周震宇 程繼業(yè) 陳沫 沈心 姚玲

(蘇州市藥品檢驗檢測研究中心，蘇州 215014)

美羅培南由日本住友株式會社研發(fā)，第二代廣譜碳青霉素烯類抗生素，通過抑制細菌細胞壁的合成而產(chǎn)生抗菌作用[1-2]。制劑注射用美羅培南為美羅培南和無水碳酸鈉按處方比例無菌分裝制成，臨床多用于治療混合感染和嚴(yán)重感染，其不良反應(yīng)以皮膚及皮下組織類疾病和胃腸系統(tǒng)疾病為主[3]。

1994年，美羅培南以商品名“Mepem?”在意大利上市，1999年在中國境內(nèi)上市，商品名為“美平”(規(guī)格0.5 g)。2020年，深圳市海濱制藥有限公司生產(chǎn)的注射用美羅培南在國內(nèi)首家通過仿制藥質(zhì)量與療效的一致性評價。根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局進口藥品和國產(chǎn)藥品數(shù)據(jù)庫的查詢結(jié)果，目前國內(nèi)共有11家生產(chǎn)企業(yè)取得注射用美羅培南的生產(chǎn)批件，涉及批準(zhǔn)文號25個，有3個規(guī)格(0.25、0.5和1.0 g)，其中國內(nèi)藥品生產(chǎn)企業(yè)10家，進口藥品生產(chǎn)企業(yè)1家。

注射用美羅培南為2021年國家藥品評價性抽驗品種。本次抽驗范圍覆蓋 20個省、3個直轄市和4個自治區(qū)，共抽取到100批樣品，涉及生產(chǎn)企業(yè)11家、批準(zhǔn)文號20個和規(guī)格3個，其中抽自使用單位26批，批發(fā)經(jīng)營單位74批。通過現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗結(jié)合探索性研究，綜合評價國內(nèi)外不同生產(chǎn)企業(yè)的注射用美羅培南質(zhì)量現(xiàn)狀，分析可能存在的質(zhì)量問題，明確提高產(chǎn)品質(zhì)量的方向。

1 儀器及試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀(Waters e2695-2998，配有四元泵、在線脫氣機、自動進樣器、DAD檢測器和Empower pro工作站)，AA-7000型原子吸收分光光度計(島津公司)，安捷倫7890B/7697A氣相色譜儀(Agilent OpenLab Acquisition CDS2.4色譜數(shù)據(jù)處理工作站)，Thermo Xseries2電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，Agilent 7697A頂空進樣(安捷倫公司)，Agilent 7890B/7200 Accurate Q-TOF GC/MS(安捷倫公司)(Mass Hunter workstation數(shù)據(jù)處理工作站)，電子天平(梅特勒托利多XSE205DU)，超純水儀(Millipore Milli-Q)。

1.2 試藥

美羅培南對照品(中國食品藥品檢驗研究院，批號：130506-202004)，美羅培南雜質(zhì)A對照品(杭州卓越科技生物有限公司，批號：20200723)，美羅培南雜質(zhì)B對照品(杭州卓越科技生物有限公司，批號：20201110)，鈉單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000 μg/mL，中國計量科學(xué)研究院，批號20124)，硝酸(蘇州晶瑞化學(xué)股份有限公司，批號210205081)，丙酮(99.5%，分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號20140107)，鋁、砷、鎘、鉻、銅、鐵、錳、鉛、錫、銻、鋅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000 μg/mL，國家有色金屬及電子材料分析測試中心)，鋇元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL，中國計量科學(xué)研究院，批號：19041-GBW(E)08043)。

2 實驗方法

2.1 法定檢驗

按各執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)對注射用美羅培南進行法定檢驗。主要檢驗項目包括鑒別、有關(guān)物質(zhì)、堿度、澄清度與顏色、含量均勻度和含量測定等。

2.2 探索性研究

2.2.1 有關(guān)物質(zhì)

