi)細(xì)胞的PERK 持續(xù)激活，同時(shí)，eIF2α 表現(xiàn)出磷酸化作用，進(jìn)而使蛋白質(zhì)翻譯下調(diào)，最終的結(jié)果是蛋白質(zhì)合成量急劇減少導(dǎo)致突觸功能衰竭、神經(jīng)元死亡和其他神經(jīng)退行性病變［9］。

有研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)朊病毒病小鼠使用小分子藥物GSK2606414 抑制PERK 可以恢復(fù)重要蛋白的合成，并阻止神經(jīng)退行性病變，但全面抑制UPR也會(huì)導(dǎo)致胰腺損傷［10］。因此，該研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步探索使用綜合應(yīng)激反應(yīng)抑制劑（integrated stress response inhibitor，ISRIB）恢復(fù)重要蛋白合成，ISRIB通過(guò)阻止eIF2α介導(dǎo)的翻譯抑制，在保留了一些必要的UPR 的同時(shí)逆轉(zhuǎn)了蛋白質(zhì)合成的減少，使朊病毒病小鼠的整體蛋白質(zhì)合成率達(dá)到對(duì)照組的70%，并且未發(fā)現(xiàn)胰腺毒性反應(yīng)［10］。有研究者篩選出的鹽酸曲唑酮和二苯甲酰甲烷均能夠部分抑制eIF2 磷酸化和UPR 激活，并且均不存在胰腺毒性，同時(shí)，還表現(xiàn)出更好的藥代動(dòng)力學(xué)特性。經(jīng)過(guò)鹽酸曲唑酮和二苯甲酰甲烷治療的朊病毒病小鼠未出現(xiàn)明顯的神經(jīng)系統(tǒng)臨床癥狀，同時(shí)生存期也顯著延長(zhǎng)［11］。在以UPR 為基礎(chǔ)的另一種治療思路中，研究人員證實(shí)了胍那芐衍生物sephin 1可以選擇性結(jié)合并抑制應(yīng)激誘導(dǎo)的蛋白磷酸酶1調(diào)節(jié)亞基15A復(fù)合物，因此，該藥物可以通過(guò)延長(zhǎng)eIF2α 磷酸化時(shí)間，一定程度上抑制UPR 導(dǎo)致的促凋亡蛋白（如CHOP）的表達(dá)，以此起到對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用。該方法已經(jīng)在小鼠肌肉萎縮性側(cè)索硬化癥模型中成功抑制了神經(jīng)退行性病變［12］，表明該方法具有應(yīng)用潛力。

2.2 靶向自噬反應(yīng)

自噬作用是普遍發(fā)生于真核細(xì)胞溶酶體內(nèi)的一種細(xì)胞行為，其可以降解胞內(nèi)各類折疊錯(cuò)誤或有毒性的蛋白，因此，在細(xì)胞的生命周期中扮演重要角色。目前，已有研究顯示，PrPSc 感染的細(xì)胞中，自噬小體數(shù)增多，自噬流活化，而在被阻斷自噬過(guò)程感染PrPSc 的細(xì)胞中，PrPSc 含量顯著上升［13］，這初步揭示了真核細(xì)胞的自噬作用與PrPSc 感染之間的關(guān)系，提示研究人員可以從調(diào)控細(xì)胞自噬入手尋找緩解或治療朊病毒病的藥物。

