任志明，劉 磊，2，吳清揚(yáng)，2，史 策，2，王春琳，2，母昌考，2，葉央芳，2

(1.寧波大學(xué)，浙江 寧波 315211;2.水產(chǎn)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 寧波 315211)

擬穴青蟹又稱青蟹，是我國(guó)重要的海水養(yǎng)殖蟹，屬海產(chǎn)珍品之一。隨著電子商務(wù)和物流行業(yè)的迅猛發(fā)展，青蟹借助其耐干露、易運(yùn)輸?shù)奶攸c(diǎn)，需求量迅速增加。目前，青蟹養(yǎng)殖所需的苗種多依賴自然海區(qū)的野生苗種，人工繁育的苗種數(shù)量較少，限制了青蟹養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。國(guó)內(nèi)成功的擬穴青蟹育苗案例以室內(nèi)水泥池工廠化育苗為主，有少量為室外土池生態(tài)育苗。我國(guó)雖未完全實(shí)現(xiàn)擬穴青蟹育苗的穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)，但育苗技術(shù)在全球范圍內(nèi)仍屬領(lǐng)先水平。

青蟹優(yōu)質(zhì)苗種的規(guī)模化繁育是一個(gè)時(shí)間線較長(zhǎng)的系統(tǒng)性工程，包括親蟹的越冬保種、人工促熟及抱卵蟹培育、幼體培育、幼蟹培育等環(huán)節(jié)，并輔以水質(zhì)調(diào)控、餌料培養(yǎng)等工作。筆者及所在課題組于青蟹繁育、遺傳育種方面做了大量的研究和實(shí)踐工作，并取得一定成效?，F(xiàn)將擬穴青蟹工廠化人工育苗技術(shù)要點(diǎn)總結(jié)如下。

一、親蟹培育的技術(shù)要點(diǎn)

青蟹規(guī)?；庇幕緱l件是有足夠數(shù)量的繁育用親蟹。近年來(lái)，全國(guó)多家擬穴青蟹繁育相關(guān)科研和生產(chǎn)單位，均受親蟹數(shù)量的制約，難以實(shí)現(xiàn)規(guī)?；庇?，甚至遇到了“無(wú)蟹可育”的境況，主要原因是膏蟹集中促抱卵難、親蟹(尤其是抱卵蟹)在人工條件下成活率極低。繁殖用親蟹一般是來(lái)自自然海區(qū)野生蟹和人工養(yǎng)殖蟹的膏蟹或抱卵蟹。由于以上來(lái)源的親蟹生長(zhǎng)環(huán)境、體質(zhì)和病原攜帶等情況各異，由原生環(huán)境轉(zhuǎn)移到人工環(huán)境時(shí)，水質(zhì)環(huán)境的突變、轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程的損傷和驚擾，導(dǎo)致親蟹發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，大量消耗體能而降低了免疫力，致使攜帶的病原趁虛而入，突破青蟹的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致蟹死亡。根據(jù)多年的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，在青蟹冬眠前將其轉(zhuǎn)移至人工環(huán)境進(jìn)行越冬，并完成性腺促熟和促抱卵，這是解決規(guī)?；H蟹培育的必然途徑。

1.親蟹(膏蟹)的越冬保種

青蟹在冬季低溫季節(jié)會(huì)進(jìn)行穴居冬眠，活動(dòng)減少或基本不活動(dòng)，難以捕捉，所以在水溫低于15℃前，捕捉性腺發(fā)育相對(duì)成熟的膏蟹，經(jīng)消毒后轉(zhuǎn)入人工條件進(jìn)行越冬保種。

越冬保種設(shè)施以室內(nèi)水泥池為佳，靠進(jìn)水口一側(cè)約1/2面積鋪細(xì)沙10～15厘米，鋪沙部分設(shè)置成雙層底為佳。沙子上用磚瓦塊壘砌或PVC管模擬洞穴供親蟹躲藏，密度為2～3只/米2。水溫控制在10～15℃為宜，水深60厘米以上。水泥池上加蓋厚塑料膜和黑色遮陽(yáng)網(wǎng)，保證池內(nèi)光線強(qiáng)度在500勒克斯以下。視夜間親蟹活動(dòng)情況確定是否投喂餌料，餌料以鮮活貝類(如蟶子)為主，但低溫期間親蟹外出攝食很少。視水質(zhì)情況適時(shí)換水，一般每5～7天換水1次。最好加裝水泵、連接管路和過(guò)濾桶，使池水循環(huán)流動(dòng)，可減少換水量，保證水質(zhì)的穩(wěn)定。

此外，親蟹也可選擇室外土池越冬。面積1畝以內(nèi)的小土池較為方便操作，最大水深1.5米，可在土池上方覆蓋塑料棚，便于保溫。水溫控制在(10±2)℃，適當(dāng)遮光。視水質(zhì)情況，每1～2周換水1次。

