陳素華，馬天江，張智慧，張磊，史磊

作者單位：漯河市中心醫(yī)院腫瘤科，河南 漯河462000

結(jié)直腸癌是全球第三大惡性腫瘤，對(duì)人類健康構(gòu)成重大威脅［1］。據(jù)統(tǒng)計(jì)，結(jié)直腸癌是所有癌癥中發(fā)病率第三高的癌癥［2］。結(jié)直腸癌由多種因素引起，包括個(gè)體遺傳和環(huán)境影響。例如，大規(guī)模的遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌的發(fā)生與多基因異常表達(dá)和多分子相互作用有關(guān)［3-4］，但對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)生的分子機(jī)制的研究并不詳盡。因此，進(jìn)一步研究結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制，可能為開(kāi)發(fā)新的治療策略提供理論依據(jù)。最新研究表明，長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）LINC01419在食管鱗狀細(xì)胞癌組織和細(xì)胞中上調(diào)表達(dá)，沉默其表達(dá)可抑制食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡［5］。LINC01419在胃癌組織中高表達(dá)，干擾其表達(dá)抑制胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲［6］。資料顯示，微小RNA-132-3p（miR-132-3p）在結(jié)直腸癌組織和細(xì)胞中下調(diào)表達(dá)，過(guò)表達(dá)miR-132-3p 抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡［7］。但lncRNA LINC01419 在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移侵襲的影響，且lncRNA LINC01419是否通過(guò)靶向調(diào)控miR-132-3p 的表達(dá)影響結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲目前還尚未可知。因此，本研究考察lncRNA LINC01419在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)，以及對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移侵襲的影響，并結(jié)合miR-132-3p，探索lncRNA LINC01419潛在的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑結(jié)直腸癌細(xì)胞株SW620 購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心，LINC01419 小干擾RNA si-LINC01419、si-NC、過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pcDNA、pcDNA-LINC01419、miR-NC、miR-132-3p、anti-miR-NC、anti-miR-123-3p、熒光素酶報(bào)告載體購(gòu)自上海GenePharma 公司，甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）、細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A（P21）、B 細(xì)胞淋巴瘤-2（Bcl-2）蛋白、Bcl-2 相關(guān)X（Bax）蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）抗體購(gòu)自美國(guó)Cellular Signaling Technology 公司，膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素（Annexin V-FITC）/碘化丙啶細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自江蘇凱基生物公司。1.2 臨床樣本來(lái)源收集漯河市中心醫(yī)院2015 年10 月至2018 年5 月因結(jié)直腸癌手術(shù)切除的組織標(biāo)本20 例，以距離結(jié)直腸癌邊緣≥3 cm 的癌旁正常組織標(biāo)本20 例為對(duì)照。所有病例經(jīng)病理學(xué)確診為結(jié)直腸癌，術(shù)前未行任何放、化療。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求，獲得病人或其近親屬的知情同意書。樣本取材后迅速置于液氮中凍存，用于lncRNA LINC01419 和miR-132-3p 水平的檢測(cè)。

1.3 實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qRTPCR）檢測(cè)lncRNA LINC01419 和miR-132-3p 表達(dá)結(jié)直腸癌組織和癌旁組織的總RNA 使用TRIzol 試劑獲得，逆轉(zhuǎn)錄制備互補(bǔ)DNA（cDNA），以cDNA 為模板，進(jìn)行qRT-PCR 反應(yīng)。引物序列為：ln?cRNA LINC01419 正 向 5′-GAAACTCCGAACA?CATCTG-3’，反向5′-TTCTCCTGCTGGTTGATT-3′，miR-132-3p正向5′-GCGCGCGTAACAGTCTACAGG-3′，反向5′-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCC-3′。ln?cRNA LINC01419 和miR-132-3p 表達(dá)根據(jù)2?ΔΔCt方法計(jì)算。

