王育紅 賈新彥 孫瑞林 馬嬌豪

摘要：枳椇子是我國傳統(tǒng)的藥食同源植物資源，在保健食品、調(diào)味品、醫(yī)藥等領(lǐng)域具有廣闊的開發(fā)利用價(jià)值，黃酮類物質(zhì)是其主要活性成分之一。在綜述了目前枳椇子總黃酮的提取方法及生物活性研究基礎(chǔ)上，展望了未來研究方向，為深入開發(fā)利用枳椇子資源提供支持。

關(guān)鍵詞：枳椇子;黃酮類物質(zhì);提取方法;功效;研究進(jìn)展

枳椇子為鼠李科枳椇屬植物北枳椇、枳椇和毛果枳椇的干燥成熟種子，又稱拐棗子、雞爪子等，屬藥食同源資源。枳椇屬植物在我國海拔2100m以下的開曠地、山坡林緣或疏林地帶均有分布，也有作為庭院觀賞樹木栽種。枳椇子富含糖類、氨基酸等多種營養(yǎng)成分[1]，而且還含有不少功能活性因子，例如，黃酮類、多糖、萜類等。據(jù)《本草綱目》記載，枳椇子具有“止嘔逆、解酒毒、解蟲毒”等功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí)黃酮類物質(zhì)是枳椇子中的主要活性成分之一。

黃酮類化合物（Flavonoids） 原指是以2-苯基色原酮（現(xiàn)指具有C6-C3-C6結(jié)構(gòu)） 為骨架衍生的一大類酚類化合物，廣泛存在于自然界的植物中，屬植物次生代謝產(chǎn)物。大量研究表明，黃酮類化合物具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、降血壓、降血糖、抗胃潰瘍、抗心肌缺血以及保護(hù)神經(jīng)與生殖組織、改善記憶等藥理作用[2]。

黃酮類化合物具有的較高生物活性，吸引了國內(nèi)外大量學(xué)者和技術(shù)人員的關(guān)注，在其提取、分離純化、成分鑒別、生物活性、改性修飾及應(yīng)用等方面開展了大量研究。為了進(jìn)一步拓寬黃酮類化合物應(yīng)用資源范圍，彌補(bǔ)傳統(tǒng)藥源的不足，有關(guān)枳椇子的方劑應(yīng)用及其關(guān)鍵功效成分——黃酮類化合物的研究也如火如荼地開展起來。本文綜述了近年來枳椇子在黃酮類化合物提取和活性方面的研究現(xiàn)狀，為枳椇子資源的深度開發(fā)利用提供參考。

一、枳椇子中黃酮類物質(zhì)的提取研究現(xiàn)狀

黃酮類化合物在植物體內(nèi)的存在形式有兩種，分別是游離型和結(jié)合型，其中以與糖結(jié)合成苷的形式為主，將其從植物體內(nèi)提取出來是開展后續(xù)研究的基礎(chǔ)。目前，枳椇子總黃酮的提取方法主要有以下幾種。

（一） 溶劑提取法

溶劑提取法是依據(jù)“相似相溶”原理，溶劑在滲透、擴(kuò)散作用下，逐漸通過細(xì)胞壁滲入植物組織細(xì)胞內(nèi)，黃酮類物質(zhì)成分?jǐn)[脫束縛溶解進(jìn)入溶劑，從而得到提取[3]。

張會(huì)香等[4]研究了水和乙醇溶液兩種不同溶劑對提取枳椇子中總黃酮的影響，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使用50%乙醇溶液的提取率比用水提高了39.65%，提取溫度和溶劑使用量分別下降了20%與25%，并有助于保持黃酮物質(zhì)結(jié)構(gòu)的完整和后續(xù)濃縮的便利。

（二） 熱回流提取法

僅采用溶劑提取有效成分，存在提取率低、目標(biāo)成分選擇性不高等不足之處。升高提取溫度可以有效促進(jìn)溶劑分子的運(yùn)動(dòng)速度，促進(jìn)有效成分的溶出，減少提取時(shí)間，增加提取率。因而，目前總黃酮物質(zhì)的傳統(tǒng)提取方法多采用熱回流提取法。

文為[5]等研究發(fā)現(xiàn)，采用75%乙醇溶液熱回流提取枳椇子中總黃酮要優(yōu)于水，浸膏得率增加了16.12%，且其中的總黃酮含量增加近一倍;采取正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化熱回流提取工藝，最佳工藝條件為8倍量75%乙醇溶液，提取2h。該工藝與傳統(tǒng)滲漉法相比，提取的總黃酮可明顯降低肝勻漿中MDA（丙二醛） 的含量，活性更強(qiáng)。郭林平等[6]使用70%乙醇溶液熱回流兩次提取枳椇子總黃酮，也取得了較好的提取效果，其研究發(fā)現(xiàn)該法簡單可靠，可進(jìn)行推廣生產(chǎn)。以上研究均采用熱回流提取法，不同提取試劑試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，黃酮類化合物水溶性差，可溶于甲醇、乙醇或稀堿水溶液中，由于乙醇成本低、易回收、毒性小、環(huán)境影響小，作為其提取劑具有很好的經(jīng)濟(jì)性和可行性[7]。

