蔡智敏，顏琿璘，黃 和，鐘賽意，何俊杰，李映志，劉 海,

（1.廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院，廣東省亞熱帶果蔬加工現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心，廣東湛江 524088；2.省級(jí)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（熱帶特色園藝）產(chǎn)業(yè)技術(shù)研發(fā)中心，廣東湛江 524088）

貢柑（Citrus reticulata，Gonggan）又稱“皇帝柑”、“貴妃橙”，被中國果品流通協(xié)會(huì)授予“中華名果”榮譽(yù)稱號(hào)。貢柑果實(shí)果形靚麗、色澤金黃、含有人體所需的糖類、維生素等營養(yǎng)物質(zhì)，具有肉質(zhì)細(xì)嫩、易剝皮的雙重優(yōu)點(diǎn)。貢柑果實(shí)在采后易受病菌侵染，破壞果實(shí)組織結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致腐爛變質(zhì)。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國柑橘采后損失率在20%～30%，嚴(yán)重影響貢柑果實(shí)的市場供應(yīng)和商品價(jià)值[1]。因此，針對貢柑果實(shí)的采后貯藏保鮮存在問題，開發(fā)新型的、實(shí)用的保鮮技術(shù)，減少貢柑果實(shí)采后的損失，提高果農(nóng)經(jīng)濟(jì)效益，有利于促進(jìn)貢柑產(chǎn)業(yè)的持續(xù)發(fā)展[2]。

鄰苯基苯酚（o-phenylphenol）又名2-羥基聯(lián)苯或2-苯基苯酚，為白色薄片或淡紅色粉末，微溶于水[3]。美國環(huán)境保護(hù)局（EPA）允許美國企業(yè)將鄰苯基苯酚作為生產(chǎn)防腐劑、保鮮劑等化工制品的成分[4]。國際上對于果蔬中鄰苯基苯酚的殘留量規(guī)定不得多于10～12 mg/kg[5]。在農(nóng)產(chǎn)品貯藏與加工方面，鄰苯基苯酚（OPP）主要作為高效廣譜的殺菌防霉劑用于采后果蔬的防腐保鮮，如葡萄、檸檬及番茄等果蔬的防腐保鮮[6-9]。

果蠟涂膜保鮮技術(shù)是指利用果蠟涂膜在果實(shí)表面使其形成薄膜，創(chuàng)造一個(gè)半封閉的環(huán)境，達(dá)到減少果實(shí)內(nèi)部水分蒸發(fā)、抑制果蔬成熟、延緩衰老的目的[10-12]。為了讓果蔬保鮮達(dá)到更好效果，多方法聯(lián)用是目前果蔬保鮮研究領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[3]。夏更壽等[13]研究了β-環(huán)糊精鄰苯基苯酚包合物（β-CD-OPP）對甌柑的保鮮作用，發(fā)現(xiàn)5‰的β-CD-OPP 溶液作為緩釋保鮮劑可有效減少水分和營養(yǎng)成分的損失，并降低果實(shí)病變率。常虹等[14]將殼聚糖、納他霉素、石蠟三種保鮮液復(fù)合配比，對皇帝柑涂膜保鮮。鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟復(fù)合涂膜法是利用鄰苯基苯酚的防腐保鮮功能及果蠟可減少膜內(nèi)外氣體交換的作用，從而降低果實(shí)的呼吸強(qiáng)度和相關(guān)酶活性，減少營養(yǎng)物質(zhì)損耗，以延緩果實(shí)腐爛變質(zhì)，延長貯藏期[15]。

目前，利用鄰苯基苯酚涂膜在果蔬保鮮方面的應(yīng)用研究在國內(nèi)外鮮有報(bào)道，尤其針對貢柑果實(shí)方面。因此，本文通過研究鄰苯基苯酚涂膜處理對貢柑果實(shí)貯藏過程中品質(zhì)和一些生理指標(biāo)的影響，以便于研發(fā)低成本、保鮮效果明顯的新型保鮮劑，同時(shí)有利于促進(jìn)鄰苯基苯酚在其他果蔬貯藏保鮮方面的廣泛應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

