崔志潔，姜惺偉，吳登科，雷新建，曹陽春，鄧 露，姚軍虎，蔡傳江

(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，楊凌 712100)

奶牛圍產(chǎn)期包括圍產(chǎn)前期(產(chǎn)前21 d)和圍產(chǎn)后期(產(chǎn)后21 d)。圍產(chǎn)期奶牛由于采食量下降，胎兒急速發(fā)育等因素，能量攝入無法滿足機(jī)體需求[1-2]，導(dǎo)致能量和其他營(yíng)養(yǎng)素的負(fù)平衡，進(jìn)而易患各種代謝疾病，如脂肪肝、酮病等。有研究表明，產(chǎn)后奶牛脂肪肝患病率高達(dá)50%[3]。

煙酸(niacin, NA)，又名尼克酸，與其衍生物煙酰胺是VB3的兩種形式，是人體和動(dòng)物不可缺少的營(yíng)養(yǎng)成分。VB3是輔酶I和輔酶II前體物，還可通過煙酸的G蛋白偶聯(lián)受體(GPR109A)發(fā)揮抗脂解作用[4]，在能量代謝和細(xì)胞保護(hù)途徑都起著至關(guān)重要的作用[5]。NA在臨床上被廣泛用于治療血脂代謝異常。Ganji等[6-8]在體內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，NA可顯著改善肝中脂肪積累以及脂肪變性、炎癥和纖維化；Li等[9]的研究結(jié)果表明，NA可通過增加肝的脂質(zhì)氧化并減少脂肪酸的從頭合成來緩解大鼠慢性酒精脂肪肝。NA在奶牛飼料中作為添加劑也被廣泛使用。Morey等[10]報(bào)道在圍產(chǎn)期奶?；A(chǔ)日糧中添加24 g·d-1過瘤胃保護(hù)煙酸(rumen-protected niacin, RPN)，可降低產(chǎn)后血漿中非酯化脂肪酸(nonesterifiedfatty acid, NEFA)的濃度。從源頭上減少機(jī)體體脂動(dòng)員，使進(jìn)入肝的NEFA減少是緩解脂肪肝途徑之一，加速甘油三酯(triglycerides, TG)轉(zhuǎn)運(yùn)出肝是緩解脂肪肝的另一條途徑。膽堿(choline, CH)是一種水溶性維生素類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，參與3個(gè)主要的生理過程：1)作為細(xì)胞結(jié)構(gòu)物質(zhì)，維持細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能；2)參與乙酰膽堿合成，維持信息傳遞；3)作為甲基供體，參與機(jī)體甲基和蛋氨酸循環(huán)，調(diào)控基因表達(dá)[11]。此外，CH可促進(jìn)極低密度脂蛋白(very low density lipoprotein，VLDL)的合成，使TG及時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)出肝組織，還可作為肉毒堿的甲基供體加快肝中脂肪酸的β氧化，減少TG的沉積[12-13]。CH在人類和鼠的肝組織能量代謝中發(fā)揮重要作用，并可用于預(yù)防和治療脂肪肝[14-16]。由于反芻動(dòng)物瘤胃的特殊性，添加的CH需經(jīng)過瘤胃包被技術(shù)加工，孫菲菲[17]在圍產(chǎn)期奶?；A(chǔ)日糧中添加60 g·d-1過瘤胃保護(hù)膽堿(rumen-protected choline, RPC)，發(fā)現(xiàn)RPC能顯著降低血漿NEFA的含量，提高VLDL的含量，從而改善肝和機(jī)體健康。綜上，煙酸可從源頭上減少進(jìn)入肝的NEFA，膽堿可增加肝中TG的運(yùn)輸，二者分別從不同的途徑緩解奶牛脂肪肝，但二者同時(shí)添加是否有協(xié)同作用并未報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在前期研究基礎(chǔ)上，研究日糧中添加RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛泌乳性能和脂質(zhì)代謝的影響，以期為緩解奶牛脂肪肝提供理論依據(jù)。

在馬克思之后，阿倫特從人的行動(dòng)與語言的公共性維度概括出存在主義的公共性，哈貝馬斯將公共性闡發(fā)為主體間商談倫理的公共性，羅爾斯則提出在無知之幕中建構(gòu)公共理性并以此限制人的行為，但他們都沒有超越馬克思，只是對(duì)馬克思的公共性理論進(jìn)行了部分延伸和拓展，使之更加正視人性之弱點(diǎn)、更為契合新的時(shí)代精神。在21世紀(jì)破解人類共同難題，需要激活歷史唯物主義的公共性維度，引導(dǎo)人們更多地從公共實(shí)踐、公共利益、公共需要、公共意識(shí)、公共目標(biāo)來認(rèn)識(shí)和破解發(fā)展難題。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組

