上官文丹，陳 可，陳清瑩，張杏果，鐘青萍,

（1.華農(nóng)（潮州）食品研究院有限公司，廣東潮州 521000；2.廣東省食品質(zhì)量與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，廣東廣州 510642）

副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一種常見的食源性病原菌，能導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物或人的細(xì)菌性感染疾病甚至是死亡。生物被膜是指細(xì)菌菌體與胞外的蛋白質(zhì)、多糖、DNA等相互粘連形成的膜樣聚集體[1]，是細(xì)菌為適應(yīng)復(fù)雜多變的生存環(huán)境而進(jìn)化的高效策略。副溶血弧菌普遍具有較強(qiáng)的生物被膜形成能力，能在海鮮、食物接觸表面以及食品加工設(shè)備表面上成膜[2]，擴(kuò)大細(xì)菌對(duì)食品的污染范圍，增加對(duì)宿主的感染的機(jī)率。統(tǒng)計(jì)資料表明，副溶血弧菌引起的食物中毒位居微生物食物中毒的首位，給全球食品安全和人類健康造成潛在的威脅[3-5]。

群體感應(yīng)（quorum sensing，QS）是細(xì)菌集體行為的一種現(xiàn)象，細(xì)菌通過自誘導(dǎo)群體感應(yīng)信號(hào)分子（autoinducer，AI）來感知環(huán)境中種群密度的變化，當(dāng)細(xì)菌密度達(dá)到一定閾值時(shí)，就能調(diào)控細(xì)菌中某些基因的表達(dá)，進(jìn)而表現(xiàn)為一系列的行為特征，包括毒力因子分泌、生物被膜形成、孢子形成、胞外水解酶和胞外多糖（extracellular polysaccharides，EPS）產(chǎn)生等，實(shí)現(xiàn)單個(gè)細(xì)胞無法完成的群體性行為，提高細(xì)菌對(duì)不良環(huán)境的適應(yīng)性，對(duì)致病菌的防治帶來嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)[6]。QS是副溶血弧菌生活方式的一個(gè)重要特征[7]，其中LuxS/AI-2型QS調(diào)控系統(tǒng)介導(dǎo)細(xì)菌的致病性和抗逆性，是近年來的研究熱點(diǎn)。張義全[8]和蔣富鳳等[9]的研究結(jié)果表明，受QS系統(tǒng)中LuxM和LuxS分別調(diào)控的OpaR和AphA在副溶血弧菌的不同生長(zhǎng)階段調(diào)控副溶血弧菌的毒力因子表達(dá)和生物被膜形成等生理途徑；GUO等[7]研究發(fā)現(xiàn)，副溶血性弧菌的生長(zhǎng)、毒力及生物被膜形成受LuxM/LuxS依賴的QS系統(tǒng)所調(diào)控。

細(xì)菌的致病機(jī)制、抗性等主要生理功能依賴其QS系統(tǒng)的調(diào)節(jié)和控制，而且在食品腐敗變質(zhì)過程中QS系統(tǒng)也發(fā)揮重要作用[10]，因此干擾細(xì)菌的群體感應(yīng)是目前研究的熱點(diǎn)。QS抑制劑（quorum sensing inhibitors，QSIs）是一類能淬滅細(xì)菌QS系統(tǒng)的物質(zhì)，其可干擾致病因子等基因的表達(dá)，降低致病性，但不引起細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，因此QSIs有望成為控制食品腐敗變質(zhì)和減少食物中毒的有效策略。研究發(fā)現(xiàn)部分合成和天然的物質(zhì)對(duì)病原菌具有潛在的抗QS活性[11-12]。乳酸菌是公認(rèn)安全的微生物，通過抑制致病菌QS是發(fā)揮它們抗菌性能的主要方式之一[13]，如清酒乳酸菌NR28能在不影響腸出血性大腸桿菌生長(zhǎng)前提下，有效降低該菌的AI-2水平及毒力因子表達(dá)[14]，海洋源戊糖片球菌zy-B-1的乙酸乙酯提取物對(duì)單增李斯特菌AI-2型QS系統(tǒng)也表現(xiàn)良好的淬滅活性[15]，但對(duì)來源于水產(chǎn)品中的副溶血弧菌在相關(guān)方面的研究相對(duì)匱乏。因此，本文以副溶血弧菌為研究對(duì)象，探究戊糖乳桿菌DF9的乙酸乙酯提取物對(duì)其QS調(diào)控系統(tǒng)的抑制效果，為控制與副溶血弧菌相關(guān)的污染和感染，以及拓寬乳酸菌的研究和應(yīng)用領(lǐng)域具有積極意義。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

