包學(xué)太 黎育穎 田軍權(quán) 蘇文璇 楊 凡 姚 康

(1.中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)生理與代謝過(guò)程湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南省畜禽健康養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，長(zhǎng)沙410125；2.中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京100049)

仔豬的斷奶過(guò)渡期是整個(gè)生豬養(yǎng)殖過(guò)程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，將直接影響到養(yǎng)豬業(yè)的整體經(jīng)濟(jì)效益[1-2]。斷奶應(yīng)激導(dǎo)致仔豬胃腸道消化酶分泌不足，再加上消化道自身的偏堿性環(huán)境，導(dǎo)致仔豬腸道極易感染病原菌和病毒，造成斷奶仔豬腹瀉[3]。腹瀉導(dǎo)致斷奶仔豬生長(zhǎng)發(fā)育緩慢，死亡率提高，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。過(guò)去很長(zhǎng)一段時(shí)間，畜禽生產(chǎn)過(guò)程中使用抗生素來(lái)維持和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，但長(zhǎng)期、大量、廣泛以及不合理的使用抗生素，導(dǎo)致致病菌抗藥性增強(qiáng)，畜產(chǎn)品藥物殘留嚴(yán)重，這直接危及到人類健康。歐盟在2006年及我國(guó)在2020年頒布了相關(guān)政策禁止在飼料中添加抗生素，因此尋找綠色、高效和無(wú)污染的替抗產(chǎn)品顯得尤為重要。

小檗堿，又名黃連素，是一種具有四環(huán)結(jié)構(gòu)的異喹啉類生物堿，在許多草藥植物的根、根莖和莖皮中含量較高，是存在于亞洲和美洲的各種黃連科和小檗屬植物中的重要活性成分[4-5]。據(jù)藥理研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿對(duì)多種病原微生物具有抑制和殺滅作用，其抑菌機(jī)制主要是作用于細(xì)胞膜，破壞菌體結(jié)構(gòu)，致使菌體細(xì)胞破裂，胞內(nèi)離子外流[6]。同時(shí)，小檗堿還能抑制細(xì)菌RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)合成，從而發(fā)揮抑菌作用[7-8]。此外，小檗堿在抗腫瘤[9-10]、抗氧化[11]和治療糖尿病[12]等方面應(yīng)用也較為廣泛。齊墩果酸，又名慶四素，是從女貞子、甘草等植物中分離提取的一種五環(huán)三萜類化合物，是女貞子中的主要有效成分[13]。齊墩果酸具有護(hù)肝降酶的作用，常用于治療急性肝炎[14]。同時(shí)，齊墩果酸被機(jī)體吸收后還具有抗炎[15-16]、抗腫瘤[17-18]和抗氧化[19]等藥理作用。但是，小檗堿和齊墩果酸的單一成分均難溶于水，有著吸收差的特點(diǎn)，再加上小檗堿味道極苦可能會(huì)影響飼糧的適口性，這就限制了它們作用于動(dòng)物機(jī)體所發(fā)揮的功效。基于此，我們根據(jù)小檗堿和齊墩果酸鹽的化學(xué)特性構(gòu)建了一種化合物——小檗堿齊墩果酸鹽，其化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。這不僅解決了小檗堿味苦的問(wèn)題，而且這種化合物具有親脂性，可以增加透膜吸收，從而克服了小檗堿和齊墩果酸鹽單一成分吸收差的問(wèn)題。雖然小檗堿齊墩果酸鹽克服了小檗堿和齊墩果酸單一成分的缺點(diǎn)，但其在預(yù)防和治療仔豬腹瀉方面的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。研究表明，產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(enterotoxigenicEscherichiacoli，ETEC)是導(dǎo)致仔豬腹瀉的最常見(jiàn)的一類致病菌，其中K88菌株是引起仔豬腹瀉的主要病原菌，多用于構(gòu)建仔豬腹瀉模型[20-22]。因此，本試驗(yàn)采用灌服一定量的ETEC K88來(lái)建立仔豬腹瀉模型，模擬實(shí)踐生產(chǎn)中大腸桿菌導(dǎo)致的斷奶仔豬腹瀉，并將不同劑量的小檗堿齊墩果酸鹽添加到仔豬飼糧中，研究其對(duì)斷奶仔豬感染ETEC K88后生長(zhǎng)性能、腹瀉、血清生化指標(biāo)和腸道健康的影響。