在細(xì)胞自噬調(diào)控信號(hào)通路中，雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）是最有效、最直接的相關(guān)信號(hào)通路。mTOR 是一種高分子量絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，可以磷酸化自噬啟動(dòng)因子未配位的51 樣激酶1/人類自噬相關(guān)蛋白1、人類自噬相關(guān)蛋白13 等自噬相關(guān)因子，使其失活從而抑制細(xì)胞自噬，因而mTOR 的降解被認(rèn)為是感染PrPSc 的細(xì)胞中自噬活化的主要原因［13］。已有研究證實(shí)，雷帕霉素通過(guò)結(jié)合mTOR 而在一定程度上促進(jìn)自噬，提高細(xì)胞清除PrPSc 的能力，且感染PrPSc 的實(shí)驗(yàn)小鼠在接受雷帕霉素治療后發(fā)病時(shí)間延遲，癥狀嚴(yán)重程度減輕，生存期也延長(zhǎng)近10%［14］。但在臨床實(shí)踐中，雷帕霉素對(duì)mTOR的抑制效果仍具有局限性，主要是由于mTOR 被抑制后負(fù)反饋調(diào)節(jié)激活了位于其上游的蛋白激酶B（protein kinase B，AKT），進(jìn)而使mTOR 被活化。有研究者使用mTOR 和ATK 的雙重抑制劑發(fā)現(xiàn)，對(duì)mTOR 通路具有良好的抑制效果［15-16］；富脯氨酸AKT 底 物40（protein-rich AKT substrate of 40-kDa，PRAS40）既是AKT底物，而且還可以抑制mTOR，轉(zhuǎn)染HA-PRAS40 的細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞朊病毒蛋白殘基106-126 處理后，與轉(zhuǎn)染空白載體的對(duì)照組相比，凋亡標(biāo)識(shí)蛋白水平約下降50%［17］。以上研究不僅提示PRAS40 在抑制mTOR 過(guò)度活化以保護(hù)細(xì)胞免受PrPSc 侵襲引起的凋亡中起作用，而且還為抑制mTOR，促進(jìn)細(xì)胞自噬清除PrPSc提供了新的方案。有研究者還發(fā)現(xiàn)，阿司咪唑和伊馬替尼這2 種已經(jīng)上市的藥物也可以促進(jìn)溶酶體自噬，從而提高PrPSc 的清除效率［18-19］。此外，他克莫司和鋰也可以通過(guò)誘導(dǎo)PrPSc 感染細(xì)胞中的自噬反應(yīng)來(lái)提高PrPSc 的清除效率［18，20］。值得注意的是，鋰元素還可以特異性緩解毒性多肽對(duì)抑制元件沉默性轉(zhuǎn)錄因子的抑制作用，并恢復(fù)由抑制元件沉默性轉(zhuǎn)錄因子干擾引起的下游靶蛋白表達(dá)紊亂［21］，這些機(jī)制可能會(huì)為感染PrPSc 的神經(jīng)細(xì)胞提供保護(hù)作用，但關(guān)于細(xì)胞自噬如何緩解包括朊病毒病在內(nèi)的一系列神經(jīng)退行性疾病的具體機(jī)制尚未完全明確［22］，因此，此類以溶酶體自噬反應(yīng)為基礎(chǔ)藥物的進(jìn)一步篩選、改良還需相關(guān)基礎(chǔ)研究的繼續(xù)推進(jìn)。

2.3 靶向線粒體損傷

線粒體作為真核生物細(xì)胞內(nèi)重要的細(xì)胞器，其與胞內(nèi)的許多生理、病理過(guò)程相關(guān)，如線粒體在氧化磷酸化、鈣離子穩(wěn)態(tài)、活性氧（reactive oxygen species，ROS）清除與程序性細(xì)胞死亡中均起主導(dǎo)作用［23］。而PrPSc 的感染可以導(dǎo)致不同程度的線粒體功能異常［24］。當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在PrPSc 影響下穩(wěn)態(tài)受到破壞后，胞質(zhì)中鈣離子濃度失調(diào)導(dǎo)致線粒體膜電位喪失，同時(shí)，呼吸功能受到抑制，這可能產(chǎn)生大量導(dǎo)致氧化應(yīng)激的ROS，氧化應(yīng)激又可進(jìn)一步使線粒體損傷，導(dǎo)致其形態(tài)異常、膜功能損傷和功能障礙［25］，如在朊病毒株ME7 感染的小鼠模型中，線粒體分裂和融合的相關(guān)蛋白表達(dá)模式均發(fā)生了變化［26］，最終激活線粒體介導(dǎo)的凋亡途徑。線粒體介導(dǎo)的凋亡途徑主要與B 細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（B-celllymphoma/leukemia-2，Bcl-2）蛋白家族有關(guān)，其中Bcl相關(guān)X蛋白（Bcl-associated X protein，Bax）可以直接插入線粒體膜，引起細(xì)胞色素C 釋放進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)與凋亡活化因子相結(jié)合，促進(jìn)半胱天冬酶的產(chǎn)生并啟動(dòng)一系列的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，引發(fā)細(xì)胞凋亡。當(dāng)大量神經(jīng)元細(xì)胞凋亡時(shí)，患者會(huì)表現(xiàn)出一系列臨床癥狀并最終死亡。此外，線粒體的功能障礙可能還是中樞神經(jīng)突觸細(xì)胞變性的潛在機(jī)制［27］。

