張行行，趙 麓，楊嘉妮，周 爽，劉繼平，王 川，王 斌

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)陜西省中醫(yī)藥管理局中藥藥效機(jī)制與物質(zhì)基礎(chǔ)重點(diǎn)研究室，陜西 咸陽 712046)

腦卒中是一組急性腦循環(huán)障礙所致的局部或全面性腦功能壞死綜合征，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)又稱“中風(fēng)”，是由于毒邪損傷腦絡(luò)，靜脈拘攣瘀閉，氣血流通失常，腦神失養(yǎng)，神機(jī)失守，致神昏閉缺，半身不遂；常用清熱解毒藥來促進(jìn)氣血流通，對(duì)缺血性腦卒中起到了良好的治療效果[1]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，缺血性腦卒中(cerebral ischemic stroke，CIS)是由于腦主動(dòng)脈血流短暫或持久減少，引起的腦組織缺血、缺氧，從而引起局灶性腦組織壞死或腦軟化[2]。廣泛使用的治療方法以早期溶栓恢復(fù)腦部供血為主，但大多數(shù)患者因受治療時(shí)間窗或其他禁忌癥的限制不能獲得溶栓治療，而以往“一藥一靶一病”的單一環(huán)節(jié)治療藥物，忽略了機(jī)體生物過程的復(fù)雜性和多環(huán)節(jié)性，造成療效低，在臨床試驗(yàn)中屢遭失敗 ，因此限制了其進(jìn)一步發(fā)展。中醫(yī)藥在各種疾病的治療中都表現(xiàn)出了很好的效果，具有有效性強(qiáng)，副作用較小，可以作用于CIS的多個(gè)病理環(huán)節(jié)，通過調(diào)整機(jī)體自身修復(fù)功能而起到治療作用，因此有望成為治療CIS的新突破。

黃芩-梔子作為清熱類經(jīng)典藥對(duì)早已成功用于治療CIS[3-4]，但配伍之后藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制尚不明確，因而限制了其臨床推廣和二次開發(fā)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從中藥成分、靶點(diǎn)與疾病間相互作用的整體性出發(fā)，運(yùn)用各大數(shù)據(jù)庫進(jìn)行藥物與疾病相關(guān)靶點(diǎn)信息的搜集、預(yù)測(cè)與篩選，將單個(gè)靶點(diǎn)或多個(gè)靶點(diǎn)放在整個(gè)生物網(wǎng)絡(luò)中進(jìn)行定位研究，特別適合用于中藥多成分-多靶點(diǎn)的作用機(jī)制研究，有利于揭示中藥復(fù)雜成分作用機(jī)制[5]?；诖?，本文采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討黃芩-梔子作用于缺血性腦損傷的物質(zhì)基礎(chǔ)及分子機(jī)制，以期為CIS疾病新藥開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 黃芩、梔子活性成分的收集與構(gòu)建在中藥藥理數(shù)據(jù)庫(traditional chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP)分別以“黃芩”、“梔子”檢索其所有成分，在檢索結(jié)果中設(shè)定化合物篩選條件：類藥性(drug-likeness，DL)≥0.18，口服生物利用率(oral bioavailability，OB)≥40，血腦屏障透過率(BBB)≥-0.3，去重后，導(dǎo)入Excel表格建立黃芩、梔子配伍組分易吸收化合物庫。

1.2 化合物的補(bǔ)充考慮化合物在中藥中的含量、代謝及藥理作用對(duì)黃芩、梔子有效成分進(jìn)行補(bǔ)充，將黃芩素(baicalein,B)、漢黃芩素(wogonin，W)、黃芩苷(baicalin，BG)、漢黃芩苷(wogonoside，WG)4個(gè)化合物[6]，環(huán)烯醚萜類梔子苷(gardenoside)、京尼平苷(geniposide)、京尼平酸(geniposidie acid_qt)、二萜類西紅花苷(crocin)、西紅花酸(crocetin)5個(gè)化合物[7]也分別納入黃芩和梔子的研究范圍。