圖1 小檗堿齊墩果酸鹽化學(xué)結(jié)構(gòu)

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用小檗堿齊墩果酸鹽由湖南省中醫(yī)藥研究院制備并提供，性質(zhì)穩(wěn)定，相對(duì)分子質(zhì)量為792.1，純度為80%，其余20%為齊墩果酸和硫酸小檗堿的單一成分。本試驗(yàn)所用大腸桿菌購(gòu)自國(guó)家菌種保藏中心的K88凍干粉[編號(hào)：VIP(S)24607]，經(jīng)復(fù)蘇、傳代增菌，最終獲得試驗(yàn)所需濃度菌液。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和飼養(yǎng)管理

選取28日齡健康的“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交斷奶仔豬50頭[體重(8.22±0.98) kg]，隨機(jī)分為5個(gè)組，每組10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭豬。5個(gè)組分別為對(duì)照組、模型組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，其中對(duì)照組和模型組飼喂基礎(chǔ)飼糧，低、中、高劑量組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加50、250和500 mg/kg小檗堿齊墩果酸鹽的試驗(yàn)飼糧?；A(chǔ)飼糧參照NRC(2012)營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

本試驗(yàn)在中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所全封閉動(dòng)物房飼養(yǎng)間開(kāi)展，所有試驗(yàn)豬只單欄飼養(yǎng)。試驗(yàn)全程自由采食和飲水，舍內(nèi)定期打掃衛(wèi)生及消毒。試驗(yàn)預(yù)試期3 d，正試期18 d。在正試期第15天，模型組和低、中、高劑量組仔豬灌服10 mL濃度為2×109CFU/mL的ETEC K88菌液，對(duì)照組仔豬灌服相同劑量的無(wú)菌LB培養(yǎng)液。

1.3 樣本采集

于正試期第18天，所有豬只在禁止采食12 h后，進(jìn)行前腔靜脈采血并屠宰取樣。所采血液分裝在抗凝管和普通管中各5 mL，用于血常規(guī)指標(biāo)和血清生化指標(biāo)的測(cè)定。采血后所有豬只迅速處死并解剖，分離心臟、肝臟、脾臟和腎臟，稱重記錄。同時(shí)分離空腸、回腸置于冰上，取中段2 cm左右放于裝有4%多聚甲醛固定液的50 mL離心管中，用于檢測(cè)腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能

試驗(yàn)期間每天記錄各欄采食量，在試驗(yàn)第1、14和18天同一時(shí)間空腹稱重仔豬重量，最終計(jì)算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 腹瀉評(píng)分

試驗(yàn)期間每天09:00對(duì)仔豬的糞便進(jìn)行評(píng)分并記錄，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2。

表2 仔豬糞便評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1.4.3 臟器指數(shù)

屠宰后分離心臟、肝臟、脾臟和腎臟，吸干其表面水分并稱重記錄，用于計(jì)算各器官指數(shù)。計(jì)算公式如下：

臟器指數(shù)(%)=(臟器重/仔豬活體重)×100。

1.4.4 血清生化指標(biāo)

試驗(yàn)使用普通負(fù)壓采血管采集血樣，4 ℃、3 000 r/min離心15 min，分離得到血清后，使用全自動(dòng)生化分析儀(Cobas c311，羅氏公司)測(cè)定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和堿性磷酸酶(ALP)活性以及補(bǔ)體3(C3)、補(bǔ)體4(C4)、C反應(yīng)蛋白3(CRPL3)和免疫球蛋白G(IgG)含量。

