劉公言 白莉雅 孫海濤 李明勇 劉 曼 劉 策 姜文學(xué) 楊麗萍 王文志 王 鵬 高淑霞*

(1.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南250100；2.青島康大兔業(yè)發(fā)展有限公司，國(guó)家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部兔遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青島266000；3.山東正宇兔業(yè)有限公司，臨沂273400)

高檔功能性食品是指對(duì)人類身體某種或多種機(jī)能有益處、有足夠營(yíng)養(yǎng)效果且能改善健康狀況或能減少患病的食品?；咎卣靼ǎ阂皇莵?lái)自于天然成分；二是可以作為食物在日常飲食中食用；三是可被人體消化吸收且具有增強(qiáng)人體某些機(jī)能、改善身體和心理狀況、延緩衰老甚至預(yù)防和治療某些疾病等功能[1]。兔肉具有高消化率、高蛋白質(zhì)、高賴氨酸、低脂肪、低能量、低膽固醇等特點(diǎn)，是高血壓及心血管病患者的理想營(yíng)養(yǎng)肉品，被認(rèn)為是一種理想的功能性食品[2]。維生素E和硒是動(dòng)物機(jī)體重要的抗氧化物質(zhì)，二者相互協(xié)同，共同抵御氧化物質(zhì)對(duì)機(jī)體的損傷。亞硒酸鈉等傳統(tǒng)無(wú)機(jī)硒源具有吸收率低、毒性高等缺點(diǎn)，且對(duì)環(huán)境產(chǎn)生污染；酵母硒屬于優(yōu)質(zhì)的有機(jī)硒源，吸收率高，在滿足動(dòng)物對(duì)硒的生理需求后，還可以在動(dòng)物體內(nèi)儲(chǔ)存。因此，在動(dòng)物生產(chǎn)上使用有機(jī)硒取代無(wú)機(jī)硒具有重要生態(tài)意義。王旭等[3]研究報(bào)道，飼料中添加維生素E可顯著提高香魚(yú)仔稚魚(yú)成活率及肝胰臟抗氧化酶活性。高海桐等[4]研究報(bào)道，飼糧中添加酵母硒能夠顯著提高豬肉的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量，改善豬肉的食用品質(zhì)，提高貯藏品質(zhì)。飼糧中聯(lián)合添加酵母硒和維生素E可以提高肉雞生長(zhǎng)性能，改善肌肉品質(zhì)，增強(qiáng)肌肉抗氧化能力[5]。張浩等[6]研究表明，飼糧中添加酵母硒有提高產(chǎn)蛋雞生長(zhǎng)性能和蛋品質(zhì)的趨勢(shì)，也有提高雞蛋中硒富集效率的趨勢(shì)。飼糧中添加0.3 mg/kg有機(jī)硒可提高湖羊的生長(zhǎng)性能和肌肉品質(zhì)，提高肌肉和器官中硒含量[7]。然而，近年來(lái)關(guān)于具有抗氧化功能的富硒兔肉等研究報(bào)道較少。因此，本試驗(yàn)以閩西南黑兔為研究對(duì)象，探討飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能、屠宰性能、肌肉品質(zhì)和抗氧化性能的影響，為開(kāi)發(fā)功能性兔肉產(chǎn)品提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選用35日齡、體重相近、斷奶的閩西南黑兔160只，隨機(jī)分為4組，每組10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4只(公母各占1/2)。Ⅰ組(對(duì)照組)飼喂基礎(chǔ)飼糧，不額外添加維生素E和酵母硒；Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加100 mg/kg維生素E、0.15 mg/kg硒和100 mg/kg維生素E+0.15 mg/kg硒。維生素E添加形式為DL-α-生育酚乙酸酯(以α-生育酚計(jì))，硒添加形式為酵母硒(以硒計(jì))，添加量參考文獻(xiàn)[8]。預(yù)試期5 d，正試期70 d。飼糧制成長(zhǎng)度1.0～1.5 cm，直徑約0.3 cm的全價(jià)配合顆粒飼料?；A(chǔ)飼糧配方參考De Blas等[9]，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。飼糧中α-生育酚和硒含量實(shí)測(cè)值見(jiàn)表2。試驗(yàn)兔在封閉兔舍內(nèi)每籠2只飼養(yǎng)，試驗(yàn)期間，試驗(yàn)兔每天飼喂2次，全程自由采食和飲水。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

表2 飼糧中α-生育酚和硒含量實(shí)測(cè)值(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.2 樣品采集與制備