戊糖乳桿菌DF9 由本實(shí)驗(yàn)室從內(nèi)蒙古牧民自制奶豆腐中分離鑒定得到，保存于本實(shí)驗(yàn)的-80 ℃冰箱；副溶血弧菌ATCC17802、哈維氏弧菌BB170均購(gòu)于廣東省微生物菌種保藏中心；胰蛋白胨、大豆蛋白胨、牛肉膏、酵母粉 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；酸水解酪蛋白、L-精氨酸 上海源葉科技有限公司；硫酸鎂、NaCl、葡萄糖 廣州化學(xué)試劑廠；蛋白胨、結(jié)晶紫 上海麥克林公司；乙酸乙酯 天津富宇化工公司；PI染料、PBS液 上海生工生物工程有限公司；FITC-ConA染料 Sigma公司。

PL602-S天平 Mettler Toledo公司；YXQ-LS-50A滅菌鍋 上海博迅公司；150A培養(yǎng)箱 金壇榮華公司；TS-200B搖床 上海天呈科技公司；5417R離心機(jī) Eppendorf公司；Forma ClassⅡA2生物安全柜 Thermo Electron公司；SpectraMax i3x酶標(biāo)儀 Molecular Devices公司；R1001-VN旋蒸儀、循環(huán)水真空泵 鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)公司；BA310-T光學(xué)顯微鏡 Motic公司；EVO MA 15掃描電鏡 FEI公司；LSM 7810 DUO激光共聚焦顯微鏡 Zeiss公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌株的培養(yǎng) 將戊糖乳桿菌DF9接入MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)12 h（37 ℃）；副溶血弧菌ATCC17802接入 3% NaCl-TSB 培養(yǎng)基中培養(yǎng) 12 h（37 ℃，150 r/min）；哈維氏弧菌BB170接入AB培養(yǎng)基中培養(yǎng)12 h（30 ℃，90 r/min）。上述菌株均活化2代后使用。

1.2.2 戊糖乳桿菌DF9乙酸乙酯提取物的制備 將過夜活化培養(yǎng)的戊糖乳桿菌DF9接入MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng) 24 h，離心（4 ℃、8000 r/min、10 min）后以0.45 μm的微孔濾膜進(jìn)行過濾，得到無細(xì)胞發(fā)酵液。用等體積乙酸乙酯萃取過夜。取上層乳化層，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機(jī)溶劑（37 ℃、120 r/min），將濃縮液進(jìn)行真空冷凍干燥，得到粉末狀提取物，將其溶于TSB或AB培養(yǎng)基中，以0.22 μm的微孔濾膜過濾除菌，配制成濃度為50 mg/mL工作液，將其命名為DF9-QSI，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)中。

1.2.3 DF9-QSI作用下的副溶血弧菌和哈維氏弧菌BB170的生長(zhǎng) 將活化培養(yǎng)的副溶血弧菌或哈維氏弧菌接入孔板內(nèi)含 DF9-QSI（0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 mg/mL）的 200 μL 的 3%NaCl-TSB培養(yǎng)基或AB培養(yǎng)基中，以未含DF9-QSI組作為陰性對(duì)照組。將孔板置于全自動(dòng)生長(zhǎng)曲線儀中恒溫（37或30 ℃）培養(yǎng)24 h，定期測(cè)定600 nm處OD值。

1.2.4 DF9-QSI對(duì)副溶血弧菌AI-2活性的影響 采用哈維氏弧菌BB170生物發(fā)光法[16]進(jìn)行。將副溶血弧菌接種于含 DF9-QSI不同濃度（0、0.2、0.4、0.8 mg/mL）的3% NaCl-TSB培養(yǎng)基中，使菌的終濃度為 107CFU/mL，混勻后培養(yǎng) 12 h，離心、0.22 μm微孔濾膜過濾得無細(xì)胞上清液，待用。將過夜活化培養(yǎng)的哈維氏弧菌接種于AB培養(yǎng)基中培養(yǎng)12 h，將細(xì)菌重懸至OD595nm為0.8，按1:5000將該菌液與無菌新鮮AB培養(yǎng)基稀釋、混勻。再將前述所得的無細(xì)胞上清液按1:50與哈維氏弧菌的稀釋液進(jìn)行混合，培養(yǎng)3 h（30 ℃、100 r/min）。避光環(huán)境中吸取200 μL菌液于不透明黑色96孔板中，利用酶標(biāo)儀的化學(xué)發(fā)光模式對(duì)哈維氏弧菌的熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量，以未經(jīng)DF9-QSI處理的作為對(duì)照組。按公式（1）計(jì)算DF9-QSI對(duì)AI-2的抑制率：

