林文明 陳曉艷 陳貴娥 孫陽(yáng) 劉鐵明 董明芝 李宇華,

(1.中國(guó)人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)海軍第一醫(yī)院藥劑科，廣東 湛江 524005；2.空軍軍醫(yī)大學(xué)藥理學(xué)教研室/國(guó)家中藥胃腸藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 西安710032；3.西安正大制藥有限公司，陜西 西安 710032)

胃腸動(dòng)力障礙是功能性消化不良(FD)的主要病理生理基礎(chǔ)[1]。臨床上對(duì)胃腸動(dòng)力障礙的治療主要以促動(dòng)力藥、助消化藥、抑酸藥、抗幽門(mén)螺桿菌藥物等為主；近些年來(lái)，中醫(yī)藥在治療胃腸動(dòng)力障礙上療效確切、不良反應(yīng)小，故在臨床上應(yīng)用廣泛[2]。艽龍膠囊的有效成分為中藥秦艽中提取的龍膽總苷，具有清肝泄熱之功效，臨床上用于功能性消化不良屬肝胃郁熱證者，療效顯著，不良反應(yīng)少[3]。本文旨在探討艽龍膠囊對(duì)小鼠胃腸動(dòng)力的影響，為臨床治療提供新的思路。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物與藥物 昆明種小鼠60只(雌雄各半，雌性未孕)，體質(zhì)量20～25 g，由空軍軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK(軍)2015-0007。艽龍膠囊，0.08 g/粒(西安正大制藥有限公司，批號(hào)160202)；多潘立酮片(嗎丁啉)，10 mg/片(西安楊森制藥有限公司，批號(hào)：151203)。

1.2試劑與儀器 鹽酸左旋精氨酸(北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司，批號(hào)150905)，活性碳(成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)20061030)，血漿胃動(dòng)素EILISA測(cè)定試劑盒(上海索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)DRE30082)，血管活性腸肽EILISA測(cè)定試劑盒(上海索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)DRE30543)，NO試劑盒(上海索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)DRE30105)；電子天平(ME204，METTLER公司)、光學(xué)顯微鏡(Nikon H600L，日本Nikon公司)、酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀、低速臺(tái)式離心機(jī)。半固體營(yíng)養(yǎng)糊的配制：羧甲基纖維素鈉10 g溶于250 mL蒸餾水中，分別加入蔗糖12 g、奶粉16 g、淀粉10 g，攪拌均勻后，加入活性炭末2 g，配制成300 mL的黑色半固體糊，4℃冰箱儲(chǔ)存，用前取出恢復(fù)至室溫。

1.3方法 將60只昆明小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、嗎丁啉對(duì)照組、艽龍膠囊低、中、高3個(gè)劑量組(30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg)，每組10只，雌雄各半。從實(shí)驗(yàn)第1天開(kāi)始，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組給予蒸餾水，10 ml/kg灌胃，1次/d，連續(xù)7 d；嗎丁啉對(duì)照組1.4 mg/kg給藥，1次/d，連續(xù)7 d；艽龍膠囊分別按30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg給藥，1次/d，連續(xù)7 d。胃腸動(dòng)力模型復(fù)制參照李瓊等[4]實(shí)驗(yàn)方法基礎(chǔ)上改良，即模型組及各給藥組在實(shí)驗(yàn)第4天以1.5 g/kg劑量腹腔注射左旋精氨酸注射液，第5、6、7天腹腔注射左旋精氨酸注射液0.75 g/kg復(fù)制胃腸動(dòng)力障礙模型，每日先腹腔注射左旋精氨酸1 h后灌胃給藥。