本試驗(yàn)選用24頭健康、胎次相近的中國(guó)荷斯坦圍產(chǎn)期奶牛(山東省淄博市某規(guī)?；膛?chǎng))。根據(jù)2×2試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，將奶牛分為4組，每組6頭。日糧處理組分別為：對(duì)照組(CON，基礎(chǔ)日糧)、煙酸組(RPN，基礎(chǔ)日糧+18.4 g·d-1RPN(有效成分9.6 g·d-1))、膽堿組(RPC，基礎(chǔ)日糧+60 g·d-1RPC(氯化膽堿15 g·d-1))、混合組(RPN×RPC，基礎(chǔ)日糧+18.4 g·d-1RPN+60 g·d-1RPC)。RPN劑量參考Morey等[10,18]的方法；RPC劑量參考孫菲菲[17]的方法。試驗(yàn)期為產(chǎn)前14 d到產(chǎn)后21 d，共35 d。試驗(yàn)用RPN(純度65%，過瘤胃率80.3%)和RPC(氯化膽堿25%，過瘤胃率85%)均購(gòu)自杭州康德權(quán)飼料有限公司。

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)牛飼養(yǎng)管理均依照牧場(chǎng)管理制度。試驗(yàn)期配制2種日糧，分別是圍產(chǎn)前期日糧和圍產(chǎn)后期日糧，原料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1；基礎(chǔ)日糧以全混合日糧(total mixed ratio，TMR)的形式飼喂，分別于07:00和16:00飼喂，自由采食和飲水。

表1 圍產(chǎn)前期和圍產(chǎn)后期日糧組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.3 樣品采集

1.3.1 血液樣品的采集 于產(chǎn)前14、7 d，產(chǎn)后1、7、14和21 d 18:00在頸靜脈采集約10 mL血液樣品，分裝于EDTA-K2抗凝管中，3 000×g離心15 min，取上清液(即血漿)，分裝于1.5 mL離心管中，-20 ℃冷凍保存，待測(cè)。

1.4.5 肝脂質(zhì)合成和氧化相關(guān)基因表達(dá)量的測(cè)定 采用常規(guī)TRIzol法，提取奶牛肝組織總 RNA。稱取50～80 mg冷凍肝組織，加入1 mL TRIzol(TaKaRa，中國(guó)大連)，充分勻漿，取上清液，加入氯仿和異丙醇，獲得RNA沉淀。然后用75%的乙醇洗滌RNA沉淀，將其溶解于無RNAse水中。使用超微量核酸蛋白測(cè)定儀檢測(cè)RNA濃度。隨后將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA(UEIris RT mix with DNase，R2020，US EVERBRIGHT INC)。反應(yīng)條件是：42 ℃持續(xù)30 min、95 ℃持續(xù)5 min、5 ℃持續(xù)5 min，-20 ℃保存?zhèn)溆?。使用SYBR(US EVERBRIGHT INC，S2014))進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量(RT-qPCR)。擴(kuò)增體系為10 μL：SYBR Green Master Mix(2×)5 μL，正向和反向引物各0.5 μL，cDNA 4 μL。使用兩步快速擴(kuò)增法：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃變性10 s，重復(fù)40個(gè)循環(huán)，60 ℃退火30 s，重復(fù)40個(gè)循環(huán)(LightCycler?96，Roche)?；虮磉_(dá)量用經(jīng)典的2-ΔΔCT方法計(jì)算[19]，引物序列見表2。

研究結(jié)果為企業(yè)在合作實(shí)踐中更好的開展協(xié)調(diào)聯(lián)動(dòng)工作，創(chuàng)新合作方式，提高合作深度與廣度，設(shè)計(jì)合理有效的協(xié)調(diào)聯(lián)動(dòng)機(jī)制提供了重要參考依據(jù)。由于各影響因素對(duì)協(xié)調(diào)聯(lián)動(dòng)影響程度不同，企業(yè)在確立與優(yōu)化合作伙伴關(guān)系時(shí)應(yīng)重點(diǎn)針對(duì)關(guān)鍵因素制定措施以改進(jìn)其對(duì)合作關(guān)系的作用效果。