參照《中國藥典》2020年版二部注射用美羅培南有關(guān)物質(zhì)項下色譜條件[4]，采用特定雜質(zhì)加校正因子的自身對照法計算有關(guān)物質(zhì)的含量，雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的校正因子參考歐洲藥典10.0版，對所有批次抽樣進行檢驗，建立統(tǒng)一的判定標(biāo)準(zhǔn)，評估產(chǎn)品的優(yōu)劣。

2.2.2 碳酸鈉含量

照《中國藥典》2020版四部通則0406原子吸收法[5]，在330.3 nm波長處測定系列標(biāo)準(zhǔn)鈉溶液和空白溶液吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同法測定供試品溶液，按所列公式計算供試品中碳酸鈉含量。

2.2.3 丙酮殘留量

照殘留溶劑測定法(《中國藥典》2020年版四部通則0861第二法)[6]，氣相外標(biāo)法測定產(chǎn)品中丙酮殘留量。色譜條件：以6%-氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷為固定相的毛細管氣相色譜柱(DB-624 30 m×0.32 mm，1.80 μm)，載氣為氮氣，流量為1 mL/min，柱溫為40℃，進樣口溫度為140℃，檢測器(FID)溫度為250℃，采用頂空分流進樣，分流比為5:1，頂空瓶平衡溫度為90℃，平衡時間30 min。

2.2.4 藥用玻璃金屬元素浸出量

建立ICP-MS方法，內(nèi)標(biāo)定量法對注射用美羅培南藥用玻璃中的12種元素雜質(zhì)(As、Sb、Pb、Cd、Al、Ba、Cr、Cu、Fe、Mn、Sn、Zn)浸出量進行考察，選取同位素為27Al、52Cr、55Mn、56Fe、65Cu、66Zn、75As、111Cd、118Sn、121Sb、137Ba和208Pb，按照內(nèi)標(biāo)同位素質(zhì)量數(shù)與待測元素質(zhì)量數(shù)相近的原則，其中27Al、52Cr、55Mn、56Fe以45Sc作為內(nèi)標(biāo)，65Cu、66Zn、75As、以72Ge作為內(nèi)標(biāo)，111Cd、118Sn、121Sb以115In作為內(nèi)標(biāo)，137Ba以159Tb作為內(nèi)標(biāo)，208Pb以209Bi作為內(nèi)標(biāo)。ICP-MS工作參數(shù)：一般測定模式，用調(diào)諧溶液對儀器條件進行優(yōu)化；同心霧化器，射頻功率為1500W，等離子體氬氣流速為 15.0 L/min，載氣流速為 1.05 L/min，采樣深度為10.0 mm，蠕動泵速為 0.2 r/s，霧化室溫度為2℃ ；分析模式為全定量，重復(fù)次數(shù)為3次；掃描次數(shù)為100次。內(nèi)標(biāo)元素通過T型三通管在線引入等離子體。

2.2.5 膠塞相容性

采用GC-Q TOF對注射用美羅培南所用膠塞中的遷移物進行了考察。色譜條件：固定液為5%苯基/95%甲基硅氧烷的非極性毛細管色譜柱(DB-5MS，30.0 m×0.25 mm×0.25 μm)，載氣為高純氦氣，流速為每分鐘1.0 mL；分流比為10∶1；起始柱溫50℃，保持10 min，以10 ℃/min升至170℃，維持20 min。頂空平衡時間30 min，平衡溫度120℃。質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源(EI)，轟擊電壓70 eV；離子源溫度為250℃，接口溫度250℃；質(zhì)量分辨率1 amu，全掃描方式，掃描的質(zhì)量數(shù)范圍 50～650。

3 結(jié)果與討論

3.1 法定檢驗結(jié)果與分析

按現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對100批注射用美羅培南進行檢驗，全部檢驗項目均符合規(guī)定；與2015年國家評價性抽驗結(jié)果(檢驗合格率為99.1%，1批樣品溶液的顏色不符合規(guī)定[7])比較，產(chǎn)品整體質(zhì)量趨好。

