孫宏建

(佳木斯市中心醫(yī)院腫瘤科，黑龍江 佳木斯 154002)

胃癌是我國(guó)發(fā)病率最高的惡性腫瘤，主要的臨床癥狀為食欲不振、惡心嘔吐、消瘦乏力等，嚴(yán)重威脅患者的生命安全[1]。目前臨床上治療胃癌最有效的方式仍然是手術(shù)，其中腹腔鏡輔助D2根治性全胃切除術(shù)應(yīng)用較廣泛，但是對(duì)于中晚期胃癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，且預(yù)后較差。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，細(xì)胞免疫能夠通過(guò)提高患者的非特異性細(xì)胞免疫水平，對(duì)腫瘤細(xì)胞開展直接殺傷作用，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫水平，達(dá)到治療的目的[2]。本研究探討腹腔鏡輔助D2根治性全胃切除術(shù)聯(lián)合細(xì)胞免疫對(duì)胃癌患者腫瘤標(biāo)志物水平的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料：選擇2018年5月～2019年12月本院收治的64例胃癌患者作為本次研究對(duì)象，應(yīng)用雙色球法隨機(jī)分為手術(shù)組和聯(lián)合組各32例。手術(shù)組男18例，女14例；年齡45～68歲，平均(56.61±10.08)歲；腫瘤直徑2～10 cm，平均(4.82±1.02)cm；TNM分期：Ⅱ期21例，Ⅲ期11例。聯(lián)合組，男19例，女13例；年齡45～70歲，平均(56.65±10.10)歲；腫瘤直徑2～10 cm，平均(4.85±1.05)cm；TNM分期：Ⅱ期22例，Ⅲ期10例。兩組臨床資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①依據(jù)《胃癌診療規(guī)范2018版》確診為胃癌患者[3]；②預(yù)計(jì)生存期在3個(gè)月以上者；③知情、同意并簽署本次研究者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①意識(shí)障礙者；②手術(shù)禁忌證者；③凝血障礙者；④合并有心肝腎肺等嚴(yán)重疾病者；⑤失訪者。本次研究已經(jīng)過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。

1.2方法：手術(shù)組應(yīng)用腹腔鏡輔助D2根治性全胃切除術(shù)進(jìn)行治療。患者進(jìn)行全身麻醉，取平臥位，首先進(jìn)行臍孔穿刺，建立人工氣腹壓(術(shù)中維持在2.0 kPa左右)。然后從臍孔置入套管針和鏡頭，觀察腹腔后在左側(cè)腋前線肋緣下2 cm處作主操作口置入器械，接著在右側(cè)鎖骨中線2 cm處、臍橫線交點(diǎn)偏上2 cm處、右側(cè)前線肋緣下2 cm處分別作一個(gè)5 mm的輔助操作口；再利用超聲刀切斷胃結(jié)腸和脾胃韌帶及大網(wǎng)膜，游離動(dòng)靜脈，依次切斷肝胃韌帶、胃部右動(dòng)靜脈，使得全胃游離；再接著確定腫瘤情況，清掃D2淋巴結(jié)；最后在腹部正中作長(zhǎng)7 cm左右的輔助切口，切斷十二指腸殘端，切除遠(yuǎn)端胃，采取畢Ⅰ/Ⅱ式吻合術(shù)；清洗腹腔后置入引流管，關(guān)閉腹腔結(jié)束手術(shù)。

聯(lián)合組在手術(shù)組基礎(chǔ)上加用細(xì)胞免疫進(jìn)行治療。手術(shù)前抽取患者100 ml外周血，利用梯度離心機(jī)分離單核細(xì)胞，并放入RPMI1640 培養(yǎng)基(條件：5%CO2、37℃)中培養(yǎng)。第4天加入75 ng/ml粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、50 ng/ml重組人白細(xì)胞介素-4(rhIL-4)、40 μg/ml腫瘤抗原；第5天加入50 mg/ml腫瘤壞死因子-α(TNF-α)；第7天收獲抗原負(fù)載成熟的樹突細(xì)胞(CD細(xì)胞)。然后收集非貼壁細(xì)胞，稀釋至1×106個(gè)/ml，加入1 000 U/ml γ-干擾素、1 000 U/ml重組人白細(xì)胞介素-2(rhIL-2)；每隔3 d加入2 500 U/ml rhIL-2；在第10天和第12天收獲細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK細(xì)胞)。CD細(xì)胞、CIK細(xì)胞均經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，注射前測(cè)試病毒、細(xì)菌、真菌和支原體為陰性。第1個(gè)療程在腹股溝淋巴結(jié)周圍區(qū)皮下注射1×1010個(gè)免疫細(xì)胞(DC-CIK細(xì)胞)，12 d為1個(gè)療程，共治療3個(gè)療程。