1.4 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染SW620 細(xì)胞在DMEM 培養(yǎng)基中（含10%胎牛血清），于培養(yǎng)箱（37 ℃、5%二氧化碳、飽和濕潤(rùn)）生長(zhǎng)。SW620 細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)，將其接種至6 孔板。依照Lipofectamine 2000 試劑操作指示，在達(dá)約70% 密度時(shí)將si-LINC01419、pcDNALINC01419、miR-132-3p、anti-miR-123-3p 和各自陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染入SW620細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48 h。

1.5 MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖將SW620細(xì)胞接種于96 孔板（1×104個(gè)），分別培養(yǎng)24 h、48 h、72 h 后，與100 μL MTT 溶液反應(yīng)，4 h 后將結(jié)晶用二甲基亞砜溶解，在酶標(biāo)儀檢測(cè)SW620 細(xì)胞的吸光度值，波長(zhǎng)為490 nm。

1.6 蛋白質(zhì)印跡法（Western blotting）檢測(cè)cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9 蛋白表達(dá)利用RIPA 裂解液獲得SW620 細(xì)胞的蛋白，吸取30μg 蛋白進(jìn)行10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后將其轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，經(jīng)5%脫脂牛奶封閉后，4 ℃加入cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9 蛋白抗體（均為1∶1 000 稀釋）孵育，次日加入二抗孵育2 h，顯色、顯影，以GAPDH為內(nèi)參，分析蛋白條帶灰度值。

1.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡SW620 細(xì)胞（1×105個(gè)）的凋亡按照細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒操作指示進(jìn)行，置于流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡情況。

1.8 Transwell 檢測(cè)細(xì)胞遷移、侵襲采用無(wú)血清DMEM 培養(yǎng)基調(diào)整SW620 細(xì)胞密度為1×105個(gè)/毫升，并加入Transwell 上室（細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)時(shí)Tran?swell 上室以Matrigel 膠包被，而細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)未使用Matrigel 膠），下室加入500 μL 含血清的DMEM。孵育24 h后，結(jié)晶紫染色，顯微鏡下拍照計(jì)數(shù)。

1.9 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)LncBasePredicted v.2 對(duì)LINC01419 和miR-132-3p的結(jié)合進(jìn)行預(yù)測(cè)。構(gòu)建包含miR-132-3p 結(jié)合位點(diǎn)的LINC01419 野生型（WT-LINC01419）和突變型（MUT-LINC01419）報(bào)告基因載體，并分別與miR-132-3p 或miR-NC 共轉(zhuǎn)染SW620 細(xì)胞，48 h 后檢測(cè)細(xì)胞熒光素酶活性。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料表示為±s。采用t檢驗(yàn)比較兩組間數(shù)據(jù)差異，采用單因素方差分析比較多組數(shù)據(jù)間差異，使用SNK 法進(jìn)行組間多重比較，吸光度采用兩因素析因設(shè)計(jì)方差分析，認(rèn)為P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 lncRNA LINC01419 和miR-132-3p 在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)qRT-PCR 檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示，與癌旁組織比較，結(jié)直腸癌組織中l(wèi)ncRNA LINC01419表達(dá)量明顯增加［（2.74±0.26）比（1.00±0.09），t=28.28，P<0.001］，miR-132-3p 表達(dá)量顯著減少［（0.51±0.05）比（1.01±0.08），t=23.70，P<0.001］。

2.2 干擾lncRNA LINC01419 對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 增殖的影響時(shí)間因素、分組因素均對(duì)吸光度有影響，且時(shí)間與分組交互條件下對(duì)吸光度仍有影響。 在結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 中轉(zhuǎn)染si-LINC01419，其表達(dá)量明顯低于si-NC 組（P<0.05）。MTT 檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與si-NC 組比較，si-LINC01419明顯降低SW620細(xì)胞24 h、48 h、72 h的細(xì)胞活性（P<0.05）。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果表明，與si-NC組比較，si-LINC01419 顯著減少SW620 細(xì)胞中cyclin D1和P21蛋白表達(dá)量（P<0.05）。見(jiàn)表1，圖1。

