鞏曉宇 嚴(yán)俊珍 邱鳳鄒 陳秋燕 陸燕萍

【摘 要】 目的：建立香丹注射液中吐溫80含量測(cè)定的方法，用于該類藥品的質(zhì)量控制和安全性評(píng)價(jià)。方法：采用高效液相色譜法，凝膠色譜柱，柱溫為30 ℃;以0.02 mol/L醋酸銨溶液-乙腈（90∶10）為流動(dòng)相，流速為0.6 mL/min;Alltech蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度120 ℃，氮?dú)饬魉?.0 L/min，進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果：樣品色譜圖中吐溫80無(wú)干擾，分離度符合要求，吐溫80濃度在0.505～5.05 mg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（R2=0.9991），加樣回收實(shí)驗(yàn)表明，平均加樣回收率96.7%， RSD=2.0%。結(jié)論：通過(guò)高效液相色譜法結(jié)合凝膠色譜柱建立的方法準(zhǔn)確可靠，可以準(zhǔn)確有效的檢測(cè)香丹注射液中吐溫80的含量，評(píng)價(jià)藥品的安全性，控制藥品質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 吐溫80;HPLC;含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R284?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2022）03-0038-03

Determination of the Content of Twain 80 in Xiangdan Injection

GONG Xiaoyu YAN Junzhen QIU Fengzou CHEN Qiuyan LU Yanping*

Longgang District People’s Hospital of Shenzhen & The Second Affiliated Hospital of the

Chinese University of Hong Kong，Shenzhen 518172，China

Abstract：Objective To establish a method for the determination of Xiangdan injection Twain 80 content， for the drug quality control and safety evaluation. Methods The gel chromatography column， the column temperature is 30 DEG C; to 0.02 mol / L ammonium acetate solution and acetonitrile （90∶10） as mobile phase. The flow rate was 0.6ml/min; Alltech evaporative light scattering detector， the drift tube temperature of 120 DEG C， nitrogen flow rate 2.0 L/min， into 10 mu l of sample volume. Results The Twain 80 concentration in the range of 0.505-5.05 mg/mL， a good linear relationship （R2=0.9991）， the average recovery rate was 96.7%， RSD=2.0%. Conclusion The established method is accurate and reliable， and can effectively detect Xiangdan injection of Tween 80 in the content and evaluation of drug safety and control the quality of drugs.

Key words：Twain 80; HPLC; Determination of Content

香丹注射液為心腦血管類疾病的臨床常用制劑，有擴(kuò)張血管，增進(jìn)冠狀動(dòng)脈血流量的作用，主要適用于冠心病、心絞痛，亦可用于心肌梗塞等。香丹注射液的主要成分有丹參、降香，輔料為吐溫80（聚山梨酯80）。

吐溫80在中藥注射劑中一般作為助溶劑，能顯著增加香丹注射液處方中植物提取物有效成分的溶解度，防止溶液渾濁而影響藥物的吸收和釋放。有報(bào)道顯示，中藥注射劑的不良反應(yīng)事件與吐溫80的含量有一定的相關(guān)性 [1-2]，香丹注射液應(yīng)用過(guò)程中比較常見(jiàn)的不良反應(yīng)，一方面是消化道的癥狀，如惡心、嘔吐等;一方面是過(guò)敏樣反應(yīng)，如皮膚發(fā)紅、發(fā)癢、頭暈等。這類癥狀與吐溫80之間存在一定的關(guān)聯(lián)性，建立吐溫80的含量測(cè)定方法，對(duì)于指導(dǎo)臨床用藥、進(jìn)行不良反應(yīng)監(jiān)控有十分重要的意義[3]。由于吐溫80屬于大分子的聚合物，而且紫外吸收較弱，很難通過(guò)常規(guī)的C18色譜柱分離檢測(cè)，本試驗(yàn)采用高效液相法、凝膠色譜柱并結(jié)合蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)香丹注射液中的吐溫80進(jìn)行了含量測(cè)定和方法學(xué)研究，對(duì)多批次的香丹注射液樣品進(jìn)行分析考察，結(jié)果證實(shí)建立的方法可有效用于香丹注射液的安全性評(píng)價(jià)和質(zhì)量分析。

1 儀器與試藥

Agilent1200 高效液相色譜儀（德國(guó)）;凝膠色譜柱（TSK gel G2000SWXL? 8.7 mm×30.0 cm）;Alltech 2000ES蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，LC-solution分析軟件;梅特勒AB204-N型電子分析天平。

吐溫80對(duì)照品（湖南和眾三立科技發(fā)展有限公司，批號(hào)R03DX0），香丹注射液（廣東新峰藥業(yè)有限公司，批號(hào)160602、160703、160903）。

甲醇、乙腈等為色譜純，純化水，醋酸銨（上?；S，批號(hào)130514），其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取吐溫80對(duì)照品適量，加流動(dòng)相0.02 mol/L醋酸銨溶液-乙腈（90∶10）定量稀釋制成每mL含5.0 mg的溶液（實(shí)際配制濃度：5.05 mg/mL），作為對(duì)照品母液。再精密量取5 mL，用流動(dòng)相定容至25 mL容量瓶中，得到濃度為1.01 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2 樣品溶液的制備 取香丹注射液，搖勻，用注射器吸取5 mL，用0.45 um微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液2 mL置樣品瓶中，即得。

2.3 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 凝膠色譜柱：（TSK gel G2000SWXL? 8.7 mm×30.0 cm），柱溫為30 ℃;以0.02 mol/L醋酸銨溶液-乙腈（90∶10）為流動(dòng)相，流速為0.6 mL/min;采用Alltech ELSD2000ES檢測(cè)器，檢測(cè)條件為：漂移管溫度120 ℃，氮?dú)饬魉?.0 L/min;進(jìn)樣量10 μL。在上述條件 [4-5]下，香丹注射液的吐溫80色譜峰與其他色譜峰達(dá)到基線分離，理論塔板數(shù)超過(guò)3000，峰形對(duì)稱。如圖1所示。