2.親蟹(膏蟹)人工促熟及抱卵蟹的培育

根據(jù)生產(chǎn)進(jìn)度安排，適時(shí)將越冬親蟹轉(zhuǎn)移至室內(nèi)培育池進(jìn)行人工促熟和促抱卵。設(shè)施與室內(nèi)越冬池基本相同。水溫以每天0.5～1℃的速度升溫至22～25℃，鹽度為25～30，鹽度過(guò)低不利于抱卵。高溫燙單側(cè)眼柄，直到眼柄完全變紅，破壞眼柄內(nèi)部Y器官，降低促性腺發(fā)育激素抑制激素的分泌水平。每天換水量1/2，每2～3天排干水干露刺激1小時(shí)?？稍O(shè)置循環(huán)水，減少換水量，保證水質(zhì)的穩(wěn)定。青蟹排卵一般在夜間，盡量避免人為驚擾，且抱卵后的前兩天不宜進(jìn)行抓捕、轉(zhuǎn)池等操作，以免造成“流產(chǎn)”。適量投喂餌料，每天挑揀殘餌。

抱卵蟹應(yīng)與未抱卵蟹分開(kāi)培育，避免被未抱卵蟹干擾造成流產(chǎn)或死亡。抱卵蟹培育需相對(duì)恒定水溫，溫度變化小于1℃，利于胚胎發(fā)育，水溫25～28℃為宜。胚胎發(fā)育至孵化需要10～15天。水溫越高，胚胎發(fā)育越快。鹽度為25～30，鹽度過(guò)低不利于胚胎發(fā)育。日換水量1/3，不可干露，最好設(shè)置循環(huán)水，可減少換水量，保證水質(zhì)的穩(wěn)定，流水刺激會(huì)提高抱卵蟹成活率。抱卵蟹培育過(guò)程中應(yīng)每隔幾天檢查胚胎發(fā)育情況，并檢查卵粒表面有無(wú)纖毛蟲(chóng)等附著，遇到問(wèn)題要及時(shí)處理，避免影響胚胎正常發(fā)育甚至造成死亡。

二、人工育苗技術(shù)

1.幼體的孵化與培育

通常蟹卵的顏色變化過(guò)程為淺黃色→橙黃色→橘紅色→棕褐色→灰黑色，可根據(jù)卵的顏色變化同時(shí)結(jié)合顯微鏡觀察卵內(nèi)幼體心跳次數(shù)判斷孵化時(shí)間。待卵顏色為灰黑色、鏡檢心跳為150次/分左右時(shí)，次日早晨5:00-9:00便會(huì)孵化?？蓪⒂左w孵化在專門的孵化桶或池，再轉(zhuǎn)移幼體到育苗池進(jìn)行培育，也可直接將抱卵蟹掛在育苗池中直接孵化。以孵化池孵化再轉(zhuǎn)移幼體的方式為佳，可將卵殼及親蟹體表脫落的污物排除在育苗池之外，減少病原的帶入。培育池中幼體密度以5萬(wàn)只/米3為佳。

青蟹幼體發(fā)育經(jīng)過(guò)溞狀幼體期(Z)、大眼幼體期(M)，再蛻1次殼后變?yōu)橛仔?。培育水溫?5～30℃，幼體發(fā)育一般為17～25天，水溫越高發(fā)育越快。隨著幼體的體形、大小和食性變化，其適口餌料也隨之變化。在Z1～Z2階段投喂輪蟲(chóng)和微藻，Z3～M階段投喂鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體或橈足類。其中，M幼體階段在投喂鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體的同時(shí)，還需要增加投喂鹵蟲(chóng)成體。在Z1～Z2階段，充足的輪蟲(chóng)可以顯著提高幼體成活率，一般投喂密度宜大于20個(gè)/毫升。在Z2階段可適當(dāng)補(bǔ)充投喂鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體。Z3～Z5階段宜投喂充足的鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體，投喂量為8～20個(gè)/(天·只)，可分早晚兩次投喂。M階段前2天宜投喂鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體，投喂量為20～30個(gè)/(天·只)，之后以投喂鹵蟲(chóng)成體為佳，投喂量為大眼幼體重量的80%～100%。從Z3期開(kāi)始可輔以蝦片等飼料，日投喂量為4～6毫克/升，分4～6次投喂。出苗前幼蟹可投喂鹵蟲(chóng)成體或碎蛤肉，日投喂量為幼蟹重量的100%～200%。

輪蟲(chóng)宜用微藻(如小球藻、小硅藻)培養(yǎng)，可直接投喂幼體；若由酵母培養(yǎng)，則在投喂前1～2小時(shí)用微藻強(qiáng)化培養(yǎng)。