如圖5所示，日糧添加RPN顯著降低了肝中TG的含量(主效應(yīng)P=0.006)。組間比較發(fā)現(xiàn)，RPN和RPN×RPC組肝中TG含量顯著低于CON組(P<0.05),RPC組與CON組相比差異不顯著(P>0.05)。

1.3.2 肝組織樣品的采集 于產(chǎn)后21 d進(jìn)行肝組織活檢(每次在13:00時(shí)采集)，用活檢針穿刺采集肝組織樣本。將第10和11根肋骨和髖關(guān)節(jié)到右前肢肘關(guān)節(jié)的連線交叉處區(qū)域剃光，酒精消毒，2 mL鹽酸利多卡因皮下麻醉，5 min后通過皮膚反應(yīng)評(píng)估麻醉效果，用刀片在體壁切口，活檢針向肝插入，收集約100 mg組織在液氮中快速冷凍，-80 ℃下保存，待測(cè)。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 母牛體重和犢牛初生重 產(chǎn)犢后1、7、14和21 d測(cè)定母牛體重(body weight, BW)和犢牛初生重。

1.4.2 產(chǎn)奶量測(cè)定與乳成分分析 產(chǎn)犢后，試驗(yàn)?zāi)膛２捎敏~骨式擠奶臺(tái)進(jìn)行擠奶，擠奶廳配套利拉伐奶廳管理系統(tǒng)軟件，記錄產(chǎn)后1～21 d的產(chǎn)奶量，產(chǎn)后14 d和產(chǎn)后21 d上午和下午均采集乳樣各約50 mL，均勻混合為全天奶樣，混合奶樣中添加1～2滴飽和重鉻酸鉀溶液作為防腐劑，混勻保存。乳成分使用全自動(dòng)乳成分分析儀(FOSS, 丹麥)測(cè)定，檢測(cè)指標(biāo)包括乳脂肪、乳蛋白、乳糖、固形物和乳尿素氮。

當(dāng)前在校大學(xué)生群體基本為“95后”“00后”，這類群體更具有全球化視野、立體化知識(shí)結(jié)構(gòu)與個(gè)性化表達(dá)習(xí)慣，對(duì)“形勢(shì)與政策”課授課的內(nèi)容和方式要求更高，所以亟需推進(jìn)教學(xué)方式方法的創(chuàng)新。具體來說，可從以下幾方面著手。

1.4.3 血漿生化指標(biāo)測(cè)定 血漿生化指標(biāo)均使用生化試劑盒測(cè)定：葡萄糖(GLU，上海優(yōu)選生物科技有限公司)，甘油三酯(TG，E-BC-K261-M，武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司)，NEFA(A042-1-1，南京建成生物工程研究所)、β-羥丁酸(β-hydroxybutyric acid，BHBA，E030-1-1，南京建成生物工程研究所，中國(guó)南京)。VLDL含量采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定，試劑盒購(gòu)于上海優(yōu)選生物科技有限公司。

1.4.4 肝TG的測(cè)定 肝TG使用商業(yè)試劑盒(E-BC-K261-M，武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司)測(cè)定，總蛋白濃度使用BCA法。

隨著全國(guó)數(shù)字化城市建設(shè)浪潮興起，數(shù)字城市成為熱點(diǎn)研究方向之一。各大院校、科研結(jié)構(gòu)及公司紛紛對(duì)數(shù)字城市理論進(jìn)行研究，并開展一些系列的系統(tǒng)開發(fā)工作，取得了一定的研究成果，如CityMaker三維數(shù)字城市可視化平臺(tái)、Skysymbol網(wǎng)絡(luò)三維數(shù)字城市平臺(tái)等。由于三維數(shù)字城市包含大量地形、影像、城市模型及紋理數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)量通常在幾百G以上。因此，海量數(shù)據(jù)成為數(shù)字城市實(shí)現(xiàn)動(dòng)態(tài)可視化的瓶頸[2]。對(duì)于海量級(jí)別精細(xì)化數(shù)字城市模型數(shù)據(jù)庫(kù)如何組織與管理以及場(chǎng)景數(shù)據(jù)如何調(diào)度，成為3DGIS數(shù)字城市建設(shè)的關(guān)鍵問題，也是主要的障礙。

表2 引物列表

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SAS 9.2的混合線性模型進(jìn)行單因素和雙因素重復(fù)測(cè)定分析(Repeated Measurement Model)，對(duì)于單個(gè)時(shí)間點(diǎn)的組間差異顯著性，采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，P≤0.05表示差異顯著，0.050.05表示無顯著性差異。

