楊嘉力， 王 振， 劉 飛， 張麗娜， 楊少奇

胃黏膜腸上皮化生(gastric intestinal metaplasia，IM)與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，被認(rèn)為是腸型胃癌的癌前病變[1]。研究表明IM的發(fā)生與幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染存在一定的關(guān)聯(lián)性[2-4]，但其發(fā)生機(jī)制仍不明確。因此，積極探尋IM的特異性分子標(biāo)志物有助于臨床醫(yī)師早期診斷IM。尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2(caudal-related homeobox transcription factor 2,CDX2)最早在果蠅中發(fā)現(xiàn)[5]，在胃黏膜中檢出CDX2提示正常胃黏膜組織向腸化方向發(fā)展[6]。因此，CDX2在胃黏膜中的異位表達(dá)可能與IM的發(fā)生有一定的關(guān)聯(lián)。黏蛋白2(mucin 2,MUC2)主要在結(jié)腸黏膜杯狀細(xì)胞中表達(dá)，而在正常胃黏膜中不表達(dá),其表達(dá)與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7-10]。但目前CDX2及MUC2在IM組織中的表達(dá)情況及其臨床意義尚不明確，Hp感染是否會(huì)增加CDX2、MUC2的表達(dá)也尚不清楚?；诖?，本研究旨在分析和比較不同性質(zhì)胃黏膜組織中CDX2、MUC2的表達(dá)情況，進(jìn)一步明確其臨床意義，探討CDX2、MUC2表達(dá)與IM發(fā)生和Hp感染的關(guān)聯(lián)性。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 選擇2011年1月至2014年5月因消化道癥狀就診于寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院消化內(nèi)科門(mén)診并行內(nèi)鏡活檢的152例患者，根據(jù)病理檢查結(jié)果將其分為非萎縮性胃炎組(32例)、萎縮性胃炎組(31例)、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組(24例)、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組(5例)、胃癌組(17例)和IM組(43例)。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)行胃鏡檢查及活檢，病理檢查診斷明確；(2)未行胃癌手術(shù)、放化療等治療；(3)近1個(gè)月內(nèi)未服用抑酸類(lèi)藥物，既往未接受Hp根除治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他系統(tǒng)良、惡性腫瘤；(2)合并有其他組織器官急、慢性炎癥。

1.3標(biāo)本收集方法 (1)組織標(biāo)本：調(diào)取研究對(duì)象于寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院病理科石蠟包埋封存的胃鏡病理活檢標(biāo)本。(2)血液標(biāo)本：收集研究對(duì)象清晨空腹外周血，以2 000 r/min條件離心15 min，收集血清，-70 ℃保存待測(cè)。

1.4免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CDX2、MUC2的表達(dá) 將組織蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片，將切片烘烤并溶蠟，再脫蠟、脫水，然后將切片放入緩沖液中加熱至微沸，放置室溫冷卻，洗滌，加入一抗液孵育后，再加入二抗液使其浸潤(rùn)全部組織，并孵育。最后將每張切片滴加DBA顯色液染色，脫水，常規(guī)封片。由病理科兩位醫(yī)師在高倍顯微鏡下對(duì)染色切片進(jìn)行觀察，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)估。CDX2陽(yáng)性表達(dá)：主要表達(dá)于細(xì)胞核，呈棕黃或深褐色顆粒。MUC2陽(yáng)性表達(dá)：主要表達(dá)于細(xì)胞漿，呈棕黃或棕褐色顆粒。CDX2、MUC2陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，共記錄500個(gè)目標(biāo)細(xì)胞，最終判定結(jié)果以陽(yáng)性細(xì)胞百分比與染色細(xì)胞強(qiáng)度的乘積為準(zhǔn)。染色強(qiáng)度得分：0分為無(wú)色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比得分：陽(yáng)性細(xì)胞<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。以染色細(xì)胞強(qiáng)度得分與陽(yáng)性細(xì)胞百分比得分的乘積≥3判定為陽(yáng)性(+)[1]。

1.5血清Hp-IgG檢測(cè) 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)血清中Hp-IgG水平，試劑盒購(gòu)自武漢華美生物工程有限公司。實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，采用Bio-RAD680酶標(biāo)儀對(duì)結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)(百分率)[n(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Kappa一致性檢驗(yàn)分析兩指標(biāo)結(jié)果的一致性水平。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1不同性質(zhì)胃黏膜組織CDX2、MUC2陽(yáng)性率比較結(jié)果 6組的CDX2、MUC2陽(yáng)性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中IM組的CDX2、MUC2陽(yáng)性率最高，且高于其他5組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同性質(zhì)胃黏膜組織CDX2、MUC2陽(yáng)性率比較結(jié)果[n(%)]

2.2IM組和胃炎組CDX2與Hp-IgG表達(dá)情況的一致性分析結(jié)果 IM組Hp-IgG陽(yáng)性率高于胃炎組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(65.12% vs 42.50%；χ2=4.270，P=0.039)。Kappa一致性分析結(jié)果顯示，在IM組中CDX2與Hp-IgG的表達(dá)情況具有一致性(P<0.05)，但胃炎組CDX2與Hp-IgG的表達(dá)情況一致性不顯著(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 IM組和胃炎組CDX2與Hp-IgG表達(dá)情況的一致性分析結(jié)果(n)

2.3IM組和胃炎組MUC2與Hp-IgG表達(dá)情況的一致性分析結(jié)果 Kappa一致性分析結(jié)果顯示，在IM組和胃炎組中MUC2與Hp-IgG的表達(dá)情況一致性不顯著(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 IM組和胃炎組MUC2與Hp-IgG表達(dá)情況的一致性分析結(jié)果(n)

