劉洋，許敏敏，張亞，劉世權(quán)，苑美青，賈振軍

1.中國人民公安大學(xué)偵查學(xué)院，北京 100038；2.黑龍江省墾區(qū)公安局北安分局，黑龍江 黑河 164000；3.石家莊市公安局，河北 石家莊 050000；4.中國政法大學(xué)證據(jù)科學(xué)研究院，北京 100091；5.公安部鑒定中心 法醫(yī)遺傳學(xué)公安部重點實驗室，北京 100038

根據(jù)世界衛(wèi)生組織的數(shù)據(jù)，超過三分之一的婦女在一生中可能遭受過性侵犯[1]。2020 年，我國各級檢察院起訴強奸罪的犯罪嫌疑人達29 450 人，媒體公開報道了332 起性侵害兒童案件，受害人數(shù)為845 人，年齡最小的受害人僅1 歲[2-3]。實際上，出于自我保護等心理，很多性侵害案件的受害人并未報案，因此，實際發(fā)生的案件數(shù)量要多于司法機關(guān)掌握與媒體報道的案件數(shù)量。目前DNA 鑒定技術(shù)作為偵破性侵害案件的主要技術(shù)手段，其檢驗結(jié)果作為法定證據(jù)，在絕大部分此類案件的偵查、起訴和審判階段發(fā)揮著至關(guān)重要的證據(jù)作用，具有較強的證明力。但是，DNA 證據(jù)在證明性侵害案件時也面臨諸多困難：（1）物證提取難。一些強奸案中，犯罪嫌疑人戴避孕套作案或結(jié)扎輸精管或其系少弱精子癥、無精子癥患者，往往不會在案發(fā)現(xiàn)場遺留精斑，此類案件由于缺乏重要生物物證，致使部分犯罪嫌疑人逃避了法律制裁。（2）證據(jù)類型單一。性侵害案件多發(fā)生在相對隱秘與封閉的場所，故鮮有視聽資料等證明案件事實的直接證據(jù)，甚至有些案件只能獲得“一對一”證據(jù)，導(dǎo)致刑事審判中據(jù)以定案的事實無法達到“證據(jù)確實、充分”的證明標準。（3）證據(jù)保全難。部分強奸、猥褻兒童案件中的受害人可能意識不到自己被性侵害，監(jiān)護人可能在侵害行為發(fā)生后一段時間才發(fā)現(xiàn)。在部分強奸案件中，一些受害女性會不停地清洗身體，這些情況都會導(dǎo)致生物檢材的滅失，從而增加了案件認定的難度。（4）證據(jù)證明力弱。即使在犯罪現(xiàn)場提取到犯罪嫌疑人的DNA，如果不能精確認定DNA 的斑跡組織來源，也很難直接證明犯罪事實。因為犯罪現(xiàn)場物品上或受害人身體上出現(xiàn)犯罪嫌疑人的DNA，有可能是DNA 二次或多次轉(zhuǎn)移形成，所以不能根據(jù)DNA 證據(jù)直接推斷或者證明犯罪嫌疑人與受害人有直接身體接觸[4-5]。

鑒于此，近年來研究人員開始關(guān)注性侵害案件中唾液、精斑、陰道擦拭物等生物物證中除DNA 之外的其他信息，如具有組織來源特異性的海量微生物信息[6-10]。對遺留在人體生物物證上的微生物信息進行深度挖掘，可為性侵害案件的偵查提供更多信息，如體液斑跡來源推斷、性侵害方式推定、案發(fā)時間推斷等。本文綜述了國內(nèi)外人體微生物組的最新研究進展，探討了其作為新型物證在性侵害案件中的應(yīng)用價值，希望在推動人體微生物組在性侵害案件中發(fā)揮重要證據(jù)價值方面拓展思路。

