易筑剛，陳春旭，易金，蔡靜云，王遵

(1.遵義市林業(yè)科學(xué)研究所,貴州 遵義 563000；2.遵義華粟環(huán)境設(shè)計工程有限公司，貴州 遵義 563000)

PDA培養(yǎng)基，即馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PotatoDextroseAgar Medium的簡稱)，是一種常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，能滿足絕大多數(shù)真菌的基本生長要求。按傳統(tǒng)方法制取馬鈴薯汁，其制備過程繁瑣、耗時長，最主要的是扔掉了馬鈴薯大量的內(nèi)含物和微量元素，造成極大浪費(fèi)。

針對PDA培養(yǎng)基制備中的這些問題，市場上出現(xiàn)了直接用馬鈴薯淀粉或馬鈴薯浸出粉取代傳統(tǒng)的馬鈴薯汁，如北京奧博星生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基和寧夏啟元藥業(yè)有限公司的霉菌培養(yǎng)基(專利申請?zhí)枮椋?01310594078.6)都是采用馬鈴薯浸出粉代替馬鈴薯汁，馬鈴薯浸出粉是馬鈴薯的酶解產(chǎn)物，主要為微生物培養(yǎng)提供碳源和氮源。然而就其工藝流程來說，仍然除去了馬鈴薯的大部分淀粉和蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)，最為主要的是生產(chǎn)成本高、價格相當(dāng)昂貴，難以得到廣泛應(yīng)用。

因此，尋找一種操作簡便、原料利用率高、成本低且效果較好的培養(yǎng)真菌方法，成為實(shí)驗室工作急需解決的問題。為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述技術(shù)問題，利用馬鈴薯富含營養(yǎng)物質(zhì)和內(nèi)含物特性，本文進(jìn)行了馬鈴薯全營養(yǎng)基質(zhì)培養(yǎng)真菌實(shí)驗。

1 材料與方法

1.1 材料

松乳菇真菌純培養(yǎng)液、馬鈴薯、濾紙、葡萄糖、中速雙圈定性濾紙、載玻片、試管、打孔器。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗準(zhǔn)備

(1)接種元制備：用打孔器將濾紙打成直徑0.3 cm的圓片，得到接種元，將其裝在試管內(nèi)用膠塞塞緊管口；

(2)全營養(yǎng)基質(zhì)制備：馬鈴薯洗凈，切成7 cm×2.5 cm×0.2 cm切片；

(3)介質(zhì)紙片制備：用中速雙圈定性濾紙剪成8 cm×2.5 cm紙片；

(4)碳源制備：將葡萄糖、可溶性淀粉、80目熟玉米粉分別按40 g/L含量制備水溶液(ph值自然)

1.2.2 實(shí)驗處理

(1)介質(zhì)紙片在碳源溶液內(nèi)充分浸濕，貼在全營養(yǎng)基質(zhì)片上， 再貼放到載玻片上(介質(zhì)朝上)， 用鑷子裝進(jìn)試管內(nèi)，沿管壁滴加1.5 mL相應(yīng)碳源溶液，每種碳源設(shè)置3個重復(fù)，塞緊試管口；

(2)設(shè)置2種對照：一是用清水替換碳源溶液，二是直接用PDA固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，分別設(shè)置3個重復(fù)；

(3)滅菌：將上述處理及接種元以0.103 MPa，121 ℃，高壓蒸氣滅菌30 min；

(4)接種：滅菌后的材料置無菌操作臺中冷卻至室溫，將接種元放進(jìn)真菌純培養(yǎng)液內(nèi)浸透，用接種針挑取接種元接種在培養(yǎng)介質(zhì)上(2個接種元)，塞緊管口；

(5)培養(yǎng)：將接種好的試管，置相對濕度80%、溫度28 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱內(nèi)，介質(zhì)紙片朝上傾斜20°～30°，靜置培養(yǎng)。

1.2.3 觀察記錄

(1)采用定性描述方法記錄各處理菌絲的平均生長情況，包括菌絲長度、菌絲致密程度以及菌絲擴(kuò)散程度，間隔5 d記錄一次，詳見表1；

表1 實(shí)驗觀察記錄

續(xù)表1 實(shí)驗觀察記錄

(2)為便于比較它們的差異性，采取權(quán)重賦值方法分別給菌絲長度、菌絲致密程度以及菌絲擴(kuò)散程度分別作0.2、0.5、0.3的權(quán)重賦值，根據(jù)記錄情況對各處理分別計算其生長指數(shù)，詳見表2；

表2 各處理生長指數(shù)表

2 結(jié)果與分析

本實(shí)驗用3種碳源，即葡萄糖、可溶性淀粉、玉米粉通過濾紙與馬鈴薯結(jié)合培養(yǎng)，同時與2種對照設(shè)置一起培養(yǎng)，觀察菌絲的生長情況(詳見圖1)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：(1) 初期階段，即第5 d，PDA固體培養(yǎng)基菌絲生長好于其他培養(yǎng)；隨著時間推移，其生長情況較其他碳源馬鈴薯基質(zhì)培養(yǎng)情況呈下降趨勢，到第10 d幾乎持平，到第15 d馬鈴薯全基質(zhì)培養(yǎng)的菌絲體濃密、健壯，明顯優(yōu)于PDA固體培養(yǎng)基；(2)不同碳源條件下馬鈴薯基質(zhì)培養(yǎng)菌絲體生長呈現(xiàn)差異，即：葡萄糖>玉米粉>可溶性淀粉；(3)對照1初期階段，菌絲生長很差，但10 d后其生長呈快速提高趨勢。

圖1 各處理生長指數(shù)圖

3 結(jié)論與討論

(1)傳統(tǒng)PDA培養(yǎng)基在馬鈴薯汁熬制過濾過程中，一定損失了大量養(yǎng)分和微量元素，才導(dǎo)致其后續(xù)培養(yǎng)不像在馬鈴薯全基質(zhì)條件下那樣強(qiáng)勁，同時也論證了真菌的健壯生長離不開全面的營養(yǎng)物質(zhì)。

(2)該實(shí)驗為我們提供了一條新的既便捷，效果又好的培養(yǎng)真菌路徑，同時對不同條件下培養(yǎng)菌絲生物量的測定提供了便捷方法。

(3)實(shí)驗中松乳菇真菌經(jīng)多次轉(zhuǎn)接后，該方法可起到復(fù)壯該真菌的作用。

(4)本實(shí)驗僅僅是用松乳菇真菌作的實(shí)驗，對其他真菌是否有上述效果，仍需實(shí)驗驗證。

(5)對本實(shí)驗不同碳源誘發(fā)松乳菇真菌在馬鈴薯基質(zhì)上更快生長的機(jī)理需作進(jìn)一步研究。