1.4觀察指標(biāo) 一般情況觀察：動(dòng)物生長(zhǎng)狀況、糞便性狀、被毛色澤、自主活動(dòng)、行為活動(dòng)。平均體質(zhì)量和平均攝食量觀察。胃腸運(yùn)動(dòng)功能的測(cè)定：于給藥第6天晚上，禁食不禁飲水，次日腹腔注射左旋精氨酸1 h后給藥，1 h后按0.8 mL/只灌胃半固體營(yíng)養(yǎng)糊，15 min后麻醉動(dòng)物，打開(kāi)腹腔，腹主動(dòng)脈采血，肝素抗凝，收集血漿，按以下方法取樣并計(jì)算小鼠胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率。(1)胃內(nèi)殘留率：結(jié)扎賁門(mén)部和幽門(mén)下端，取出胃，用生理鹽水沖洗胃表面的血漬，稱(chēng)全重，然后沿胃大彎剪開(kāi)胃體，洗去胃內(nèi)容物后在濾紙上擦干，稱(chēng)重，計(jì)算胃內(nèi)殘留率(%) =胃全重(g)-胃凈重(g)/炭末混懸液灌胃總質(zhì)量(g) ×100%。(2)小腸推進(jìn)率：摘取小腸管：上端至幽門(mén)下端，下端至回盲部；測(cè)量小腸全長(zhǎng)和半固體糊在小腸中的推進(jìn)距離，計(jì)算小腸推進(jìn)率(%) =幽門(mén)部到炭末前沿的長(zhǎng)度(cm)/小腸總長(zhǎng)度(cm) ×100%。分離血漿生化指標(biāo)：4℃，2 000 r/min，離心15 min，收集血漿，置于-80℃保存；按照試劑盒要求進(jìn)行血漿胃動(dòng)素(MTL)和一氧化氮(NO)測(cè)定。

2 結(jié) 果

2.1一般情況觀察 在給予左旋精氨酸注射液前，正常組、模型組及各給藥組小鼠未見(jiàn)活動(dòng)異常、糞便異常及毛色改變，當(dāng)在第5天，第二次給藥左旋精氨酸注射液造模后，模型組小鼠出現(xiàn)毛色不光澤、毛發(fā)豎起的改變。正常組和各給藥組無(wú)異常表現(xiàn)，均未出現(xiàn)死亡小鼠。

2.2平均體重和平均攝食量觀察 小鼠體質(zhì)量在第4天給予左旋精氨酸后，模型組小鼠體重在造模后表現(xiàn)為下降趨勢(shì)，艽龍膠囊各給藥組及嗎丁啉組小鼠體重?zé)o明顯下降，由此表明，艽龍膠囊和嗎丁啉顯著改善小鼠胃腸動(dòng)力功能，減緩小鼠體重下降(見(jiàn)圖1)。小鼠攝食量在給予左旋精氨酸注射液造模后，與模型組比較，給藥組攝食量均呈上升趨勢(shì)。其中艽龍膠囊高劑量組小鼠攝食量明顯上升，與嗎丁啉組小鼠攝食量基本一致，表明艽龍膠囊增加了左旋精氨酸誘導(dǎo)的胃腸動(dòng)力障礙小鼠攝食量，明顯改善小鼠的胃腸動(dòng)力功能(見(jiàn)圖2)。

注：A.雌性小鼠體重變化；B.雄性小鼠體重變化。圖1 各組小鼠體重變化圖

注：A.雌性小鼠攝食量變化；B.雄性小鼠攝食量變化。圖2 各組小鼠攝食量變化圖

2.3胃腸運(yùn)動(dòng)功能的測(cè)定 與正常組比較，給予左旋精氨酸注射液造模后，模型組小鼠胃內(nèi)殘留率明顯增加，推進(jìn)率明顯降低；與模型組相比，艽龍膠囊中、高劑量組胃內(nèi)殘留率明顯降低，小腸推進(jìn)率明顯增加。見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠胃內(nèi)碳末混懸糊胃內(nèi)殘留率及小腸推進(jìn)率比較

2.4血漿生化水平 與正常組比較，給予左旋精氨酸注射液造模后，模型組小鼠血漿中MTL含量明顯降低，NO含量明顯升高；與模型組相比，艽龍膠囊中高劑量組均可明顯升高小鼠血漿中MTL含量和降低小鼠血漿中NO含量。見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠血漿中MTL和NO含量比較

