李 瑪， 李 云， 鄭 雷,3， 蘇 鈦， 熊永興， 李啟青， 邱 斌,4

(1.云南農(nóng)業(yè)職業(yè)技術學院， 昆明 650031； 2.云南省藥物研究所， 昆明 650111；3.四川中醫(yī)藥高等?？茖W校， 四川 綿陽 621000； 4.云南中醫(yī)藥大學， 昆明 650500)

隨著中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，掠奪式采挖野生資源造成極大破壞。中藥材人工種植就成了解決中藥資源瀕危狀況、保證中藥材質(zhì)量、保護中藥資源原生環(huán)境的必由之路[1]。種子是藥材生產(chǎn)活動的源泉[2]，優(yōu)良的種子是生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)中藥材的先決條件[3]，開展種子檢驗規(guī)程和種子質(zhì)量分級研究，有助于在種植藥材前選用優(yōu)良的種子，從而能夠從源頭上控制中藥材的生產(chǎn)活動，保證中藥材的質(zhì)量與產(chǎn)量[4-7]。

五加科人參屬植物珠子參(PanaxjaponicasC. A. Mey. var.major(Burk.) C. Y. Wu et K. M. Feng)為中藥材珠子參的基源植物之一，其以干燥根莖入藥[8]，以皂苷類、多糖等為主要藥效成分[9]，具有補肺養(yǎng)陰，祛瘀止痛，止血的功效，用于氣陰兩虛，煩熱口渴，虛勞咳嗽，跌撲損傷，關節(jié)痹痛，咳血，吐血，衄血，崩漏，外傷出血[8]。珠子參野生資源較少，隨著藥材用量的增加，野生資源已難以滿足市場需求，目前已開展珠子參人工引種馴化種植，并取得了一定成果[10-12]，形成了一定的種植規(guī)模。當前，尚無關于珠子參種子檢驗和種子質(zhì)量標準的研究，為了更好地規(guī)范珠子參藥材的種植活動，提高珠子參藥材的品質(zhì)，保證廣大藥農(nóng)的利益，本研究測定珠子參種子凈度、千粒重、真實性、含水量、生活力、發(fā)芽率等指標，系統(tǒng)研究珠子參種子檢驗方法，并在此基礎上制定了珠子參種子的檢驗規(guī)程，可為珠子參種子質(zhì)量標準的研究提供依據(jù)。同時，也可進一步規(guī)范珠子參藥材的種植。

1 材 料

珠子參種子收集于云南省麗江市各珠子參栽培區(qū)，經(jīng)中科院昆明植物研究所李恒研究員鑒定為五加科人參屬植物珠子參(PanaxjaponicasC. A. Mey. var. major(Burk.) C. Y. Wu et K. M. Feng)的種子。

2 方 法

2.1 扦 樣

按《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程 扦樣》的規(guī)定執(zhí)行。

2.2 凈度分析

按《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程 凈度分析》的規(guī)定執(zhí)行。

2.3 種子真實性鑒定

隨機數(shù)取種子100粒，測量記錄其大小、形狀、顏色，重復3次。

2.4 重量測定

種子千粒重測定采用百粒法、五百粒法和千粒法3種方法進行，百粒法、五百粒法計算變異系數(shù)，千粒法計算重復間差數(shù)與平均數(shù)之比。

2.5 含水量測定

參照《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程 水分測定》，采用高恒溫(131±2)℃烘干法和低恒溫(103±2)℃烘干法對種子含水量進行測定。

2.6 生活力測定

2.6.1染色時間的確定

取凈種子充分浸泡，將種子沿種臍縱切，取半粒置于培養(yǎng)皿中，配制0.1%TTC溶液進行染色，染色溫度15 ℃，染色時間設為2 h，4 h，6 h，16 h和18 h，觀察并計數(shù)。試驗重復3次，每重復50粒種子。

