張學(xué)勇，簡瑩娜，許發(fā)芳，王朝風(fēng)，朵紅

(1.青海大學(xué)畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，西寧 810016；2.青海省互助八眉豬原種育繁場，海東 810500；3.互助縣動物疫病預(yù)防控制中心，海東 810500)

豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)感染引起的傳染性疾病，各年齡段的豬均可被感染，主要威脅仔豬，引起仔豬的急性水樣腹瀉、脫水和嘔吐，對仔豬具有高致死性[1]。成年豬感染PEDV后，臨床癥狀僅表現(xiàn)為厭食嘔吐，無上述的明顯腹瀉癥狀，所以當(dāng)母豬感染時，屬于帶毒隱性感染，但新生仔豬由于母源抗體不足，且免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善等，使其易感PEDV，感染后仔豬死亡率可高達(dá)80%[2]。病豬和隱性感染的帶毒豬為主要傳染源，一般通過接觸和空氣傳播，健康豬經(jīng)呼吸道或消化道感染后發(fā)病[3]。特別是2010年后，我國豬場報道的PEDV發(fā)生變異，豬群中發(fā)生突破感染，PEDV在豬場中廣泛流行，養(yǎng)豬業(yè)面臨新的巨大挑戰(zhàn)[4]。本文對臨床上遇到的一例疑似流行性腹瀉仔豬病例進(jìn)行診斷以及對其防控進(jìn)行了綜述，旨在提高廣大養(yǎng)殖場(戶)對豬流行性腹瀉的防控意識。

1 發(fā)病情況

青海某規(guī)?；B(yǎng)豬場，其中一棟豬舍于2020年12月初，出生10天的4頭仔豬首先發(fā)病，出現(xiàn)腹瀉嘔吐癥狀，不采食，精神差，發(fā)病1～2天后有的呈現(xiàn)水樣腹瀉，仔豬脫水嚴(yán)重，直至死亡。隨后，同豬舍有仔豬陸續(xù)發(fā)病，母豬無其他癥狀。

2 剖解變化

仔豬皮膚蒼白無光澤，消瘦，肌肉蒼白，脫水嚴(yán)重，胃腸道中存有黃白水樣內(nèi)容物，夾雜未消化的乳塊，有腥味，腸系膜充血，腸系膜淋巴結(jié)腫大，腸粘膜充血。

3 細(xì)菌培養(yǎng)

取肝臟、脾臟、腎臟、腸內(nèi)容物接種血斜面和平板，37℃溫箱進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。

4 診斷

取腸內(nèi)容物進(jìn)行分子生物學(xué)檢查，用天根糞便基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA，具體的操作步驟參考試劑盒說明書，基因組DNA于-20℃中保存?zhèn)溆?。同時，按照病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒中提供的操作手冊，提取糞樣中總RNA，再利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。對腹瀉相關(guān)主要病原進(jìn)行PCR鑒定(表1)，以提取的基因組DNA，病毒DNA/cDNA為模板，采用特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增鑒定。

表1 PCR分子生物學(xué)鑒定所用引物

5 結(jié)果

37℃溫箱培養(yǎng)過夜后，挑取有溶血、光滑的菌落，挑一半提DNA進(jìn)行分子鑒定，另一半繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)。經(jīng)過PCR擴(kuò)增，測序分析未發(fā)現(xiàn)致病型大腸桿菌、沙門氏菌等細(xì)菌。

經(jīng)過PCR擴(kuò)增，結(jié)果表明：PEDV的PCR檢測為陽性(圖1)，豬傳染性胃腸炎病毒、豬Delta冠狀病毒、豬輪狀病毒、豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、豬細(xì)小病毒、豬圓環(huán)病毒均為陰性。測序分析發(fā)現(xiàn)，本研究鑒定獲得的序列與GenBank上傳的PEDV變異株同源性為 97.5%～99.5%，與 PEDV 經(jīng)典毒株 CV777 同源性僅為 95.4%，表明該豬場流行的PEDV為變異株。

圖1 PCR鑒定結(jié)果

6 防治

根據(jù)發(fā)病仔豬的臨床癥狀、剖解變化以及實驗室診斷，確診此豬場仔豬感染豬流行性腹瀉病毒。確診后通知豬場采取緊急措施，首先對發(fā)病豬舍中的發(fā)病仔豬、母豬與其他健康豬群進(jìn)行隔離。其次，對豬場中所有仔豬進(jìn)行免疫接種，選擇豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗(華毒株+CV777株)，同時對需要補(bǔ)免的母豬亦進(jìn)行免疫接種[5,6]。再次，對發(fā)病豬舍周圍環(huán)境進(jìn)行徹底消毒，對其舍墻、柵欄、食槽和墊料等進(jìn)行清掃消毒。最后，將發(fā)病仔豬轉(zhuǎn)移到舍溫高于25℃的隔離房中，水槽中添加適量的葡萄糖液、淡鹽水、電解多維等營養(yǎng)添加劑，及時對其產(chǎn)生的糞尿等污物進(jìn)行清除消毒，防止污染其他豬群與環(huán)境；同時對發(fā)病豬舍的飼養(yǎng)員獸醫(yī)等也進(jìn)行一定的隔離消毒，不到其他健康豬舍[7]。為避免細(xì)菌等病原的繼發(fā)感染，在仔豬奶粉中添加適量的抗生素，進(jìn)行藥物預(yù)防[8]。12月20日回訪，采取緊急處理措施后，12月中旬開始仔豬腹瀉減弱，死亡率降低，其他豬群未發(fā)生大規(guī)模腹瀉癥狀，12月末再次回訪，未再發(fā)生腹瀉嘔吐等臨床癥狀，斷奶仔豬不再死亡。

7 預(yù)防措施

青海大部分地區(qū)海拔都在2000米以上，屬于高原大陸性氣候，冬季受西伯利亞季風(fēng)和寒流影響，十二月份晝夜氣溫溫差達(dá)到16℃(均溫2℃～14℃)，晝夜溫差較大，這對新生仔豬影響就較大。因為冬季豬場為了保溫，忽視了通風(fēng)作用，研究顯示屬于冠狀病毒的PEDV不僅可以通過糞便—口途徑(消化道)傳播，還可以經(jīng)鼻腔(呼吸道)入侵引起仔豬腸道致病[6]，所以通風(fēng)十分必要，但是要加強(qiáng)管理，注意通風(fēng)時間與頻率，避免發(fā)生溫度過低引起應(yīng)激，當(dāng)豬舍溫度低于于20 ℃時，新生仔豬也非常容易發(fā)生腹瀉。條件允許的豬場可以加裝地暖、保溫?zé)舻缺卦O(shè)施，溫度控制在24～28 ℃(夜間最好開啟保溫?zé)?[9]。加強(qiáng)綜合管理，特別是飼養(yǎng)管理工作，飼養(yǎng)操作的專業(yè)性強(qiáng)，同時兼具責(zé)任心，面對疫病的預(yù)防，要有像預(yù)防新冠病毒一樣的措施和責(zé)任心，如各個圈舍的門口，主要道路經(jīng)常性鋪撒生石灰，可設(shè)置消毒池，對獸醫(yī)飼養(yǎng)人員以及飼用工具也要進(jìn)行必要的隔離消毒[10]。仔豬腹瀉是豬場冬季易發(fā)疾病中的頑疾，只有在預(yù)防上下大功夫，才能降低甚至避免疫病發(fā)生而減少損失，增加收益。