表1 干擾lncRNA LINC01419對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620增殖的影響/± s

表1 干擾lncRNA LINC01419對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620增殖的影響/± s

注：cyclin D1為細(xì)胞周期蛋白D1，P21為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A。

組別si-NC si-LINC01419 t值P值P21蛋白0.23±0.03 0.61±0.06 16.99<0.001重復(fù)次數(shù)LINC01419 1.01±0.11 0.48±0.05 13.16<0.001吸光度（490 nm）48 h 0.71±0.06 0.47±0.04 9.98<0.001 24 h 0.39±0.03 0.36±0.03 2.13 0.049 72 h 1.08±0.09 0.62±0.06 12.76<0.001 cyclin D1蛋白0.72±0.06 0.32±0.03 17.89<0.001 99

圖1 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)兩組結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620增殖相關(guān)蛋白表達(dá)結(jié)果

2.3 干擾lncRNA LINC01419 對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 凋亡的影響流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，與si-NC 組比較，si-LINC01419明顯增加SW620細(xì)胞凋亡率（P<0.05）。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與si-NC 組比較，si-LINC01419 顯著降低SW620 細(xì)胞中Bcl-2 蛋白水平，并提高Bax 蛋白表達(dá)量（P<0.05）。見(jiàn)表2，圖2。

表2 干擾lncRNA LINC01419對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620凋亡的影響/± s

表2 干擾lncRNA LINC01419對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620凋亡的影響/± s

注：Bcl-2為B細(xì)胞淋巴瘤-2，Bax為Bcl-2相關(guān)X。

組別si-NC si-LINC01419 t值P值重復(fù)次數(shù)Bax蛋白0.36±0.03 0.79±0.07 16.94<0.001 99凋亡率/%7.12±0.71 20.65±2.01 19.04<0.001 Bcl-2蛋白0.67±0.06 0.26±0.03 18.34<0.001

圖2 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)兩組結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)結(jié)果

2.4 干擾lncRNA LINC01419 對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 遷移、侵襲的影響Transwell 檢測(cè)結(jié)果表明，與si-NC 組比較，si-LINC01419 明顯降低SW620細(xì)胞的遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)（P<0.05）。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示，與si-NC 組比較，si-LINC01419 明顯減少SW620 細(xì)胞中MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)量（P<0.05）。見(jiàn)表3；圖3，4。

表3 干擾lncRNA LINC01419對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620遷移、侵襲的影響/± s

表3 干擾lncRNA LINC01419對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620遷移、侵襲的影響/± s

注：MMP-2為基質(zhì)金屬蛋白酶-2，MMP-9為基質(zhì)金屬蛋白酶-9。

組別si-NC si-LINC01419 t值P值MMP-9蛋白0.64±0.06 0.25±0.03 17.44<0.001重復(fù)次數(shù)99遷移細(xì)胞數(shù)/個(gè)106.32±10.24 49.57±5.84 14.44<0.001侵襲細(xì)胞數(shù)/個(gè)84.65±8.48 38.65±4.25 14.55<0.001 MMP-2蛋白0.81±0.07 0.39±0.03 16.54<0.001

圖4 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)兩組結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620遷移侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)結(jié)果

2.5 miR-132-3p 過(guò)表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 增殖、凋亡、遷移、侵襲的影響時(shí)間因素、分組因素均對(duì)吸光度有影響，且時(shí)間與分組交互條件下對(duì)吸光度仍有影響。在SW620 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-132-3p，發(fā)現(xiàn)相比于miR-NC 組，miR-132-3p 的表達(dá)量顯著升高（P<0.05）。與miR-NC 組比較，miR-132-3p 對(duì)SW620 細(xì)胞24 h 的細(xì)胞活性無(wú)明顯影響，明顯降低48 h、72 h 的細(xì)胞活性（P<0.05），并增加細(xì)胞凋亡率（P<0.05），減少遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)（P<0.05），以及降低cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 蛋白水平，增加P21、Bax 蛋白表達(dá)量（P<0.05）。見(jiàn)表4，5；圖5。

