盧 薇，費(fèi)建軍，沈曉梅，王金梅,

（1.湖北工業(yè)大學(xué)生物工程與食品學(xué)院，湖北武漢 430000；2.貴陽(yáng)學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550005；3.華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州 510640）

癌癥是工業(yè)國(guó)家死亡率最高的疾病之一，全球每年約有760萬(wàn)人死于癌癥[1]?；钚匝酰≧eactive Oxygen Species, ROS）是誘發(fā)癌癥的主因之一[2]。ROS是細(xì)胞代謝的常規(guī)產(chǎn)物，低、中水平的ROS在機(jī)體細(xì)胞缺氧應(yīng)答中發(fā)揮重要的生理作用[3]。然而，當(dāng)ROS過(guò)量生成且機(jī)體內(nèi)抗氧化劑的含量不足以將其清除時(shí)，氧化應(yīng)激作用會(huì)導(dǎo)致機(jī)體損傷，影響細(xì)胞脂質(zhì)、蛋白和DNA的正常功能，并導(dǎo)致癌癥等疾病的發(fā)生[3]。臨床研究表明，增加水果的攝入量可降低罹患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)[4]。水果中多酚、維生素等抗氧化活性成分可通過(guò)改善機(jī)體氧化應(yīng)激狀態(tài)、調(diào)節(jié)相關(guān)基因表達(dá)、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡及免疫系統(tǒng)等方式維系ROS的動(dòng)態(tài)平衡，保護(hù)機(jī)體，有利于癌癥的防治[2]。

漿果類水果如藍(lán)莓是公認(rèn)的多酚和維生素C含量較高、抗氧化活性較好的水果[5-6]；柑橘類水果的果皮中富含多酚類物質(zhì)，果肉中多酚含量相對(duì)較少[7]；刺梨和沙棘是我國(guó)西北部地區(qū)的特色水果，已被證實(shí)具有良好的體外抗氧化效果[8-9]，但對(duì)其活性成分及功效評(píng)價(jià)的研究較少，精深加工產(chǎn)品不多。水果貯藏期短、附加值低，部分水果如刺梨直接食用時(shí)具有較強(qiáng)的澀感[10]，故工業(yè)生產(chǎn)中常以果汁形式進(jìn)行銷售以提高水果的經(jīng)濟(jì)效益。目前，學(xué)界多以水果丙酮提取物[11]、醇提物[12]對(duì)全果中多酚進(jìn)行成分鑒定，鮮見(jiàn)果汁中多酚的功效評(píng)價(jià)，而水果榨汁過(guò)程中的機(jī)械作用和過(guò)濾過(guò)程可能會(huì)造成果汁和全果中多酚和VC等活性成分分布及含量的差異[13]。此外，大量研究仍集中于多酚的體外抗氧化性，并未涉及多酚的吸收代謝情況及生物利用率，從細(xì)胞層面上分析果汁中多酚的抗氧化能力和抗增殖活性具有更高的生物相關(guān)性[14]。

本文研究對(duì)比了5種果汁（刺梨、檸檬、藍(lán)莓、柑橘和沙棘）中VC和總酚的含量，對(duì)多酚組成進(jìn)行定性和定量分析，采用羥自由基清除法（PSC）、氧化自由基吸收能力法（ORAC）等化學(xué)方法和抗細(xì)胞氧化活性（CAA）、抗增殖活性、細(xì)胞毒性分析等細(xì)胞水平分析方法評(píng)價(jià)5種果汁的抗氧化和抗腫瘤細(xì)胞增殖活性，為水果精深加工提供了一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

刺梨原汁 貴州恒力源天然生物科技有限公司；沙棘原汁 內(nèi)蒙古淳點(diǎn)實(shí)業(yè)有限公司；藍(lán)莓原汁、柑橘原汁和檸檬原汁 實(shí)驗(yàn)室自制；2’,7’-二氯熒光素二乙酸酯（DCFH-DA）、2,2’-偶氮雙（2-氨基丙烷）鹽酸鹽（ABAP）、福林酚試劑、沒(méi)食子酸、蘆丁、兒茶素、阿魏酸、2’,7’-二氯熒光素二乙酸酯（DCFHDA）、熒光素、維生素C、維生素E、槲皮素 美國(guó)Sigma公司；HepG2細(xì)胞 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（中國(guó)，廣東，中山大學(xué)）；培養(yǎng)基（WME）、磷酸鹽緩沖液（PBS）美國(guó)GIBCO公司。