1.3 黃芩、梔子活性成分靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)在TCMSP搜索納入研究的活性成分的相關(guān)靶點(diǎn)信息并通過Drugbank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行補(bǔ)充，篩選去重后通過Uniprot數(shù)據(jù)庫篩選出人類靶點(diǎn)和規(guī)范基因名。

1.4 CIS相關(guān)靶點(diǎn)的獲取以“cerebral ischemic stroke”為檢索詞，分別從 CTD、TTD 和GeneCards數(shù)據(jù)庫收集CIS相關(guān)靶點(diǎn)，合并3個(gè)數(shù)據(jù)庫的檢索結(jié)果，去除重復(fù)靶點(diǎn)后，建立CIS疾病相關(guān)靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫。

1.5 藥物-疾病共同靶點(diǎn)的篩選與相互作用網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建運(yùn)用Venny 2.1(https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/)對(duì)黃芩-梔子預(yù)測(cè)靶點(diǎn)(1.3)與CIS相關(guān)靶點(diǎn)(1.4)進(jìn)行交集并建立黃芩、梔子抗CIS的基因靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫；將共同的基因靶點(diǎn)導(dǎo)入String(https://string-db.org/，Version 11.0)，物種選擇Homo sapiens，Required score設(shè)為0.7；獲取靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)，導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件進(jìn)行拓?fù)浞治龊蚉PI網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建，并依據(jù)節(jié)點(diǎn)的Degree值調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)的屬性。

1.6 基因通路與生物學(xué)功能的分析將黃芩-梔子抗CIS作用靶點(diǎn)上傳到DAVID平臺(tái)(https://david.ncifcrf.gov/，Version 6.8)進(jìn)行GO生物學(xué)功能注釋和KEGG 通路富集分析(P<0.05)，篩選出前10名GO生物學(xué)功能和前15名KEGG通路。

1.7 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析利用黃芩-梔子與CIS交集靶點(diǎn)反向篩選有效成分，運(yùn)用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建“藥物-有效成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，借助軟件network analyzer 插件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)度(degree)、介數(shù)(betweenness)等網(wǎng)絡(luò)互作分析，從中分析黃芩-梔子配伍治療CIS的藥效基礎(chǔ)。

1.8 分子對(duì)接接驗(yàn)證核心成分和靶點(diǎn)以“藥物-有效成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖中度值較大的有效成分和靶點(diǎn)為研究對(duì)象，進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。具體操作步驟如下：① 在TCMSP分別下載網(wǎng)絡(luò)度較高的有效成分MOL2格式文件；② 從PDB數(shù)據(jù)庫下載網(wǎng)絡(luò)度較高的靶點(diǎn)蛋白pdb格式文件，利用PyMOL對(duì)原始蛋白去除水和其他無關(guān)物，拆分蛋白與原始配體并分別保存為pdb文件格式；③ 使用AutoDock Tools將標(biāo)準(zhǔn)蛋白、原始配體、核心化合物轉(zhuǎn)化為pdbqt文件格式，并利用原始配體尋找到標(biāo)準(zhǔn)蛋白的活性口袋。使用AutoDock Vina標(biāo)準(zhǔn)對(duì)接程序進(jìn)行核心成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)的對(duì)接；④ 采用PyMoL軟件將結(jié)合能較高的結(jié)果可視化處理。

2 結(jié)果

2.1 黃芩、梔子活性成分的篩選結(jié)果在TCMSP 數(shù)據(jù)庫中共檢索到黃芩143個(gè)化合物、梔子98個(gè)化合物，設(shè)定條件OB≥40%，DL≥0.18，BBB≥-0.3，篩選得到黃芩14個(gè)化合物，補(bǔ)充4個(gè)化合物，共18個(gè)化合物納入研究；得到梔子5個(gè)化合物，補(bǔ)充5個(gè)化合物，共10個(gè)化合物納入研究，其中，MOL000449-stigmasterol化合物為黃芩和梔子所共有。綜上，黃芩和梔子共收集到27個(gè)化合物(Tab 1)。

