姜勇波 高曉麗 黃明 曹建濱 楊夢莉 李曉紅

布魯氏菌?。╞rucellosis）簡稱布病，屬于一種人畜共患疾病[1]，發(fā)病后患者將表現(xiàn)出多汗、肝脾腫大、發(fā)熱、關(guān)節(jié)疼痛等癥狀，嚴(yán)重影響其生活質(zhì)量及身心健康。研究表明[2]，布魯氏菌病主要發(fā)病原因?yàn)椴剪斒蠗U菌感染，因此提示積極采取有效措施提高布魯氏菌抗體檢出率對及時診斷病情具有積極意義。基于此，文章選取于2015年3月—2017年10月布魯氏菌病監(jiān)測工作中，以養(yǎng)殖牛羊和屠宰為職業(yè)，伴有發(fā)熱、乏力、關(guān)節(jié)痛等布魯菌病疑似癥狀人員，確診的90例布魯氏菌病患者作為本次研究對象。探討IELISA檢測IgG應(yīng)用于布魯氏菌病監(jiān)測工作中的具體價值，以期為提高此病正確檢出率提供可靠依據(jù)，以達(dá)到早發(fā)現(xiàn)、早防治的目的，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取于2015年3月—2017年10月布魯氏菌病監(jiān)測工作中確診的90例布魯氏菌病患者作為本次研究對象，90例患者均經(jīng)臨床檢查確診布魯氏菌病，其中男52例、女38例，年齡19～71歲、平均（45.61±0.17）歲。

布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]：（1）具有布魯氏菌病感染體接觸史；（2）發(fā)生多汗、發(fā)熱、骨關(guān)節(jié)疼痛、乏力、肌肉疼痛等布魯氏菌病相關(guān)癥狀；（3）虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）陽性；（4）試管凝集試驗(yàn)（SAT）1：100（++）及以上。

樣本納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）確診發(fā)生布魯氏菌??；（2）對本次研究所需IELISA檢測IgG具有良好耐受性；（3）對本次研究內(nèi)容完全知情；（4）本次研究前自愿、獨(dú)立簽署知情同意協(xié)議。

樣本排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他細(xì)菌感染性疾?。唬?）對本次研究中所需IELISA檢測IgG無法耐受；（3）拒不簽署知情同意協(xié)議；（4）妊娠、產(chǎn)褥、哺乳等特殊生理時期女性布魯氏菌病患者。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 90例布魯氏菌病患者均接受IELISA檢測IgG，指定高年資、高職稱實(shí)驗(yàn)室醫(yī)師嚴(yán)格按照儀器試劑相關(guān)規(guī)定完成操作。記錄90例布魯氏菌病患者IELISA檢測IgG結(jié)果，將所得數(shù)據(jù)輸入統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件并與確診結(jié)果做對比分析。

1.2.2 IELISA方法 采集待檢者血清作為本次檢測樣本，微量板孔需經(jīng)抗原包被，制作固相載體后將血清于板孔處加入，固相載體中存在的抗原與其所含抗體特異性結(jié)合并形成免疫復(fù)合物。將多余物質(zhì)去除后加入IgG抗體（經(jīng)酶標(biāo)記），使之與前述免疫復(fù)合物反應(yīng)后行洗板處理。將多余結(jié)合物除去并將底物加入，此時可見反應(yīng)后生成有顏色產(chǎn)物，于450 nm波長處測量光密度值（optical density，OD），IgG與OD450值呈正相關(guān)（正比），利用繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方法得出標(biāo)本中IgG水平，顏色強(qiáng)度、特異性抗體含量表現(xiàn)為正相關(guān)性（正比）。IgG值陰性標(biāo)準(zhǔn)為20 U/mL及以下，即IgG值檢測結(jié)果在20 U/mL以上則提示此標(biāo)本為陽性。

2 結(jié)果

90例布魯氏菌病患者均順利完成IELISA檢測IgG，本次研究未見因故中斷、自愿退出等異常情況。經(jīng)分析可知，90例布魯氏菌病患者經(jīng)IELISA檢測IgG陽性人數(shù)86例、陽性率為95.56%。

3 討論

布魯氏菌病是一種傳染變態(tài)反應(yīng)性人畜共患慢性傳染病，既往由于牛羊等動物中布魯氏菌病發(fā)病率較高，因此已引起畜牧獸醫(yī)行業(yè)高度關(guān)注[4]。布魯氏桿菌的感染途徑包括消化道、皮膚黏膜等，人類從事擠奶、肉類加工、接觸皮毛等途徑均可感染布魯氏桿菌[5]。由于近年來食品市場對牛羊肉、奶制品等需求量增加，人感染布魯氏桿菌幾率隨之上升，而病情嚴(yán)重者不僅喪失勞動能力，甚至導(dǎo)致終身殘疾，對家庭及社會造成嚴(yán)重負(fù)擔(dān)[6]。因此提示，積極采取有效措施加強(qiáng)布魯氏菌病監(jiān)測工作已成為現(xiàn)階段相關(guān)醫(yī)務(wù)人員共同關(guān)注的重點(diǎn)。

細(xì)菌分離培養(yǎng)是現(xiàn)階段臨床用于診斷布魯氏菌病的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但此法存在培養(yǎng)條件苛刻、采樣難度大、實(shí)驗(yàn)人員感染風(fēng)險高等弊端[7]，且對慢性布魯氏菌病患者經(jīng)此法檢出率較低，應(yīng)引起相關(guān)醫(yī)護(hù)人員注意。傳統(tǒng)布魯氏菌抗體檢測技術(shù)包括虎紅平板凝集試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）、試管凝集試驗(yàn)等[8]，但由于SAT、RBPT存在一定的假陰性、假陽性情況[9]，而CFT操作復(fù)雜、對操作者要求較高且無法檢測綿羊種布魯氏菌[10]，因此上述方法均不利于臨床推廣。

IELISA是目前用于人間布魯氏菌病監(jiān)測工作的檢測方法之一，利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板表面將特定抗體/抗原吸附，從而使聚苯乙烯微量反應(yīng)板表面局部發(fā)生用酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)，將流離成分利用洗滌法洗滌并檢測獲得結(jié)果[11]。IELISA兼具放射免疫實(shí)驗(yàn)、熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)，結(jié)果可同時用酶標(biāo)儀測定或肉眼直接觀察，具有安全可靠、特異性及敏感性均較高等特點(diǎn)。文章對90例布魯氏菌病患者分析可知，其經(jīng)IELISA檢測IgG陽性率為95.56%，此結(jié)論與國內(nèi)外相關(guān)研究結(jié)果相符。布魯氏菌病以男性發(fā)病率較高，高危職業(yè)涉及畜牧養(yǎng)殖業(yè)、獸醫(yī)、農(nóng)牧民等[12]，IELISA檢測IgG對人間布魯氏菌病的監(jiān)測工作具有較高的應(yīng)用價值。

綜上，IELISA 檢測有較高的準(zhǔn)確率，方法簡便、快速、自動化，適合于大樣本篩查和布魯氏菌病的監(jiān)測工作。但應(yīng)注意的是，IELISA檢測IgG步驟復(fù)雜，不方便實(shí)際工作中針對少量標(biāo)本進(jìn)行檢測。此外，雖然IELISA操作簡單，但對儀器要求較高，因此不適用于各級基層機(jī)構(gòu)應(yīng)用。