UVA2300型紫外分光光度計(jì) 上海天美公司；RV 10型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國(guó)IKA公司；1525-2487UV型高效液相色譜儀 美國(guó)Waters公司；Synergy Neo2型多功能酶標(biāo)儀 美國(guó)博騰儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 水果原汁的制備 將藍(lán)莓、柑橘和檸檬鮮果洗凈并瀝干后分別用榨汁機(jī)打漿，將漿液過(guò)200目篩，取濾液制得水果原汁，-4 ℃冷藏備用。

1.2.2 果汁活性物質(zhì)提取 參考王懷玲[14]的方法并做適當(dāng)修改。稱取2 mL果汁樣品，加入80%丙酮40 mL，攪拌混勻，冰浴超聲10 min，4000 r/min離心10 min，收集上清提取液。濾渣重復(fù)提取3次。收集全部上清提取液后45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干。用超純水定容至10 mL。提取液貯存于-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 維生素C含量的測(cè)定 參考GB 5009.86-2016食品中抗壞血酸的測(cè)定[15]，以高效液相色譜法測(cè)定果汁中VC的含量。

1.2.4 總多酚含量的測(cè)定 采用福林酚試劑法測(cè)定樣品總酚含量[13]。取適當(dāng)稀釋的提取物和標(biāo)準(zhǔn)品各0.1 mL與0.4 mL超純水混合，加入0.1 mL福林酚試劑氧化6 min，再加入1 mL碳酸鈉溶液（7%）和0.8 mL的超純水，靜置90 min，使用分光光度計(jì)在760 nm處測(cè)定混合物的吸光度。以沒(méi)食子酸為標(biāo)品，測(cè)定結(jié)果以沒(méi)食子酸當(dāng)量表示（g GAE/L）表示。

1.2.5 多酚組分分析 采用高效液相色譜法對(duì)果汁中酚類物質(zhì)進(jìn)行分析測(cè)定，參考趙謀明等[13]的方法并做適當(dāng)修改。采用C18色譜柱，柱溫30 °C，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，流動(dòng)相（A，0.1%三氟乙酸水溶液；B，乙腈）以1.0 mL/min的速度進(jìn)行梯度洗脫，方法如下：0～5 min，90% A；5～20 min，90%～75% A；20～25 min，75%～65% A；25～31 min，65%～42% A；31～34 min，42%～40% A；34～40 min，40%～10% A；40～50 min，10%～90% A；50～60 min，90% A。

1.2.6 過(guò)氧化氫自由基清除能力（PSC）分析 通過(guò)測(cè)定樣品的過(guò)氧化氫自由基清除能力來(lái)分析樣品總化學(xué)抗氧化活性，參考王懷玲[14]的方法并做適當(dāng)修改。75 mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.4）稀釋植物化學(xué)提取物。將0.1 mL稀釋樣品與0.1 mL DCFH-DA（13.26 mmol/L）和 0.05 mL ABAP（40 mmol/L）混合。反應(yīng)在37 ℃下進(jìn)行，多功能酶標(biāo)儀對(duì)樣品熒光值監(jiān)測(cè)，計(jì)算半有效抑制濃度（EC50）。以VC為標(biāo)品，測(cè)定結(jié)果以VC當(dāng)量表示（μmol VCE/mL）。

1.2.7 氧自由基吸收能力（ORAC）分析 通過(guò)測(cè)定樣品的氧自由基吸收能力可用于分析樣品總化學(xué)抗氧化活性，參考王懷玲[14]的方法并做適當(dāng)修改。75 mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.4）稀釋植物化學(xué)提取物。于96孔板中加入20 μL樣品和空白對(duì)照（緩沖液）于37 ℃孵育10 min；加入200 μL熒光素于37 ℃孵育10 min；除了空白孔（空白加入緩沖液）外，每孔加入20 μL的ABAP溶液。反應(yīng)在37 ℃下進(jìn)行，多功能酶標(biāo)儀對(duì)樣品熒光值監(jiān)測(cè)。以維生素E為標(biāo)品，測(cè)定結(jié)果以維生素E當(dāng)量表示（μmol TE/mL）。