1.4.5 血常規(guī)指標(biāo)

使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝負(fù)壓采血管采集血樣后，迅速采用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀(BC-5000VET，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)進(jìn)行血細(xì)胞分類與計(jì)數(shù)檢測(cè)，包括白細(xì)胞(WBC)、嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)、中性粒細(xì)胞(Neu)、嗜堿性粒細(xì)胞(Bas)、淋巴細(xì)胞(Lym)、單核細(xì)胞(Mon)、紅細(xì)胞(RBC)數(shù)量和血紅蛋白(HGB)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白(MCH)含量，以及紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)(RDW-CV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差(RDW-SD)、血小板(PLT)數(shù)量、血小板壓積(PCT)、平均血小板體積(MPV)和血小板體積分布寬度(PDW)等指標(biāo)。

1.4.6 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)

將2～3 cm空腸和回腸組織樣品在4%多聚甲醛固定液固定至少24 h，再依次經(jīng)過(guò)梯度酒精脫水、二甲苯透明和石蠟浸蠟包埋，然后采用旋轉(zhuǎn)切片機(jī)切取厚度為4 μm的切片，烘干并做好標(biāo)記。經(jīng)過(guò)脫蠟水化、先后用Harris蘇木素和伊紅染液染色、脫水，并用中性樹(shù)膠封片，顯微鏡鏡檢。選取組織切片上絨毛完整、走向平直的視野，采用正置光學(xué)顯微鏡(NIKON ECLIPSE CI)觀察，并用CaseViewer軟件測(cè)量空腸和回腸絨毛高度和隱窩深度,計(jì)算絨毛高度/隱窩深度(V/C)值。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用Excel 2010軟件進(jìn)行初步歸納整理，然后采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著的指標(biāo)則使用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，并使用線性或二次曲線分析檢測(cè)指標(biāo)對(duì)小檗堿齊墩果酸鹽添加劑量的反應(yīng)。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，第1～14天，即ETEC K88感染前，與模型組相比，中劑量組仔豬ADFI顯著升高(P<0.05)。第15～18天，即ETEC K88感染后，各組仔豬末重、ADFI、ADG和F/G之間均無(wú)顯著差異(P>0.05)。第1～18天，與模型組相比，中劑量組仔豬ADFI顯著升高(P<0.05)；高劑量組F/G顯著低于模型組和低劑量組(P<0.05)。小檗堿齊墩果酸鹽添加組仔豬第14天和第18天體重呈現(xiàn)出劑量效應(yīng)，且高劑量組高于對(duì)照組(P>0.05)。

表3 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

續(xù)表3項(xiàng)目 Items對(duì)照組Control group模型組Model group低劑量組Low dose group中劑量組Mid dose group高劑量組High dose group末重 Final body weight/kg11.58±0.5411.21±0.5011.43±0.8812.04±0.2612.57±0.32平均日采食量 ADFI/kg0.46±0.03ab0.40±0.04b0.44±0.03ab0.51±0.02a0.44±0.03ab平均日增重 ADG/kg0.19±0.030.19±0.030.16±0.040.21±0.020.23±0.02料重比 F/G2.12±0.18ab2.56±0.29a2.65±0.36a2.34±0.23ab1.72±0.14b

2.2 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬糞便評(píng)分的影響

由表4可知，第1～14天，各組仔豬糞便評(píng)分之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。在感染后24 h，與對(duì)照組相比，模型組仔豬糞便評(píng)分顯著升高(P<0.05)；與模型組相比，低、中、高劑量組仔豬糞便評(píng)分明顯降低，但差異不顯著(P>0.05)。而在感染后48 h，與對(duì)照組相比，模型組仔豬糞便評(píng)分顯著升高(P<0.05)；與模型組相比，低、中、高劑量組仔豬糞便評(píng)分顯著降低(P<0.05)。在整個(gè)試驗(yàn)期，低、中、高劑量組仔豬糞便評(píng)分隨著添加劑量的增加呈降低趨勢(shì)(P>0.05)。