1 人體微生物群與微生物組的個體特異性及相對穩(wěn)定性

人體微生物群（microbiota）分為病毒群、細菌群、古細菌群和真核細胞型微生物群，其中以細菌群數(shù)量最多且占主導(dǎo)地位[11]。這些微生物，小部分是與人體接觸轉(zhuǎn)移而暫時停留在人體體表及腔道表面的過路菌，絕大部分是與人體保持緊密共生關(guān)系的常駐菌。人體微生物群對人的健康和疾病發(fā)展有重大影響，因此，人體微生物群的基因組——人體微生物組，也被稱為人的“第二基因組”[12]。在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，由于不同個體所攜帶的微生物群具有高度特異性和相對穩(wěn)定性，因此，人體微生物組也被形象地稱為“人體微生物指紋”[13]。

1.1 不同個體微生物群與微生物組具有個體特異性

不同個體之間因生活衛(wèi)生習(xí)慣、性別、年齡等不同，其微生物群落的組成具有高度的個體特異性[14-15]。

因生活環(huán)境的不同，城鄉(xiāng)居民皮膚微生物組的差異可能與土壤、水以及與農(nóng)牧業(yè)相關(guān)的微生物接觸程度不同有關(guān)，農(nóng)村環(huán)境的特點是高度的微生物多樣性，即使是與土壤或植物的短暫接觸也會導(dǎo)致手部微生物群發(fā)生變化[16]。HOSPODSKY 等[17]研究發(fā)現(xiàn)，在戶外工作且經(jīng)常接觸土壤和水的坦桑尼亞婦女的手部微生物群中，主要是紅桿菌屬（Erythrobacillus）和類諾卡氏菌科（Nocardioidaceae）等環(huán)境細菌，而來自美國的女學(xué)生的手上主要為葡萄球菌屬（Staphylococcus）、丙酸桿菌科（Propionibacteriaceae）、鏈球菌科（Streptococcaceae）和黃單胞菌科（Xanthomonadaceae）。

男性與女性的皮膚由于厚度、毛發(fā)濃密程度、汗液和皮脂腺分泌情況不同導(dǎo)致微生物組成差別很大，女性的皮膚由于較男性薄、pH 偏低和較少出汗而表現(xiàn)出更高的多樣性[18-19]。女性手上有著更多的腸桿菌目（Enterobacteriales）和乳桿菌科（Lactobacillaceae）細菌，而在男性中，則以痤瘡丙酸桿菌（Propionibacterium acnes）和棒狀桿菌屬（Corynebacterium）為主[20]。

皮膚微生物可能參與皮膚老化的進程，包括免疫功能的調(diào)節(jié)、對紫外線輻射的抵抗以及與衰老相關(guān)物質(zhì)的生物合成和代謝[21]，隨著年齡的增長，微生物組中厚壁菌門（Firmicutes）的數(shù)量減少，如金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和痤瘡丙酸桿菌[22]。JUGé等[23]發(fā)現(xiàn)，與年輕女性的皮膚相比，54～69 歲女性皮膚上有更高比例的變形桿菌屬（Proteus）和低比例的不動桿菌屬（Acinetobacter）。

2010 年，F(xiàn)IERER 等[13]正是利用人體微生物存在個體差異的特點，通過比較計算機使用者指尖及配套鼠標和鍵盤上的細菌群落，發(fā)現(xiàn)同一個體的指尖與鍵盤上的細菌群落之間的相似度遠高于其他個體的指尖與鍵盤上的細菌群落，計算機使用者在鍵盤上留下了獨特的“細菌指紋”。這項研究開創(chuàng)了利用人體微生物群落進行法醫(yī)學(xué)個體識別的先河。DíEZ LóPEZ等[24]通過使用來自人類微生物組計劃的1 636 份皮膚、口腔和陰道樣本的16S rRNA 基因高通量測序數(shù)據(jù)，利用人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)算法建立模型，并使用該模型對來自手部皮膚、唾液、陰道液的110 份樣本進行測試，其結(jié)果顯示出非常高的準確度，皮膚的受試者操作特征（receiver operator characteristic，ROC）曲線的曲線下面積（area under the curve，AUC）值為0.99，口腔的AUC 值為0.99，陰道液的AUC 值為1。