1.2.8 抗細(xì)胞氧化活性（CAA）分析 評(píng)價(jià)樣品在細(xì)胞水平的抗氧化活性，參考王懷玲[14]的方法并做適當(dāng)修改。主要步驟包括：a.將培養(yǎng)適宜的HepG2細(xì)胞以6×104cells/孔的濃度接種于96孔黑色孔板上，于培養(yǎng)箱中孵育24 h；b.棄去培養(yǎng)基，用PBS洗滌孔板；c.每孔中加入 100 μL 含 DCFH-DA（50 μmol/L）的樣品，培養(yǎng)1 h；d.棄去樣品，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同處理：用 PBS沖洗微孔，加入 100 μL ABAP；無(wú) PBS沖洗，直接將100 μL ABAP加入到未經(jīng)沖洗的微孔中；e.使用多功能酶標(biāo)儀在485 nm激發(fā)和538 nm發(fā)射波長(zhǎng)下每隔5 min測(cè)定熒光值，實(shí)驗(yàn)溫度37 ℃，持續(xù)測(cè)量1 h。每塊測(cè)定板包括三個(gè)對(duì)照孔和空白孔：對(duì)照孔是經(jīng)DCFH-DA和ABAP處理的細(xì)胞；空白孔中是經(jīng)DCFH-DA和無(wú)ABAP處理的細(xì)胞。以槲皮素為標(biāo)品，測(cè)定結(jié)果以槲皮素當(dāng)量表示（μmol QE/100 mL）。

1.2.9 抗腫瘤細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞毒性分析 對(duì)樣品的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞毒性進(jìn)行分析比較，參考王懷玲[14]的方法并做適當(dāng)修改。細(xì)胞培養(yǎng)方法與CAA法相似。主要步驟包括：a.將培養(yǎng)適宜的HepG2細(xì)胞以1.5×104cells/孔的濃度接種于96孔白色孔板上進(jìn)行抗增殖活性分析，細(xì)胞毒性分析采用的細(xì)胞濃度則為2.5×104cells/孔；b.兩者均于培養(yǎng)箱中分別孵育4和24 h；c.棄去培養(yǎng)基，用PBS洗滌孔板；d.用培養(yǎng)基對(duì)樣品進(jìn)行梯度稀釋，每孔加入100 μL樣品，分別培養(yǎng)72和24 h；e.采用亞甲基藍(lán)染色法測(cè)定細(xì)胞存活量。樣品的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞毒性分析分別以 EC50（mg/mL）和 CC50（mg/mL）表示。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為三次測(cè)定平均值，結(jié)果以“平均值（mean）±標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）”表示。組間的顯著性差異和相關(guān)性分析采用SPSS 19.0軟件的ANOVA分析方法，方差分析之后的多重比較采用Duncan’s法，P＜0.05表示樣本間具有顯著性差異，P＜0.01表示樣品間差異極顯著，并對(duì)樣品進(jìn)行聚類分析。

2 結(jié)果分析

2.1 五種果汁的維生素C含量和酚類組成

果汁較強(qiáng)的抗氧化性及其抗衰老、預(yù)防癌癥的功效主要?dú)w因于果汁中所含的抗氧化物質(zhì)如酚類化合物、維生素C、維生素E、類胡蘿卜素等[16]。五種果汁中VC和總酚含量見(jiàn)圖1。由圖可知，刺梨汁的VC含量最高，為14.13 g/L；沙棘汁的VC含量次之，為1.92 g/L；檸檬汁、藍(lán)莓汁和柑橘汁的VC含量遠(yuǎn)低于刺梨汁和沙棘汁，且三者間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。沙棘和刺梨均富含VC，不同品種沙棘鮮果中VC含量為140～3000 mg/100 g[17]，是常見(jiàn)果蔬的五至數(shù)百倍[18]；不同品種刺梨鮮果的VC含量高達(dá)1300～3500 mg/100 g[19]。岳珍珍[20]等報(bào)道野刺梨汁中VC總量約為17.50 g/L，與本文測(cè)定值較為接近。張娟等[21]報(bào)道新鮮沙棘汁中VC總量約為3.10 g/L，高于本文測(cè)定值，這可能是制備工藝的差異和貯藏過(guò)程造成的VC損耗。