表4 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬糞便評(píng)分的影響

2.3 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬臟器指數(shù)的影響

由表5可知，與對(duì)照組和模型組相比，飼糧添加小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬心臟、肝臟和腎臟指數(shù)均無(wú)顯著影響(P>0.05)；而低劑量組仔豬脾臟指數(shù)較中劑量組顯著降低了37.50%(P<0.05)，且脾臟指數(shù)隨著小檗堿齊墩果酸鹽添加劑量的增加呈現(xiàn)出先增高后降低，有二次回歸趨勢(shì)(0.05≤P<0.10)。

表5 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬臟器指數(shù)的影響

2.4 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬血清生化指標(biāo)的影響

由表6可知，與模型組相比，低劑量組仔豬血清ALP活性顯著降低(P<0.05)，低、中、高劑量組血清C4含量顯著升高(P<0.05)，高劑量組血清C3含量顯著提高(P<0.05)。仔豬血清AST活性隨著小檗堿齊墩果酸鹽添加劑量的增加而線性提高(P<0.05)，其他血清生化指標(biāo)各組間均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表6 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬血清生化指標(biāo)的影響

2.5 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬血常規(guī)指標(biāo)的影響

由表7可知，模型組和低劑量組仔豬血液中Lym數(shù)量顯著低于對(duì)照組和中、高劑量組(P<0.05)，并且血液中Eos數(shù)量也顯著低于中、高劑量組(P<0.05)。與模型組相比，低劑量組仔豬血液中PLT數(shù)量顯著升高(P<0.05)，對(duì)照組血液中PCT顯著升高(P<0.05)。與對(duì)照組相比，中劑量組血液中PDW顯著降低(P<0.05)。各組仔豬其他血常規(guī)指標(biāo)之間均無(wú)顯著差異(P>0.05)。仔豬血液中RBC數(shù)量和HGB含量與小檗堿齊墩果酸鹽添加劑量呈線性負(fù)相關(guān)(P<0.05)。

表7 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬血常規(guī)指標(biāo)的影響

2.6 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表8可知，高劑量組仔豬空腸絨毛高度顯著高于低劑量組(P<0.05)，模型組空腸隱窩深度顯著高于其他各組(P<0.05)，對(duì)照組空腸V/C值顯著高于模型組和低劑量組(P<0.05)；中、高劑量組仔豬回腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組、模型組和低劑量組(P<0.05)，高劑量組回腸V/C值顯著高于低劑量組(P<0.05)。仔豬回腸隱窩深度隨小檗堿齊墩果酸鹽添加劑量的增加呈現(xiàn)先增高后降低趨勢(shì)(0.05≤P<0.10)。由圖2可以看出，模型組仔豬空腸和回腸絨毛萎縮、隱窩增生，有明顯的腸上皮細(xì)胞及腸腺體壞死；而中、高劑量組空腸和回腸均為完整的絨毛，且隱窩深度低于模型組，視野中可見(jiàn)正常的腸上皮細(xì)胞和腸腺體。