1.2 同一個體微生物群與微生物組具有相對穩(wěn)定性

對于健康的成年人，盡管每種微生物的相對豐度都會隨著時間的推移而產(chǎn)生波動，并且在個體之間存在差異，但同一個體同一身體部位的微生物群卻具有一定的時間穩(wěn)定性[25]。在人體微生物含量豐富的各個微環(huán)境中，目前腸道微生物研究最多，研究結(jié)果也顯示其時間穩(wěn)定性最好。2015 年，F(xiàn)RANZOSA 等[26]利用從人類微生物組計劃獲取的糞便樣本數(shù)據(jù)，開發(fā)基于碰撞集的編碼算法（hitting set-based coding algorithm）進行個體識別。通過對同一個體不同采樣時間（間隔30～300 d）宏基因組代碼的比較，證明腸道微生物組的個性特征非常穩(wěn)定，根據(jù)微生物組特征，可以在100 多人的群體中準確地識別到個體，即使在1 年后，仍然可以準確識別80%的個體。2021 年，CHEN 等[27]揭示了人類腸道菌群的多樣性和時間穩(wěn)定性，研究人員對Lifelines-DEEP（一項在荷蘭北部進行的前瞻性普通人群隊列研究）隊列中338 例志愿者的腸道菌群結(jié)構(gòu)與腸道菌群基因組結(jié)構(gòu)進行了間隔4 年的縱向系統(tǒng)性分析，并且開發(fā)了基于菌群結(jié)構(gòu)與菌群基因組特征的菌群指紋。應(yīng)用這項技術(shù)，研究人員實現(xiàn)了對Lifelines-DEEP 隊列間隔4 年的個體樣本高達85%的識別。

WANG 等[28]對洗牙前后3 個月間11 個連續(xù)時間點的169 份唾液和牙菌斑微生物組數(shù)據(jù)進行深度挖掘，以分析口腔微生物的穩(wěn)定性，結(jié)果表明，整個跟蹤周期中唾液菌群的多樣性和結(jié)構(gòu)一直保持穩(wěn)定，而牙菌斑菌群從洗牙后開始解構(gòu)，3 d 后即可重建，之后隨時間推移逐漸恢復(fù)到原始完整形態(tài)。

與腸道和口腔相比，皮膚直接暴露于環(huán)境中，擁有更多樣化的微生物群落，但其穩(wěn)定性卻超出預(yù)期。OH 等[29]于2011 年6 月—2014 年5 月在3 個時間點收集了12 例健康志愿者17 份皮膚位點的樣本，通過衡量3 個時間點同一個體同一身體部位皮膚微生物群落結(jié)構(gòu)的相似程度來探究皮膚微生物群的時間穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)同一個體同一部位不同時間的皮膚微生物群十分相似，此外，還發(fā)現(xiàn)群落的穩(wěn)定性與群落的多樣性呈現(xiàn)負相關(guān)。SCHMEDES 等[30]采用監(jiān)督學(xué)習(xí)的算法對特定個體皮膚微生物組穩(wěn)定分支特異遺傳標記的核苷酸多態(tài)性進行了分析，利用OH 等[29]的研究數(shù)據(jù)對來自12 例健康個體14 個身體部位的皮膚微生物組進行歸因，其中3 個身體部位（面部、手、前臂）的準確度高達100%。

GAJER 等[31]研究了32 例育齡婦女在16 周內(nèi)陰道細菌群落組成的動態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)以卷曲乳桿菌（Lactobacillus crispatus）為優(yōu)勢菌的微生物組、以惰性乳桿菌（Lactobacillus iners）為優(yōu)勢菌的微生物組、無優(yōu)勢菌的多樣化微生物組在超過85%的時間里是穩(wěn)定的，而以卷曲乳桿菌和惰性乳桿菌共同主導(dǎo)的菌群較不穩(wěn)定。VODSTRCIL 等[32]研究了性活動對年輕女性陰道微生物群的影響，結(jié)果顯示，性行為會影響陰道微生物群的組成。如果乳桿菌是陰道的優(yōu)勢菌種，隨著時間的推移，陰道微生物群會恢復(fù)到性交之前的狀態(tài)。陰莖-陰道性交不會改變微生物群的一致性，但會增加陰道加德納菌（Gardnerella vaginalis）的定植。