圖1 五種果汁的維生素C和總酚含量Fig.1 Content of vitamin C and total phenolic of five juices

五種果汁的總酚與VC含量呈相似的趨勢(shì)，其中，刺梨汁和沙棘汁的總酚含量最高，分別為13.06±0.48和12.53±1.17 g GAE/ L，且二者間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；藍(lán)莓汁的總酚含量次之，為 1.82 g GAE/L；檸檬汁和柑橘汁的總酚含量最低，分別為0.33和0.48 g GAE/ L。大量研究表明，藍(lán)莓果實(shí)的總酚含量遠(yuǎn)高于柑橘、檸檬等常見(jiàn)果蔬[4]。王懷玲[14]測(cè)定了14種藍(lán)莓果實(shí)的總酚為212.7～460.4 mg GAE/100 g FW，Zeng等[22]報(bào)道了不同成熟期刺梨果實(shí)的總酚含量在129.26～154.81 mg GAE/g DW之間，考慮到刺梨的含水量，折算出刺梨果實(shí)的總酚含量約為藍(lán)莓果實(shí)總酚含量的10～20倍，與本文中兩種果汁的總酚含量之比基本一致。刺梨果實(shí)中酚類化合物和VC含量較為接近[10]，與本文結(jié)果類似。岳珍珍[20]報(bào)道野刺梨汁中總酚含量為9.34 g/L，安雪菲等[8]報(bào)道無(wú)子刺梨汁中總酚含量約為32.81 g/kg。Tkacz等[23]報(bào)道沙棘汁中總酚含量為4.60 g/L。水果亞種和成熟度對(duì)水果中活性成分含量的影響極大[22]，且部分水果的果肉和果皮中的活性成分含量也有顯著差異[7]。因此，原料和工藝均會(huì)導(dǎo)致果汁中VC和總酚等活性成分含量的不同。

對(duì)五種果汁的酚類組成和含量進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)表1。由表可知，刺梨汁中檢出的主要酚類物質(zhì)為沒(méi)食子酸（5.48 mg/100 mL）、蘆丁（53.61 mg/100 mL）和兒茶素（68.69 mg/100 mL）。多酚類化合物主要包括黃酮類化合物和非黃酮類化合物如酚酸、芪類化合物、單寧等物質(zhì)。刺梨中多酚主要由黃酮和酚酸組成[10]，Liu等[24]在刺梨果實(shí)中鑒定出了蘆丁、槲皮苷、山奈酚和木犀草素，Zeng等[22]在刺梨果實(shí)中鑒定出了兒茶素、表兒茶素、鞣花素、楊梅酮、奎尼酸、槲皮素。

表1 五種果汁的酚類組成和含量Table 1 Phenolic profiles and content in five juices

沙棘汁中檢出的主要酚類物質(zhì)為沒(méi)食子酸（6.64 mg/100 mL）、蘆丁（16.71 mg/100 mL）、兒茶素（3.33 mg/100 mL）和阿魏酸（1.16 mg/100 mL）。小漿果中一般含有大量植物酚酸類物質(zhì)。沙棘鮮果中的酚酸類物質(zhì)主要由羥基苯甲酸和羥基肉桂酸的衍生物組成，如沒(méi)食子酸，其含量約為7.9～15.9 mg/kg DW，阿魏酸的含量低于10.5 mg/kg DW[19]。蘆丁是沙棘鮮果中常見(jiàn)的黃酮苷，其含量約為233～285 mg/kg DW[19]。兒茶素是沙棘鮮果中主要的黃酮類物質(zhì)，Irena等[25]測(cè)定了9種沙棘鮮果中的兒茶素含量為5.4～110.3 mg/kg DW。

