劉夢(mèng)珂，劉世軍，梁玉杰，易前名，歐升源，高毅權(quán)，孫歡歡

(陜西中醫(yī)藥大學(xué) 陜西省中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中心 秦藥特色資源研究開發(fā)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(培育)陜西省創(chuàng)新藥物研究中心，陜西 咸陽 712083)

棗葉為鼠李科植物棗(ZiziphusjujubaMill.)的干燥葉。大棗全國各地廣為栽培，且栽培品種甚多[1]。原產(chǎn)于我國，現(xiàn)亞洲、歐洲和美洲也常有栽培。具有清熱解毒的功效。臨床常用于小兒發(fā)熱，瘡癤，熱痱，爛腳，燙火傷[2]?！睹t(yī)別錄》載：“棗葉，散服使人瘦，久即嘔吐，揩熱痱瘡良”。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，大棗含有三萜類、皂苷類、生物堿類、黃酮類、糖苷類、核苷類、糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸類、維生素類、酰胺類、有機(jī)酸類、甾體類等成分[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明，棗葉具有保肝[4]、抑制肥胖[5,6]、降脂[7]、抗氧化[8]等作用。特別是有人發(fā)現(xiàn)大棗葉70%乙醇提取物具有減肥作用[5, 6]，這與《名醫(yī)別錄》中的“棗葉，散服使人瘦”相一致。本實(shí)驗(yàn)對(duì)棗葉的減肥活性成分的提取工藝進(jìn)行研究，為其后續(xù)研究提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

干燥大棗葉(陜西省合陽縣)；無水乙醇(安徽安特食品股份有限公司)；蒸餾水。

1.2 儀器與設(shè)備

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海科恒實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司)；循環(huán)水式多用真空泵(河南省予華儀器有限公司)；精密天平(深圳市賽德力檢測(cè)設(shè)備有限公司)；圓底燒瓶、冷凝管、量筒、燒杯、布氏漏斗、循環(huán)式真空泵、濾紙。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 單因素實(shí)驗(yàn) 分別以提取時(shí)間、提取次數(shù)及料液比進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，以棗葉浸膏得率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1.3.1.1 提取時(shí)間的確定

取粉碎棗葉50.0 g平均分為五份，用70%的乙醇提取1次，料液比為1:6，分別提取0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h，合并濾液，進(jìn)行抽濾定容，按1∶10的比例取濾液于干燥至恒重并稱定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸發(fā)至干，105℃條件下干燥3 h，置于干燥器中冷卻30min，迅速稱重，以其浸膏得率作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。、；浸膏得率(%)=[(m2-m0)n/m1100%

式中：m0蒸發(fā)皿重量(g)；m1供試品重量(g)；m2干燥后蒸發(fā)皿+樣品重量(g)；n=10(定容后濾液提取比例)

1.3.1.2 提取次數(shù)的確定

取粉碎棗葉50.0 g平均分為五份，用70%的乙醇提取0.5 h，料液比為1:6，分別提取1次、2次、3次、4次、5次，合并濾液，按照1.3.1.1項(xiàng)下合并濾液后步驟處理。

1.3.1.3 料液比的確定

取粉碎棗葉50.0 g平均分為五份，用70%的乙醇提取0.5 h，提取1次，料液比分別為1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14，合并濾液，按照1.3.1.1項(xiàng)下合并濾液后步驟處理。

1.3.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)。分別取干燥粉碎棗葉10.0 g(9份)，進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)[9]，以提取時(shí)間(A)、提取次數(shù)(B)、料液比(C)影響因素進(jìn)行考察，實(shí)驗(yàn)因素水平見表1，按正交試驗(yàn)表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

表1 因素水平

1.3.3 提取路線

干棗葉→揉碎→醇提→抽濾→定容→濃縮→烘干。

1.3.4 浸膏的提取方法 選取干棗葉，去除雜質(zhì)，揉碎。稱取10.0 g后，置于圓底燒瓶中，根據(jù)正交設(shè)計(jì)方法加70%乙醇回流提取，合并濾液，按照1.3.1.1項(xiàng)下合并濾液后步驟處理。