2 人體微生物群與微生物組定植部位的特異性

人體不同部位器官因其生理結(jié)構(gòu)、pH、汗液和皮脂分泌等微環(huán)境不同，造成人體各部位微生物群組成迥異。如由于頭皮、面部、胸背部的皮脂腺會產(chǎn)生大量油性皮脂，親脂性痤瘡丙酸桿菌在這些部位占優(yōu)勢[28]；陰道、口腔、腸道、耳道等部位由于處于半封閉狀態(tài)，且功能各異，其中微生物組成更是具有明顯的定植部位特異性。

2.1 女性陰道微生物群與微生物組的特征

由于陰道與外界相對隔絕的解剖結(jié)構(gòu)和相對酸性的pH 環(huán)境，陰道微生物種類較少且具有很好的特異性。陰道微生物通常以厭氧的革蘭氏陽性菌——乳桿菌屬（Lactobacillus）為主，如卷曲乳桿菌、惰性乳桿菌、格氏乳桿菌（Lactobacillus gasseri）和詹氏乳桿菌（Lactobacillus jensenii），或以非乳桿菌為主的多樣化微生物群，如雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）、加德納菌屬（Gardnerella）、奇異菌屬（Atopobium）和普雷沃菌屬（Prevotella），也有以白色假絲酵母菌（Saccharomyces albicans）為代表的真菌類群，但真菌類群在健康女性中的豐度通常較低[33-34]。陰道微生物群落的構(gòu)成受健康狀況、種族、性習(xí)慣、避孕藥具使用和懷孕等情況的影響較大。與白種人或亞洲女性相比，非洲黑種人和非裔美國女性陰道內(nèi)存在卷曲乳桿菌、詹氏乳桿菌、格氏乳桿菌、陰道乳桿菌（Lactobacillus vaginalis）的可能性較小，而更有可能存在惰性乳桿菌，并且可能具有更高的細菌多樣性[35-36]。不同年齡段的女性由于性激素分泌水平不同，陰道菌群也存在多樣性。對于青春期的少女而言，陰道菌群并不是以乳桿菌為優(yōu)勢菌，而是以無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）或者咽峽炎鏈球菌（Streptococcus anginosus）等為正常的菌群[37]。YAO 等[38]對河南、廣東和新疆人群陰道樣本中16S rRNA 基因的V3～V4 高變區(qū)進行了高通量測序，試圖揭示更多關(guān)于不同地區(qū)陰道微生物群的信息。相似性分析（analysis of similarities，ANOSIM）結(jié)果顯示，3 個區(qū)域的陰道微生物群差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），主要由乳桿菌屬、加德納菌屬、奇異菌屬和雙歧桿菌屬構(gòu)成。但是，隨機森林分析結(jié)果顯示，低豐度菌群如芽球菌屬（Blastococcus）、節(jié)桿菌屬（Arthrobacter）、勞爾氏菌屬（Ralstonia）中可能含有可特異性區(qū)分其他體液的細菌以及區(qū)分不同地域樣本的細菌。目前，在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)﹃幍牢⑸锏难芯恐饕谟隗w液組織來源鑒定等方面，充分挖掘陰道微生物組的信息可能會對性侵害案件提供更多的幫助。