2.2 黃芩-梔子預(yù)測(cè)靶點(diǎn)及疾病的收集黃芩18個(gè)活性成分從TCMSP、DrugBank數(shù)據(jù)庫共收集到175個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)，梔子10個(gè)化合物共收集到86相關(guān)靶點(diǎn)；去除重復(fù)項(xiàng)后，黃芩-梔子共收集到預(yù)測(cè)靶點(diǎn)197個(gè)；以“cerebral ischemic stroke”為檢索詞在CTD、TTD、GeneCards數(shù)據(jù)庫中共收集到FDA批準(zhǔn)的抗CIS相關(guān)基因靶點(diǎn)共2 694個(gè)。

Tab 1 Information table of active compounds of Scutellaria baicalensis Georgi and Gardenia

2.3 黃芩-梔子治療缺血性腦卒PPI網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建將黃芩-梔子預(yù)測(cè)靶點(diǎn)與CIS相關(guān)靶點(diǎn)輸入Venny進(jìn)行對(duì)比并取交集，歸納總結(jié)出黃芩-梔子預(yù)測(cè)靶點(diǎn)中有明確抗CIS作用的靶點(diǎn)共156個(gè)(Tab 2)，所得Venny圖見Fig 1；將結(jié)果導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫進(jìn)行蛋白互作分析，再將分析結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape3.7.2繪制PPI蛋白互作網(wǎng)絡(luò)見Fig 2，其中42個(gè)節(jié)點(diǎn)，138條映射關(guān)系，將網(wǎng)絡(luò)中靶點(diǎn)的大小按照其在網(wǎng)絡(luò)中網(wǎng)絡(luò)度的大小來排列，藥物分子擁有的靶點(diǎn)數(shù)越多其網(wǎng)絡(luò)度越大，可以得出有12個(gè)蛋白度值高于10，其中MAPK1、TNF、MAPK8、IL-6、PTGS2、IL1B等在靶點(diǎn)互作分析中網(wǎng)絡(luò)度較高，表明這些蛋白在網(wǎng)絡(luò)圖中貢獻(xiàn)度高，在PPI網(wǎng)絡(luò)中扮演著重要的角色。

2.4 “藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建利用黃芩-梔子抗CIS的156個(gè)靶點(diǎn)反向篩選有效成分，共得到有效成分26個(gè)，構(gòu)建“藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖見Fig 3。網(wǎng)絡(luò)圖中，黃芩、梔子作為單味藥時(shí)可作用于部分靶點(diǎn)，而作為藥對(duì)使用時(shí)，兩者除了可以單獨(dú)作用于部分靶點(diǎn)外，還可共同作用于部分靶點(diǎn)，可以充分體現(xiàn)出中藥復(fù)方的協(xié)同作用。

Fig 1 Scutellaria-Gardenia prediction target and CSI target Venny diagram

Fig 2 Scutellaria baicalensis-Gardenia anti-cerebral ischemia PPI network diagram

2.5 黃芩、梔子抗CIS作用靶點(diǎn)的分析與通路注釋對(duì)黃芩-梔子抗CIS的156個(gè)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO基因富集分析和KEGG靶點(diǎn)通路注釋分析。共得到生物學(xué)過程(biological process，BP)553個(gè)，主要參與RNA聚合酶Ⅱ的正調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、凋亡過程、轉(zhuǎn)錄、炎癥反應(yīng)等；分子功能(molecular function，MF)105個(gè)，主要參與蛋白質(zhì)結(jié)合(protein binding)、能量代謝(ATP binding)和轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合(transcription factor binding)等；細(xì)胞組件成分(cellular component，CC)共61個(gè)，主要分布于等離子膜(plasma membrane)、核(nucleus)和胞質(zhì)(cytosol)等，各取排名前10條，見Fig 4；共映射出通路共123條(P<0.05)，其中癌癥通路(pathways in cancer)、PI3K-Akt 信號(hào)通路(PI3K-Akt signaling pathway)、MAPK信號(hào)通路(MAPK signaling pathway)、cAMP信號(hào)通路(cAMP signaling pathway)、TNF信號(hào)通路(TNF signaling pathway)等排列靠前，取排名前15條相關(guān)通路,見Fig 5。