藍(lán)莓汁中檢出的主要酚類物質(zhì)為兒茶素（0.19 mg/100 mL）和阿魏酸（0.14 mg/100 mL）。王懷玲[14]測(cè)定了14種藍(lán)莓果實(shí)的兒茶素和阿魏酸含量分別在0.18～0.34 和 0.03～0.18 mg /100 g FW 之間，并檢出了香豆酸、水楊酸、槲皮素和白藜蘆醇。

檸檬汁中檢出的主要酚類物質(zhì)為蘆丁（2.09 mg/100 mL）和阿魏酸（0.06 mg/100 mL），柑橘汁中僅檢出阿魏酸（0.52 mg/100 mL）。柑橘類水果富含橘皮素、柚皮素和多甲氧基黃酮等特征性黃酮類物質(zhì)，也含有蘆丁、槲皮素等水果中常見(jiàn)的多酚類物質(zhì)，但部分柑橘類品種如Eureka lemon中未檢出蘆丁[26]。

2.2 五種果汁的化學(xué)抗氧化活性

化學(xué)法是常見(jiàn)的評(píng)價(jià)體外總抗氧化活性的方法，其中，PSC法和ORAC法均通過(guò)熒光探針檢測(cè)自由基的含量來(lái)評(píng)價(jià)樣品清除氧自由基的能力，具有一定的生物相關(guān)性[14]。五種果汁的體外抗氧化性質(zhì)見(jiàn)圖2。由圖2可知，五種果汁的PSC抗氧化活性和ORAC抗氧化活性呈現(xiàn)相同的趨勢(shì)，即沙棘汁、刺梨汁和藍(lán)莓汁的抗氧化活性較高，排序?yàn)樯臣?6.12 μmol VCE/mL，111.57 μmol TE/mL）＞刺梨汁（38.10 μmol VCE/mL，89.72 μmol TE/mL）＞藍(lán)莓汁（12.60 μmol VCE/mL，39.59 μmol TE/mL）；檸檬汁（0.46 μmol VCE/mL，6.99 μmol TE/mL）和柑橘汁（3.33 μmol VCE/mL，1.83 μmol TE/mL）抗氧化活性較低且二者間的抗氧化活性無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。王懷玲[14]測(cè)定了14種藍(lán)莓果實(shí)中游離多酚的PSC值（8.59～17.54 μmol VCE/g FW）和 ORAC 值（26.27～67.47 μmol TE/g FW）。Tkacz等[23]報(bào)道沙棘汁的ORAC值為74.2 μmol TE/mL，略低于本文中沙棘汁的測(cè)定值。由此可知，沙棘汁、刺梨汁和藍(lán)莓汁具有較強(qiáng)的清除氧自由基的能力，體外總抗氧化活性較高，而檸檬汁和柑橘汁的體外總抗氧化活性較低，這可能與不同果汁的VC和多酚組成成分的差異性有關(guān)。

圖2 五種果汁的PSC抗氧化活性和ORAC抗氧化活性Fig.2 Peroxyl radical scavenging capacity and oxygen free radical absorptive capacity of five juices