2.2 男性陰莖微生物群與微生物組的特征

目前對陰莖微生物組的研究主要集中在陰莖龜頭及冠狀溝。陰莖冠狀溝有著復(fù)雜而又穩(wěn)定的菌群，菌群中大多含有3 個屬：棒狀桿菌屬（Corynebacterium）、葡萄球菌屬和厭氧球菌屬（Anaerococcus），其他種類豐富的屬按相對豐度順序依次為：嗜胨菌屬（Peptoniphilus）、普雷沃菌屬、芬戈爾德菌屬（Finegoldia）、卟啉單胞菌屬（Porphyromonas）、丙酸桿菌屬、代爾夫特菌屬（Delftia）。對青少年與老年男性陰莖微生物群的研究[39]表明，性經(jīng)歷可能是陰莖微生物群組成的決定因素。同時，大量研究[40-41]也證實與細菌性陰道?。╞acterial vaginosis，BV）相關(guān)的細菌會在性交過程中發(fā)生轉(zhuǎn)移，在女性患有BV 的夫妻中，男性陰莖微生物群與女性陰道微生物群的相似性明顯更高。MEHTA 等[42]基于3 種機器學(xué)習(xí)分類算法（隨機森林、支持向量機、K 最近鄰分類算法）利用夫妻中男性陰莖微生物群組成情況對其女性性伴侶是否患有BV 進行了準確預(yù)測。

包皮環(huán)切術(shù)對陰莖微生物群組成情況會產(chǎn)生較大的影響，對包皮環(huán)切術(shù)前后冠狀溝樣本的研究[43]表明，包皮環(huán)切術(shù)后由厭氧菌屬組成的細菌科顯著減少，而兼性厭氧菌屬增加，需氧和微需氧細菌科變化并不顯著，值得注意的是，這樣的改變可能降低了男性感染人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）、單純皰疹病毒2（herpes simplex virus-2，HSV-2）和人乳頭狀瘤病毒（human papilloma virus，HPV）的風(fēng)險。

2.3 人體口腔微生物群與微生物組的特征

口腔微生物群是人體中獨特而保持動態(tài)變化的生態(tài)系統(tǒng)，其特征在于生態(tài)條件的不穩(wěn)定性?？谇恢胁煌课痪哂歇毺氐奈⑸锶篬44]。唾液作為主要的口腔樣本，是案發(fā)現(xiàn)場重要的痕跡物證，特別是性侵害和虐待兒童案件中的皮膚咬痕。唾液主要由鏈球菌屬（Streptococcus）、普雷沃菌屬、卟啉單胞菌屬、放線菌屬（Actinomyces）、奈瑟菌屬（Neisseria）等組成，影響唾液微生物群落構(gòu)成的個體特征包括吸煙、口腔衛(wèi)生、口腔健康狀況以及社會經(jīng)濟地位等[44-45]。家庭環(huán)境對唾液微生物群的影響比個體遺傳因素更大[46]。接吻也會影響唾液微生物群落的組成，每10 s 的接吻大約轉(zhuǎn)移8 000 萬個細菌，與不相關(guān)的個體相比，伴侶間具有更相似的微生物群落[47]。

2.4 人體腸道微生物群與微生物組的特征

人體的腸道擁有大量呈動態(tài)變化的微生物群，對人類生理健康有重要的影響，如合成維生素和氨基酸，促進免疫系統(tǒng)發(fā)育，提供一些必需的營養(yǎng)物質(zhì)等。此外，腸道微生物組可以通過影響宿主表觀遺傳過程繼而引起某些疾病，如結(jié)腸癌、炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）、多系統(tǒng)器官衰竭、心血管疾病、肥胖和糖尿病等[48-49]。腸道微生物主要由放線菌門（Actinobacteria）、厚壁菌門、擬桿菌門（Bacteroidetes）和變形菌門（Proteobacteria）組成。擬桿菌屬（Bacteroides）、雙歧桿菌屬、真桿菌屬（Eubacterium）、消化鏈球菌屬（Peptostreptococcus）、梭菌屬（Clostridium）、消化球菌屬（Peptococcus）和瘤胃球菌屬（Ruminococcus）是人體腸道中的主要菌屬[50]。值得注意的是，胃腸道不同位置的微生物組成差異顯著，與大腸相比，胃和小腸中存在的微生物種類非常少，豐度最高的菌屬是螺桿菌屬（Helicobacter）、鏈球菌屬、葡萄球菌屬、普雷沃菌屬、韋榮氏球菌屬（Veillonella）、乳桿菌屬、放線菌屬、羅氏菌屬（Rothia）等[51]。