德慶貢柑 采自廣東省德慶縣德慶果園，采收成熟度為7.5～8.5分熟，采收后立即送至實(shí)驗(yàn)室，選取相對大小均勻、色澤一致的果實(shí)作為研究材料；2，6-二氯酚靛酚鈉、PVP 西隴化工股份有限公司；甘露醇、蔗糖 廣州化學(xué)試劑廠；氫氧化鈉 分析純，天津科威公司；硫代巴比妥酸 天津江天化工有限公司。其他均為國產(chǎn)分析純試劑。

CF16R高速冷凍離心機(jī)、UNIC 2800UV/VIS紫外分光光度計(jì) 日立高新技術(shù)公司；GY-3指針式水果硬度計(jì) 艾普計(jì)量儀器有限公司；HH-6晶玻數(shù)顯電子恒溫水浴箱 上海一恒科學(xué)儀器有限公司；手持糖度計(jì) 上海勃基儀器儀表有限公司；DDS-11A電導(dǎo)儀 上海精密科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 鄰苯基苯酚濃度的選擇 鄰苯基苯酚涂膜溶液配制按如下配比依次進(jìn)行：石蠟200 g、巴西天然棕櫚蠟3 g、烷基磺酸鈉10 g、鄰苯基苯酚（0.1%、0.2%、0.4%、0.8%濃度）。取新鮮貢柑果實(shí)分別用0%（只進(jìn)行果蠟涂膜處理）、0.1%、0.2%、0.4%和0.8%濃度（w/v）的鄰苯基苯酚涂膜溶液對采后貢柑果實(shí)進(jìn)行處理，以未經(jīng)任何處理的果實(shí)作為對照（CK），每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15個(gè)果，一共需要270個(gè)果實(shí)，晾干后于常溫貯藏，每隔3 d進(jìn)行果實(shí)腐爛率調(diào)查和評(píng)估，以確定最佳處理濃度。

1.2.2 貢柑的涂膜處理及貯藏實(shí)驗(yàn) 采用未經(jīng)任何涂膜處理的果實(shí)作為對照，以0.2%濃度的鄰苯基苯酚涂膜對挑選好的果實(shí)進(jìn)行處理，晾干后用0.015 mm厚的聚乙烯薄膜保鮮袋填裝，于常溫條件下（25 ℃）貯藏，每隔3 d取樣觀察并進(jìn)行指標(biāo)測定，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15個(gè)果，總共需要810個(gè)果實(shí)。

1.2.3 測定指標(biāo)

1.2.3.1 果實(shí)腐爛率的測定 參考Cao等[16]的方法。依據(jù)果實(shí)腐爛部分占整個(gè)果實(shí)的表面積比例來劃分腐爛的等級(jí)（如表1）。

表1 果實(shí)腐爛等級(jí)劃分Table 1 Grading of fruit decay

果實(shí)腐爛率的計(jì)算公式：

1.2.3.2 硬度的測定 用GY-3硬度計(jì)插穿果實(shí)，讀出硬度計(jì)數(shù)值，即為果實(shí)硬度，單位為kg/cm2。

1.2.3.3 失重率 采用稱重法測定貢柑減重率，以果實(shí)損失重量占鮮果重百分比表示，取整果稱重[17]，以百分率表示。

1.2.3.4 可溶性固形物（TSS）測定 從15個(gè)貢柑果實(shí)中取20 g果肉組織，榨汁處理，用手持蔗糖儀測定果實(shí)組織TSS含量，以百分率表示[18]。

1.2.3.5 可滴定酸（TA）含量測定 采用酸堿滴定法測定[19]。取上述果汁，用蒸餾水定容搖勻靜置過濾，滴加酚酞，用已標(biāo)定的氫氧化鈉進(jìn)行滴定，終點(diǎn)為粉色且30 s不褪色。做三次重復(fù)。

1.2.3.6 維生素 C含量（VC）測定 采用 2，6-二氯酚靛酚鈉鹽滴定法測定[20]。從15個(gè)貢柑果實(shí)中取20 g果肉組織，榨汁處理，用草酸溶液定容搖勻，靜置過濾，用標(biāo)定好的 2,6-二氯酚靛酚進(jìn)行滴定，終點(diǎn)為微紅色且15 s不褪色。做三次重復(fù)。