3 討論

3.1IM作為癌前病變，是胃癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)IM的早期防治在胃癌的綜合治療中有重要的作用[2]。有研究表明CDX2、MUC2的表達(dá)與IM的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，并可能參與了胃黏膜癌變的過(guò)程[11]。James等[12]的研究表明CDX2蛋白由311個(gè)單氨基酸組成，通過(guò)螺旋-螺旋方式結(jié)合在DNA對(duì)應(yīng)區(qū)域，以轉(zhuǎn)錄因子的形式調(diào)節(jié)DNA的表達(dá)，對(duì)結(jié)腸和小腸的上皮發(fā)育和分化起著重要的作用。Mutoh等[13]通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，胃黏膜CDX2陽(yáng)性表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠子代在出生后第37天，除腸嗜鉻素樣細(xì)胞外，所有胃黏膜細(xì)胞完全被腸化生取代。也有研究表明，正常胃黏膜組織中無(wú)CDX2表達(dá)，而在發(fā)生腸化和胃癌時(shí)CDX2出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，且發(fā)生腸化時(shí)CDX2的表達(dá)水平較發(fā)生胃癌時(shí)更高[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，CDX2在萎縮性胃炎組織中開(kāi)始出現(xiàn)表達(dá)，而在IM組織中其陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到最高，且顯著高于其他不同性質(zhì)的胃黏膜組織；在發(fā)生胃癌時(shí)CDX2陽(yáng)性表達(dá)率下降，但仍高于萎縮性胃炎組，這與相關(guān)研究[15]結(jié)果相似。姚凡保等[16]的研究結(jié)果提示CDX2的表達(dá)程度可在一定程度上反映“正常組織-癌前病變-癌變”的過(guò)程。因此，筆者推測(cè)CDX2是IM發(fā)生的始動(dòng)因子，其在胃黏膜中的異常表達(dá)使正常胃黏膜結(jié)構(gòu)破壞，繼之出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致IM的發(fā)生，促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

3.2在正常胃黏膜結(jié)構(gòu)被破壞并出現(xiàn)腸化或胃癌組織時(shí)，MUC2在胃黏膜組織中呈陽(yáng)性表達(dá)。有研究發(fā)現(xiàn)MUC2在淺表性胃炎中不表達(dá)，而在IM和胃癌中呈陽(yáng)性表達(dá)，并且胃黏膜發(fā)生腸化時(shí)，MUC2陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于其他類(lèi)型的胃黏膜組織[17]。陳淑敏等[10]研究也表明，MUC2高表達(dá)于萎縮性胃炎伴IM組織中。本研究結(jié)果顯示，MUC2在非萎縮性胃炎中不表達(dá)，在萎縮性胃炎中開(kāi)始出現(xiàn)表達(dá)，當(dāng)發(fā)展至IM時(shí)MUC2表達(dá)陽(yáng)性率達(dá)到最高，且顯著高于其他性質(zhì)的胃黏膜組織，發(fā)生胃癌時(shí)其陽(yáng)性表達(dá)率有所降低，這與崔小強(qiáng)等[17]的研究結(jié)果相似。這可能與MUC2維持腸上皮細(xì)胞的更新與分化的作用有關(guān)，其為IM發(fā)生的重要調(diào)節(jié)因子，因此MUC2具有應(yīng)用于診斷IM的前景。與IM組相比，胃癌組中MUC2陽(yáng)性表達(dá)率降低，其機(jī)制可能與胃癌發(fā)生后腸化特有的杯狀細(xì)胞減少、癌細(xì)胞的增多有關(guān)，有待進(jìn)一步研究明確。另外，本研究發(fā)現(xiàn)MUC2在低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組織的陽(yáng)性表達(dá)率也較高，這與苗龍[18]的研究結(jié)果相似，提示腸化與上皮內(nèi)瘤變共存的可能，也證實(shí)了胃癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)漸進(jìn)的過(guò)程。

3.3Hp感染是IM發(fā)生的危險(xiǎn)因素[10]。Shin等[19]研究發(fā)現(xiàn)Hp根除后可引起CDX2 mRNA表達(dá)下調(diào)，而CDX2蛋白的提升會(huì)促進(jìn)腸上皮化生和異型增生。Babu等[20]發(fā)現(xiàn)Hp感染的IM黏膜中MUC2表達(dá)上調(diào)了75%。本研究結(jié)果顯示，IM組織中Hp-IgG陽(yáng)性率顯著高于胃炎時(shí)，驗(yàn)證了Hp感染可增加IM發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。Kappa一致性分析結(jié)果顯示，IM組中CDX2與Hp-IgG的表達(dá)情況具有一致性(P<0.05)，提示Hp感染可能通過(guò)誘導(dǎo)CDX2的表達(dá)從而引起IM。本研究結(jié)果還顯示，在IM組和胃炎組中MUC2與Hp-IgG的表達(dá)情況一致性不顯著(P>0.05)，提示Hp感染并不是通過(guò)影響MUC2表達(dá)而誘使IM發(fā)生。這與Babu等[20]的研究結(jié)果不同，考慮與樣本入選條件差異和樣本量較少等因素有關(guān)，需繼續(xù)擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，CDX2、MUC2在非萎縮性胃炎組織中不表達(dá)，而在IM組織中高表達(dá)，疾病進(jìn)展至胃癌時(shí)其陽(yáng)性表達(dá)率又有所降低，其均具有作為診斷IM發(fā)生的應(yīng)用前景。IM組織中CDX2與Hp-IgG的表達(dá)情況具有一致性，考慮Hp感染后可通過(guò)調(diào)節(jié)CDX2在胃黏膜的表達(dá)而引起IM發(fā)生。