3 人體微生物組在性侵害案件中的應(yīng)用價值

3.1 性侵害案件中體液斑跡的來源推斷

性侵害案件現(xiàn)場常見的體液斑跡有血斑、精斑、唾液斑、陰道液斑、尿斑和汗斑等。目前常規(guī)DNA 檢驗技術(shù)無法對以上斑跡進行準確的來源推斷，而推斷這些斑跡的準確組織來源又對性侵害案件的定性、犯罪嫌疑人的行為刻畫以及犯罪現(xiàn)場重建至關(guān)重要[52]。如對于猥褻和無射精案件，若在嫌疑人手指、陰莖的擦拭物中檢出陰道液成分，則可以證明有猥褻或陰道性交行為的發(fā)生；若在受害人頸部或乳房的擦拭物中檢出嫌疑人唾液成分，則可以推斷嫌疑人在性侵害過程中存在啃咬或親吻行為。

目前體液來源鑒定的常規(guī)方法主要有化學(xué)試驗、免疫學(xué)試驗、光譜法和顯微鏡法等[53]。這些鑒定方法一般只能作為一種推定試驗，而且靈敏度低、特異性差、易腐敗。近年來基于分子遺傳學(xué)的核酸分析方法，如信使RNA（messenger RNA，mRNA）[54-55]、微小RNA（microRNA，miRNA）[56]組織特異性差異性甲基化區(qū)域[57-58]的檢測方法逐步發(fā)展，有望取代傳統(tǒng)的體液識別方法。同時，一些研究人員開始把目光轉(zhuǎn)向相對簡便和靈敏的以PCR 為基礎(chǔ)的口腔、陰道細菌DNA檢測方法[59-60]。此外，也有研究人員開始使用高通量測序方法研究口腔或陰道細菌群落結(jié)構(gòu)的特異性，進而推斷體液斑跡的組織來源[61-62]。

2010 年，F(xiàn)LEMING 等[63]首次使用16S-23S rRNA基因間隔區(qū)鑒定特異性存在于陰道的細菌，結(jié)果表明，卷曲乳桿菌與格氏乳桿菌特異性地存在于陰道液中，可以作為檢測陰道液的標志物。2012 年，日本學(xué)者AKUTSU 等[64]分析本國不同個體生物檢材中的微生物，發(fā)現(xiàn)陰道阿托波氏菌（Atopobium vaginae）特異性地存在于陰道液中，在陰道液和女性尿液中檢測出卷曲乳桿菌和詹氏乳桿菌，但女性尿液中的乳桿菌屬則可能來自陰道液的污染。同年，GIAMPAOLI 等[65]基于不同人體生物檢材具有特定的細菌群落這一典型特征，通過多重實時PCR 對不同體液中的細菌濃度進行半定量分析，成功分辨出唾液和糞便中的陰道液，并且該研究團隊將這項研究成果商業(yè)化，形成了ForFLUID 試劑盒。DOI 等[66]使用實時PCR 對陰道液中的主要乳桿菌進行定量分析，結(jié)果表明，12 份陰道液樣本中，除1 份樣本（可能為BV 患者）外，均能確定為陰道液。國內(nèi)使用微生物鑒定陰道液的研究相對較少，2016 年，ZOU 等[67]使用通用引物擴增陰道液、唾液、糞便、鼻腔分泌液中微生物的16S rRNA 基因，用毛細管電泳法對擴增產(chǎn)物進行檢測，證實卷曲乳桿菌和詹氏乳桿菌特異性地存在于陰道液中，可以依此鑒定陰道液。