1.2.3.7 果皮細(xì)胞膜通透性的測定 膜透性的測定采用相對電導(dǎo)率法[21]。用DDS-11A型電導(dǎo)率儀進(jìn)行測定，將切片組織用蒸餾水沖洗，在 0.3 mol/L甘露醇中靜置，測定電導(dǎo)率；煮沸后冷卻至室溫，再測定一次電導(dǎo)率。相對滲透率用前后兩次電導(dǎo)率之比來表示。

1.2.3.8 MDA、SOD、CAT含量測定 參考闞超楠等[22]的測定方法。MDA含量測定：稱取貢柑果皮5 g，用液氮處理后加25 mL 10% 三氯乙酸勻漿，5000×g下離心10 min，吸取1 mL上清液，加入3 mL 0.5%硫代巴比妥酸（用10%三氯乙酸配制），沸水浴20 min，冷卻定容至4 mL，分別測定532和600 nm處的光吸收值。

SOD活性測定：取貢柑果皮2 g，液氮磨碎，然后加入5倍量0.05 mol/L的磷酸緩沖液（pH7.0）及0.4 g PVP進(jìn)行勻漿，接著4 ℃下20000 ×g離心15 min。取上清液0.05 mL，然后加入3 mL含有39.15 μmol甲硫氨酸 （Met）、0.3 μmol EDTA、0.225 μmol氮藍(lán)四唑（NBT）、0.006 μmol核黃素（以上試劑均用pH7.8的0.05 mol/L磷酸緩沖液配制）反應(yīng)液，在4000 lx 的光下反應(yīng)10 min，然后測定560 nm處光吸收值，以緩沖液代替酶液作空白，以抑制光還原氮藍(lán)四唑50%為一個(gè)酶活力單位。

CAT活性測定：取貢柑果皮2 g，先用液氮磨碎，然后加入5倍量0.05 mol/L的磷酸緩沖液（pH7.0）進(jìn)行勻漿，于4 ℃下 20000×g離心 15 min，收集上清液用于酶活性測定。3 mL反應(yīng)液含有44.25 μmol H2O2（以 pH7.8的0.05 mol/L磷酸緩沖液配制）和0.05 mL粗酶液，在240 nm處測定光吸收值變化。酶活力單位定義為每分鐘引起光吸收值變化0.001所需的酶量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用 Excel 數(shù)據(jù)處理、Origin 2017 繪制圖形、SPSS 19.0軟件進(jìn)行顯著性分析（P＜0.05表示差異顯著）。所有試驗(yàn)重復(fù)3次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果取平均值，并以（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 鄰苯基苯酚濃度的確定

從圖1可知，各處理組果實(shí)腐爛率均隨著貯藏時(shí)間延長而升高。第0～6 d，單獨(dú)果蠟涂膜處理組和不同濃度鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理組果實(shí)均未發(fā)生腐爛，而對照組果實(shí)在第6 d開始發(fā)生腐爛，腐爛率為10%；在第9～12 d，0.1%、0.4%、0.8%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟組均出現(xiàn)輕微腐爛現(xiàn)象，而0.2%鄰苯基苯酚涂膜處理組果實(shí)在此期間未發(fā)生腐爛，且在貯藏后期15～24 d腐爛率一直保持低水平，第24 d的腐爛率僅為37%。經(jīng)分析，一方面可能由于鄰苯基苯酚具有高效殺菌防腐能力，另一方面可能是由于涂膜在果表面形成的高分子膜對細(xì)菌等微生物起到物理屏障作用，抑制微生物生長發(fā)育及其病理性失水，從而降低了腐爛率。這與趙珊等[23]在櫻桃上的研究結(jié)果一致；鄭福慶等[24]研究結(jié)果表明了保持貢柑果實(shí)表面清潔是防腐保鮮的關(guān)鍵。由此可知，經(jīng)鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟處理的果實(shí)比空白對照組和果蠟處理組更不易腐爛，其中以0.2%鄰苯基苯酚涂膜處理為最佳，所以選取0.2%鄰苯基苯酚涂膜處理進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖1 不同濃度鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后貢柑果實(shí)腐爛率的影響Fig.1 Effects of wax coating treatment with different concentration of OPP on the decay rate of postharvest Gonggan citrus fruit