2 結(jié)果與討論

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1 提取時(shí)間對(duì)浸膏得率的影響 由圖1可知，浸膏得率隨著提取時(shí)間的增加，出現(xiàn)上升趨勢(shì)。即棗葉提取時(shí)間從0.5 h增加到1.5 h時(shí)，浸膏得率從11.13%上升到17.44%；提取時(shí)間增加到2 h時(shí)，浸膏得率無明顯升高；當(dāng)提取時(shí)間增加到2.5 h時(shí)，圖像逐漸趨于平緩，浸膏得率不再明顯增加。從圖1中數(shù)據(jù)可知，棗葉提取時(shí)間為2.5 h時(shí)，浸膏得率最大，與提取時(shí)間為2h的浸膏得率無明顯差異。因此，棗葉最佳的提取時(shí)間為2 h。

圖1 提取時(shí)間對(duì)浸膏得率的影響

2.1.2 提取次數(shù)對(duì)浸膏得率的影響 由圖2可知，浸膏得率隨著提取次數(shù)的增加，出現(xiàn)上升趨勢(shì)。即當(dāng)棗葉提取次數(shù)從1次增加到4次時(shí)，浸膏得率從12.46%上升到 28.37%；提取次數(shù)上升到5次時(shí)，圖像逐漸趨于平緩，浸膏得率無明顯升高。從圖中數(shù)據(jù)可知，提取次數(shù)為5次時(shí)，浸膏得率最大，與提取次數(shù)為4次的浸膏得率無明顯差異。因此，棗葉最佳提取次數(shù)為4次。

圖2 提取次數(shù)對(duì)浸膏得率的影響

2.1.3 料液比對(duì)浸膏得率的影響 由圖3可知，浸膏得率隨著料液比的增加，出現(xiàn)上升趨勢(shì)。即當(dāng)料液比從1∶6增加到1∶10時(shí)，浸膏得率從14.85%上升到 21.61%；料液比上升到1∶14時(shí)，圖像逐漸趨于平緩，浸膏得率無明顯升高。從圖中數(shù)據(jù)可知，料液比為1∶14時(shí)，浸膏得率最大，與料液比為1∶10的浸膏得率無明顯差異。因此，棗葉最佳的料液比為1∶10。

圖3 料液比對(duì)浸膏得率的影響

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2和表3數(shù)據(jù)分析可以看出，對(duì)浸膏得率指標(biāo)影響最大為因素B。以浸膏得率為考察依據(jù)來看，可以看出各因素影響得率的主次順序?yàn)锽>A>C。因素B的極差最大，是影響浸膏得率的主要因素。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果分析

表3 方差分析結(jié)果

經(jīng)方差分析，因素A、B對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著影響，因素C影響不顯著。結(jié)合表2的直觀分析，優(yōu)選工藝為A3B3C3，但考慮到生產(chǎn)中實(shí)際情況，節(jié)約成本，確定其優(yōu)選工藝為A3B3C1，即用1:8的料液比先后提取4次，每次2 h。按此提取條件做三批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表4所示，與正交試驗(yàn)結(jié)果基本一致，說明此提取工藝穩(wěn)定可行。

表4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

本實(shí)驗(yàn)通過正交試驗(yàn)優(yōu)選提取時(shí)間為2 h，回流次數(shù)為4次，料液比為1:8作為大棗葉的最佳提取方法，這為大棗葉減肥活性成分提取工藝的參數(shù)確定提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為棗葉相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)奠定了一定的基礎(chǔ)。

3.2 實(shí)驗(yàn)意義

本項(xiàng)目研究優(yōu)選大棗葉中減肥活性成分的提取工藝，使大棗葉資源得到最大化利用，減緩資源浪費(fèi)和環(huán)境污染。另外，選用乙醇提取棗葉中減肥成分，保證了減肥產(chǎn)品的無害性，為綠色健康減肥產(chǎn)品的研發(fā)提供依據(jù)。

4 結(jié)論

本文探究了大棗葉中減肥活性成分的最佳提取工藝，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上利用正交試驗(yàn)進(jìn)行分析。分析結(jié)果表明提取次數(shù)為4次，提取時(shí)間為2 h， 料液比為1:8為最佳提取工藝。 采用最佳提取條件進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，實(shí)際測(cè)得棗葉的浸膏得率與預(yù)測(cè)值誤差相對(duì)較小，結(jié)果合理。本實(shí)驗(yàn)可以為開發(fā)大棗葉系列減肥產(chǎn)品奠定一定的基礎(chǔ)。