以上機(jī)制為研究者提供了一種尋找朊病毒病治療藥物的思路，即可通過(guò)使用靶向線粒體損傷藥物降低ROS 水平，保護(hù)線粒體，或者阻止由線粒體介導(dǎo)的凋亡過(guò)程，從而保護(hù)患者神經(jīng)元。通過(guò)篩選，研究人員發(fā)現(xiàn)MitoQ和積雪草酸2種線粒體靶向抗氧化劑，均在被PrPSc 感染的細(xì)胞系中發(fā)揮重要作用，從而降低了ROS 水平，緩解了線粒體的氧化應(yīng)激損傷，修復(fù)了線粒體功能，使PrPSc感染細(xì)胞的存活率上升了約1倍［23］。另外一項(xiàng)研究則發(fā)現(xiàn)，利用胰島素樣生長(zhǎng)因子-1 預(yù)處理細(xì)胞后，再利用細(xì)胞朊病毒蛋白殘基106-126 則無(wú)法誘導(dǎo)Bax 易位和細(xì)胞色素C 的釋放。表明胰島素樣生長(zhǎng)因子-1 可以通過(guò)阻斷Bax 易位來(lái)防止PrPSc 誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞死亡，同時(shí)，研究人員還發(fā)現(xiàn)胰島素樣生長(zhǎng)因子-1可以通過(guò)抑制線粒體功能障礙來(lái)減弱ROS的產(chǎn)生［28］。

PrPSc 相關(guān)的線粒體信號(hào)通路可能作為藥物篩選的潛在靶點(diǎn)，其中磷酸酶及張力蛋白同源物誘導(dǎo)的激酶1（PTEN-induced kinase 1，PINK1）和Parkin 這兩種調(diào)節(jié)線粒體自噬活性的線粒體蛋白受到了臨床的廣泛關(guān)注。在線粒體自噬中，激活的PINK1通過(guò)磷酸化多泛素鏈修飾受損線粒體上的線粒體膜蛋白，進(jìn)而招募Parkin 并引發(fā)一系列下游反應(yīng)降解受損的線粒體。有研究在感染PrPSc的小鼠腦組織切片中觀察到PINK1和Parkin的異常上調(diào)，同時(shí)，抑制受PrPSc 感染的細(xì)胞系中PINK1 或Parkin 的表達(dá)可以緩解線粒體自噬［29］，表明PrPSc 感染細(xì)胞中，誘發(fā)神經(jīng)元壞死現(xiàn)象的線粒體自噬行為與PINK1/Parkin 通路相關(guān)。有學(xué)者研究了線粒體發(fā)動(dòng)蛋白樣蛋白1（dynamin-like protein 1，DLP1）介導(dǎo)的線粒體分裂過(guò)程。通常情況下，DLP1 存在于細(xì)胞質(zhì)中，被線粒體膜上受體樣分子招募以調(diào)節(jié)線粒體分裂復(fù)合物。研究發(fā)現(xiàn)，朊病毒病倉(cāng)鼠模型中，DLP1 調(diào)節(jié)的線粒體碎裂導(dǎo)致神經(jīng)元活性降低、凋亡及突觸可塑性改變，而抑制DLP1 表達(dá)可以抑制細(xì)胞朊病毒蛋白殘基106-126 處理后細(xì)胞線粒體碎裂的現(xiàn)象［30］。值得注意的是，在該項(xiàng)研究中，研究人員抑制DLP1 時(shí)使用了RNA 干擾技術(shù)，探明了潛在的DLP1 相關(guān)治療措施。以上研究結(jié)果表明，靶向線粒體損傷藥物在緩解PrPSc 感染方面具有巨大潛力，但進(jìn)一步的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)以及更多種類的靶向線粒體損傷藥物的篩選還有待更深入地開(kāi)展研究，相關(guān)藥物短時(shí)間內(nèi)尚難以進(jìn)入實(shí)際應(yīng)用階段。