2.2 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后果實(shí)硬度的影響

硬度是衡量果蔬品質(zhì)變化程度的重要指標(biāo)[22]。如圖2所示，整個(gè)貯藏期間，處理組果實(shí)硬度明顯高于對照組果實(shí)硬度。采后3～6 d處理組果實(shí)硬度下降幅度為8.44%，高于空白對照組的10.70%。處理組果實(shí)在6到24 d中硬度指標(biāo)下降平緩，硬度僅降低0.163 kg/cm2，空白對照組6到18 d下降平緩，下降幅度為17.24%，第18 d起開始大幅度下降，18到24 d下降幅度為25%，進(jìn)入二次速降期，可能是因?yàn)楣麑?shí)達(dá)到衰老期，細(xì)胞壁中膠層的基質(zhì)崩潰，果膠在果膠酶的作用下大幅度分解，細(xì)胞大量游離，因此硬度二次速降。以上表明0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理明顯減緩了果實(shí)采后硬度的軟化速率，有效維持了貯藏后期貢柑果實(shí)的硬度。

圖2 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后貢柑果實(shí)硬度的影響Fig.2 Effect of wax coating treatment with 0.2% OPP on the hardness of postharvest Gonggan citrus fruits

2.3 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后果實(shí)失重率的影響

水分蒸發(fā)是導(dǎo)致果實(shí)失重及品質(zhì)降低的關(guān)鍵因素之一[25]。從圖3可知，處理組果實(shí)和對照組果實(shí)在貯藏期間果實(shí)的失重比例均不斷增加，增速不同。趙珊等[23]認(rèn)為可能是果蔬自身貯存能量可維持短期呼吸所導(dǎo)致的。第6 d開始，對照組果實(shí)的失重率顯著高于0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理組（P＜0.05）。對照組在第3～15 d，失重率迅速增加，平均每3 d的失重率為1.42%，15～24 d失重率減緩，處于平穩(wěn)狀態(tài)，最終失重率為7.50%。在貯藏0～12 d內(nèi)，經(jīng)0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理的果實(shí)處于失重率的平緩增長期，失重率相對水平較低，這可能是由于鄰苯基苯酚涂膜液在果實(shí)表面形成薄膜，減輕果實(shí)內(nèi)部蒸騰作用及水分代謝。這與徐呈祥等[17]研究結(jié)果一致。從12 d開始，處理果的失重率逐漸增加，但顯著低于對照果（P＜0.05），因此，0.2% 鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理有效維持了貯藏后期貢柑果實(shí)的水分含量，保證了果實(shí)的正常代謝水平。

圖3 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后貢柑果實(shí)失重率的影響Fig.3 Effect of wax coating treatment with 0.2% OPP on the weightlessness rate of postharvest Gonggan citrus fruits

2.4 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后果實(shí)可溶性固形物的影響

可溶性固形物的含量是檢測果蔬貯藏品質(zhì)的指標(biāo)之一，其含量反映著果實(shí)組織中糖和其他固形物含量的多少，決定著細(xì)胞組織的保水能力。可溶性固形物含量越高，保水力越強(qiáng)，因?yàn)楦吆康目扇苄怨绦挝锬茉黾蛹?xì)胞的滲透壓，根據(jù)細(xì)胞滲透原理，可有效避其免水分滲透至細(xì)胞壁外[23]。如圖4所示，處理組果實(shí)在貯藏過程中果實(shí)可溶性固形物含量均呈先上升后下降的趨勢；對照組果實(shí)的含量在0～6 d內(nèi)快速增加，說明果實(shí)在此階段里快速成熟；在6～18 d內(nèi)對照組可溶性固形物持續(xù)降低，之后趨于穩(wěn)定，在18～24 d內(nèi) TSS 含量顯著低于處理果（P＜0.05）。處理組果實(shí)的可溶性固形物含量在貯藏前期上升過程比較緩慢，第3 d開始逐步增加，到第15 d達(dá)到峰值，說明其在此階段中果實(shí)逐漸成熟，且果實(shí)經(jīng)鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理有效推遲了成熟時(shí)間，達(dá)到保鮮效果，并維持著著TSS較高含量。余易琳等[26]、楊雅景等[25]認(rèn)為是由于涂膜法阻止了果實(shí)直接與空氣接觸，減緩氧氣的進(jìn)入，在果實(shí)內(nèi)部形成低O2高CO2的氣體條件從而降低果實(shí)呼吸代謝作用，減慢物質(zhì)消耗所導(dǎo)致。由此可知，0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理有效保持了采后貢柑果實(shí)的品質(zhì)，保鮮效果明顯。