Tab 2 Scutellaria-Gardenia anti-cerebral ischemia target information

續(xù)Tab 2

Fig 4 Potential target GO enrichment analysis

2.6 黃芩-梔子“成分-靶點(diǎn)-通絡(luò)”網(wǎng)絡(luò)分析圖將富集得到的前15條KEGG通路反向篩選得到89個(gè)CIS靶點(diǎn)和24個(gè)黃芩-梔子活性成分，構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖,見Fig 6。其中度值較大的活性成分分別為黃芩苷、漢黃芩素、梔子苷、黃芩素、蘇薺苧黃酮和千層紙素A(Tab 3)；度值較大的靶點(diǎn)為PTGS2、PIK3CG、AKT1、HSP90AB1、PRKACA和NOS2等(Tab 4)。

Fig 5 Potential target KEGG pathway annotation

Tab 3 Topological parameters of core active ingredients

Tab 4 Key target topological parameters

2.7 分子對(duì)接驗(yàn)證核心成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)一般認(rèn)為，配體與受體的結(jié)合能越低，結(jié)合的構(gòu)向越穩(wěn)定。結(jié)合能≤-4.25 kcal·mol-1,說明兩者有一定的結(jié)合活性，≤-5.0 kcal·mol-1,說明兩者有較好的結(jié)合活性，≤-7.0 kcal·mol-1,說明兩者有強(qiáng)的結(jié)合活性。為了能更直接地闡述黃芩-梔子配伍使用抗CIS的可能作用機(jī)制。選取由網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選得到的核心成分黃芩苷、漢黃芩素、梔子苷、黃芩素分別與關(guān)鍵靶點(diǎn)PTGS2、PIK3CG、AKT1、HSP90AB1、PRKACA、NOS2進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證(Tab 5)，其中87.5%的成分與其靶點(diǎn)的結(jié)合能≤-7.0 kcal·mol-1，表明成分與其靶點(diǎn)均具有較強(qiáng)的結(jié)合活性，大部分有效成分與目標(biāo)靶點(diǎn)的結(jié)合能比臨床推介抗炎藥阿司匹林的結(jié)合能還要強(qiáng)。利用Pymol軟件將部分結(jié)合能較高的結(jié)果進(jìn)行可視化處理,見Fig 7。

Fig 6 Network diagram of “drug-component-target-pathway”

Fig 7 Schematic diagram of molecular docking between Scutellaria baicalensis-Gardenia core components and key targets

Tab 5 Core compound docking results with key targets

3 討論

黃芩-梔子為清熱解毒常用藥對(duì)，在心腦血管系疾病的治療上表現(xiàn)出了較好的效果，但對(duì)于配伍后藥效基團(tuán)和作用機(jī)制的研究相對(duì)較少，本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合分子對(duì)接技術(shù)對(duì)黃芩-梔子配伍治療CIS的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制進(jìn)行了探討。