表8 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

圖2 仔豬空腸和回腸蘇木精-伊紅染色切片

3 討 論

3.1 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

仔豬腹瀉是仔豬斷奶后常見(jiàn)的一種疾病，會(huì)嚴(yán)重影響豬只生長(zhǎng)性能，導(dǎo)致免疫功能受損，進(jìn)而增加發(fā)病率和死亡率，制約著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展[23]。因此，有效預(yù)防仔豬腹瀉是保證斷奶仔豬健康生長(zhǎng)發(fā)育的重要環(huán)節(jié)。在禁抗背景下，促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)發(fā)育、預(yù)防和治療各種疾病需要開(kāi)發(fā)合適的抗生素替代品。其中，小檗堿因具有多種藥理作用成為研究熱點(diǎn)之一。據(jù)研究報(bào)道，在葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸炎試驗(yàn)中，鹽酸小檗堿可有效緩解結(jié)腸炎造成的小鼠體重下降，且50 mg/kg的鹽酸小檗堿改善體重減輕效果最為明顯[24-25]。在本研究中，ETEC K88感染前，相比于對(duì)照組和模型組，低、中、高劑量組仔豬第14天體重均有所提高，提示小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)未感染ETEC K88的仔豬有增重效果。其原因可能是小檗堿齊墩果酸鹽被機(jī)體吸收后，增強(qiáng)了機(jī)體免疫力，提高了仔豬采食量，進(jìn)而保證了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。而ETEC K88感染后，相比于模型組，低、中、高劑量組仔豬第18天體重同樣有所增高，并且呈劑量效應(yīng)，提示小檗堿齊墩果酸鹽較好地緩解了ETEC K88感染導(dǎo)致的仔豬體重減輕。其原因可能是飼糧中的小檗堿齊墩果酸鹽到達(dá)后腸后能直接作用于病原菌，從而減少了腸毒素的產(chǎn)生，有效緩解了腸黏膜損傷，進(jìn)而保證仔豬腸道健康及正常生長(zhǎng)發(fā)育。在整個(gè)試驗(yàn)期，中劑量組仔豬ADFI顯著高于模型組，高劑量組F/G顯著低于模型組，提示小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬感染ETEC K88造成的炎癥有較好的防治作用，保證仔豬更好的采食。綜上所述，小檗堿齊墩果酸鹽有助于仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育，可有效緩解仔豬感染ETEC K88后的體重減輕。

3.2 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬糞便評(píng)分的影響

仔豬腹瀉是生豬養(yǎng)殖過(guò)程中的一大難題，也是造成養(yǎng)殖場(chǎng)經(jīng)濟(jì)損失的一個(gè)重要原因，解決好仔豬腹瀉問(wèn)題是挽回生豬養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)損失的根源[2]。糞便評(píng)分是根據(jù)豬只糞便性狀成型進(jìn)行評(píng)分，可直接反映仔豬的腹瀉狀況。本研究中，在ETEC K88感染前，除高劑量組外的其余4組仔豬均存在較為輕微的腹瀉，這可能跟養(yǎng)殖試驗(yàn)當(dāng)時(shí)的氣溫、近窗近門的環(huán)境因素等有關(guān)。而在ETEC K88感染后24和48 h，模型組仔豬的糞便評(píng)分顯著高于對(duì)照組，提示本試驗(yàn)仔豬腹瀉模型建立成功，這一結(jié)果與Peng等[26]報(bào)道的ETEC K88攻毒后仔豬的糞便評(píng)分結(jié)果一致。此外，從ETEC K88感染后24和48 h 2次的糞便評(píng)分結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，小檗堿齊墩果酸鹽添加組糞便評(píng)分隨時(shí)間變化降低，模型組糞便評(píng)分反而稍有增高。其原因可能是小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)于腹瀉仔豬有較好的治療效果，并且隨著添加劑量的增加效果越明顯。而模型組仔豬在攻毒處理后，ETEC K88造成的仔豬腸道黏膜損傷沒(méi)能得到緩解，加之仔豬階段自身免疫力較弱，機(jī)體離子失衡，導(dǎo)致腹瀉加重。另外，在感染后24和48 h，中、高劑量組糞便評(píng)分相等，其原因可能是本研究中250和500 mg/kg 2種添加劑量已經(jīng)達(dá)到小檗堿齊墩果酸鹽治療仔豬腹瀉的適宜臨界點(diǎn)，且治療效果不隨添加劑量的增加而提高。綜上可知，小檗堿齊墩果酸鹽在緩解ETEC K88造成的仔豬腹瀉方面效果顯著，但最適添加劑量還需進(jìn)一步研究。