圖4 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后貢柑果實(shí)可溶性固形物的影響Fig.4 Effect of wax coating treatment with 0.2% OPP on the soluble solids of postharvest Gonggan citrus fruits

2.5 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后果實(shí)可滴定酸含量的影響

圖5試驗(yàn)結(jié)果表明，處理組和對照組果實(shí)的可滴定酸含量在整個(gè)貯藏期間均不斷上升。在貯藏期間，對照組果實(shí)的可滴定酸含量呈持續(xù)上升趨勢；而0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理組的果實(shí)，其可滴定酸含量在第0～3 d有所下降，可能是由于貯藏前期有機(jī)酸一部分作為呼吸基質(zhì)被用作呼吸底物消耗，另一部分被機(jī)體轉(zhuǎn)化為糖分儲(chǔ)存體內(nèi)，因此導(dǎo)致其含量下降。第6 d后處于一個(gè)緩慢的增長過程，到21 d，處理果實(shí)的可滴定酸含量為14.70 mg/100 g，而對照果則在第21 d達(dá)到最高值，為17.23 mg/100 g，之后有所下降。說明0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理有效抑制了果實(shí)組織細(xì)胞的呼吸作用，減少了糖的降解，抑制了酸的積累，從而有效保持了貢柑果實(shí)的原有風(fēng)味。

圖5 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后貢柑果實(shí)可滴定酸含量的影響Fig.5 Effect of wax coating treatment with 0.2% OPP on the titratable acid content of postharvest Gonggan citrus fruits

2.6 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后果實(shí)維生素C含量的影響

維生素C（VC）是一種可清除果實(shí)內(nèi)活性氧的重要抗氧化劑，對延緩果實(shí)衰老具有積極作用[27-28]。由圖6可知，在0～6 d，處理組果實(shí)與對照組果實(shí)的VC含量雖稍有下降，但不明顯，兩者相差較小。但從第6 d開始，對照果的VC含量出現(xiàn)一個(gè)迅速下降的過程，到第15 d，VC含量共下降了11.5 mg/100 g，下降幅度為33.33%，第15 d后，對照果的VC含量保持不變，在22～23 mg/100 g波動(dòng)。然而，處理果的VC含量在0～15 d里依然處于一個(gè)相對平穩(wěn)的高水平狀態(tài)，到第15 d后出現(xiàn)一個(gè)明顯下降過程，可能由于隨著果實(shí)成熟還原型較強(qiáng)的抗壞血酸被氧化所導(dǎo)致，但其VC含量依然明顯比對照高（P＜0.05）。綜上所述，0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理能夠延緩貢柑果實(shí)中維生素C的損失，穩(wěn)定維持果實(shí)的抗氧化能力，維護(hù)了果實(shí)的品質(zhì)。

圖6 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后貢柑果實(shí)維生素C含量的影響Fig.6 Effect of wax coating treatment with 0.2% OPP on the content of vitamin C in postharvest Gonggan citrus fruits

2.7 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后果實(shí)膜透性的影響

膜透性的增加是細(xì)胞膜損傷的重要標(biāo)志。果蔬組織后熟衰老過程中，細(xì)胞質(zhì)膜功能下降，膜透性增加，細(xì)胞內(nèi)電解質(zhì)向外滲漏，導(dǎo)致相對電導(dǎo)率上升[29]。如圖7所示，隨著貯藏時(shí)間延長，處理果和對照果組織細(xì)胞的相對電導(dǎo)率變化都表現(xiàn)出逐步上升的趨勢，但對照組上升速率明顯快于對照組，這是因?yàn)閷φ战M果實(shí)細(xì)胞膜被破壞，導(dǎo)致膜透性增加。這與袁仲玉等[30]研究結(jié)果一致。在0～9 d，兩組對照樣品的細(xì)胞膜通透性較接近，在第9～18 d，對照組果實(shí)的細(xì)胞膜通透性增加較快，明顯高于處理組果實(shí)；而0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理過的果實(shí)膜透性在低水平內(nèi)波動(dòng)，呈緩慢增長趨勢。說明0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理能有效延緩果實(shí)膜透性增加，維持細(xì)胞膜選擇透過作用，保證細(xì)胞內(nèi)部電解質(zhì)水平。