通過數(shù)據(jù)庫的收集，共篩選到黃芩-梔子27個(gè)有效化合物和197個(gè)預(yù)測(cè)靶點(diǎn)，CIS相關(guān)基因靶點(diǎn)共2 694個(gè)，對(duì)預(yù)測(cè)靶點(diǎn)與CIS疾病靶點(diǎn)進(jìn)行對(duì)比分析，得到156個(gè)共同靶點(diǎn)，對(duì)其進(jìn)行GO功能和KEGG通路富集分析，發(fā)現(xiàn)黃芩-梔子可能通過參與RNA聚合酶Ⅱ的正調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、凋亡過程、轉(zhuǎn)錄、炎癥反應(yīng)等生物學(xué)過程；在等離子膜、核和胞漿等部位參與蛋白質(zhì)結(jié)合、能量代謝和轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合等分子反應(yīng)，進(jìn)而調(diào)控PI3K-Akt信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、cAMP信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路等抑制腦卒中后炎性反應(yīng)、細(xì)胞凋亡，穩(wěn)定血腦屏障，改善缺血組織供血供氧，發(fā)揮抗CIS的作用。對(duì)通路反向篩選得到黃芩苷、漢黃芩素、梔子苷、黃芩素等核心成分和PTGS2、PIK3CG、AKT1、HSP90AB1、PRKACA、NOS2等關(guān)鍵靶點(diǎn)。PTGS2為前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2(PTGS2)，又稱COX-2，能夠促使花生四烯酸(arachidonic acid，AA)轉(zhuǎn)化成前列腺素E2(PGE2)，其通過與G蛋白偶聯(lián)的前列腺素受體EP4結(jié)合而發(fā)揮生物效應(yīng)，促進(jìn)環(huán)腺苷酸(cyclic adenosine monophosphate，cAMP)表達(dá)增加，繼而能夠提高炎性因子IL-6和TNF的釋放，介導(dǎo)發(fā)熱反應(yīng)，使體溫升高[8]，通過抑制PTGS2的活性，可達(dá)到解熱、抗炎的目的，可作為非甾體抗炎藥物的作用靶點(diǎn)；PIK3CG是PI3K-AKT信號(hào)通路的重要信息分子，敲除PIK3CG模塊后，巨噬細(xì)胞的存活率顯著降低，提示增加其表達(dá)量可以抑制巨噬細(xì)胞的凋亡，同時(shí)也對(duì)巨噬細(xì)胞促炎因子——TNF-α的分泌有抑制作用，一定程度上阻滯了巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)[9]；AKT1(絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶)，可以不同程度抑制CASP3、NFKB1等細(xì)胞因子表達(dá)，抑制腦卒中后炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖和存活；此外，還可被多種上游細(xì)胞因子(如血管內(nèi)皮生長因子等)激活,進(jìn)而對(duì)缺血性損傷后的神經(jīng)元發(fā)揮保護(hù)作用[10]；PRKACA屬于蛋白激酶A(protein kinase，PKA)的一種催化亞基，通過阻斷病毒誘導(dǎo)信號(hào)適配蛋白(virus induced signaling adaptor，VISA)抑制NF-κB的釋放、Ⅰ型干擾素和炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)，發(fā)揮抗炎、抗病毒作用[11]；NOS2為誘導(dǎo)型一氧化氮合酶，誘導(dǎo)產(chǎn)生多種功能的信使分子一氧化氮(NO)，過量的NO不僅可以介導(dǎo)胞質(zhì)靶蛋白(例如PTGS2/COX2)的半胱氨酸S-亞硝基化，參與炎癥，增強(qiáng)促炎介質(zhì)如IL-6和IL-8的合成，亦可調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶通路破壞血腦屏障、損害線粒體功能，加重腦部供能不足[12]。結(jié)合靶點(diǎn)在篩選所得通路中發(fā)揮作用繪制黃芩-梔子配伍治療腦缺血效應(yīng)機(jī)制示意圖,見Fig 8，討論其治療機(jī)制。