1.2.5 DF9-QSI對(duì)副溶血弧菌動(dòng)力的影響 吸取2 μL 1.2.4中含DF9-QSI的混合菌液分別接于群集、泳動(dòng)及蹭行三種平板中央，以未含DF9-QSI組作為對(duì)照組，平板正置培養(yǎng)24 h（37 ℃）。觀察并測(cè)量副溶血弧菌的遷移區(qū)域大小，并按公式（2）計(jì)算抑制率：

式中：dControl表示對(duì)照組副溶血弧菌群集/泳動(dòng)/蹭行的遷移直徑（mm）；dDF9-QSI表示 DF9-QSI處理組副溶血弧菌群集/泳動(dòng)/蹭行的遷移直徑（mm）。

1.2.6 DF9-QSI對(duì)副溶血弧菌EPS合成量的影響將含 DF9-QSI不同濃度（0、0.2、0.4、0.8 mg/mL）的3% NaCl-TSB培養(yǎng)基1 mL加入48孔板中，孔內(nèi)接入副溶血弧菌（終濃度為107CFU/mL），并放入無菌玻片，靜置培養(yǎng)24 h（37 ℃）。以未含DF9-QSI組作為對(duì)照組。孵育后的玻片置于含0.5 mL生理鹽水的試管中，振蕩30 s，加入等體積的5%苯酚，振蕩后加入5倍體積濃H2SO4，振勻，取200 μL測(cè)定490 nm處OD值，按公式（3）計(jì)算抑制率：

式中：ODControl表示對(duì)照組的OD490 nm；ODDF9-QSI表示DF9-QSI處理組的OD490nm。

1.2.7 DF9-QSI對(duì)生物被膜生物量的影響 吸取1 mL含 DF9-QSI（0、0.2、0.4、0.8 mg/mL）的 3% NaCl-TSB培養(yǎng)基加入96孔板，每孔內(nèi)接入副溶血弧菌（終濃度為 107CFU/mL），靜置培養(yǎng) 24 h（37 ℃）。棄除孔內(nèi)上層菌液，孔板經(jīng)PBS液清洗、恒溫固定（60 ℃，30 min）、0.1% 結(jié)晶紫室溫染色（5 min）、PBS液再清洗、室溫干燥及33%冰乙酸脫色（10 min）后，測(cè)定595 nm處OD值，計(jì)算抑制率。

1.2.8 光學(xué)顯微鏡觀察 吸取1.5 mL含DF9-QSI（0.8 mg/mL）的3% NaCl-TSB培養(yǎng)基加入24孔板，每孔內(nèi)接入副溶血弧菌（終濃度為107CFU/mL），并放入無菌玻片，靜置培養(yǎng)24 h（37 ℃）。以未含DF9-QSI組作為對(duì)照組。取出的玻片經(jīng)超純水潤(rùn)洗3次、0.1%結(jié)晶紫染色（5 min）、超純水再潤(rùn)洗及室溫晾干后，置于光學(xué)顯微鏡的油鏡下觀察。

1.2.9 掃描電鏡觀察 上述1.2.8中孵育好的樣本片經(jīng)PBS液潤(rùn)洗、2.5%戊二醛液預(yù)固定（4 ℃，24 h）、PBS液潤(rùn)洗、1%鋨酸后固定（0.5 h）及PBS液再潤(rùn)洗后，依次用系列濃度的乙醇（30%、50%、70%、80%、90%）脫水10 min，再以100%乙醇脫水2次，每次10 min。預(yù)處理的玻片再經(jīng)真空干燥和噴金后，置于場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡（FE-SEM）下觀察。

1.2.10 激光共聚焦顯微鏡（CLSM）觀察 上述1.2.8中孵育好的樣本片用PBS液潤(rùn)洗后，加入5 μL FITC Con-A 染料染色 30 min（4 ℃），再加入 5 μL PI染料繼續(xù)染色15 min（4 ℃）。以上操作需在避光下進(jìn)行。之后將樣本片置于激光共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為510 nm。以ZEN軟件對(duì)圖像進(jìn)行處理。