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取吐溫80對(duì)照品溶液適量置容量瓶中，加流動(dòng)相定量稀釋成0.505 、1.01 、2.02、4.04、5.05 mg/mL吐溫80的系列對(duì)照品溶液。精密吸取各種濃度對(duì)照品溶液10μL注入液相色譜儀，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積的對(duì)數(shù)值對(duì)濃度的對(duì)數(shù)值作圖，得到吐溫80的回歸方程Iny=5.5418 Inx+11.227，R2=0.9991，線性范圍為0.505～5.05 mg/mL。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為1.01 mg/mL的吐溫80對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，其相對(duì)保留時(shí)間穩(wěn)定，6次進(jìn)樣得到吐溫80峰面積的RSD為0.6%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取濃度為1.01 mg/mL的吐溫80對(duì)照品溶液10 μL，分別于0、2、4、8、10、24 h在上述色譜條件下測(cè)定。結(jié)果6次測(cè)量后，其峰面積的RSD為1.5%。表明吐溫80在24 h內(nèi)未出現(xiàn)降解，穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取香丹注射劑6份，每份精密吸取5 mL，分別精密加入1.01 mg/mL的吐溫80（Sigma）5 mL，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備溶液，樣品含量以及加入的含量詳見(jiàn)表1，并按照以上的方法學(xué)測(cè)定吐溫80的峰面積，計(jì)算得到吐溫80的平均加樣回收率為97.87%，RSD=1.8%。

2.8 樣品測(cè)定 根據(jù)以上方法學(xué)考察的結(jié)果，取不同批次的香丹注射液樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測(cè)定。分別計(jì)算每份樣品中吐溫80的含量，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 藥用輔料與不良反應(yīng)之間具有相關(guān)性 中藥注射劑在臨床上的嚴(yán)重不良反應(yīng)時(shí)有報(bào)道，和藥物本身的來(lái)源有一定的關(guān)聯(lián)，比如藥材的產(chǎn)地差異、藥材種植中引入的重金屬、農(nóng)藥殘留、植物藥材中可能產(chǎn)生的黃曲霉毒素等，同時(shí)也和中藥成分的本身的復(fù)雜性有關(guān) [6-7]，在加上藥物使用者的個(gè)體差異，引起不良反應(yīng)的過(guò)敏原具有非常多的不確定性，但藥用輔料也是其中一個(gè)不可忽視的重要環(huán)節(jié)，藥用輔料的品質(zhì)、純度、質(zhì)量、來(lái)源等，都和藥物不良反應(yīng)之間存在一定的相關(guān)性，準(zhǔn)確的定量分析研究有助于藥物的安全性評(píng)價(jià)和藥物警戒研究。

3.2 規(guī)范注射液中吐溫80含量的合理限度 吐溫80作為增溶劑，在中藥注射液中的應(yīng)用十分普遍，由于其用量與不良反應(yīng)存在相關(guān)性 [8-9]，建立樣品中吐溫80的含量可以有效控制制劑質(zhì)量，可以為臨床用藥安全提供參考標(biāo)準(zhǔn)，保證用藥安全。以上研究給出了有效的吐溫80檢測(cè)方法，限度控制研究中，還需要更多的樣品量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，樣品中也應(yīng)涵蓋不同廠家和企業(yè)，同時(shí)對(duì)藥品的原料進(jìn)行分析檢測(cè)，考察有關(guān)物質(zhì)等，為了更準(zhǔn)確合理的給出限度值，還需要結(jié)合臨床表現(xiàn)和不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，以期更科學(xué)有效的對(duì)吐溫80含量的限度進(jìn)行規(guī)范。

3.3 色譜條件的合理優(yōu)化 吐溫80是一種非離子型表面活性劑，有增溶的作用，易溶于水和甲醇、乙酸乙酯和植物油類等有機(jī)溶劑，但由于吐溫80屬于聚合物，分子量較大，不適用常規(guī)的色譜柱進(jìn)行分離，而且紫外掃描的數(shù)據(jù)表明，吐溫80也沒(méi)有明顯的紫外吸收，常規(guī)的紫外檢測(cè)器靈敏度不夠，吐溫80的含量檢測(cè)，難以用常規(guī)的色譜方法進(jìn)行分離、檢測(cè)，試驗(yàn)中探索凝膠色譜柱進(jìn)行分析，結(jié)合蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，需要對(duì)流動(dòng)相體系的適用性進(jìn)行驗(yàn)證，同時(shí)對(duì)流動(dòng)相的流速和流動(dòng)相體系中乙酸銨比例進(jìn)行了考察[10-12]，試驗(yàn)中對(duì)比分析了醋酸銨-乙腈體系以及磷酸鹽緩沖液體系，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，選擇0.02 moL/L醋酸銨溶液-乙腈（90∶10）體系作為流動(dòng)相可以有效的改善色譜峰型，當(dāng)流速為0.6 mL/min時(shí)，色譜圖基線平穩(wěn)，分離效果最佳，出峰時(shí)間合理。

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（收稿日期：2021-06-22 編輯：劉 斌）

作者簡(jiǎn)介：鞏曉宇（1983-），女，漢族，碩士，副主任中藥師，研究方向?yàn)橹兴庂Y源與鑒定。E-mail： xiaoyu123126@163.com

通信作者：陸燕萍（1964-），女，漢族，本科，主任中藥師，研究方向?yàn)橹兴庂Y源與鑒定。E-mail：luyanp317@163.com