2 結(jié) 果

2.1 添加RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛生產(chǎn)性能的影響

如表3和表4所示，奶牛的BW和犢牛的初生重并未受到添加RPN和RPC的影響，產(chǎn)后3周內(nèi)，奶牛的BW呈現(xiàn)下降狀態(tài)。日糧添加RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)后期奶牛產(chǎn)奶量(圖1)、乳脂、乳蛋白、乳糖、非脂固形物和乳尿素氮(表5)均無顯著影響(主效應(yīng)P>0.05)。

圖1 圍產(chǎn)期奶牛添加RPN和RPC對(duì)產(chǎn)奶量的影響

表3 圍產(chǎn)期奶牛添加RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛體重的影響

2.2 添加RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛血液生化指標(biāo)的影響

如圖3所示，添加RPN和RPC對(duì)血漿中NEFA、BHBA和GLU無顯著影響(主效應(yīng)P>0.05)，RPN與RPC間不存在交互作用(RPN×RPCP>0.05)，但血漿NEFA、BHBA濃度均受時(shí)間影響(TimeP<0.05)。單獨(dú)添加RPN和RPC對(duì)血漿中TG無顯著性影響(主效應(yīng)P>0.05)，但RPN和RPC存在交互作用(RPN×RPCP<0.05)，且與時(shí)間存在交互作用(RPN×RPC×TimeP<0.05)。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)產(chǎn)前14 d到產(chǎn)后21 d血漿中VLDL的含量，結(jié)果顯示(圖4)，日糧中添加RPN、RPC顯著增加了血漿中VLDL的含量(主效應(yīng)RPNP<0.001, RPCP<0.001)，且二者存在交互作用(RPN×RPCP<0.001)。RPN×RPC與時(shí)間也存在交互效應(yīng)(RPN×RPC×TimeP=0.038)，組間比較，RPN、RPC和RPN×RPC的VLDL含量均顯著高于CON組(P<0.05)。

圖2 RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛血漿中NA和CH含量的影響

如圖2所示，圍產(chǎn)期奶?；A(chǔ)日糧中添加RPN和RPC可分別提高血漿中NA和CH的含量(主效應(yīng)P<0.001)。在整個(gè)試驗(yàn)期，血漿NA和CH含量隨時(shí)間變化而變化(TimeP<0.001)，NA和CH含量都是在產(chǎn)后1 d達(dá)到最高。

圖3 RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛血漿中生化指標(biāo)含量的影響

圖4 RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛血漿中VLDL含量的影響

2.3 添加RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛肝中TG的影響

邊坡區(qū)上部為含角礫粉質(zhì)粘土，下部為基巖層。上部土體為含角礫粉質(zhì)粘土底部局部地段分布有一層厚度為0.1～0.2m灰白色夾紫紅色粉質(zhì)粘土，粉質(zhì)粘土夾少量角礫，分布在邊坡的中前緣地段，該層遇水極易軟化，并易形成貫通性潛在滑動(dòng)面，空隙較大，地下水易富集在此，因此在暴雨季節(jié)，地表水滲入形成局部孔隙水水壓急劇增高，隨著水自上向下排泄流經(jīng)，再加上土體力學(xué)參數(shù)降低，為邊坡變形破壞形成提供有利條件。下部基巖為順層砂質(zhì)泥巖邊坡，巖層層面局部呈閉合～張開0.1～0.3cm，裂隙面粗糙，充填少量的粘性土，巖層中層間錯(cuò)動(dòng)帶較為發(fā)育，薄層泥巖地段最為發(fā)育，為工程邊坡潛在滑動(dòng)面（順層結(jié)構(gòu)面）。

圖5 RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛肝中TG含量的影響

2.4 添加RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛肝脂質(zhì)合成及氧化基因表達(dá)的影響

由表6可知，日糧中添加RPN和RPC對(duì)PPAR-αmRNA相對(duì)表達(dá)量無顯著影響(主效應(yīng)P>0.05)，但RPN和RPC存在互作效應(yīng)(RPN×RPCP=0.043)。RPC有降低DGAT1的趨勢(shì)(主效應(yīng)RPCP<0.10)，添加RPN和RPC對(duì)脂質(zhì)合成和氧化的其他基因相對(duì)表達(dá)量均無顯著影響(主效應(yīng)P>0.05)；組間對(duì)比差異不顯著(P> 0.05)。