1.3 數(shù)據(jù)處理

以上實(shí)驗(yàn)至少進(jìn)行三次，取其平均值，以SPSS 25.0軟件分析均值的顯著性差異，P＜0.05則差異具有統(tǒng)計(jì)意義。圖形采用Graphpad prism 7.0進(jìn)行繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 DF9-QSI作用下副溶血弧菌和哈維氏弧菌BB170的生長(zhǎng)

由圖1a可知，與對(duì)照組相比，當(dāng) DF9-QSI濃度≤0.8 mg/mL時(shí)，其在一定程度上減緩了副溶血弧菌的生長(zhǎng)；當(dāng)其≥1.0 mg/mL時(shí)，DF9-QSI明顯延遲副溶血弧菌進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的時(shí)間，并使到達(dá)穩(wěn)定期的最終菌濃度顯著減少（P＜0.05），呈現(xiàn)濃度依賴性的抑制作用。本研究中哈維氏弧菌BB170是作為AI-2信號(hào)分子的指示菌，還應(yīng)排除DF9-QSI對(duì)其生長(zhǎng)的影響。圖1b結(jié)果顯示，哈維氏弧菌在系列濃度的DF9-QSI處理后，生長(zhǎng)趨勢(shì)與對(duì)照組基本保持一致，表明哈維氏弧菌的生長(zhǎng)未受到DF9-QSI的影響。為了證明DF9-QSI是通過靶向干擾副溶血弧菌QS調(diào)控系統(tǒng)而非抑制菌生長(zhǎng)而發(fā)揮作用，選用≤0.8 mg/mL的DF9-QSI作進(jìn)一步的研究。

圖1 DF9-QSI處理下副溶血弧菌（a）和哈維氏弧菌BB170（b）的生長(zhǎng)變化Fig.1 Growth changes of V.parahaemolyticus (a) and V.harveyi BB170 (b) treated with DF9-QSI

2.2 DF9-QSI對(duì)副溶血弧菌AI-2活性的抑制

由圖2可知，添加0.2、0.4和0.8 mg/mL的DF9-QSI對(duì)副溶血弧菌AI-2活性的抑制率分別為14.45%±8.56%、50.57%±9.15%和66.16%±5.30%，表明DF9-QSI可通過抑制副溶血弧菌的AI-2活性，靶向干擾其QS系統(tǒng)，具有開發(fā)新型生物制劑以淬滅副溶血弧菌QS的潛力，但具體哪些物質(zhì)發(fā)揮群體感應(yīng)淬滅作用還有待后續(xù)深入研究。PARK等[14]研究結(jié)果證明清酒乳桿菌NR28對(duì)野生型大腸桿菌ATCC43894毒力的抑制與降低其AI-2活性相關(guān)。PELYUNTHA等[17]發(fā)現(xiàn)從發(fā)酵葡萄中分離的乳酸菌能有效干擾傷寒沙門菌的AI-2活性和生物被膜形成，從而降低其毒力。

圖2 DF9-QSI對(duì)副溶血弧菌AI-2活性的抑制作用Fig.2 Inhibition effect of DF9-QSI on AI-2 activity of V.parahaemolyticus

