王建彬，梁春梅，廖玉英，陳惠茹，賴嘉希，柯吳堅(jiān)

（1.汕頭市澄海區(qū)人民醫(yī)院，廣東 汕頭 515800；2. 南方醫(yī)科大學(xué)皮膚病醫(yī)院，廣東 廣州 510009）

人類(lèi)乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）感染是全球最常見(jiàn)的性傳播感染之一［1］。HPV可在多個(gè)部位（如生殖器、口腔、肛門(mén)、直腸等）出現(xiàn)良性、潛在惡性或惡性腫瘤等病變，對(duì)患者身體和心理造成極大的危害［2］。雖然HPV疫苗近年來(lái)在國(guó)內(nèi)外得到廣泛接種，使得HPV檢出率出現(xiàn)大幅下降，然而對(duì)于未接種HPV疫苗者或疫苗無(wú)法保護(hù)的其他HPV型別而言，其檢出率卻出現(xiàn)不斷增加的趨勢(shì)［3、4］。通過(guò)生殖器與生殖器的直接性接觸導(dǎo)致男女雙方HPV交叉感染的傳播途徑已獲得足夠認(rèn)識(shí)［5］，但男女雙方是否通過(guò)口—口和口—生殖器等其他部位的直接接觸導(dǎo)致HPV傳播的認(rèn)識(shí)，相關(guān)臨床研究則相對(duì)不多［6］。為進(jìn)一步明確性病門(mén)診女性就診者口腔和生殖器HPV的感染情況，以及其性伴HPV的感染能否造成女性就診者口腔和生殖器的感染，我們招募200名性病門(mén)診女性就診者及其男性性伴侶，對(duì)男女雙方口腔和生殖器進(jìn)行HPV核酸檢測(cè)和臨床危險(xiǎn)因素分析，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 患者招募 自2016年1月至2018年1月期間，我們共招募性病門(mén)診女性就診者200名，其中167對(duì)女/男性伴共同完成口腔和生殖器部位的HPV標(biāo)本采集。入組標(biāo)準(zhǔn)：男女雙方在過(guò)去1年內(nèi)為固定性伴侶關(guān)系，且每月發(fā)生性行為次數(shù)平均超過(guò)1次。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡均小于18歲、孕婦、無(wú)固定性伴侶者、確診HIV或性病者、長(zhǎng)期服用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑者、合并其他系統(tǒng)并發(fā)癥者。

1.2 樣本采集［7］囑咐女性就診者及其男性性伴侶在采集樣本前的24小時(shí)內(nèi)禁止性行為。醫(yī)務(wù)人員采用專(zhuān)用的HPV取樣細(xì)胞刷，分別對(duì)入組者口腔、女性外陰和陰道壁內(nèi)、男性包皮和龜頭等部位取樣。每個(gè)部位用細(xì)胞刷反復(fù)10次，以獲得足夠多的脫落上皮細(xì)胞標(biāo)本。將細(xì)胞刷放入提前編號(hào)且含有專(zhuān)門(mén)細(xì)胞保存液的取樣管中。所有樣本低溫保存或直接進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 DNA提?。?］樣本的HPV DNA提取采用HybriBio公司的細(xì)胞裂解液進(jìn)行提取。具體方法如下：① 移液槍吸取臨床樣本500ul，置于離心機(jī)中14000 rpm離心1min后，去除離心管中的上清液體；② 溶液I在45℃水浴鍋中提前預(yù)熱并振蕩混勻。在去除上清的離心管中加入400 ul溶液I，100℃水浴鍋中加熱15min后，常溫下靜置2min；③ 點(diǎn)動(dòng)離心加熱后的離心管。取振蕩混勻的溶液II 400ul加到離心管中，常溫下靜置2min。再次將離心管置于離心機(jī)中14000 rpm離心5min后，去除離心管中的上清液體；重復(fù)該步驟2次后，常溫靜置2min；④ 取溶液III 60ul加入離心管中，常溫放置10min，置于離心機(jī)中14000 rpm離心1min；⑤ 采用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)離心后的上清液OD 260/280比值，當(dāng)OD 260/280比值介于1.7～2.0時(shí)則達(dá)到所需檢查純度，將符合檢測(cè)純度的DNA低溫保存或進(jìn)行PCR檢測(cè)。