2.3 五種果汁的抗細(xì)胞氧化活性

除了清除自由基活性外，機(jī)體內(nèi)的抗氧化水平還包括阻斷自由基的產(chǎn)生和增加內(nèi)生抗氧化劑水平等。抗細(xì)胞氧化活性可用于測(cè)定活性物質(zhì)在生理?xiàng)l件下的生物利用度及其對(duì)抗氧化能力的影響，較化學(xué)法更具科學(xué)性。CAA法是常見(jiàn)的評(píng)估HepG2細(xì)胞模型的食品及膳食補(bǔ)充劑的抗氧化劑水平的方法，其通過(guò)檢測(cè)樣品在一段時(shí)間內(nèi)的熒光強(qiáng)度變化來(lái)定量樣品的抗氧化活性[27]。其中PBS沖洗過(guò)程可在一定程度上反映活性物質(zhì)能否順利通過(guò)細(xì)胞膜及其與細(xì)胞膜結(jié)合的緊密程度[28]，判斷活性物質(zhì)是進(jìn)入胞內(nèi)與活性氧自由基反應(yīng)還是在細(xì)胞膜上直接與胞外的氧自由基反應(yīng)[29]。五種果汁經(jīng)PBS沖洗前后的CAA值見(jiàn)圖3。由圖3可知，無(wú)PBS沖洗時(shí)，果汁的CAA值由高至低為：刺梨汁（163.96 mg/QE 100 mL）＞沙棘汁（126.67 mg/QE 100 mL）＞藍(lán)莓汁（63.97 mg/QE 100 mL）＞柑橘汁（8.77 mg/QE 100 mL）＞檸檬汁（1.05 mg/QE 100 mL）。經(jīng)PBS沖洗后，果汁的細(xì)胞抗氧化能力明顯下降，其排序由高至低為：沙棘汁（82.68 mg/QE 100 mL）＞刺梨汁（46.33 mg/QE 100 mL）＞藍(lán)莓汁（23.63 mg/QE 100 mL）＞檸檬汁（0.39 mg/QE 100 mL）＞柑橘汁（ND）。根據(jù)PBS沖洗前后的結(jié)果可知不同果汁的細(xì)胞吸收率為沙棘汁（65.27%）＞藍(lán)莓汁（36.95%）＞刺梨汁（28.26%）。檸檬汁和柑橘汁的CAA值過(guò)低，說(shuō)明上述兩種果汁的抗細(xì)胞氧化活性較低，這可能是由于其VC和多酚含量較低導(dǎo)致的，故此處不討論其細(xì)胞吸收率。

圖3 五種果汁的細(xì)胞抗氧化活性Fig.3 Cellular antioxidant activity （CAA） of five juices

2.4 五種果汁的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞毒性

活性物質(zhì)抑制腫瘤細(xì)胞半數(shù)生長(zhǎng)時(shí)的濃度可反映其抗腫瘤細(xì)胞增殖活性的強(qiáng)度，半抑制濃度（EC50）越低，該物質(zhì)的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性越高；對(duì)細(xì)胞造成半數(shù)毒性的濃度（CC50）越小，該物質(zhì)的細(xì)胞毒性越大[30]。不同果汁對(duì)HepG2肝癌細(xì)胞具有不同的抗增殖活性，見(jiàn)表2。刺梨汁（5.50 mg/mL）和沙棘汁（7.67 mg/mL）的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性最強(qiáng)，藍(lán)莓汁（30.72 mg/mL）和檸檬汁（33.39 mg/mL）次之，柑橘汁（119.80 mg/mL）的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性最弱。刺梨汁、柑橘汁和藍(lán)莓汁的CC50值均高于150 mg/mL，說(shuō)明上述三種果汁的毒性很低。有研究表明，藍(lán)莓對(duì)HepG2細(xì)胞有一定的抗增殖活性[14]，沙棘對(duì)HepG2細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞和Caco-2細(xì)胞均有抑制增殖的作用[27]。

表2 五種果汁的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞毒性（mean±SD, n=3）Table 2 Antiproliferative activities towards tumor cells and cytotoxicities of five juices (mean±SD, n=3)

2.5 聚類相關(guān)性分析

果汁中的活性成分與抗氧化活性、抗腫瘤細(xì)胞增殖活性之間的相關(guān)性分析見(jiàn)圖4。PSC值與沒(méi)食子酸含量（R2=0.957,P＜0.05）和總酚含量（R2=0.920,P＜0.05）均顯著相關(guān)。類似的，ORAC值與沒(méi)食子酸含量（R2=0.955,P＜0.05）和總酚含量（R2=0.959,P＜0.01）均密切相關(guān)。沖洗前后，果汁的CAA值與沒(méi)食子酸含量及總酚含量均顯著相關(guān)，與VC、兒茶素和蘆丁的含量也有一定的正相關(guān)性。EC50值與各活性成分基本呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明活性物質(zhì)含量與抗腫瘤細(xì)胞增殖活性基本呈正相關(guān)。由此可見(jiàn)，多酚類組分尤其是沒(méi)食子酸與果汁的化學(xué)抗氧化活性和抗細(xì)胞氧化活性具有顯著的正相關(guān)性，其可進(jìn)入胞內(nèi)與活性氧自由基反應(yīng)達(dá)到良好的抗細(xì)胞氧化效果，VC、兒茶素和蘆丁含量也與抗細(xì)胞氧化活性具有一定的正相關(guān)性。