2.3 DF9-QSI對(duì)副溶血弧菌動(dòng)力的影響

生物被膜的形成是一個(gè)逐步的、動(dòng)態(tài)循環(huán)的過程，其生命周期大致經(jīng)歷浮游單菌粘附表面、細(xì)胞微聚集體形成、三維狀生物被膜形成、生物被膜繼續(xù)發(fā)育成熟、菌體脫落變成浮游菌5個(gè)過程[2]。鞭毛和菌毛對(duì)細(xì)菌生物被膜生命周期的早期表面附著及蔓延有利，與細(xì)菌QS調(diào)控系統(tǒng)密切相關(guān)[18]。副溶血弧菌存在鞭毛介導(dǎo)的群集、泳動(dòng)行為以及菌毛介導(dǎo)的蹭行行為，能增強(qiáng)細(xì)菌生物被膜形成能力[19-20]。ENOSBERLAGE等[21]將調(diào)控副溶血弧菌鞭毛運(yùn)動(dòng)的flgE和flgD基因敲除后，細(xì)菌在物體表面的成膜能力明顯減弱，且不產(chǎn)生成熟生物被膜。圖3顯示，DF9-QSI對(duì)副溶血弧菌的動(dòng)力具有抑制作用。在群集培養(yǎng)基上，副溶血弧菌的運(yùn)動(dòng)范圍達(dá)（14.11±1.75）mm，以0.2、0.4和0.8 mg/mL DF9-QSI處理時(shí)，對(duì)細(xì)菌的群集抑制率分別為18.10%±7.63%、33.79%±1.53%和39.06%±0.57%。在泳動(dòng)培養(yǎng)基上，對(duì)照組中的副溶血弧菌泳動(dòng)性能強(qiáng)，遷移直徑為（89.59±0.15）mm，但僅添加0.2 mg/mL DF9-QSI使遷移直徑下降至（46.66±0.58）mm，抑制率為 47.91%±0.65%。在蹭行培養(yǎng)基中，0.8 mg/mL 的DF9-QSI幾乎抑制了副溶血弧菌的蹭行行為，抑制率高達(dá)87.44%±1.06%。上述結(jié)果表明，DF9-QSI能明顯影響副溶血弧菌鞭毛和菌毛的功能，減弱細(xì)菌在早期的轉(zhuǎn)移、黏附和成膜能力。亦有研究發(fā)現(xiàn)乳酸菌源QSIs能抑制嗜水氣單胞菌[22-23]、單增李斯特菌[15]及哈維氏弧菌[24]的群集和泳動(dòng)能力，且與致病菌的QS系統(tǒng)相關(guān)，這與本文所得結(jié)果相類似。

圖3 DF9-QSI對(duì)副溶血弧菌群集（a）、泳動(dòng)（b）和蹭行（c）的抑制作用Fig.3 Inhibitory activities of DF9-QSI on swarming (a), swimming (b) and twitching (c) of V.parahaemolyticus

2.4 DF9-QSI對(duì)副溶血弧菌生物被膜形成及其EPS合成的抑制

群體感應(yīng)影響細(xì)菌的生物被膜的形成。由圖4可知，DF9-QSI抑制副溶血弧菌生物被膜的形成，三種濃度下的抑制率分別為5.06%±7.75%、44.46%±6.91%和60.97%±8.31%。結(jié)合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表明DF9-QSI能顯著抑制副溶血弧菌的QS系統(tǒng)，進(jìn)而破壞細(xì)菌生物被膜的形成。

EPS具有粘性，能使細(xì)胞聚集并相互連接形成微菌落，推動(dòng)生物被膜向成熟階段發(fā)展。因此，EPS在加強(qiáng)細(xì)菌與底物之間結(jié)合，維持生物被膜三維結(jié)構(gòu)完整性以及對(duì)抗外界環(huán)境壓力方面具有重要意義[25-26]。圖4顯示，隨著DF9-QSI濃度的增大，對(duì)副溶血弧菌EPS合成的抑制率也逐漸增大；以0.2、0.4和0.8 mg/mL的DF9-QSI處理時(shí)，對(duì)副溶血弧菌EPS合成的抑制率分別為20.25%±9.20%、41.65%±7.35%和60.39%±1.81%，表明DF9-QSI可有效阻止副溶血弧菌產(chǎn)生EPS。NITHYA等[27]報(bào)道了奇異變形桿菌和短小芽孢桿菌S6-15的培養(yǎng)提取物能降低副溶血弧菌、銅綠假單胞菌等10種病原菌的疏水性指數(shù)和EPS產(chǎn)量，此外這些提取物對(duì)致病菌成膜能力的抑制率達(dá)80%～95%。聚球藻細(xì)胞提取物對(duì)哈維氏弧菌和創(chuàng)傷弧菌的成膜能力及EPS產(chǎn)量的抑制率均在65%以上，且無抗菌活性，也能有效防止致病菌成熟生物被膜的初始附著，并破壞其結(jié)構(gòu)[28]。

圖4 DF9-QSI處理下副溶血弧菌成膜量及EPS合成量的變化Fig.4 Changes of biofilm formation and EPS synthesis of V.parahaemolyticus treated with DF9-QSI

2.5 光學(xué)顯微鏡和場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡下觀察的生物被膜形貌變化