傳統(tǒng)的唾液檢測方法是先進行碘淀粉試驗，然后進行確證實驗，如鏡檢或三氯化鐵實驗等，但該檢測方法不僅步驟繁瑣，而且由于淀粉酶可能存在于尿液和精液等其他體液中[68]，缺少特異性。隨著對口腔細菌群落的深入探索，越來越多的研究人員開始將口腔中的細菌作為鑒定唾液的標志物。2009 年，NAKANISHI 等[69]首次使用唾液鏈球菌（Streptococcus salivarius）鑒定唾液，研究結(jié)果表明，相對于精液、尿液、陰道液或皮膚樣本，只在唾液樣本中檢測到唾液鏈球菌或變形鏈球菌（Streptococcus mutans）。但是口腔中細菌種類和系統(tǒng)類型眾多，飲食習(xí)慣、吸煙、年齡和健康狀況也可以改變口腔細菌群落的組成，1～2 種口腔細菌可能不足以確定唾液的存在。因此，JUNG等[59]開發(fā)了OB mRT-PCR 試劑盒，基于3 種口腔細菌［唾液鏈球菌、血鏈球菌（Streptococcus sanguinis）、微黃奈瑟球菌（Neisseria subflava）］利用實時熒光定量PCR 對140 份韓國人的唾液樣本進行檢測，結(jié)果表明，所有樣本中至少檢測出2 種靶細菌。對非唾液樣本進行的測試進一步證明了該試劑盒的特異性，而且較常規(guī)試紙條測試方法更為靈敏。HANSSEN 等[70]基于16S rRNA 基因測序?qū)Τ练e于皮膚上的唾液樣本進行分析，通過主成分分析（principal component analysis，PCA）和線性判別分析對沉積在皮膚上的唾液樣本和純皮膚樣本的微生物群進行分類識別，交叉驗證的準確率可達到94%。

3.2 不同個體間肢體接觸的確定

NECKOVIC 等[71]研究皮膚微生物群在異源菌群之間的轉(zhuǎn)移規(guī)律，發(fā)現(xiàn)皮膚微生物既可以通過直接接觸轉(zhuǎn)移，如通過握手行為在人群之間可靠地轉(zhuǎn)移，也可通過間接接觸轉(zhuǎn)移，如異源菌群在不同個體之間的轉(zhuǎn)移。該研究表明，在缺乏傳統(tǒng)DNA 證據(jù)的情況下，如性騷擾案件，可通過對人體微生物組的分析來推斷是否存在肢體接觸。

CARDA-DIéGUEZ 等[72]報道了1 個案例，一位年輕女性每次與男友發(fā)生性行為后都會出現(xiàn)陰道炎和牙齦炎，研究人員采集了他們的口腔和生殖器拭子，分析性行為前后口腔、陰道和陰莖微生物群的組成，結(jié)果顯示，口交和陰道性交行為造成了他們口腔與陰道菌群顯著的變化，進而引發(fā)牙齦炎與陰道炎。陰莖-陰道性交行為也可能造成陰莖微生物群組成的變化，NELSON 等[39]對18 例青春期男性的陰莖冠狀溝和尿液微生物群的研究結(jié)果表明，陰莖和尿道可以被多種與BV 相關(guān)的菌群定殖，而其中某些定殖是由于性行為引起的，值得注意的是，僅在有性經(jīng)驗的參與者中檢測到了支原體（mycoplasma）、解脲支原體（Ureaplasma urealyticum）和纖毛菌屬（Leptotrichia）。上述案例提示，分析性行為前后微生物群落的變化情況可以間接證明身體接觸方式。

3.3 陰毛微生物組可攜帶重要案件信息

強奸事實的認定通常是對遺留在陰道內(nèi)的精液進行STR 分型以確定犯罪嫌疑人。但如果犯罪嫌疑人具有一定的反偵查能力，則可能會戴上避孕套作案，增大了案件偵破難度。此種情形可能在犯罪現(xiàn)場提取到陰毛，雖然找到的陰毛一般都缺失毛根，難以從中獲取足量的DNA 信息，但陰毛上攜帶的微生物可能為案件提供重要信息。TRIDICO 等[73]的研究表明，陰毛比頭發(fā)含有更多獨具“個人特色”的細菌，其穩(wěn)定性至少可以保持5 個月。該研究結(jié)果提示，如果沒有發(fā)現(xiàn)更好的物證，通過對比嫌疑人和現(xiàn)場提取的陰毛的微生物組成，或許可以確定或排除嫌疑人。