表6 RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛肝脂代謝相關(guān)基因的影響

3 討 論

3.1 日糧添加RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛生產(chǎn)性能的影響

在過去幾十年，關(guān)于奶牛日糧中補(bǔ)飼RPN和RPC的研究有很多，大多數(shù)結(jié)果表明二者的補(bǔ)充不影響泌乳早期的采食量(dry matter intake, DMI)和產(chǎn)奶量。Morey等[10]在圍產(chǎn)期奶?；A(chǔ)日糧中添加24 g·d-1RPN，對(duì)體況評(píng)分(body condition score, BCS)、BW、能量平衡、產(chǎn)奶量及乳成分無顯著影響。Yuan等[20]研究結(jié)果顯示，圍產(chǎn)期奶牛日糧中補(bǔ)飼12 g·d-1RPN對(duì)奶牛生產(chǎn)性能也無顯著影響。Bollatti等[21]報(bào)道，奶牛日糧添加12.9 g·d-1RPC不會(huì)影響其DMI、BCS和BW。本試驗(yàn)研究結(jié)果與之一致，日糧添加RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛、犢牛體重產(chǎn)奶量以及乳成分無顯著影響。但也有研究結(jié)果顯示，補(bǔ)飼RPN和RPC可以提高奶牛產(chǎn)奶量[22-23]。Potts等[23]發(fā)現(xiàn)，在試驗(yàn)中添加60 g·d-1RPC(氯化膽堿含量為28.8%)，可顯著增加奶牛的產(chǎn)奶量。本試驗(yàn)RPC添加量與Potts 等[23]的試驗(yàn)相似，但氯化膽堿含量較低，為25%。因此，本試驗(yàn)生產(chǎn)性能無顯著變化可能是由于添加量較低或生物學(xué)效價(jià)不同，后續(xù)應(yīng)加大添加量，探索RPN和RPC的最佳劑量。

鑒于藥學(xué)類實(shí)驗(yàn)室種類多樣，經(jīng)常存在多學(xué)科交叉共用實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)象，筆者提出以實(shí)驗(yàn)室安全防控點(diǎn)為依據(jù)的實(shí)驗(yàn)室分類方案，以便安全環(huán)保培訓(xùn)和實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入制度的實(shí)施。該分類方案將實(shí)驗(yàn)室按安全與環(huán)保因素分為以下幾類：“有毒”指可直接接觸有毒物質(zhì)、產(chǎn)生有毒氣、液、固體物質(zhì)、接觸高傳染性生物、放射性物質(zhì)等的實(shí)驗(yàn)室；“危險(xiǎn)”指實(shí)驗(yàn)中可能發(fā)生爆炸、爆沸、明火，接觸高壓、高溫等實(shí)驗(yàn)室；“風(fēng)險(xiǎn)”指實(shí)驗(yàn)中可能接觸腐蝕性物質(zhì)，可造成實(shí)驗(yàn)者肢體損傷，接觸動(dòng)物、微生物有潛在感染，火、水、電傷害等的實(shí)驗(yàn)室；“一般”可能出現(xiàn)水、電、火災(zāi)及普通污染物等實(shí)驗(yàn)室，具體涉及的實(shí)驗(yàn)室見表1。

3.2 添加RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛血液生化指標(biāo)的影響

為增加小腸中對(duì)NA和CH的生物利用度，本試驗(yàn)從產(chǎn)前14 d到產(chǎn)后21 d持續(xù)添加RPN和RPC，顯著提高了血漿中NA和CH的含量。值得注意的是，二者混合添加后血漿中CH的含量并未顯著提高，且與CON組中的CH含量接近，原因可能是部分CH在肝中轉(zhuǎn)化為甜菜堿，進(jìn)一步提供甲基，而NA代謝過程中會(huì)消耗甲基[24]，導(dǎo)致RPN × RPC組CH含量未顯著提高，其具體原因還需進(jìn)一步探究。