2.6.2TTC濃度和染色溫度確定

采用正交試驗處理。TTC濃度為0.1%、0.3%和0.5%，染色溫度為15 ℃、20 ℃、25 ℃和30 ℃，采用2.6.1所確定的染色時間進行染色，觀察并計數(shù)。試驗重復3次，每重復50粒種子。

2.7 發(fā)芽率測定

珠子參種子具有后熟特性，需經(jīng)過后熟才能完成萌發(fā)[13]。珠子參種子采集后，以新鮮種子為材料，按趙新禮[14]的方法，將種子與濕沙按照體積比1∶3混合均勻，置于15 ℃下沙藏160 d，待種子完成形態(tài)后熟后進行發(fā)芽試驗。

2.7.1發(fā)芽前處理

采用自來水(ck)、無菌水、0.1%高錳酸鉀、1%次氯酸鈉分別對珠子參種子浸種10 min，采用沙上發(fā)芽床， 在20 ℃光暗交替(光照12 h，黑暗12 h)條件下進行發(fā)芽試驗，觀察并計數(shù)，觀察種子污染率。每個處理50粒種子，3次重復。

2.7.2適宜發(fā)芽床的確定

設置紙上、沙上、蛭石3種發(fā)芽床條件，在20 ℃光暗交替(光照12 h，黑暗12 h)條件下進行發(fā)芽試驗，觀察統(tǒng)計種子發(fā)芽情況。每個處理50粒種子，3次重復。

2.7.3適宜發(fā)芽溫度的確定

設置15、20、25 ℃分別作為發(fā)芽溫度，發(fā)芽床為沙上，光照條件設置為光暗交替(光照12 h，黑暗12 h)，觀察統(tǒng)計種子發(fā)芽情況。每個處理50粒種子，3次重復。

2.7.4光照對種子發(fā)芽的影響

發(fā)芽床為沙上，發(fā)芽溫度20 ℃，光照條件設置為光暗交替(光照12 h，黑暗12 h)和24 h全黑暗處理，觀察統(tǒng)計種子發(fā)芽情況。每個處理50粒種子，3次重復。

2.7.5發(fā)芽計數(shù)時間的確定

根據(jù)種子發(fā)芽表現(xiàn)，確定初次計數(shù)時間和末次計數(shù)時間。以珠子參種子胚根伸出種皮2 mm時的試驗天數(shù)作為發(fā)芽初次計數(shù)時間，種子發(fā)芽數(shù)達到最高后再無發(fā)芽種子出現(xiàn)時的發(fā)芽天數(shù)為末次計數(shù)時間。

一是涉農(nóng)專項轉(zhuǎn)移支付項目增加容易取消難。新一輪財稅體制改革以來，涉農(nóng)專項轉(zhuǎn)移支付目錄得到了較大幅度的壓減，但這種整合多數(shù)是小類歸大類，是物理整合而不是化學整合，原有的條塊分配模式基本沒有打破。根據(jù)審計署的報告顯示，一些專項轉(zhuǎn)移支付歸并后管理方式并沒有發(fā)生根本性改變，仍存在“碎片化、部門化、司處化”的現(xiàn)象。從地方情況看，涉農(nóng)資金的統(tǒng)籌整合任務也迫在眉睫。名目繁多的涉農(nóng)資金，大部分以獨立、具體的項目形式“戴帽”下達。

2.7.6結(jié)果統(tǒng)計

試驗結(jié)果以發(fā)芽率表示。

發(fā)芽率(%) =(試驗結(jié)束時發(fā)芽的種子數(shù)/供試種子總數(shù))×100%。

3 結(jié)果與分析

3.1 扦 樣

珠子參凈度分析試樣的最小重量為40 g，送驗樣品須為凈度分析的10倍以上，珠子參種子凈度分析需要種子400 g。

3.2 凈度分析

本次試驗所用的珠子參種子采集自各產(chǎn)區(qū)，并未摻入其他植物的種子，采集后在實驗室充分洗去果皮并陰干表面水分，無雜質(zhì)，故本次試驗中的珠子參種子凈度為100%。