試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，每個(gè)重復(fù)選取1只與該組平均體重相近的試驗(yàn)兔，心臟采集血液，分離血清樣品，-20 ℃保存，用于血清抗氧化指標(biāo)測(cè)定。同時(shí)，采集背腰最長(zhǎng)肌(第1和第7腰椎之間)，測(cè)定肌肉物理性狀、營(yíng)養(yǎng)成分和抗氧化指標(biāo)。

1.3 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能

在試驗(yàn)正式開(kāi)始(40日齡)和結(jié)束當(dāng)日(110日齡)，稱量每個(gè)重復(fù)肉兔重量。平均日增重(ADG)按每個(gè)重復(fù)肉兔重量除以試驗(yàn)天數(shù)和試驗(yàn)兔只數(shù)計(jì)算所得。平均日采食量(ADFI)按每個(gè)重復(fù)總采食量除以試驗(yàn)天數(shù)和試驗(yàn)兔只數(shù)計(jì)算所得。料重比(F/G)按總采食量除以總增重計(jì)算所得。

1.3.2 屠宰性能

試驗(yàn)結(jié)束前1天晚上禁食12 h，試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天每個(gè)重復(fù)選取1只與該組平均體重相近的試驗(yàn)兔屠宰，稱重并記錄宰前活重。頸部放血處死后，立即剝皮，在腕關(guān)節(jié)處去除前肢及在跗關(guān)節(jié)處去后肢，移走腸道及內(nèi)容物和泌尿生殖器官后(保留頭、氣管、食管、胸腔器官、肝臟和腎臟及腎周脂肪)稱重即為胴體重[10]；胴體重在第一頸椎處去頭，同時(shí)去除氣管、食管，并保留肝臟(摘去膽囊)、腎臟及腎周脂肪稱重，即為半凈膛胴重。半凈膛胴胴體重去心臟、肝臟、腎臟及腎周脂肪后稱重即為全凈膛胴重，同時(shí)對(duì)心臟、肝臟(摘去膽囊)和腎臟進(jìn)行稱重，并分別除以宰前活重，計(jì)算屠宰率、半凈膛屠宰率、全凈膛屠宰率、心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)和腎臟指數(shù)。

1.3.3 肌肉物理性狀

采集背腰最長(zhǎng)肌測(cè)定pH、肉色[亮度(L*)、紅度(a*)和黃度(b*)值]、剪切力、滴水損失、失水率和熟肉率，具體測(cè)定方法參考文獻(xiàn)[11]。

1.3.4 肌肉營(yíng)養(yǎng)成分

肌肉中干物質(zhì)(DM)、粗蛋白質(zhì)(CP)、粗脂肪(EE)和粗灰分(Ash)含量分別采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.3—2016[12]、GB 5009.5—2016[13]、GB/T 14772—2008[14]和GB/T 9695.18—2008[15]測(cè)定。飼糧和肌肉中維生素E(α-生育酚、β-生育酚和γ-生育酚)含量采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 9695.30—2008[16]在液相色譜儀(Agilent，型號(hào)：1260)上測(cè)定。飼糧和肌肉中微量元素(鐵、銅、鋅、錳和硒)含量采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.268—2016[17]在電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(Thermo，型號(hào)：iCAPQ)上測(cè)定。

1.3.5 血清和肌肉抗氧化指標(biāo)

血清和肌肉谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量以及總抗氧化能力(total antioxidant capacity，T-AOC)分別使用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定(貨號(hào)分別為A005、A001-1、A003-1和A015-3-1)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SAS 9.1.3統(tǒng)計(jì)軟件中的GLM程序進(jìn)行數(shù)據(jù)的方差分析，采用Duncan氏法進(jìn)行數(shù)據(jù)的多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能的影響

飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能的影響見(jiàn)表3。由表可知，飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔終末體重、平均日增重、平均日采食量和料重比均無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表3 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能的影響

2.2 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔屠宰性能的影響

飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔屠宰性能的影響見(jiàn)表4。由表可知，飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)宰前活重、胴體重、半凈膛胴重、全凈膛胴重、心臟重、肝臟重和腎臟重以及屠宰率、半凈膛屠宰率、全凈膛屠宰率、心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)和腎臟指數(shù)均無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表4 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔屠宰性能的影響

2.3 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔肌肉物理性狀的影響

飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔肌肉物理性狀的影響見(jiàn)表5。由表可知，飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肌肉肉色a*和b*值有顯著影響(P<0.05)；其中，Ⅳ組的肌肉肉色a*值顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組的肌肉肉色b*值顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肌肉pH、肉色L*值、剪切力、滴水損失、失水率和熟肉率均無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表5 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔肌肉物理性狀的影響