WILLIAMS 等[74]通過分析女性陰毛微生物組中男性微生物組所占的比例，評估了陰毛微生物組在性侵害案件中的應(yīng)用潛力。當只有一個嫌疑人時，該方法能準確推斷出嫌疑人陰毛微生物群轉(zhuǎn)移到女性陰毛的比例，而且當行為人是已知嫌疑人以外的人時，不存在錯誤歸屬，當嫌疑人增加至4 人時，該方法也表現(xiàn)出可靠的結(jié)果。因此，當存在多個嫌疑人且需要確認其是否與受害人發(fā)生過性接觸或者排除現(xiàn)有嫌疑人時，可以嘗試分析當事人陰毛微生物群的組成情況。

3.4 人體微生物組攜帶的時間信息

性行為會造成微生物群落組成發(fā)生變化，受擾動的微生物群恢復(fù)到初始狀態(tài)需要一定的時間，明確微生物群落組成的時間變化規(guī)律，可能提升微生物物證的價值。

一項縱向研究[31]發(fā)現(xiàn)，性行為發(fā)生后24 h 內(nèi)陰道微生物群落組成發(fā)生了顯著變化，因此，在沒有精斑的情況下，可以利用陰道微生物組的變化情況確定婦女是否被強奸。然而，對于單個個體而言，是否每次發(fā)生性行為后陰道微生物群都會產(chǎn)生變化，還需要更多的研究數(shù)據(jù)支持。

TRIDICO 等[73]研究了毛發(fā)宏基因組物證應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的可能性，該實驗要求每位志愿者在3 個時間點自行收集本人的頭發(fā)和陰毛，第一次收集以及之后2 個月和5 個月的時間點，分別稱為T0、T2 和T5，在對陰毛微生物組操作分類單位（operational taxonomic unit，OTU）進行PCA 時發(fā)現(xiàn)，一對夫妻陰毛微生物群落的組成在T5 時間點比之前的其他時間點（T0、T2）更相似。經(jīng)過詢問得知，這對夫妻在T5 時間點前18 h 曾有過性行為，并在這段時間淋浴。該案例說明性交過程中男性和女性的陰毛微生物會發(fā)生轉(zhuǎn)移，并且可以在對方陰毛上穩(wěn)定地存在一段時間，即使在性交后進行淋浴也沒有立即恢復(fù)到性交前的群落組成。該現(xiàn)象提示，如果進一步的研究能夠確定發(fā)生交換的陰毛微生物群落恢復(fù)到未交換前的群落組成所需要的時間，那么就可以根據(jù)陰毛微生物群落組成的變化情況推斷出大致的案發(fā)時間。

4 展 望

高通量測序技術(shù)、生物信息學(xué)和人工智能的進步極大地促進了法醫(yī)微生物學(xué)的發(fā)展，使其研究內(nèi)容從生物犯罪和生物恐怖逐步擴展到刑事案件的檢驗與鑒定領(lǐng)域，目前已在土壤地理來源推斷[75-76]、個體識別[71，77]、確定死亡原因與死亡方式[78-79]、死亡時間推斷[80-82]等領(lǐng)域開展了許多創(chuàng)新性研究，并取得了一系列振奮人心的成果。但我們也應(yīng)認識到，人體微生物組作為法醫(yī)物證應(yīng)用于實際性侵害案件，還有許多工作要做，包括深入研究性侵害行為發(fā)生前后微生物的轉(zhuǎn)移規(guī)律、體液離體后微生物群的變化狀況、不同采樣及物證保存方法對微生物組的影響，以及建立穩(wěn)健的人體微生物組分析方法、數(shù)據(jù)庫等相關(guān)工作。

綜上，人體微生物組很有可能成為刑事證據(jù)領(lǐng)域全新的法醫(yī)物證類型，其研究成果將極大地拓展法庭科學(xué)技術(shù)檢驗的外延和內(nèi)涵，進一步增強傳統(tǒng)生物物證的證據(jù)價值，為刑事案件的偵查、起訴與審判活動提供更多的線索和依據(jù)。