3.2 探索性研究

圍繞藥品的安全性和有效性開展探索性研究工作，針對該品種現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)多的現(xiàn)狀，力求統(tǒng)一各企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)置合理的檢驗檢測項目；并采用統(tǒng)一的評價方法對不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品進行分析，助力藥品質(zhì)量的提高。

3.2.1 有關(guān)物質(zhì)

按照2.2.1項下方法對100批次樣品的有關(guān)物質(zhì)進行測定。結(jié)果顯示，雜質(zhì)A的含量均值為0.27%，雜質(zhì)B的含量均值為0.26%，其他最大單雜的含量均值為0.03%，雜質(zhì)總量的均值為0.64%，可見國內(nèi)上市產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)的總體質(zhì)量良好(表1)。原研藥(日本住友)的雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的含量均控制在0.2%以下，雜質(zhì)總量均值低于0.5%；國內(nèi)企業(yè)的產(chǎn)品僅企業(yè)H的產(chǎn)品雜質(zhì)含量控制達到原研藥的水平，其他企業(yè)的產(chǎn)品與原研藥相比較，在雜質(zhì)控制水平上仍有差距。

表1 各生產(chǎn)企業(yè)樣品的有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果Tab.1 Results of relevant substances in samples of various manufacturers

現(xiàn)行國內(nèi)的注射用美羅培南標(biāo)準(zhǔn)中，僅國家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBH02582015有關(guān)物質(zhì)項下規(guī)定雜質(zhì)A的校正因子為1.62、雜質(zhì)B的校正因子為1.98[8]，其他標(biāo)準(zhǔn)均未涉及雜質(zhì)校正因子；歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)在有關(guān)物質(zhì)項下規(guī)定雜質(zhì)A的校正因子為1.6，雜質(zhì)B不適用校正因子校正[9]。本實驗室驗證(表2)，雜質(zhì)A的校正因子約為1.6，雜質(zhì)B的校正因子約為1.2。建議在有關(guān)物質(zhì)測定時，引入雜質(zhì)A的校正因子，并對雜質(zhì)B應(yīng)用校正因子的合理性開展進一步的探討。

表2 美羅培南和雜質(zhì)A線性方程及范圍Tab.2 Linear equation and range of meropenem and impurity A

注射用美羅培南溶液的穩(wěn)定性較差，但僅部分標(biāo)準(zhǔn)在有關(guān)物質(zhì)測定中注明供試品溶液應(yīng)臨用新制，《中國藥典》2020年版及部分國家藥品標(biāo)準(zhǔn)均沒給予提醒?？疾旃┰嚻啡芤?4 h的穩(wěn)定性，結(jié)果表明，雜質(zhì)A、雜質(zhì)B以及總雜質(zhì)含量在24 h內(nèi)均呈線性增長。因此，在有關(guān)物質(zhì)測定時供試品溶液應(yīng)臨用新制，以免造成有關(guān)物質(zhì)檢驗結(jié)果偏高。

3.2.2 碳酸鈉含量

美羅培南在水中的溶解度較小，制劑中需要加入碳酸鈉作為助溶劑。美國藥典(USP)2021年版[10]對碳酸鈉的含量進行了控制，國內(nèi)現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅國家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBH02582015及國家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBH12332020[11]進行注射用美羅培南中碳酸鈉的含量測定，其他標(biāo)準(zhǔn)均并未對制劑中碳酸鈉的加入量進行檢查。