（三） 微波輔助提取法

微波輔助提取法是將微波技術(shù)與溶液浸提法結(jié)合，借助微波能加熱植物細(xì)胞內(nèi)的水等極性物質(zhì)，升高細(xì)胞內(nèi)部溫度，使水汽化導(dǎo)致細(xì)胞破裂，黃酮類物質(zhì)成分?jǐn)[脫束縛溶解進(jìn)入提取溶劑，達(dá)到高效提取的目的[8-9]。

黎莉等[10]通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，分別研究了枳椇子浸泡時(shí)間、微波輻射功率、微波作用時(shí)間和乙醇濃度對枳椇子總黃酮提取率的影響，結(jié)果顯示，使用50%的乙醇溶液浸泡枳椇子0.5h，在400W 的微波作用下提取0.4h，提取工藝最佳，總黃酮得率為2.18%，優(yōu)于傳統(tǒng)的熱回流法。微波輔助提取法具有萃取時(shí)間短、提取溶劑少、提取效率高和綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。周蘭姜[11]采用正交試驗(yàn)法篩選最佳工藝條件，試驗(yàn)結(jié)果是10倍量50%乙醇水溶液濃度、300W微波輻射0.33h，提取物中總黃酮含量為1.46%。試驗(yàn)表明，與熱回流相比，微波輔助法具有縮短提取時(shí)間、提高提取效率等優(yōu)勢。

（四） 超聲波輔助提取法

超聲波輔助提取法是將超聲波技術(shù)與溶液浸提法結(jié)合，借助超聲波產(chǎn)生的機(jī)械振動(dòng)作用和空化作用，加速植物原料中黃酮類物質(zhì)成分的釋放與溶出，從而提高提取率。

胡志林等[12]通過單因素以及正交試驗(yàn)對枳椇子總黃酮進(jìn)行了超聲波提取的工藝研究，研究表明，最佳工藝條件為8倍量的70%乙醇提取1.5h，重復(fù)三次，浸膏收率與總黃酮含量均最優(yōu)。于修燭等[13]采用超聲波輔助提取枳椇子總黃酮，并采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)法對提取條件進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明，超聲波功率為374.4W、料液比為1∶69.4g/mL、乙醇水溶液濃度為64.5%，黃酮得率達(dá)到0.819%，提取效果最佳，具有應(yīng)用優(yōu)勢。田智勇等[14]通過單因素和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對超聲波輔助提?。?0～40目） 干燥的枳椇子總黃酮的最佳提取工藝進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，使用70%乙醇水溶液、料液比1∶14g/mL，在160W超聲波作用下，保溫70℃提取1h，粗提液中總黃酮含量最高，達(dá)到1.17mg/g。試驗(yàn)表明，超聲提取優(yōu)勢明顯，快速高效。張凰[15]在單因素的基礎(chǔ)上選取乙醇濃度、提取溫度、提取時(shí)間3個(gè)因素，采用響應(yīng)面法優(yōu)化枳椇子總黃酮提取工藝， 其最佳工藝條件為： 乙醇濃度68.9% ， 提取溫度50.24℃， 提取時(shí)間0.57h， 得率可達(dá)3.528%，研究表明，超聲輔助提取技術(shù)具有高效、節(jié)能、省時(shí)、簡便等特點(diǎn)。以上研究均采用超聲波輔助法進(jìn)行提取，提取效果和黃酮得率均優(yōu)于熱回流。因此，超聲輔助法提取枳椇子黃酮完全可行。前人的研究結(jié)果可以作為后續(xù)提取工藝研究的參考范圍，以便進(jìn)一步優(yōu)化工藝，獲得更好提取效果。