2.4 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔肌肉營(yíng)養(yǎng)成分含量的影響

飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔肌肉營(yíng)養(yǎng)成分含量的影響見(jiàn)表6。由表可知，飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肌肉中DM、CP、EE和Ash含量均無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表6 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔肌肉營(yíng)養(yǎng)成分含量的影響

飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肌肉中α-生育酚含量有顯著影響(P<0.05)；其中，Ⅱ組和Ⅳ組肌肉中α-生育酚含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肌肉中β-生育酚和γ-生育酚含量均無(wú)顯著影響(P>0.05)。

飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肌肉中銅、錳和硒含量有顯著影響(P<0.05)；其中，Ⅲ組和Ⅳ組肌肉中銅和錳含量顯著低于對(duì)照組和Ⅱ組(P<0.05)，Ⅲ組和Ⅳ組肌肉中硒含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肌肉中鐵和鋅含量均無(wú)顯著影響(P>0.05)。

2.5 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔抗氧化性能的影響

飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔抗氧化性能的影響見(jiàn)表7。由表可知，飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)血清中GSH-Px活性、MDA含量和T-AOC有顯著影響(P<0.05)；其中，Ⅲ組和Ⅳ組血清中GSH-Px活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組血清中MDA含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組血清中T-AOC顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)血清中SOD活性無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表7 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔抗氧化性能的影響

飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肌肉中SOD活性、MDA含量和T-AOC有顯著影響(P<0.05)；其中，Ⅳ組肌肉中SOD活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，Ⅳ組肌肉中MDA含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，Ⅱ組和Ⅳ組肌肉中T-AOC顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肌肉中GSH-Px活性無(wú)顯著影響(P>0.05)。

3 討 論

3.1 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能和屠宰性能的影響

維生素E是一類脂溶性維生素，包括了α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚及三烯酚等，主要參與動(dòng)物前列腺素的合成、血液凝固、穩(wěn)定細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，是機(jī)體重要的抗氧化成分。維生素E缺乏主要導(dǎo)致肉兔肌肉發(fā)育不良和繁殖性能下降，妊娠母兔流產(chǎn)率和死胎率增加[18]。Oriani等[19]在61日齡肉兔飼糧中添加0、60、150或375 mg/kg α-生育酚醋酸酯，連喂4周，發(fā)現(xiàn)期對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響。同樣，Eiben等[20]研究發(fā)現(xiàn)，在最后7周的育肥期內(nèi)，飼糧中添加150 mg/kg維生素E和飼糧中添加60 mg/kg維生素E飼喂的育肥兔之間生長(zhǎng)性能不存在顯著差異。張偉等[21]研究表明，在生長(zhǎng)肉兔飼糧中添加不同水平的維生素E不能改變其生長(zhǎng)性能，然而富含維生素E的飼糧(200 mg/kg)能夠減少種公兔自由基的產(chǎn)生并提高精液品質(zhì)(精子成活率、精子膜的完整性和精子活力等)，能夠提高種兔繁殖性能[22]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼糧中單獨(dú)添加維生素E或聯(lián)合添加酵母硒對(duì)育肥兔生長(zhǎng)性能均無(wú)顯著影響，與上述研究結(jié)果基本一致。

在大多數(shù)畜種中，微量元素硒與維生素E密切相關(guān)。硒是GSH-Px重要組成部分，該酶具有清除代謝過(guò)程中形成的過(guò)氧化物作用。Dokoupilová等[23]研究報(bào)道，在35日齡的肉兔飼糧中添加0.12和0.50 mg/kg硒(添加形式為酵母硒)，飼喂4周，并不影響其生長(zhǎng)性能、飼料轉(zhuǎn)化率和出欄率等。Marounek等[24]研究表明，飼喂硒含量為0.08或0.40 mg/kg飼糧的肉兔生長(zhǎng)性能之間不存在顯著差異。同樣，Mattioli等[25]研究報(bào)道，在生長(zhǎng)兔飼糧中添加0.46 mg/kg硒飼喂7周，也不會(huì)影響肉兔生長(zhǎng)性能。Zhang等[26]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中硒添加水平對(duì)斷奶至2月齡肉兔生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼糧中單獨(dú)添加酵母硒或聯(lián)合添加維生素E對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能均無(wú)顯著影響，與上述研究結(jié)果基本一致。