3.3 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬臟器指數(shù)的影響

臟器指數(shù)是動(dòng)物機(jī)體一項(xiàng)重要的生物學(xué)特征指標(biāo)，常用于衡量機(jī)體健康狀況和相應(yīng)臟器的功能強(qiáng)弱。其中，脾臟是動(dòng)物機(jī)體最大的免疫器官，脾臟質(zhì)量與其體質(zhì)量呈一定的線性關(guān)系[27]，脾臟指數(shù)可反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能的強(qiáng)弱。肖玉波[28]研究發(fā)現(xiàn)，小鼠在接種腫瘤細(xì)胞后，脾臟指數(shù)顯著提高，而與模型組相比，灌胃給藥的高劑量小檗堿組并未發(fā)現(xiàn)顯著差異。在本研究中，與中劑量組相比，低劑量組仔豬脾臟指數(shù)降低了37.50%。這可能與低劑量的小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)攻毒仔豬治療效果不顯著，以及灌胃攻毒過(guò)程中造成的應(yīng)激較大，影響采食導(dǎo)致的仔豬體重下降有關(guān)。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)，在仔豬飼糧中添加小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)ETEC K88感染仔豬的心臟、肝臟和腎臟的臟器指數(shù)無(wú)顯著影響，這與肖玉波[28]試驗(yàn)結(jié)果基本一致。

3.4 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬血清生化指標(biāo)的影響

動(dòng)物機(jī)體血清生化指標(biāo)受飼糧營(yíng)養(yǎng)水平的影響，同時(shí)血清生化指標(biāo)又可以間接反映機(jī)體自身的營(yíng)養(yǎng)水平、生長(zhǎng)發(fā)育和健康狀況。因此，血清生化指標(biāo)作為動(dòng)物生產(chǎn)研究中重要指標(biāo)之一，在評(píng)價(jià)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育、預(yù)防疾病等方面意義重大[29]。據(jù)研究報(bào)道，在四氯化碳誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷的試驗(yàn)中，模型組血清ALP活性升高，小檗堿治療組血清ALP活性降低，提示小檗堿在一定程度上緩解了四氯化碳誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷[30]。Gao等[31]研究發(fā)現(xiàn)，齊墩果酸可以緩解由四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病大鼠血清中ALP活性的升高。而本研究中低劑量組仔豬血清ALP活性顯著低于模型組，提示飼糧中添加50 mg/kg的小檗堿齊墩果酸鹽有助于緩解仔豬感染ETEC K88后的肝臟損傷，從而表現(xiàn)出低劑量組血清ALP活性的下降。有研究表明，補(bǔ)體是人和動(dòng)物體內(nèi)一組具有酶原活性的球蛋白，是血漿蛋白的組成成分，血清中C3、C4含量可反映機(jī)體的免疫水平[32]。Xu等[33]研究發(fā)現(xiàn)，50 mg/kg的小檗堿每2周1次添加到團(tuán)頭魴飼糧中，可顯著提高機(jī)體血清中C3和C4含量。在本研究中，仔豬血清C3和C4含量由高到低依次為小檗堿添加組、對(duì)照組和模型組，提示小檗堿齊墩果酸鹽有助于提高仔豬的機(jī)體免疫水平，這可能跟小檗堿齊墩果酸鹽相對(duì)于單一的小檗堿或齊墩果酸更易于被機(jī)體吸收，因此發(fā)揮協(xié)同增效作用，從而增強(qiáng)機(jī)體免疫能力有關(guān)。