3.3 真實性鑒定

珠子參果實為核果狀漿果，成熟后為鮮紅色帶黑色，果實呈腎形或球狀腎形，含種子1～3粒，偶4?；?粒，種子白色或灰黑色，側(cè)扁或三角狀卵形，表面粗糙，種子平直的一面有種脊，靠基部有一圓形吸水孔，種子胚乳豐富，白色，胚細小，位于胚乳基部，歪斜。種子長3.40～8.95 mm，寬3.23～7.85 mm，厚3.11～8.57 mm。

3.4 重量測定

珠子參種子重量測定結(jié)果(表1)顯示，百粒法及五百粒法條件下測定千粒重，變異系數(shù)(CV)均大于4.0%，測定值無效，所以不能采用百粒法及五百粒法測定珠子參種子千粒重；采用千粒法測定時，重復間差數(shù)與平均數(shù)之比小于5.0%，測定值有效。因此，珠子參種子重量的測定方法確定為千粒法。

表1 珠子參種子重量測定

3.5 含水量測定

圖1 高恒溫烘干法測定珠子參種子含水量

圖2 高恒溫烘干法和低恒溫烘干法種子含水量測定比較

3.6 生活力測定

3.6.1珠子參種子生活力測定染色時間確定

不同染色時間測定的珠子參種子生活力結(jié)果見表2。珠子參種子染色16 h后測定的種子生活力基本穩(wěn)定，種子生活力達到97%以上，因此珠子參種子生活力測定的適宜染色時間為16 h。

表2 珠子參種子染色時間分析

3.6.2珠子參種子生活力測定染色TTC濃度和染色溫度確定

TTC濃度和染色溫度影響珠子參種子生活力測定。由表3可看出，同一TTC濃度下隨著溫度的升高，珠子參種子生活力測定值降低，同一溫度下隨著TTC濃度的升高珠子參種子生活力測定值呈降低趨勢。通過TTC濃度和染色溫度的正交試驗處理可得出，試驗處理1、試驗處理2、試驗處理3和試驗處理7測定的珠子參種子生活力值無顯著差異，均大于等于96.0%。因此珠子參種子生活力測定的適宜TTC濃度和染色溫度為：TTC濃度0.1%，染色溫度15～25 ℃或TTC濃度0.3%，染色溫度25 ℃。由于TTC具有毒性，綜合成本及染色效果考慮，建議珠子參種子生活力測定的TTC濃度為0.1%，染色溫度為15～25 ℃。

表3 珠子參種子生活力測定

3.7 發(fā)芽率測定

3.7.1珠子參種子發(fā)芽前處理

由表4可見，在珠子參種子發(fā)芽過程中，種子容易受到污染，未經(jīng)消毒殺菌處理的種子污染嚴重，經(jīng)過高錳酸鉀及次氯酸鈉溶液處理的種子，發(fā)芽率明顯高于自來水和無菌水處理的種子，采用高錳酸鉀和次氯酸鈉溶液處理的種子間發(fā)芽率差異不明顯。根據(jù)實驗結(jié)果，在進行珠子參種子發(fā)芽試驗前，可采用0.1%高錳酸鉀溶液或1%次氯酸鈉溶液對珠子參種子進行浸泡，時間為10 min，已達到種子消毒的目的。

表4 發(fā)芽前不同處理對珠子參種子發(fā)芽率的影響

3.7.2適宜發(fā)芽床的確定

由表5可見，紙上、沙上兩種處理間種子發(fā)芽率差異不明顯，紙上和沙上兩種發(fā)芽床的發(fā)芽率明顯高于蛭石發(fā)芽床。因此，沙上和紙上均可作為珠子參種子發(fā)芽床，從結(jié)果看，采用沙上作為發(fā)芽床的種子發(fā)芽率高于紙上發(fā)芽床，并且本試驗沙上發(fā)芽床更利于水分的保存，因此珠子參種子發(fā)芽率測定最適發(fā)芽床為沙上。