1.3觀察指標(biāo):①T細(xì)胞亞群水平：利用美國(guó)Beckman Coulter生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀測(cè)試兩組患者治療前、治療后的外周血T細(xì)胞亞群水平，包括CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+。②腫瘤標(biāo)志物水平：利用羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司生產(chǎn)的Cobas e411型電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析儀通過(guò)電化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)試兩組患者化療前、化療后的糖類抗原125(CA125)、糖類抗原19-9(CA19-9)、癌胚抗原(CEA)水平。③隨訪1年生存狀況：對(duì)兩組患者治療后進(jìn)行隨訪1年，統(tǒng)計(jì)生存率，并利用Prizm軟件繪制生存曲線。

2 結(jié)果

2.1兩組治療前、治療后T細(xì)胞亞群水平比較：兩組治療前CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后CD3+、CD4+、、CD4+/CD8+均比治療前顯著上升且聯(lián)合組比手術(shù)組更高，CD8+均比治療前降低且聯(lián)合組比手術(shù)組更低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組治療前、治療后T細(xì)胞亞群水平比較

2.2兩組治療前、治療后腫瘤標(biāo)志物水平比較：兩組治療前CA125、CA19-9、CEA水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后均比治療前顯著下降，且聯(lián)合比手術(shù)組更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者治療前、治療后腫瘤標(biāo)志物水平比較

2.3隨訪1年兩組生存狀況比較：手術(shù)組的生存率為71.88%(23/32)，聯(lián)合組的生存率為96.88%(31/32)，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.807，P<0.05)。見圖1。

圖1 生存曲線

3 討論

胃癌是起源于胃黏膜上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，致死率極高[4]，并且該病早期臨床癥狀不明顯易被忽視，診斷時(shí)往往為中晚期，增加臨床治療難度[5]。目前臨床上針對(duì)中晚期胃癌患者常采用腹腔鏡輔助D2根治性全胃切除術(shù)進(jìn)行治療，但是術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，且預(yù)后較差，生存率較低[6]。

免疫療法是通過(guò)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫功能，誘導(dǎo)身體產(chǎn)生更強(qiáng)的抗腫瘤作用來(lái)發(fā)揮作用，即通過(guò)腫瘤患者自身的免疫力來(lái)達(dá)到治療腫瘤的目的[7]。故免疫療法能夠改善胃癌患者免疫功能，進(jìn)而改善胃癌患者T淋巴細(xì)胞亞群水平，治療后聯(lián)合組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明顯高于手術(shù)組，CD8+明顯低于手術(shù)組。

胃DC細(xì)胞能夠通過(guò)呈遞腫瘤抗原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗原特異性細(xì)胞毒T細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞，CIK細(xì)胞能夠通過(guò)分泌細(xì)胞因子殺死腫瘤細(xì)胞。而CA125是一種OC125結(jié)合的糖蛋白，CA19-9是一種低聚糖腫瘤相關(guān)抗原，CEA是一種復(fù)雜的含糖蛋白，均與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)[8]。DC-CIK免疫療法能夠顯著殺死胃腫瘤細(xì)胞，改善患者預(yù)后，降低CA125、CA19-9、CEA水平。本研究發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合組的CA125、CA19-9、CEA水平顯著低于手術(shù)組。同時(shí)手術(shù)組生存率明顯低于聯(lián)合組。分析其原因，聯(lián)合組患者通過(guò)DC-CIK免疫療法在提高患者免疫力的同時(shí)有效殺傷腫瘤細(xì)胞，改善胃癌患者預(yù)后，延長(zhǎng)生存周期。

綜上所述，應(yīng)用腹腔鏡輔助D2根治性全胃切除術(shù)聯(lián)合細(xì)胞免疫治療胃癌患者能夠顯著改善T細(xì)胞亞群水平和生存狀況，降低腫瘤標(biāo)志物水平。