圖7 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后貢柑果實(shí)膜透性的影響Fig.7 Effect of wax coating treatment with 0.2% OPP on membrane permeability of postharvest Gonggan citrus fruit

2.8 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后果實(shí)果皮MDA含量的影響

丙二醛（MDA）是膜脂過氧化作用的主要產(chǎn)物之一，MDA的積累會(huì)對果蔬細(xì)胞質(zhì)膜和細(xì)胞器造成傷害[31]。由圖8可知，處理果與對照果MDA的含量在整個(gè)貯藏過程中均呈現(xiàn)持續(xù)上升狀態(tài)，但0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理果實(shí)的MDA含量明顯低于對照組。在貯藏初期，兩試驗(yàn)組的MDA含量均穩(wěn)定在較低水平，在貯藏前6 d，處理組MDA含量呈先下降再緩慢上升的狀態(tài)，而對照果實(shí)出現(xiàn)出一個(gè)持續(xù)往上升的趨勢。第12 d以后處理果MDA含量出現(xiàn)一個(gè)躍升，第21 d接近對照果水平。而對照果MDA含量一直緩慢上升，在整個(gè)貯藏期間都高于處理組果實(shí)?？芍暩坦麑?shí)經(jīng)0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理有效抑制了MDA的大量積累，從而減緩了細(xì)胞膜過氧化作用，維持了細(xì)胞膜正常的功能作用和結(jié)構(gòu)完整性。這與袁仲玉等[30]的研究結(jié)果相似。

圖8 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后果實(shí)MDA含量的影響Fig.8 Effect of wax coating treatment with 0.2% OPP on the MDA content of postharvest Gonggan citrus fruit

2.9 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后果實(shí)果皮SOD活性的影響

超氧化物歧化物（SOD）能清除果實(shí)細(xì)胞組織衰老過程中產(chǎn)生的超氧自由基，維持自由基產(chǎn)生和清除的動(dòng)態(tài)平衡，進(jìn)而延緩果實(shí)組織衰老[32-33]。從圖9可以看出，隨著貯藏時(shí)間延長，對照組果實(shí)SOD活性在前6 d快速下降，然后處于平緩下降過程；而處理果的SOD活性則在前6 d逐步下降，之后呈上升趨勢，在第12 d達(dá)到峰值，然后逐步下降，可能是由于和H2O2過量生成，超出了防御系統(tǒng)的抵御消除能力，導(dǎo)致SOD酶的損傷。相似現(xiàn)象在詹麗娟等[34]利用殼聚糖對南湖菱果實(shí)涂膜保鮮研究中也見報(bào)道。處理果的SOD活性在貯藏第12～15 d，明顯高于對照組的果實(shí)。結(jié)果說明0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理有利于維持果實(shí)中SOD活性，SOD酶將歧化成H2O2和H2O，保證細(xì)胞內(nèi)活性氧清除能力，抑制活性氧的積累從而延緩果實(shí)衰老。

圖9 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后果實(shí)SOD活性的影響Fig.9 Effect of wax coating treatment with 0.2% OPP on SOD activity of postharvest Gonggan citrus fruit

2.10 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后果實(shí)果皮CAT活性的影響

CAT（過氧化氫酶）普遍存在于果蔬組織中，是植物體內(nèi)的一種氧化還原酶，CAT是果實(shí)后熟衰老過程中重要的保護(hù)酶，可有效清除自由基，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)[35]。如圖10所示，處理組果實(shí)與對照組果實(shí)的CAT活性都呈先上升后下降趨勢。其中，對照組果實(shí)的CAT活性在第9 d到達(dá)峰值，隨后開始下降，到第21 d下降趨勢開始減緩；而0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理果實(shí)的CAT活性在第12 d達(dá)到峰值，比對照果延緩了3 d，然后逐步下降到1.39 U/gFW。第12～24 d，處理果的CAT活性明顯高于對照果。綜上所述，0.2%苯基苯酚涂膜處理能夠延緩貢柑果實(shí)CAT活性的降低從而提高貢柑對逆境脅迫的抵抗能力，維持果實(shí)細(xì)胞的抗氧化活性，從而有效減緩果實(shí)的衰老過程。