3 基因治療

3.1 RNA干擾

已有研究顯示，敲除朊蛋白基因（prion protein gene，PRNP）或PRNP表達(dá)量降低的動(dòng)物可以有效抵抗朊病毒病，然而考慮到倫理、生物安全、臨床可行性等問(wèn)題，降低PRNP表達(dá)量是比敲除PRNP更佳的基因治療方法。

RNA 干擾是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種序列特異的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象，其通過(guò)雙鏈RNA 啟動(dòng)，可導(dǎo)致具有同源序列mRNA的降解，進(jìn)而快速、有效地減少目的基因表達(dá)，是一項(xiàng)很有潛力的基因治療技術(shù)。為研究其對(duì)PRNP基因表達(dá)的作用效果，研究人員設(shè)計(jì)了針對(duì)牛PRNP外顯子區(qū)域的干擾序列，將其轉(zhuǎn)染至胎牛成纖維細(xì)胞，結(jié)果顯示，篩選的陽(yáng)性細(xì)胞對(duì)PRNP的抑制率可達(dá)78%［31］。有研究者設(shè)計(jì)了針對(duì)PrPSc 在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制和聚集必需蛋白，即37 kD/67 kD層粘連蛋白受體前體（laminin receptor precursor，LRP）的特異性小分子干擾RNA（small interference RNA，siRNA）。目前已在體外試驗(yàn)證明LRP 為PrPSc 在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制和聚集所必需的蛋白［1］，在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中對(duì)其施以下調(diào)、抑制等措施成功降低了PrPSc 水平。動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中，向小鼠腦內(nèi)皮質(zhì)區(qū)注射LRPsiRNA 后15 d 內(nèi)，37 kD/67 kD 層粘連蛋白受體水平分別降低62%和82%，將LRPsiRNA 注射到海馬區(qū)后，小鼠腦內(nèi)LRP 和PrPSc 水平分別降低36%和41%，且朊病毒病潛伏期顯著延長(zhǎng)［32］。以上研究結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了RNA 干擾技術(shù)抑制朊病毒基因表達(dá)的可操作性，并展現(xiàn)出RNA 干擾技術(shù)治療朊病毒病靶點(diǎn)的多樣性。

3.2 反義寡核苷酸

除RNA 干擾外，反義寡核苷酸（antisenseoligonucleotide，ASO）因具有高度特異性的基因表達(dá)阻斷作用而被廣泛應(yīng)用于研究與治療遺傳相關(guān)疾病中。Raymond 等［33］設(shè)計(jì)了幾種與小 鼠PRNP mRNA 互補(bǔ)的ASO，從感染前15 天開(kāi)始，每2～3個(gè)月向小鼠進(jìn)行注射，2 種不同的ASO 分別使小鼠感染PrPSc 后存活時(shí)間延長(zhǎng)了81%和98%，感染后4 個(gè)月單次注射使存活率上升了55%，并延遲了臨床癥狀發(fā)作時(shí)間。更換ASO 種類后，在感染PrPSc 2.5 個(gè)月后每3 個(gè)月施加1 次大劑量治療能夠使小鼠存活時(shí)間增加約3 倍，在接近臨床癥狀發(fā)作時(shí)，進(jìn)行干預(yù)使存活時(shí)間提高了19%。ASO 藥代動(dòng)力學(xué)和安全性研究表明，每1～4 個(gè)月1 次的治療對(duì)人和其他靈長(zhǎng)類動(dòng)物均是無(wú)害的。有研究者還發(fā)現(xiàn)，ASO 療效對(duì)于不同的朊病毒株存在差異，提示未來(lái)可能需要根據(jù)患者的疾病發(fā)展階段和所感染毒株調(diào)整治療方案［34］。以上研究證明ASO 與PrPc mRNA 靶向性結(jié)合，并通過(guò)腦室注射實(shí)現(xiàn)ASO 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的廣泛分布，提示通過(guò)以上途徑可解決朊病毒治療中的給藥難題。未來(lái)可拓展ASO 技術(shù)的靶點(diǎn)范圍，進(jìn)而發(fā)展為治療朊病毒病的潛在方法。