表5 不同發(fā)芽床對株子參種子發(fā)芽率的影響

3.7.3適宜發(fā)芽溫度的確定

由表6可見，珠子參種子在20 ℃條件下發(fā)芽率最高，15 ℃次之，25 ℃條件下發(fā)芽率最差。因此珠子參種子最適發(fā)芽溫度為20 ℃。

表6 溫度對珠子參種子發(fā)芽率的影響

3.7.4光照條件的確定

由表7可見，光暗交替條件和全黑暗條件下珠子參種子均可正常發(fā)芽，但是種子發(fā)芽以后，在無光條件下長勢較弱，因此，珠子參種子發(fā)芽時選擇光暗交替(光照12 h，黑暗12 h)條件對其進行培養(yǎng)。

表7 光照對珠子參種子發(fā)芽率的影響

3.7.5發(fā)芽計數(shù)時間的確定

種子置發(fā)芽床后第11天胚根突破種皮約2 mm，以后種子發(fā)芽數(shù)增多，第76天后無種子發(fā)芽，發(fā)芽基本結(jié)束，珠子參種子沙藏后發(fā)芽周期為80 d左右。因此珠子參種子發(fā)芽初次計數(shù)時間為11 d，末次計數(shù)時間為80 d。

4 結(jié)論與討論

中藥材種子是中藥材種植業(yè)賴以發(fā)展和藥農(nóng)賴以生存的最基本的生產(chǎn)資料，種子檢驗則是保證中藥材種子質(zhì)量的重要措施和手段[3]。開展中藥材種子質(zhì)量評價技術和標準的研究是我國中藥材規(guī)范化生產(chǎn)中的重要內(nèi)容[15]。近年來，珠子參藥材用量呈增加趨勢，引種栽培面積亦隨之擴大，因此，開展珠子參種子檢驗規(guī)程研究，對于保護珠子參資源，規(guī)范珠子參藥材生產(chǎn)過程，從源頭上保證藥材質(zhì)量具有重要的意義。

種子凈度是衡量種子品質(zhì)的一項重要指標。用于本次研究的珠子參種子為自行到產(chǎn)區(qū)收集珠子參果實洗凈所得，凈度為100%，因此，未將凈度作為制定珠子參種子檢驗規(guī)程指標。

種子發(fā)芽率可直接反映田間出苗率，是確定播種和用種量的主要依據(jù)[16]。珠子參種子具有后熟特性，在進行種子發(fā)芽率檢測時，直接用剛采收的新鮮種子進行發(fā)芽試驗，在整個試驗期內(nèi)，種子很難發(fā)芽，并且隨著發(fā)芽時間的延長，種子大多受污染而霉爛，不能對種子發(fā)芽率進行有效的檢測。采用經(jīng)過后熟處理的種子進行發(fā)芽率測定，能夠獲得有效的發(fā)芽率測定數(shù)據(jù)。因此，在進行珠子參種子發(fā)芽率測定前，需對種子進行后熟處理。

在統(tǒng)計珠子參種子發(fā)芽計數(shù)天數(shù)時發(fā)現(xiàn)，在15 ℃下進行發(fā)芽率檢測的種子，置床8 d后即發(fā)現(xiàn)發(fā)芽的種子，但是其最終發(fā)芽率不如20 ℃下的種子，因此，計數(shù)時間采用20 ℃下的11～80 d。

本試驗以云南產(chǎn)新鮮珠子參種子為材料，系統(tǒng)的研究了珠子參種子扦樣、凈度分析、真實性鑒定、含水量、千粒重測定、發(fā)芽率測定的方法，制定了適宜珠子參種子的檢驗規(guī)程(表8)，能夠為珠子參藥材的規(guī)范化生產(chǎn)提供有力的支撐。

表8 珠子參種子檢驗規(guī)程