圖10 0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理對采后果實(shí)CAT活性的影響Fig.10 Effect of wax coating treatment with 0.2% OPP on CAT activity of postharvest Gonggan citrus fruit

3 討論與結(jié)論

采后的貢柑果實(shí)容易受到青綠霉菌的感染，造成果實(shí)的腐爛和品質(zhì)劣變。本研究發(fā)現(xiàn)，在常溫貯藏期間，0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理的果實(shí)從第12 d才開始腐爛，對比于對照組果實(shí)第6 d出現(xiàn)腐爛現(xiàn)象，顯著延長了貢柑的貯藏時(shí)間（P＜0.05）。在貯藏后期，處理果的腐爛率僅為對照組果實(shí)的50%左右。此外，處理果的抗壞血酸、可滴定酸、硬度、可溶性固形物等營養(yǎng)物質(zhì)含量明顯高于對照組；同時(shí)，處理果實(shí)的軟化和失重率也得到較好控制，從而使貢柑果實(shí)表現(xiàn)出較好的新鮮度。果實(shí)內(nèi)部生理生化指標(biāo)變動(dòng)一方面是由于外部致腐菌的作用導(dǎo)致；另一方面是由于果實(shí)內(nèi)部的呼吸代謝，水分代謝作用使得果實(shí)的營養(yǎng)物質(zhì)被消耗所導(dǎo)致。鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理可有效維護(hù)果實(shí)的品質(zhì)，其原因可能有兩個(gè)方面，其一鄰苯基苯酚具有高效殺菌防腐能力，可抑制微生物的生長繁殖發(fā)育，降低腐爛率，延長貨架期；其二涂膜果蠟可以在果實(shí)表面形成一層半透膜，阻止果實(shí)內(nèi)外氣體交換，由于果實(shí)本身的呼吸作用而造成果實(shí)處于高CO2低O2的環(huán)境，適當(dāng)高濃度的CO2和低濃度的O2可抑制果實(shí)的呼吸作用。同時(shí)，呼吸作用的減弱，可抑制果實(shí)的成熟和衰老，有效地延緩果實(shí)軟化，延長貯藏期。SOD和CAT是植物體內(nèi)清除超氧自由基和H2O2活性氧的兩種防御酶，在正常情況下，植物體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生和清除處于平衡狀態(tài)，但植物在逆境或衰老情況下，植物組織細(xì)胞內(nèi)活性氧的代謝平衡被破壞，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)超氧自由基和H2O2積累，從而引起細(xì)胞膜脂發(fā)生過氧化反應(yīng)，破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，使膜透性增加，加快細(xì)胞衰老[36-37]。本研究發(fā)現(xiàn)，0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理能有效維持了貢柑果實(shí)中SOD和CAT的活性，使處理組果實(shí)組織細(xì)胞膜過氧化產(chǎn)物MDA的含量明顯下降，減少了果實(shí)中MDA的積累，防止果實(shí)組織細(xì)胞膜脂發(fā)生過氧化反應(yīng)，從而減少了細(xì)胞膜滲透性增加，維持了果實(shí)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性，延緩了采后貢柑果實(shí)衰老，降低采后果實(shí)品質(zhì)的劣變。對于鄰苯基苯酚在采后果蔬保鮮的殘留量，夏更壽等[13]研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)0.5%鄰苯基苯酚溶液處理甌柑，其最后殘留量僅為4.20 mg/kg，低于國內(nèi)外安全標(biāo)準(zhǔn)（10 mg/kg），而本研究采用0.2%濃度的鄰苯基苯酚溶液，遠(yuǎn)低于夏更壽等的處理濃度，所以最后殘留量應(yīng)低于國內(nèi)外安全標(biāo)準(zhǔn)，食用安全放心，不會(huì)對機(jī)體造成傷害。綜上可知，0.2%鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟涂膜處理可作為貢柑果實(shí)采后保鮮的有效措施。本研究可為鄰苯基苯酚結(jié)合果蠟復(fù)合涂膜處理在貢柑果實(shí)采后貯藏保鮮的應(yīng)用研究提供了理論依據(jù)。