3 討 論

FD是臨床常見(jiàn)病和多發(fā)病，50%以上的FD患者存在胃固體排空延緩，近端胃及胃竇運(yùn)動(dòng)異常，幽門(mén)十二指腸運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)失常等胃腸動(dòng)力障礙的表現(xiàn)[5]。胃腸動(dòng)力障礙受胃腸激素(如MTL)、NO及某些藥物等多種因素的影響[6]。MTL、NO等神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)起興奮或抑制作用，如果這些遞質(zhì)的分泌比例失調(diào)，勢(shì)必導(dǎo)致胃的運(yùn)動(dòng)功能障礙[7]。MTL是由胃黏膜內(nèi)分泌細(xì)胞分泌[8]，同時(shí)存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和消化系統(tǒng)的一種活性肽類(lèi)激素，又稱(chēng)為“腦腸肽”，是調(diào)控胃腸運(yùn)動(dòng)的重要激素[9]。MTL可以使胃體、胃竇和幽門(mén)不同部位的肌細(xì)胞強(qiáng)烈收縮，并能誘發(fā)胃和小腸的移行性運(yùn)動(dòng)復(fù)合波MMCⅢ相，導(dǎo)致胃產(chǎn)生明顯的收縮運(yùn)動(dòng)和小腸明顯的分節(jié)運(yùn)動(dòng)，對(duì)胃排空有一定的促進(jìn)作用。MTL的釋放量與胃活動(dòng)有著密切的關(guān)系，MTL釋放減少時(shí)，胃蠕動(dòng)減慢；MTL釋放增加時(shí)，胃蠕動(dòng)加快[10]。NO為胃腸道非腎上腺能非膽堿(NANC)能神經(jīng)的主要抑制性遞質(zhì)之一[11]。NO是由左旋精氨酸在一氧化氮合成酶(NOS)作用下產(chǎn)生，NOS催化左旋精氨酸轉(zhuǎn)化為瓜氨酸和NO，可調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)[1]。有研究[6-7]證明，NO在胃底基礎(chǔ)張力、食物進(jìn)入胃生理性擴(kuò)張及腸蠕動(dòng)的生理性下行性抑制作用等方面均有參與，NO通過(guò)介導(dǎo)平滑肌來(lái)保護(hù)胃腸道黏膜的功能：NO增多，平滑肌松弛，抑制胃蠕動(dòng)，從而產(chǎn)生動(dòng)力障礙；NO減少，平滑肌收縮，增加胃蠕動(dòng)，減緩消化不良的癥狀，并可以同時(shí)調(diào)節(jié)胃腸道的分泌功能。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，艽龍膠囊不僅使胃腸功能障礙小鼠的攝食量增加，胃內(nèi)殘留率明顯降低，小腸推進(jìn)率明顯增加，還明顯升高小鼠血漿中MTL含量和降低小鼠血漿中NO含量，表明艽龍膠囊具有明顯促胃腸排空作用并改善胃腸動(dòng)力功能。

艽龍膠囊是臨床處方藥，用于FD屬肝胃郁熱證者，癥見(jiàn)胃脘飽脹、脘部燒灼、口干口苦，臨床常用日劑量為0.48 g，分3次口服。有研究[12]顯示，艽龍膠囊在2290例的臨床試驗(yàn)中，發(fā)生的不良反應(yīng)輕，均為不常見(jiàn)或罕見(jiàn)，主要表現(xiàn)為輕微的消化道自覺(jué)癥狀，未發(fā)生嚴(yán)重的不良事件，安全性評(píng)價(jià)良好。本實(shí)驗(yàn)主要是探究艽龍膠囊治療功能性消化不良的機(jī)制，發(fā)掘其新的臨床適應(yīng)癥。此外，本實(shí)驗(yàn)劑量設(shè)置是依據(jù)臨床劑人用劑量，即：60 kg成人為0.48 g/d，約8 mg/kg， 以人與動(dòng)物體表面積換算，小鼠劑量約為60 mg/kg，取其為中劑量，分別設(shè)計(jì)小劑量30 mg/kg和大劑量120 mg/kg。在本實(shí)驗(yàn)中，連續(xù)給予小鼠灌胃艽龍膠囊，三個(gè)劑量組均未出現(xiàn)死亡小鼠，其體質(zhì)量、攝食量等與正常組比較無(wú)差異，一定程度上反應(yīng)其毒副作用小或無(wú)。為進(jìn)一步明確實(shí)驗(yàn)中使用劑量是否有毒副作用，我們將在后續(xù)研究中闡明。