泌乳早期，奶牛為補(bǔ)償能量不足而動(dòng)用體脂[25]，導(dǎo)致血漿中NEFA、BHBA和肝中TG顯著增加[26]。由于其抗脂解作用，煙酸被認(rèn)為是一種降脂化合物[27]。因此，煙酸有望抑制泌乳早期的脂肪分解以改善奶牛健康。NEFA是反映奶牛脂肪動(dòng)員和代謝健康的重要指標(biāo)[28]。研究表明，圍產(chǎn)期補(bǔ)飼RPN可降低血漿NEFA濃度[20,29]，但也有研究表明添加RPN對(duì)血液NEFA濃度無顯著影響。Zeitz等[30]試驗(yàn)中補(bǔ)飼79 mg·kg-1BW RPN，奶牛血漿TG含量和NEFA濃度無顯著差異，本試驗(yàn)研究結(jié)果與之一致。Aragona等[31]發(fā)現(xiàn)，添加16、32、48 g·d-1RPN對(duì)圍產(chǎn)期奶牛能量代謝和生產(chǎn)性能無顯著影響。Pires等[32-34]發(fā)現(xiàn)，每小時(shí)持續(xù)真胃灌注3 mg·kg-1BW RPN可顯著降低奶牛血漿NEFA濃度，但在灌注停止后2～4 h觀察到NEFA濃度顯著反彈，且持續(xù)4～9 h。表明一定水平的RPN可以抑制脂肪分解，但血漿NEFA濃度的反彈可能會(huì)干擾對(duì)奶牛煙酸抗脂解作用的評(píng)估。血漿中NEFA部分氧化形成BHBA或酯化后作為TG儲(chǔ)存在肝中。有人提出，血漿NEFA濃度可能不是決定血漿BHBA濃度的唯一因素，但本試驗(yàn)結(jié)果中添加RPN和RPC對(duì)血漿中NEFA和BHBA的濃度均無顯著影響。如同NEFA一樣，也存在持續(xù)灌注RPN可顯著降低BHBA濃度，但停止灌注后反彈的現(xiàn)象[33-34]。采血時(shí)間可能是導(dǎo)致各研究之間血漿NEFA和BHBA濃度差異的一個(gè)原因，因?yàn)檠獫{NEFA和BHBA濃度可能會(huì)因進(jìn)食和采血之間的時(shí)間間隔而產(chǎn)生差異[4]。因膽堿可促進(jìn)VLDL的合成，是被廣泛用于緩解奶牛脂肪肝的添加劑。圍產(chǎn)期奶牛補(bǔ)飼 RPC 對(duì)血漿NEFA和BHBA的影響也不一致，這可能是因?yàn)殚_始補(bǔ)充的時(shí)期、持續(xù)時(shí)間、補(bǔ)充水平或過瘤胃保護(hù)率不同導(dǎo)致的[35]。一些研究中，RPC降低了血液 NEFA和BHBA濃度[36-38]，而在其他研究中無顯著影響[39-41]。本試驗(yàn)添加RPC對(duì)血漿NEFA和BHBA濃度無顯著影響，二者混合添加對(duì)NEFA和BHBA也無顯著影響。

3.3 添加RPN和RPC對(duì)圍產(chǎn)期奶牛肝中TG及脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

奶牛的肝脂肪變性主要是由體脂動(dòng)員、脂肪酸氧化、TG合成和輸出的不平衡引起的。在非反芻動(dòng)物中，肝中TG累積與SREBP-1c的轉(zhuǎn)錄活性和豐度密切相關(guān)，部分原因是該蛋白質(zhì)參與調(diào)節(jié)脂肪酸和TG合成的基因，包括 ACC1、FAS和DGAT1[42-43]。Jia等[44]的研究表明，中度脂肪肝奶牛的肝中過度誘導(dǎo) SREBP-1c 及其靶分子 ACC1、FAS和DGAT1表達(dá)。此外，用高濃度脂肪酸處理犢牛原代肝細(xì)胞可上調(diào)脂肪生成分子(ACA、FAS和 DGAT1)的表達(dá)，部分是通過增加SREBP-1c的表達(dá)和活性。這表明脂肪生成是奶牛中度脂肪肝發(fā)育的一個(gè)組成部分[45]，而PPAR-α和CPT1A可促進(jìn)脂肪酸的氧化，CPT1A是PPAR-α的靶分子。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，RPC有降低DGAT1的趨勢(shì)，表明添加RPN和RPC有降低肝中脂肪合成的可能。另一方面，本試驗(yàn)添加RPC奶牛肝中TG含量顯著降低，可能是RPC促進(jìn)了VLDL的合成，有利于肝中TG的輸出。

4 結(jié) 論

圍產(chǎn)期奶牛日糧中添加RPN和RPC可顯著提高血漿中VLDL的含量，降低肝中TG的含量，從而有效緩解圍產(chǎn)期奶牛脂肪過度沉積，但二者混合添加的效果并未顯著優(yōu)于單獨(dú)添加，具體機(jī)制還需進(jìn)一步探究。