2.育苗水質(zhì)管理

育苗期間良好的水質(zhì)是取得育苗成功的關(guān)鍵。青蟹育苗常規(guī)水質(zhì)指標(biāo)要求包括溫度25～30℃、鹽度25～32、pH 7.8～8.6、溶氧5毫克/升以上、總氨氮0.5毫克/升以下、亞硝酸鹽0.1毫克/升以下等。育苗池內(nèi)是一個(gè)時(shí)刻動(dòng)態(tài)變化著的小型生態(tài)系統(tǒng)，由于不斷有外源物質(zhì)和能量如餌料等的投入，水質(zhì)指標(biāo)的穩(wěn)定絕非易事。育苗水質(zhì)調(diào)控要遵循生態(tài)理念，通過(guò)多種技術(shù)手段維持水體菌相與藻相平衡穩(wěn)定，加之合理布幼、投餌等操作，實(shí)現(xiàn)良好水質(zhì)的穩(wěn)定。

(1)育苗用水的處理。水源為海區(qū)新鮮海水，用有效氯30%～32%的漂白粉50毫克/升消毒，無(wú)余氯后經(jīng)過(guò)沙濾，去除大的懸浮物和蟲(chóng)卵等物。有條件的育苗場(chǎng)可加裝蛋白質(zhì)分離器、紫外滅菌器等配套設(shè)備。蓄水池需黑暗(遮光)環(huán)境，以半埋或全埋地下的水泥池為宜，利于恒溫和遮光。

(2)微藻的使用。微藻除上述作為Z1幼體的開(kāi)口餌料外，最主要的作用就是穩(wěn)定水質(zhì)。微藻作為水體中的初級(jí)生產(chǎn)者，可通過(guò)自身生長(zhǎng)繁殖吸收利用水體中過(guò)量的NH4+、NO3-、PO43-等，同時(shí)還可以通過(guò)光合作用吸收水體CO2、釋放氧氣，起到穩(wěn)定水質(zhì)的作用。微藻的存在可以降低水體透明度，防止光線過(guò)強(qiáng)對(duì)幼體造成應(yīng)激。另外，有研究表明微藻的代謝產(chǎn)物可以抑制弧菌等致病菌的繁殖，減少病害的發(fā)生。青蟹育苗生產(chǎn)中用到的微藻主要有綠藻(小球藻、扁藻等)和硅藻(角毛藻、骨條藻、新月菱形藻等)。水溫在25～28℃時(shí)，可選擇角毛藻、骨條藻等硅藻或小球藻。水溫高于28℃時(shí)，青蟹育苗宜選用小球藻、微綠球藻等耐高溫的綠藻。

整個(gè)育苗期要維持一定的藻相，隨著換水頻率和換水量的增加，穩(wěn)定的藻色很難維持，需要在育苗中后期每次換水后適當(dāng)補(bǔ)接藻種。如果苗場(chǎng)不具備擴(kuò)培足夠藻種的條件或藻種因某種原因突然不可用，必要時(shí)可選擇藻色、水質(zhì)及苗體綜合狀態(tài)良好的池口，過(guò)濾其池水作為藻種使用。

(3)微生物制劑的使用。微生物制劑是指將自然界中的有益細(xì)菌通過(guò)人工篩選培育，再經(jīng)過(guò)生物工程發(fā)酵培養(yǎng)、工廠化生產(chǎn)出來(lái)，以單一菌或復(fù)合菌的形式用于水體生態(tài)調(diào)控及動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)保健的活菌制劑?，F(xiàn)在市場(chǎng)上銷售的這類產(chǎn)品種類繁多，如EM菌、光合細(xì)菌、芽孢桿菌、乳酸菌、硝化細(xì)菌、酵母菌等，都屬微生物制劑類的產(chǎn)品。微生物制劑的使用可以替代抗菌藥物，并起到更好的育苗效果。

微生物制劑中的有益菌通過(guò)自身生理代謝所具有的氣化、氨化、解磷、反硝化、硝化及固氮等作用，將水體中的大分子有機(jī)質(zhì)、氨氮、亞硝酸鹽、硫化氫等轉(zhuǎn)化為二氧化碳、硝酸鹽、硫酸鹽等物質(zhì)，進(jìn)而被水體中的微藻和微生物吸收利用，起到凈化水質(zhì)的作用。微生物制劑還作為良好的免疫激活劑，可通過(guò)激活生物體非特異性免疫而提高其免疫力，并可降解養(yǎng)殖動(dòng)物腸道等部位的有害物質(zhì)，或有益菌直接被消化釋放有益營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而被苗體吸收利用，利于機(jī)體健康。同時(shí)有益菌的繁殖可以在水體和養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)性地抑制致病菌，防止致病菌大量繁殖而導(dǎo)致病害的發(fā)生。在青蟹育苗過(guò)程中通常使用光合細(xì)菌、芽孢桿菌、乳酸菌、硝化細(xì)菌、噬菌體等有益菌調(diào)節(jié)育苗水質(zhì)。微生物制劑的使用以拌料和水體潑灑為主，一般用EM菌、乳酸菌、芽孢桿菌等拌料投喂，用光合細(xì)菌、芽孢桿菌、EM菌、噬菌體等潑灑水體。