4 免疫治療

通過(guò)主動(dòng)免疫途徑、被動(dòng)免疫途徑防治各類疾病一直以來(lái)都在動(dòng)物醫(yī)學(xué)和人類公共衛(wèi)生健康事業(yè)中占據(jù)重要地位，因而研究者對(duì)于PrPSc 外源抗體與疫苗進(jìn)行了深入的研究。目前已有多種PrPc 單克隆抗體被成功制備，同時(shí)，一些單鏈抗體和駱駝PrPc 抗體還表現(xiàn)出了可穿過(guò)血腦屏障的良好擴(kuò)散性［35-36］。此外，在抗體的結(jié)合位點(diǎn)方面，有研究證明，針對(duì)非整聯(lián)蛋白37 kD/67 kD 層粘連蛋白受體、淋巴毒素β受體等與PrPSc作用相關(guān)蛋白的抗體同樣可以抑制朊病毒病的發(fā)展［1，37］。在主動(dòng)免疫途徑中，突破機(jī)體對(duì)PrPc 的免疫耐受是研發(fā)疫苗的關(guān)鍵步驟，而一系列實(shí)驗(yàn)通過(guò)施加免疫佐劑［38］、修飾抗原肽［39］、制備PrPc二聚體［40-41］可能引發(fā)機(jī)體針對(duì)PrPc的免疫反應(yīng)。

但通過(guò)主動(dòng)免疫和被動(dòng)免疫治療朊病毒病仍面臨一些問(wèn)題，如實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的抗體大多數(shù)難以穿過(guò)血腦屏障，從而使得免疫治療在出現(xiàn)臨床癥狀后無(wú)法發(fā)揮效果，而對(duì)于尚未出現(xiàn)癥狀的朊病毒疾病早期階段，提早發(fā)現(xiàn)極為困難，部分有望穿過(guò)血腦屏障的小分子抗體又面臨半衰期過(guò)短、效果不佳等問(wèn)題，這二者間的矛盾目前難以調(diào)和，即使未來(lái)通過(guò)腦室內(nèi)注射進(jìn)行治療也很難實(shí)現(xiàn)大分子抗體在腦內(nèi)的廣泛分布。此外，單克隆抗體在進(jìn)入大腦后還可通過(guò)引起PrPc 的交聯(lián)作用誘發(fā)細(xì)胞凋亡，相關(guān)實(shí)驗(yàn)中注射IgGD13 和IgGP 的小鼠中分別有80%和70%的個(gè)體表現(xiàn)出海馬區(qū)域神經(jīng)元死亡［42］，因此，利用抗體抑制或預(yù)防PrPSc感染時(shí)必須十分謹(jǐn)慎，這也可能是近期被動(dòng)免疫方法治療朊病毒病進(jìn)展較緩慢的原因；并且朊病毒病免疫療法面臨抗體特異性的問(wèn)題，尤其是對(duì)于朊病毒病疫苗，其優(yōu)勢(shì)為機(jī)體產(chǎn)生的抗體能在暴露后及早清除潛在病原體以預(yù)防當(dāng)前不可治愈的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染，因而抗體需要高效地識(shí)別并結(jié)合PrPSc，否則攝入食物中攜帶的PrPc 將消耗大量抗體，降低體液中抗體濃度，削弱疫苗對(duì)PrPSc 的防御作用。有研究者已逐步發(fā)現(xiàn)PrPc 二聚體［40］、PrPc 淀粉樣蛋白［43］、非致病性的抗蛋白酶K 重組PrPc 低聚體［44］等與PrPSc 有更多相似表位的免疫原，利用免疫原刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性更強(qiáng)的抗體，有望在未來(lái)推動(dòng)朊病毒病疫苗的研發(fā)。

5 異源朊蛋白

PrPSc 的形成嚴(yán)重依賴自身與宿主細(xì)胞PrPc之間序列的同源性，異源朊蛋白（heterologous prion proteins，HetPrP）的存在通常被認(rèn)為可以抑制該過(guò)程。HetPrP 對(duì)PrPSc 形成的干擾效果早已在胞外實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中被證實(shí)，但直到近幾年，研究人員才在體內(nèi)觀察到重組倉(cāng)鼠朊蛋白對(duì)羊瘙癢病小鼠適應(yīng)株的抑制效果，實(shí)驗(yàn)中施用高劑量HetPrP 延緩和減輕了小鼠臨床癥狀的發(fā)作時(shí)間，并延長(zhǎng)了生存時(shí)間。此外，當(dāng)在感染后452 天終止研究時(shí)，高劑量治療組中50%的小鼠未表現(xiàn)出臨床癥狀，分析原因?yàn)镠etPrP 與PrPSc 結(jié)合形成了無(wú)活性復(fù)合物，或是直接抑制了PrPSc 體內(nèi)轉(zhuǎn)化過(guò)程［45］。但HetPrP 的遞送方案還需進(jìn)一步研究，該實(shí)驗(yàn)通過(guò)腦室內(nèi)注射將藥物直接送達(dá)病變區(qū)域，但與ASO 不同，HetPrP 在大腦中可能難以充分接觸PrPSc。此外，更有效的HetPrP 序列也有待進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。