黃芩有效成分黃芩苷、漢黃芩素和梔子有效成分梔子苷可以抑制MAPK家族、NFKB1、PTGS2、NOS2等靶點(diǎn)抑制下游TNF-α、IL-6、RELA等炎癥介質(zhì)的釋放并廣泛參與細(xì)胞反應(yīng)，維持腦組織穩(wěn)態(tài)；漢黃芩素、黃芩素、梔子苷可以激活PIK3CG，一方面可以調(diào)節(jié)TNF-α分泌，參與炎癥反應(yīng)，另一方面促進(jìn)Bcl-2的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡；漢黃芩素、黃芩素可以激活PRKACA阻斷VISA、抑制NF-κB的釋放和炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)；黃芩苷、漢黃芩素、黃芩素可以抑制AKT1，調(diào)控細(xì)胞增殖和生長，參與包括細(xì)胞凋亡和葡萄糖代謝在內(nèi)的細(xì)胞過程，并抑制下游CASP3、NFKB1和Bcl-2的表達(dá)；CASP3為多條細(xì)胞凋亡通路的關(guān)鍵性介質(zhì)，黃芩苷、漢黃芩素、黃芩素、梔子苷均可不同途徑抑制該蛋白表達(dá)，減少多腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)的裂解，緩減細(xì)胞功能障礙，促進(jìn)細(xì)胞存活；HSP90AB1為熱休克蛋白家族一員，黃芩素和漢黃芩素可以抑制其表達(dá)，對(duì)抗內(nèi)源性損傷因子引起的毒性作用、抑制促凋亡基因、保護(hù)線粒體，維持細(xì)胞生存和功能。此外，課題組之前研究表明，黃芩苷-梔子苷(7 ∶3)配伍使用可明顯降低TMF-α、IL-1β和IL-10的含量[13]，降低腦缺血側(cè)CysLTs含量,抑制5-Lox、CysLTs1、CysLTs2蛋白表達(dá),抑制5-LOX/CysLTs/CysLT、COX2、Toll樣受體等炎性損傷通路[14]；提高Na+,K+-ATP酶活性,降低腦組織無氧呼吸,減輕細(xì)胞毒性；降低P-gp含量、AQP-4蛋白表達(dá)，改善BBB通透性，減輕腦水腫損傷，從而起到防治缺血性腦損傷的作用?？偨Y(jié)以上，黃芩-梔子多種有效成分直接或間接作用于同一靶點(diǎn)，產(chǎn)生協(xié)同作用；作用于不同靶點(diǎn)，參與多途徑抗腦缺血損傷，從而也證明了黃芩-梔子配伍用于CIS的依據(jù)。

Fig 8 Schematic diagram of mechanism of Scutellaria baicalensis-Gardenia in treatment of cerebral ischemia

基于受體理論，將多個(gè)核心成分和關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證，這些有效成分可以與多個(gè)靶點(diǎn)結(jié)合，且具有同常用抗炎藥物如阿司匹林相近甚至更強(qiáng)的結(jié)合力，這些靶點(diǎn)分布于不同的通路，廣泛參與了腦缺血后調(diào)節(jié)血腦屏障、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖與凋亡等過程，證明了黃芩-梔子通過多靶點(diǎn)、多通路參與腦缺血損傷。此外，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證明，黃芩苷[15]、漢黃芩素[16]、黃芩素[17]、梔子苷[18]能減輕炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)腦部血流恢復(fù)，改善腦缺血損傷，可見，運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)黃芩-梔子治療腦缺血的潛在物質(zhì)基礎(chǔ)具有一定的可靠性。

綜上所述，與化學(xué)藥“單成分-單靶點(diǎn)”不同的是，黃芩、梔子含有多種成分，多種成分既可以作用于不同的靶點(diǎn)，也可以共同作用于相同靶點(diǎn)，同一靶點(diǎn)可干預(yù)不同的生物學(xué)過程及信號(hào)通路，發(fā)揮藥對(duì)之間的協(xié)同增效作用，充分體現(xiàn)了中藥復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)的優(yōu)勢(shì)。黃芩和梔子配伍治療CIS可能是通過黃芩苷、黃芩素、梔子苷等有效成分調(diào)控PI3K-Akt、MAPK、cAMP、TNF等信號(hào)通路抑制腦缺血后炎性反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、穩(wěn)定血腦屏障和促進(jìn)腦部神經(jīng)細(xì)胞增殖來發(fā)揮抗腦缺血的作用。此外，其對(duì)接位點(diǎn)所得信息對(duì)分析該化合物抑制活性的機(jī)制以及今后黃芩和梔子配伍的臨床用藥提供了一定的研究依據(jù)。下一步，我們將選擇PI3K-Akt通路繼續(xù)深入研究，給予腦缺血大鼠黃芩苷、漢黃芩素、黃芩素、梔子苷，檢測(cè)血清中樞神經(jīng)特異性蛋白(S100β)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、IL-6、TNF-α水平，檢測(cè)腦組織PI3K-Akt通路相關(guān)蛋白表達(dá)情況，進(jìn)一步探討黃芩-梔子有效成分激活PI3K-Akt通路對(duì)腦缺血大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用。