采用原子吸收分光光度法檢測注射用美羅培南中的碳酸鈉含量。由表3可知，不僅各生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品中碳酸鈉的含量不盡相同，且其批間差異(RSD)也不一致。其中，企業(yè)G的注射用美羅培南中碳酸鈉含量均值偏高(測定結(jié)果與該企業(yè)提供的處方存在一定的差距)，批間差異也較其他企業(yè)大；企業(yè)I產(chǎn)品的批間差異(RSD)也相對偏大，其在提供的反饋資料中強調(diào)，產(chǎn)品中碳酸鈉的量可根據(jù)美羅培南原料的pH值而調(diào)整，用量為一個可變范圍，故產(chǎn)品的批間存在差異。但這顯然與當(dāng)前質(zhì)量源于設(shè)計(QbD)的理念不相符合。建議類似企業(yè)應(yīng)加強對美羅培南原料藥的質(zhì)量控制，以使得生產(chǎn)過程更加可控、產(chǎn)品質(zhì)量更加穩(wěn)定。

表3 各生產(chǎn)企業(yè)樣品的碳酸鈉含量測定結(jié)果Tab.3 Assay of sodium carbonate in samples of various manufacturers

3.2.3 丙酮殘留量

僅原研企業(yè)(日本住友)執(zhí)行的進口藥品標(biāo)準(zhǔn)JX20160020對產(chǎn)品中的丙酮殘留量[12]進行了控制，限度為0.5%。根據(jù)各生產(chǎn)企業(yè)反饋的調(diào)查問卷結(jié)果，丙酮在美羅培南的生產(chǎn)過程中被廣泛使用，丙酮的殘留量，可以間接反映各企業(yè)原料藥的生產(chǎn)工藝路線和質(zhì)控水平。

按照“2.2.3”丙酮殘留量測定方法對本次抽驗的100批次樣品進行了檢測，部分企業(yè)產(chǎn)品中除檢出殘留丙酮外，還同時檢出乙酸乙酯與乙醇。注射用美羅培南為直接混粉灌裝工藝生產(chǎn)，其制劑中的殘留溶劑應(yīng)全部來自原料藥。原研企業(yè)的產(chǎn)品中，除丙酮外，未檢出乙酸乙酯、乙醇等其他殘留溶劑，提示國內(nèi)部分生產(chǎn)企業(yè)在原料藥的合成工藝方面與原研企業(yè)存在差異。

對僅檢出殘留丙酮的產(chǎn)品的測定結(jié)果作統(tǒng)計分析(圖1)，可以看出，原研藥的丙酮殘留量均值為0.02%，明顯低于其他生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品；企業(yè)J通過一致性評價的產(chǎn)品相比于未通過一致性評價的產(chǎn)品丙酮殘留量顯著減小，丙酮殘留量均值由0.1%降至0.001%，殘留溶劑控制水平優(yōu)于原研藥；企業(yè)F產(chǎn)品的丙酮殘留量偏高。丙酮殘留量的測定，可以作為一致性評價的一個重點考察項目，用來評價國內(nèi)各企業(yè)生產(chǎn)的注射用美羅培南與原研藥之間的差異。

圖1 各生產(chǎn)企業(yè)樣品的丙酮殘留量箱式圖Fig.1 Box-plot of acetone residue in samples of various manufacturers

3.2.4 藥用玻璃金屬元素浸出量

依據(jù)《化學(xué)藥品注射劑與藥用玻璃包裝容器相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[13]，參考目前藥用玻璃的原材料、添加劑以及生產(chǎn)工藝的情況，建立ICP-MS方法對注射用美羅培南藥用玻璃中金屬元素雜質(zhì)浸出量進行考察。試驗樣品共9批，由各生產(chǎn)企業(yè)提供，種類均為無色西林瓶，玻璃材質(zhì)包括低硼硅玻璃、中性硼硅玻璃和鈉鈣玻璃。

結(jié)果表明(圖2)，中硼硅玻璃浸出物種類和浸出量明顯低于低硼硅玻璃，鈉鈣玻璃浸出物的種類和浸出量最少。由于注射用美羅培南水分含量為10%左右，輔料為碳酸鈉，產(chǎn)品本身為弱堿性，在長時間堿性條件下，鈉鈣玻璃表面易產(chǎn)生碎屑顆粒，影響產(chǎn)品質(zhì)量。故該品種應(yīng)避免使用鈉鈣玻璃，建議選用化學(xué)性質(zhì)更穩(wěn)定、浸出物更少的中硼硅玻璃。