二、枳椇子中黃酮類物質(zhì)的生物活性和保健功能研究現(xiàn)狀

（一） 抗氧化作用

有研究發(fā)現(xiàn)枳棋子的療效與其含有的黃酮類等物質(zhì)成分的抗氧化作用密切相關(guān)。黃蕭天等[16]研究發(fā)現(xiàn)，70%乙醇提取的粗黃酮浸膏（黃酮含量為7.75%） 和經(jīng)精制的黃酮浸膏（黃酮含量為20.87%） 對DPPH·、超氧陰離子和羥自由基均有一定的清除作用，且呈明顯的正相關(guān)。其中，枳椇子的粗黃酮和精制黃酮對DPPH·均具有高于Vc的強(qiáng)清除作用，當(dāng)濃度0.05mg/mL時(shí)，其黃酮的清除率均達(dá)到85%，且在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，兩者的清除效果基本一致;枳椇子粗黃酮和精制黃酮對超氧陰離子自由基的清除效果要高于陽性對照Vc，且精制黃酮的效果最好，當(dāng)濃度為2.00mg/mL時(shí)，最高清除率達(dá)到22.89%，總體來說清除超氧陰離子自由基的效果并不理想;在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，兩種黃酮對羥基自由基的清除效果總體弱于Vc，但在2.00mg/mL濃度時(shí)，精制黃酮清除能力卻最強(qiáng)，達(dá)到36.03%。兩種黃酮相比，精制效果顯著高于粗制黃酮，且在1.2～2.0mg/mL時(shí)，兩種黃酮清除率增長的趨勢強(qiáng)勁。試驗(yàn)結(jié)果表明，枳椇子黃酮具有較高的體外抗氧化活性。謝三都[17]等研究了枳椇子黃酮物質(zhì)清除羥基、超氧、DPPH·、ABTS等自由基的能力，研究結(jié)果表明，枳椇子黃酮物質(zhì)與抗氧化能力有很強(qiáng)的相關(guān)性。

（二） 解酒作用

《本草綱目》記載了枳椇子可解酒毒的故事，而且其已用于多種解酒保肝組方，現(xiàn)在還有不少研究表明，枳椇子具有較強(qiáng)的解酒保肝活性[18]，可能與其中的黃酮類化合物有關(guān)，但具體作用機(jī)制并不清楚。張會(huì)香等[19]研究枳椇子黃酮物質(zhì)的體外酒精和動(dòng)物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以一定比例將濃縮提取液與56%的白酒混合，并以純水為對照，兩種比例混合液的酒精濃度均有顯著下降，表明枳椇子總黃酮具有較明顯的體外解酒作用。構(gòu)建小鼠醉酒動(dòng)物模型，以一定濃度的枳椇子總黃酮濃縮液進(jìn)行灌胃，以蒸餾水為空白對照，在小鼠灌酒后不同時(shí)間點(diǎn)采集其眼底靜脈血，測定血醇體積分?jǐn)?shù)，研究其解酒效果。在小鼠灌酒1.5h后，灌注濃縮液小鼠的血醇體積分?jǐn)?shù)顯著低于空白，說明其具有降低醉酒動(dòng)物血中乙醇濃度的作用，但解酒機(jī)理尚不明確。

三、小結(jié)與展望

枳椇子是我國傳統(tǒng)的藥食同源原料，在我國分布廣、資源豐富，但總體開發(fā)利用層次不高，深加工產(chǎn)品欠缺。隨著我國邁入老齡化社會(huì)的加快，老年性疾病患者人數(shù)大幅增加，使用各種活性成分研發(fā)保健食品以提高居民免疫力、預(yù)防疾病和改善生活質(zhì)量已是大勢所趨。黃酮是枳椇子的主要活性成分，研究其提取工藝、生物活性及保健作用，對于開發(fā)枳椇子精深加工制品、提高產(chǎn)品附加值及延伸枳椇子的產(chǎn)業(yè)鏈條具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

從枳椇子總黃酮的研究現(xiàn)狀來看，總體上還較為薄弱，提取方法僅限溶劑、熱回流、超聲波輔助、微波輔助等幾種提取方法，而在其他品種黃酮提取中已應(yīng)用的新型方法，例如，超臨界萃取[20]、超高壓萃取[21]、閃式技術(shù)[22]和酶法[23]等尚未見報(bào)道，這些方法一般具有高效、環(huán)保、提取產(chǎn)品活性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，未來在枳椇子總黃酮的提取研究中發(fā)展空間巨大。同時(shí)，應(yīng)深入拓展枳椇子黃酮類物質(zhì)的生物活性研究，開展其成分鑒別、活性作用機(jī)制及生物利用度等方面研究，進(jìn)一步明確其應(yīng)用價(jià)值，為枳椇子相關(guān)產(chǎn)品的深層次開發(fā)提供依據(jù)。

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基金項(xiàng)目：2020年度河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院科學(xué)研究一般項(xiàng)目“枳椇子中黃酮類物質(zhì)的提取鑒別與體外抑制糖尿病關(guān)鍵酶的活性研究”，項(xiàng)目編號：HNCAKY-2020-06。

作者簡介：王育紅（1972-），男，河南汝陽人，副教授，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品精深加工。

（責(zé)任編輯 曹雯梅）