肉兔屠宰性能與生長(zhǎng)性能密切相關(guān)。Castellini等[27]報(bào)道，在整個(gè)育肥期(35～85日齡)單獨(dú)和聯(lián)合補(bǔ)充飼喂添加維生素E(50和200 mg/kg)飼糧和維生素C(500和1 000 mg/L)飲水的肉兔的屠宰性狀沒(méi)有顯著差異。本研究有關(guān)屠宰性能的結(jié)果與Castellini等[27]報(bào)道基本一致。其他研究也表明，肉兔育肥期的屠宰性能并不受飼糧維生素E和硒水平的影響[20,24-26]。

3.2 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔肌肉品質(zhì)的影響

兔肉富含不飽和脂肪酸，肉兔全價(jià)配合飼料中維生素、硒等抗氧化劑的使用可以提高肉兔肌肉品質(zhì)。殷啟潤(rùn)等[28]研究表明，飲用維生素C溶液可顯著增加肉雞胸肌的肉色a*值，可在一定程度上維持肌紅蛋白的含量。劉公言等[29]研究報(bào)道，飼糧中添加維生素B6能夠降低肉兔的肉色L*值，提高肉色a*和b*值，對(duì)改善肌肉顏色具有重要意義。Gao等[30]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加維生素E能夠緩解氧化應(yīng)激，改善肌肉品質(zhì)。然而，Kim等[31]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加維生素E或硒對(duì)肌肉pH沒(méi)有顯著影響。Corino等[32]研究表明，飼糧中添加α-生育酚乙酸酯能夠穩(wěn)定生肉的顏色。這可是因?yàn)轱暭Z中添加α-生育酚乙酸酯后肌肉中α-生育酚等抗氧化成分含量增加，進(jìn)而改善肌肉顏色。

近年來(lái)，人們對(duì)飼糧中添加維生素E和硒對(duì)α-生育酚及硒在組織中的沉積、肉質(zhì)特性、抗氧化能力和兔肉貨架期的影響進(jìn)行了相關(guān)試驗(yàn)，結(jié)果表明，α-生育酚在兔肉中富集是非常有效的，并且與飼糧的添加水平有較強(qiáng)的相關(guān)性[33-34]。Tres等[35]研究報(bào)道，每千克飼糧中添加100 mg α-生育酚乙酸酯可以使兔肉中α-生育酚含量增加3倍。另外大量研究表明，育肥兔飼糧中添加硒可使肌肉中硒含量增加2～4倍[23,25,36]。本研究結(jié)果表明，飼糧中添加維生素E和酵母硒能夠增加肌肉中的α-生育酚和微量元素硒含量，且二者聯(lián)合添加效果比單獨(dú)使用效果更佳。

3.3 飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)肉兔抗氧化性能的影響

本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加維生素E和酵母硒等抗氧化劑可以提高肉兔機(jī)體抗氧化性能。Castellini等[37]研究報(bào)道，飼糧中額外補(bǔ)充0.5 mg/kg硒并不能提高肉兔血清維生素E含量。育肥兔飼糧中補(bǔ)充0.1 mg/kg有機(jī)硒能夠使兔肉中硒含量顯著增加，然而當(dāng)飼糧硒水平高于0.1 mg/kg時(shí)，它既不影響兔肉的GSH-Px活性，也不影響兔肉的氧化穩(wěn)定性[23]。對(duì)于家禽和反芻動(dòng)物等其他物種，飼喂含硒的不飽和脂肪酸藻類來(lái)源的抗氧化物質(zhì)，且與維生素E聯(lián)合使用，可對(duì)機(jī)體內(nèi)的氧化穩(wěn)定性產(chǎn)生積極的協(xié)同效應(yīng)[38-39]。然而，肉兔機(jī)體組織在清理過(guò)氧化物時(shí)，對(duì)硒的依賴性小于其他哺乳動(dòng)物。Lee等[40]報(bào)道，肉兔存在的大部分GSH-Px并沒(méi)有用硒作輔助因子。另外，Erdélyi等[41]在肉兔的肝臟、腎臟、生殖器官和肌肉等也沒(méi)有觀察到硒與GSH-Px之間的任何關(guān)系。因此，與其他動(dòng)物比較，肉兔在降低組織的氧化負(fù)荷上可能更多地依賴維生素E，而較少地依賴硒，其具體作用機(jī)理有待于進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

飼糧中添加維生素E和酵母硒對(duì)閩西南黑兔生長(zhǎng)性能和屠宰性能無(wú)顯著影響，但能夠提高機(jī)體抗氧化性能，改善肌肉顏色，增加肌肉α-生育酚和硒含量，提高兔肉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。