光學(xué)顯微鏡和場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡可直觀觀察DF9-QSI作用下的副溶血弧菌生物被膜形貌變化，結(jié)果如圖5所示。在光學(xué)顯微鏡下，對(duì)照組中的副溶血弧菌在蓋玻片上形成片狀、厚且緊密的生物被膜，在處理組中僅能見到零碎的微菌體或單菌落，無片狀生物被膜存在。經(jīng)過相同系列的固定、洗滌等預(yù)處理后，在場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡視野下仍能觀察到對(duì)照組中的副溶血弧菌菌體聚集形成三維結(jié)構(gòu)的生物被膜，處理組中僅能見到散落分布的菌體。以上顯微觀察結(jié)果表明DF9-QSI明顯降低了副溶血弧菌的成膜能力。類似地，孫夢(mèng)桐等[24]利用光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)8.0 mg/mL的乳酸乳球菌LY3-1粗提物處理后的哈維氏弧菌菌體分散分布，生物被膜結(jié)構(gòu)喪失。

圖5 光學(xué)顯微鏡（a，1000×）和 FE-SEM（b，3500×）觀察DF9-QSI處理下副溶血弧菌生物被膜結(jié)構(gòu)的變化Fig.5 Changes of biofilm structure of V.parahaemolyticus treated by DF9-QSI observed under light microscope(a, 1000×) and FE-SEM (b, 3500×)

2.6 激光共聚焦顯微鏡下觀察的生物被膜形貌變化

細(xì)菌生物被膜中EPS的分布及其空間結(jié)構(gòu)的變化可利用熒光染料結(jié)合激光共聚焦顯微鏡技術(shù)進(jìn)行觀察[29]。圖6結(jié)果表明未處理的副溶血弧菌分布密集，菌體被大量EPS（綠色熒光）包裹和覆蓋，形成的生物被膜結(jié)構(gòu)有厚度、完整；而DF9-QSI處理后，膜中的EPS覆蓋面積顯著減少，厚度明顯降低，表明細(xì)菌形成的生物被膜完整結(jié)構(gòu)被破壞。該結(jié)果進(jìn)一步說明DF9-QSI有效抑制了副溶血弧菌生物被膜的形成量及其EPS的合成。

圖6 激光共聚焦顯微鏡觀察DF9-QSI對(duì)副溶血弧菌生物被膜的影響Fig.6 Effect of DF9-QSI on the biofilm of V.parahaemolyticus observed by CLSM

3 結(jié)論

QS介導(dǎo)細(xì)菌的信號(hào)交流系統(tǒng)是微生物世界中常見的現(xiàn)象，然而有害菌依賴QS信號(hào)分子調(diào)控形成的生物被膜給抗菌劑（防腐劑、消毒劑、抗生素等）的有效性帶來巨大挑戰(zhàn)，是造成細(xì)菌感染、持續(xù)性污染和多重耐藥的主要原因。因此，細(xì)菌的QS和生物被膜形成是食品安全和醫(yī)療衛(wèi)生等領(lǐng)域面臨的難題。與常規(guī)使用的抗菌劑相比，QSIs的優(yōu)勢(shì)是能以QS為靶標(biāo)，在不殺死細(xì)菌的前提下，有效降低病原菌的致病性和抗性[30]。本文探究了亞抑菌濃度的DF9-QSI對(duì)副溶血弧菌QS系統(tǒng)相關(guān)生物表型的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，≤0.8 mg/mL的DF9-QSI基本不影響副溶血弧菌的正常生長(zhǎng)，但能有效抑制其AI-2活性、運(yùn)動(dòng)（群集、泳動(dòng)和蹭行）、生物被膜形成及EPS合成，且隨濃度增大，抑制作用明顯增強(qiáng)。光學(xué)顯微鏡、場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡和激光共聚焦顯微鏡結(jié)果表明DF9-QSI有效抑制了副溶血弧菌生物被膜的形成。因此推測(cè)DF9-QSI可能通過降低副溶血弧菌的AI-2活性，進(jìn)而減弱其生物被膜形成早期階段中浮游菌借助鞭毛、菌毛進(jìn)行的表面起始粘附的能力，并抑制細(xì)菌分泌具有粘連菌體且推動(dòng)生物被膜發(fā)育成熟的EPS的合成能力，最終抑制副溶血弧菌生物被膜的形成。本研究結(jié)果證實(shí)DF9-QSI具有淬滅副溶血弧菌AI-2類QS系統(tǒng)的作用，可為有效解決該菌在食品、醫(yī)療衛(wèi)生上的污染和感染等問題提供一種可行的方法，并進(jìn)一步提高乳酸菌作為生物源性QSIs的應(yīng)用價(jià)值。然而DF9-QSI影響細(xì)菌QS以及調(diào)控生物被膜的相關(guān)分子機(jī)理還有待深入研究。