表4 miR-132-3p過(guò)表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620增殖、凋亡、遷移、侵襲的影響/± s

表4 miR-132-3p過(guò)表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620增殖、凋亡、遷移、侵襲的影響/± s

組別miR-NC miR-132-3p t值P值重復(fù)次數(shù)吸光度（490 nm）99 miR-132-3p 1.01±0.09 2.47±0.24 17.09<0.001 24 h 0.41±0.04 0.39±0.03 1.20 0.247 48 h 0.73±0.06 0.57±0.05 6.15<0.001 72 h 1.06±0.09 0.71±0.06 9.71<0.001凋亡率/%6.58±0.66 18.46±1.84 18.23<0.001遷移細(xì)胞數(shù)/個(gè)109.47±11.25 58.97±5.32 12.17<0.001侵襲細(xì)胞數(shù)/個(gè)87.14±8.21 49.64±5.57 11.34<0.001

2.6 lncRNA LINC01419 靶向調(diào)控miR-132-3p 的表達(dá)利用LncBase Predicted v.2 工具預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，LINC01419的序列中含有與miR-132-3p互補(bǔ)的核苷酸序列。雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與miR-NC組比較，miR-132-3p 明顯降低WT-LINC01419 熒光素酶活性［（0.41±0.04）比（1.00±0.09），t=17.97，P<0.001］，而MUT-LINC01419 熒光素酶活性的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［（1.01±0.07 比1.03±0.08），t=0.56，P=0.580］。pcDNA 組、pcDNA-LINC01419 組、si-NC 組、si-LINC01419組miR-132-3p表達(dá)量比較F=294.973，P<0.001；與pcDNA 組（1.00±0.09）比較，pcDNALINC01419 明顯減少miR-132-3p 表達(dá)量（0.48±0.04）；與si-NC 組（1.01±0.08）比較，si-LINC01419 顯著提高miR-132-3p表達(dá)量（2.25±0.23）。

2.7 抑制miR-132-3p 表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾lncRNA LINC01419 對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 增殖、凋亡、遷移、侵襲的作用時(shí)間因素、分組因素均對(duì)吸光度有影響，且時(shí)間與分組交互條件下對(duì)吸光度仍有影響。與si-NC 組比較，si-LINC01419明顯增加SW620細(xì)胞中miR-123-3p表達(dá)量、凋亡率、P21、Bax 蛋白表達(dá)量（P<0.05），對(duì)24 h的細(xì)胞活性無(wú)顯著影響，而明顯降低48 h、72 h 的細(xì)胞活性、遷移細(xì)胞數(shù)、侵襲細(xì)胞數(shù)以及cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 蛋白表達(dá)量（P<0.05）。與si-LINC01419 和anti-miR-NC 共轉(zhuǎn)染比較，si-LINC01419 和anti-miR-123-3p 共轉(zhuǎn)染顯著減少SW620 細(xì)胞中miR-123-3p 表達(dá)量、凋亡率、P21、Bax蛋白表達(dá)量（P<0.05），對(duì)24 h的細(xì)胞活性無(wú)顯著影響，并明顯提高48 h、72 h 的細(xì)胞活性、遷移細(xì)胞數(shù)、侵襲細(xì)胞數(shù)以及cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白水平（P<0.05）。見(jiàn)表6，7；圖6。

表5 miR-132-3p過(guò)表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620增殖、凋亡、遷移、侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)的影響/± s

表5 miR-132-3p過(guò)表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620增殖、凋亡、遷移、侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)的影響/± s

注：cyclin D1 為細(xì)胞周期蛋白D1，P21 為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A，Bcl-2 為B 細(xì)胞淋巴瘤-2，Bax 為Bcl-2 相關(guān)X，MMP-2 為基質(zhì)金屬蛋白酶-2，MMP-9為基質(zhì)金屬蛋白酶-9。