1.4 PCR檢測(cè)［7］HPV PCR檢測(cè)采用HPV通用L1引物：MY 09/11（MY09：5’-CGT CCM ARR GGA WAC TGA TC-3’；MY11：5’-GCM CAG GGW CAT AAY AAT GG-3’；M：A/C；R：A/G；W：A/T；Y：C/T），引物由上海生工合成并經(jīng)PAGE純化。PCR反應(yīng)體系：樣本DNA、上海生工HPV通用引物、Promega Go Taq Polymerase、Promega Go Taq Buffer、Thermo dNTP、Sigma MgCl2、Sigma H2O。PCR反應(yīng)條件：95℃加熱2min；95℃變性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，共40個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。擴(kuò)增片段大小450 bp。擴(kuò)增產(chǎn)物置于70V的1.5%瓊脂糖凝膠電泳40min，將電泳后的瓊脂糖凝膠置于凝膠成像儀中觀察HPV PCR擴(kuò)增結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 26.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用配對(duì)t檢驗(yàn)對(duì)性病門(mén)診女性就診者及其性伴侶年齡進(jìn)行比較，采用兩個(gè)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分別對(duì)男女雙方口腔和生殖器HPV的檢出率、就診者年齡進(jìn)行比較，采用χ2檢驗(yàn)分別對(duì)女性就診者口腔和生殖器HPV的檢出率、口交的危險(xiǎn)因素、性伴侶口腔或生殖器HPV的檢出率進(jìn)行比較，當(dāng)P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 性病門(mén)診女性就診者及其性伴侶口腔和生殖器HPV檢出率 入組167位性病門(mén)診女性就診者的平均年齡為（30.62±8.21）歲，低于其男性性伴侶平均年齡的（32.57±8.86）歲（P＜0.001）。女性167份口腔樣本中有8份HPV DNA陽(yáng)性，陽(yáng)性率為4.79%。女性167份生殖器樣本中有95份HPV DNA陽(yáng)性，陽(yáng)性率為56.89%。男性性伴侶167份口腔樣本中有14份HPV DNA陽(yáng)性，陽(yáng)性率為8.38%。男性性伴侶167份生殖器樣本中有97份HPV DNA陽(yáng)性，陽(yáng)性率為58.08%。性病門(mén)診女性口腔HPV為低于男性口腔HPV檢出率（χ2=25.066，P＜0.001）。性病門(mén)診女性生殖器HPV檢出率低于男性生殖器HPV檢出率（χ2=9.671，P=0.002）。詳見(jiàn)表1。

表1 性病門(mén)診女性患者及其男性性伴口腔、生殖器HPV感染情況

2.2 年齡、主動(dòng)口交和男性性伴侶口/生殖器HPV的感染情況對(duì)性病門(mén)診女性就診者口腔HPV檢出率的影響 性病門(mén)診女性就診者口腔HPV陽(yáng)性組平均年齡為（36.25±7.48）歲，高于陰性組的（30.34±8.16）歲，（t=2.005，P=0.047）。性病門(mén)診女性患者口腔HPV陽(yáng)性組中有主動(dòng)口交史為62.50%高于陰性組的54.72%（χ2=0.186，P=0.666）。性病門(mén)診女性患者口腔HPV陽(yáng)性組中性伴生殖器HPV感染為87.50%高于陰性組的56.60%（χ2=2.986，P=0.084）。性病門(mén)診女性患者口腔HPV陽(yáng)性組中性伴口腔HPV感染為62.50%高于對(duì)照組的5.66%（χ2=32.040，P＜0.001）。以上結(jié)果表明女性口腔HPV的感染情況與女性主動(dòng)口交史和男性性伴侶生殖器HPV感染無(wú)明顯關(guān)系，而與女性年齡和男性性伴口腔HPV感染有關(guān)。提示女性口腔的HPV感染情況可能通過(guò)男女雙方的口—口直接接觸途徑傳播，且隨著年齡增大感染幾率增加。詳見(jiàn)表2。