3.5 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬血常規(guī)指標(biāo)的影響

血常規(guī)指標(biāo)可反映動(dòng)物機(jī)體或器官的健康狀況、新陳代謝、內(nèi)外環(huán)境平衡以及監(jiān)測(cè)一些早期血液系統(tǒng)疾病，其檢測(cè)通常包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板3個(gè)方面[34-35]。白細(xì)胞中的粒細(xì)胞可抵御外界病原微生物的侵入，同時(shí)還有吞噬異物并產(chǎn)生抗體等作用。本研究結(jié)果顯示，中、高劑量組仔豬血液中Lym和Eos數(shù)量顯著高于模型組和低劑量組，提示仔豬在感染ETEC K88后，機(jī)體產(chǎn)生大量Lym和Eos參與機(jī)體免疫反應(yīng)，抵御ETEC K88的入侵，吞噬已入侵的病原菌并產(chǎn)生抗體。因此，小檗堿齊墩果酸鹽有助于提高機(jī)體免疫功能，可以提升機(jī)體抵御外界病原微生物的能力。本研究結(jié)果還顯示，小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬感染ETEC K88后血液中紅細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)未出現(xiàn)顯著影響。PLT、MPV、PDW和PCT可以從整體反映血小板的功能和分布情況，其中PLT和MPV與骨髓造血功能有關(guān)，PDW反映血小板之間的體積差異，PCT與血小板數(shù)量和體積有關(guān)[36]。在本研究中，與模型組相比，低劑量組仔豬血液中PLT數(shù)量顯著升高；與對(duì)照組相比，中劑量組血液中PDW顯著降低，提示仔豬在ETEC K88感染后體內(nèi)骨髓造血功能下降，高劑量的小檗堿齊墩果酸鹽有助于恢復(fù)攻毒后造血功能。

3.6 小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

腸道是動(dòng)物的主要消化器官，同時(shí)也是抵御外界病原微生物、毒素和致敏大分子的重要屏障[3]。腸道黏膜層的褶皺、絨毛是動(dòng)物消化道的主要組成部分，在保證營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和維持胃腸道穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要作用[37-38]。研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿對(duì)腹膜透析液造成的大鼠結(jié)腸隱窩損傷和腸上皮屏障功能障礙有明顯的修復(fù)作用，還能改善微絨毛的形態(tài)[39]。Zhu等[24]、Zhang等[25]研究也發(fā)現(xiàn)，小檗堿對(duì)DSS誘導(dǎo)造成的小鼠腸道損傷有一定的治療效果，相比于模型組，小檗堿組腸道損傷組織學(xué)評(píng)分顯著降低，并且隨小檗堿劑量增加評(píng)分呈降低趨勢(shì)。此外，也有研究發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬進(jìn)行ETEC K88攻毒后，仔豬空腸絨毛高度和V/C值顯著降低[40]。在本研究中，與對(duì)照組相比，模型組仔豬空腸隱窩深度顯著升高，空腸V/C值顯著降低；與模型組相比，低、中、高劑量組空腸隱窩深度顯著降低，提示小檗堿齊墩果酸鹽可緩解ETEC K88感染造成的仔豬空腸隱窩增深。同時(shí)，中、高劑量組回腸絨毛高度高于其他3組，高劑量組回腸V/C值高于低劑量組，提示小檗堿齊墩果酸鹽對(duì)仔豬感染ETEC K88后回腸絨毛高度的損傷有明顯的治療效果，出現(xiàn)這一結(jié)果的一個(gè)可能的原因是小檗堿齊墩果酸鹽抑制了ETEC K88，從而減少了毒素的產(chǎn)生。并且，在本研究中500 mg/kg劑量的小檗堿齊墩果酸鹽效果最好。綜上所述，小檗堿齊墩果酸鹽可緩解ETEC K88導(dǎo)致的小腸黏膜損傷，改善腹瀉仔豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。

4 結(jié) 論

飼糧添加500 mg/kg小檗堿齊墩果酸鹽能夠提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能，緩解ETEC K88感染導(dǎo)致的仔豬腹瀉，降低腹瀉對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能、腸道健康和血液生化指標(biāo)造成的影響，提高腹瀉仔豬機(jī)體免疫力。