MMP-9蛋白0.63±0.06 0.29±0.03 15.21<0.001組別miR-NC miR-132-3p t值P值重復(fù)次數(shù)99 cyclin D1蛋白0.71±0.07 0.35±0.03 14.18<0.001 P21蛋白0.22±0.03 0.58±0.05 18.52<0.001 Bcl-2蛋白0.69±0.06 0.31±0.03 16.99<0.001 Bax蛋白0.35±0.03 0.74±0.06 17.44<0.001 MMP-2蛋白0.83±0.08 0.42±0.04 13.75<0.001

表6 抑制miR-132-3p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾lncRNA LINC01419對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620增殖、凋亡、遷移、侵襲的作用/± s

表6 抑制miR-132-3p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾lncRNA LINC01419對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620增殖、凋亡、遷移、侵襲的作用/± s

注：①與si-NC組比較，P<0.05。②與si-LINC01419+anti-miR-NC組比較，P<0.05。

組別si-NC si-LINC01419 si-LINC01419+anti-miR-NC si-LINC01419+anti-miR-123-3p F值P值侵襲細(xì)胞數(shù)/個(gè)86.32±8.24 39.68±4.12①36.77±4.01 71.25±7.01②140.95<0.001重復(fù)次數(shù)miR-123-3p 1.00±0.08 2.25±0.22①2.31±0.24 1.38±0.13②117.13<0.001吸光度（490 nm）24 h 0.40±0.04 0.37±0.03 0.36±0.03 0.38±0.03 2.44 0.082 48 h 0.74±0.06 0.51±0.05①0.46±0.04 0.62±0.06②49.35<0.001 72 h 1.07±0.09 0.66±0.06①0.61±0.06 0.92±0.08②78.58<0.001凋亡率/%7.74±0.77 22.14±2.25①24.31±2.41 13.69±1.41②157.50<0.001遷移細(xì)胞數(shù)/個(gè)108.46±9.98 51.36±5.28①48.79±5.18 88.22±8.36②135.82<0.001 9999

3 討論

結(jié)直腸癌被認(rèn)為是人類腫瘤病死率最高的腫瘤之一。在中國(guó)，結(jié)直腸癌的發(fā)病率和病死率呈上升趨勢(shì)。近年來(lái)，結(jié)直腸癌的聯(lián)合治療得到了改善，包括手術(shù)切除、放療和放化療，然而，晚期結(jié)直腸癌病人的預(yù)后仍然很差［8］。此外，癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移也是治療失敗的最常見(jiàn)原因。因此，探討和了解結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制，發(fā)掘相關(guān)的診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物，準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)結(jié)直腸癌的發(fā)展，是一個(gè)具有特殊意義和緊迫性的問(wèn)題［9］。

既往研究表明，lncRNA 在許多生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，如腫瘤血管生成、細(xì)胞遷移、細(xì)胞凋亡和耐藥性，與癌癥的發(fā)生密切相關(guān)［10-11］。ln?cRNA 可能作為致癌基因或抑癌基因在結(jié)直腸癌中發(fā)揮關(guān)鍵作用［12-14］。資料顯示，LINC01419 在肺腺癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，敲低其表達(dá)抑制肺腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，表現(xiàn)出對(duì)肺腺癌的致癌能力［15］。LINC01419的沉默可以有效抑制食管鱗狀細(xì)胞癌的細(xì)胞增殖，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡［5］，也可抑制胃癌細(xì)胞遷移侵襲［6］。 但目前沒(méi)有研究證明lncRNA LINC01419是否是參與結(jié)腸直腸癌進(jìn)展的一個(gè)重要角色。本研究數(shù)據(jù)顯示，LINC01419 在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)上調(diào)，提示LINC01419 可能調(diào)控結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展。在結(jié)直腸癌SW620 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染si-LINC01419，觀察到干擾lncRNA LINC01419 明顯抑制SW620 細(xì)胞24 h、48 h、72 h 的細(xì)胞活性、遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)，而提高細(xì)胞凋亡率，并且顯著影響增殖、凋亡、遷移侵襲相關(guān)蛋白cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9 蛋白表達(dá)。這些結(jié)果表明，lncRNA LINC01419 在結(jié)直腸癌中可能充當(dāng)致癌基因，干擾LINC01419對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移侵襲具有抑制作用，對(duì)細(xì)胞凋亡具有促進(jìn)作用，與前人研究相符，也為其在結(jié)直腸癌中的研究提供了新的資料。