圖2 各生產(chǎn)企業(yè)藥用玻璃瓶中各元素雜質(zhì)的絕對含量Fig.2 Absolute content of impurities in medicinal glass bottles of various manufacturers

3.2.5 膠塞相容性

丁基膠塞作為注射用粉針劑常用的藥品包裝材料，其生產(chǎn)過程中加入的化學(xué)助劑、反應(yīng)剩余物等會殘留在膠塞的本體中，導(dǎo)致丁基膠塞的質(zhì)量存在很多不可控因素。由丁基膠塞引起的質(zhì)量問題有溶液的澄清度、可見異物和不溶性微粒等等，嚴(yán)重影響藥品的質(zhì)量。采用GC-Q TOF對11家企業(yè)33批次樣品中的膠塞遷移物進行了考察(表4)，結(jié)果可見，企業(yè)C、D、G等企業(yè)使用的膠塞中揮發(fā)物硅氧烷類(環(huán)硅氧烷類)含量較高，提示膠塞在清洗硅化過程中使用了較高比例的二甲硅油。鑒于他們的殘留量明顯高于原研產(chǎn)品膠塞中的殘留量，殘留的揮發(fā)物硅氧烷類物質(zhì)是否具有導(dǎo)致樣品在儲存期存在潛在的澄清度指標(biāo)下降的風(fēng)險，應(yīng)引起關(guān)注。

表4 各企業(yè)膠塞揮發(fā)物相對峰面積平均值(%)Tab.4 Average relative peak area of rubber stopper volatiles of various manufacturers(%)

由各生產(chǎn)企業(yè)反饋的問卷調(diào)查結(jié)果可知，A、B、E和G 4家企業(yè)的膠塞為相同的供應(yīng)商，其中企業(yè)G使用的是未覆膜溴化丁基膠塞，其他3家企業(yè)均使用覆PTFE膜的氯化丁基膠塞。檢驗結(jié)果顯示，覆膜后的膠塞，其中八甲基環(huán)四硅氧烷的含量明顯下降。此外，企業(yè)J通過一致性評價的產(chǎn)品，其使用的膠塞中2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)的殘留量明顯較其他膠塞低；但原研企業(yè)的產(chǎn)品沒有使用覆膜膠塞，也沒對膠塞中殘留的BHT進行嚴(yán)格的控制；上述結(jié)果提示，BHT可能不是注射用美羅培南膠塞殘留物控制的關(guān)鍵指標(biāo)。

11家企業(yè)樣品在40℃/75%RH條件下放置1個月后的加速試驗表明，各企業(yè)樣品的溶液澄清度、堿度和有關(guān)物質(zhì)均符合規(guī)定，提示本品種膠塞揮發(fā)物尚未對產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生相關(guān)影響。但仍建議相關(guān)企業(yè)在長期穩(wěn)定性實驗中進一步關(guān)注膠塞相容性的影響。

4 結(jié)論

本次注射用美羅培南抽驗，全部樣品按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗，結(jié)果均符合規(guī)定，產(chǎn)品整體質(zhì)量狀況“良好”。然而，探索性研究結(jié)果揭示，普通國產(chǎn)制劑與原研產(chǎn)品及通過仿制藥一致性評價的產(chǎn)品間仍存在一定的質(zhì)量差異，通過對制劑中碳酸鈉的用量和丙酮殘留量的控制，可進一步提高產(chǎn)品的有效性和穩(wěn)定性。

注射用美羅培南現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)共有7個，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)間存在明顯差異，建議在《中國藥典》2020年版的基礎(chǔ)上，統(tǒng)一各質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加碳酸鈉含量測定和丙酮殘留量測定，在有關(guān)物質(zhì)項下增加供試品“臨用新制”的要求，同時引入雜質(zhì)A的校正因子。