圖4 果汁中活性物質(zhì)與抗氧化、抗腫瘤細(xì)胞增值活性之間的Pearson相關(guān)性分析Fig.4 Pearson correlation coefficients （probability） among phenolics profiling and anti-oxidative and anti-proliferative activities towards tumor cells

本研究通過(guò)SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，對(duì)五種果汁的主要活性成分（維生素C、阿魏酸、兒茶素、蘆丁、沒(méi)食子酸和總酚）和抗氧化活性（PSC、ORAC、CAA未沖洗、CAA沖洗和EC50）進(jìn)行聚類分析，并繪制樹(shù)狀圖，見(jiàn)圖5。結(jié)果顯示，五種果汁可根據(jù)多酚物質(zhì)種類、含量及抗氧化活性分為2類：a.刺梨汁和沙棘汁；b.檸檬汁、藍(lán)莓汁和柑橘汁。刺梨汁中發(fā)揮抗氧化活性的主要物質(zhì)組成為VC、兒茶素和蘆丁，對(duì)刺梨汁的化學(xué)抗氧化活性和抗細(xì)胞氧化活性貢獻(xiàn)較大。沙棘汁中發(fā)揮抗氧化活性的物質(zhì)為阿魏酸和沒(méi)食子酸，對(duì)化學(xué)抗氧化活性和抗細(xì)胞氧化活性均有較大貢獻(xiàn)。

圖5 五種果汁各項(xiàng)指標(biāo)的聚類分析熱圖Fig.5 Cluster analysis heat map of each index of five juices

3 結(jié)論

上述結(jié)果表明，五種果汁中刺梨汁的VC含量最高，為14.13 g/L；刺梨汁和沙棘汁的總酚含量最高，分別為 13.06±0.48和 12.53±1.17 g GAE/L，且二者間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。刺梨汁和沙棘汁的酚類物質(zhì)種類多于其他果汁，且二者的酚類物質(zhì)組成較為接近，但刺梨汁中的蘆丁和兒茶素含量高于沙棘汁。整體而言，果汁的抗氧化活性與沒(méi)食子酸和總酚含量有顯著相關(guān)性，VC、兒茶素和蘆丁含量也與抗細(xì)胞氧化活性具有一定的正相關(guān)性。其中，沙棘汁的化學(xué)抗氧化活性最強(qiáng)；刺梨汁的抗細(xì)胞氧化活性最強(qiáng)，但其28.26%的細(xì)胞吸收率低于沙棘汁（65.27%）和藍(lán)莓汁（36.95%）；刺梨汁具有最強(qiáng)的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性和最低的細(xì)胞毒性。聚類分析根據(jù)多酚物質(zhì)種類、含量及抗氧化活性將五種果汁分為2類：刺梨汁和沙棘汁；檸檬汁、藍(lán)莓汁和柑橘汁。不同于目前學(xué)界常以體外抗氧化活性評(píng)估全果的功能性，本文從細(xì)胞層面對(duì)全果果汁的抗氧化能力和抗增殖活性進(jìn)行分析，具有更高的生物相關(guān)性，可為我國(guó)特色水果的精深加工提供一定的理論基礎(chǔ)。但本文仍存在以下不足：a.本文主要研究了果汁游離態(tài)提取物的性質(zhì)，其結(jié)合態(tài)提取物的酚類組成、抗氧化能力和抗增殖活性有待進(jìn)一步研究；b.本文未對(duì)不同品種、不同成熟度全果制備的果汁的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)試和分析，而品種和成熟度對(duì)水果中酚類組成的影響較大，可進(jìn)一步影響果汁的抗氧化能力和抗腫瘤細(xì)胞增殖活性。