微小RNA（microRNA，miRNA/miR）是一類高度保守的非編碼RNA，miRNA 已被證明參與結(jié)直腸癌等癌癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程［16-18］。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，與癌旁組織比較，結(jié)直腸癌組織中miR-132-3p 表達(dá)下調(diào)，這與miR-132-3p 在膀胱癌組織中表達(dá)下調(diào)［19］的結(jié)果一致。既往研究發(fā)現(xiàn)，與癌旁組織相比，miR-132-3p 在乳腺癌組織中低表達(dá)，可抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲［20］，miR-132-3p 能抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［21］。本研究功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，miR-132-3p 過(guò)表達(dá)可以降低結(jié)直腸癌細(xì)胞48 h、72 h 的細(xì)胞活性、遷移細(xì)胞數(shù)、侵襲細(xì)胞數(shù)，并增加細(xì)胞凋亡率，顯示出抗癌活性，與Zhang 等［7］的研究一致。生物信息學(xué)結(jié)合雙熒光素酶報(bào)告檢測(cè)證實(shí)ln?cRNA LINC01419 靶向調(diào)控miR-132-3p 的表達(dá)，另外，抑制miR-132-3p 表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾lncRNA LINC01419對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620增殖、遷移、侵襲的抑制作用，以及逆轉(zhuǎn)了對(duì)細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用。上述結(jié)果證明，靶向調(diào)控miR-132-3p表達(dá)可能是ln?cRNA LINC01419 影響結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移侵襲、凋亡的重要途徑之一。

表7 抑制miR-132-3p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾lncRNA LINC01419對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620增殖、凋亡、遷移、侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)的作用/± s

表7 抑制miR-132-3p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾lncRNA LINC01419對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620增殖、凋亡、遷移、侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)的作用/± s

注：cyclin D1 為細(xì)胞周期蛋白D1，P21 為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A，Bcl-2 為B 細(xì)胞淋巴瘤-2，Bax 為Bcl-2 相關(guān)X，MMP-2 為基質(zhì)金屬蛋白酶-2，MMP-9為基質(zhì)金屬蛋白酶-9。①與si-NC組比較，P<0.05。②與si-LINC01419+anti-miR-NC組比較，P<0.05。

MMP-9蛋白0.65±0.06 0.23±0.03①0.22±0.03 0.54±0.05②217.22<0.001組別si-NC si-LINC01419 si-LINC01419+anti-miR-NC si-LINC01419+anti-miR-132-3p F值P值重復(fù)次數(shù)9999 cyclin D1蛋白0.73±0.07 0.31±0.03①0.29±0.03 0.61±0.06②168.12<0.001 P21蛋白0.24±0.03 0.62±0.06①0.63±0.06 0.36±0.03②150.50<0.001 Bcl-2蛋白0.68±0.06 0.27±0.03①0.26±0.03 0.56±0.05②202.44<0.001 Bax蛋白0.34±0.03 0.77±0.06①0.78±0.07 0.41±0.04②177.27<0.001 MMP-2蛋白0.84±0.07 0.38±0.03①0.37±0.04 0.71±0.06②183.82<0.001

綜上所述，lncRNA LINC01419 在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)上調(diào)，干擾其表達(dá)能抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制與靶向調(diào)控miR-132-3p 表達(dá)有關(guān)，這對(duì)于LINC01419、miR-132-3p 在包括結(jié)直腸癌在內(nèi)的諸多癌癥中的治療和預(yù)后價(jià)值研究具有極其重要的意義。

（本文圖3，5，6見(jiàn)封三）