6 展望

朊病毒病作為一種致命的神經(jīng)退行性疾病，死亡率極高，近40年來(lái)，為攻克這一難題，朊病毒病的檢測(cè)方法、動(dòng)物模型也均在逐步發(fā)展。目前檢測(cè)朊病毒病的金標(biāo)準(zhǔn)仍是對(duì)患者或患病動(dòng)物的腦組織進(jìn)行活檢［46］，但對(duì)朊病毒病特征性標(biāo)志物PrPSc 的檢測(cè)方法也在不斷進(jìn)步，特別是近年來(lái)實(shí)時(shí)震動(dòng)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化法和連續(xù)蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊循環(huán)擴(kuò)增法的應(yīng)用大大提升了對(duì)微量PrPSc 的檢測(cè)精度，使得從包括血液和皮膚在內(nèi)的各類組織與體液中發(fā)現(xiàn)PrPSc 感染的早期證據(jù)成為可能［47］。此外，通過(guò)免疫學(xué)方法對(duì)朊病毒病替代生物標(biāo)志物的檢測(cè)、腦電圖以及生物學(xué)成像也被用于朊病毒病的臨床診斷中［48］。朊病毒病的動(dòng)物模型長(zhǎng)期以來(lái)以嚙齒類動(dòng)物為主，如小鼠、倉(cāng)鼠、田鼠均有應(yīng)用［49］。在最新的研究中發(fā)現(xiàn)果蠅有望通過(guò)基因改造技術(shù)表現(xiàn)哺乳動(dòng)物朊病毒病的某些病理學(xué)特征［50］，若新型的無(wú)脊椎動(dòng)物模型能夠成功建立，將大大提高實(shí)驗(yàn)可操作性，降低實(shí)驗(yàn)成本，促進(jìn)對(duì)PrPSc和朊病毒病的研究。

但在尋找朊病毒病治療方法的過(guò)程中，傳統(tǒng)化學(xué)藥物的篩選大多仍停留在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)上。究其原因?yàn)椋瑢?duì)于PrPSc 及其致病機(jī)理了解不夠充分，因而部分學(xué)者致力于PrPSc 作用機(jī)制和神經(jīng)退行性病變調(diào)控因素的研究。目前一些影響朊病毒病致病過(guò)程的調(diào)控因子和信號(hào)通路引起了人們廣泛的關(guān)注，如核轉(zhuǎn)錄因子-κB［51］、鈣調(diào)蛋白［52］、抑制元件沉默性轉(zhuǎn)錄因子［21］、典型Wnt/β-catenin 信號(hào)通路等［53］，為尋找朊病毒病的治療方法帶來(lái)了新的思路和希望；另外，不同朊病毒病治療方案的聯(lián)用效果也有待進(jìn)一步研究，沉積的PrPSc 對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響是多方面的，也是階段性的，作用機(jī)制不同的藥物可以產(chǎn)生良好的互補(bǔ)效應(yīng)，提升治療效果，目前他克莫司和米諾環(huán)素的聯(lián)合使用已被證實(shí)能夠在病程的不同階段通過(guò)多種通路減輕神經(jīng)元和突觸失調(diào)，提高小鼠的存活率［54］，而且在未來(lái)的研究中，一旦研發(fā)出能投入實(shí)際應(yīng)用的基因治療、免疫治療等方法，針對(duì)何種靶點(diǎn)的藥物更適合聯(lián)合使用也需要進(jìn)一步探索。未來(lái)隨著對(duì)PrPSc 致病分子機(jī)制不斷了解及已有藥物的深入發(fā)掘，必將開(kāi)發(fā)出能夠投入臨床使用的朊病毒病治療方法。