表2 年齡、主動(dòng)口交及性伴HPV感染情況對(duì)女性口腔HPV檢出率的影響

2.3 年齡、被動(dòng)口交和男性性伴侶口腔/生殖器HPV的感染對(duì)性病門(mén)診女性就診者生殖器HPV感染的影響 性病門(mén)診女性就診者生殖器HPV陽(yáng)性組平均年齡為（30.93±8.49）歲，與性病門(mén)診女性生殖器HPV陰性組的（30.22±7.84）歲無(wú)顯著性差異（t=0.548，P=0.585）。性病門(mén)診女性生殖器HPV陽(yáng)性組中有被動(dòng)口交史為69.47%高于陰性組的36.11%（χ2=18.426，P＜0.001）。性病門(mén)診女性就診者生殖器部位HPV陽(yáng)性組中性伴生殖器HPV感染為68.42%高于陰性組的44.44%（χ2=9.671，P=0.002）。性病門(mén)診女性生殖器HPV陽(yáng)性組中性伴口腔HPV感染為13.68%高于對(duì)照組的1.38%（χ2=8.062，P=0.005）。以上結(jié)果表明性病門(mén)診女性就診者生殖器部位的HPV感染情況與年齡無(wú)關(guān)，而與被動(dòng)口交史、性伴口腔/生殖器HPV感染有關(guān)。表明女性生殖器HPV感染可能通過(guò)男女雙方的口-生殖器、口-口和生殖器-生殖器途徑傳播。詳見(jiàn)表3。

表3 年齡、被動(dòng)口交及性伴HPV感染情況對(duì)女性生殖器HPV檢出率的影響

3 討論

HPV是全球性病病原體中檢出率最高的雙鏈環(huán)狀閉合DNA病毒，臨床可分離出出200多種亞型［1］。可根據(jù)HPV致癌性的高低分為高危型和低危型［1］，其中HPV低危型與發(fā)生在肛門(mén)、生殖器、口腔等部位的良性病變相關(guān)，而HPV高危型可引起宿主細(xì)胞過(guò)度增殖，從而與肛門(mén)、生殖器、口腔等部位的潛在惡性或惡性腫瘤高度相關(guān)［2］。HPV可感染人體的肛門(mén)生殖器、咽喉、口腔、鼻腔等部位的皮膚和黏膜［6］。國(guó)外學(xué)者為明確男女雙方口腔HPV感染情況對(duì)5579位參與者進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)年齡在（14～69）歲的男女雙方口腔HPV的總檢出率6.9%，其中女性HPV檢出率為3.6%低于男性的10.1%［8］。該研究結(jié)果與我們本次研究發(fā)現(xiàn)的性病門(mén)診就診者中男女雙方口腔HPV的總檢出率6.6%結(jié)果接近，其中性病門(mén)診女性就診者口腔HPV檢出率為4.79%，低于其男性性伴侶的8.38%，與上述研究發(fā)現(xiàn)基本相同。性伴侶HPV的交叉?zhèn)鞑ナ窃斐蒆PV感染增加的重要原因之一［1、2］。Pickard等［9］對(duì)1000位年齡介于（18～30）歲的研究者進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)3月的隨訪中發(fā)現(xiàn)，口腔HPV檢出率的增加與是否有口交和舌吻高度相關(guān)。我們研究顯示，在8例女性性病門(mén)診就診者口腔HPV的感染者中，其62.50%的男性性伴侶口腔檢測(cè)出HPV，其結(jié)果明顯高于陰性對(duì)照組；同時(shí)，在95例女性性病門(mén)診就診者生殖器HPV感染者中，69.47%有被動(dòng)口交史，且其男性性伴侶口腔HPV檢出率明顯高于陰性組。通過(guò)我們的研究發(fā)現(xiàn)口腔HPV的感染或許增加性伴侶間口腔或生殖器HPV的檢出率，結(jié)果顯示HPV不僅可通過(guò)生殖器-生殖器的直接接觸傳播，或許還可以經(jīng)由口腔和口腔或口腔和生殖器的直接接觸傳播。

綜上所述，女性口腔HPV感染與主動(dòng)口交史和男性性伴侶生殖器HPV的感染無(wú)關(guān)，與年齡和性伴口腔HPV感染有關(guān)；女性生殖器HPV感染與年齡無(wú)關(guān)，與被動(dòng)口交史、性伴口腔/生殖器HPV感染有關(guān)。性伴侶之間或夫妻雙方HPV的交叉?zhèn)鞑ナ窃斐刹煌?/p>

部位HPV感染的原因之一，提示HPV可經(jīng)由多種性行為途徑傳播。因此，成功預(yù)防HPV通過(guò)性行為交叉感染的關(guān)鍵，除了做到避免多性伴侶的同時(shí)，在多種性行為方式（包括口交等）的過(guò)程中全程使用安全套，這樣才能更好的在HPV的性傳播上進(jìn)行預(yù)防，從而最大化的減少HPV的性傳播。此外，隨著HPV疫苗在我國(guó)的普及和推廣，積極接種HPV疫苗，尤其尚未有性行為時(shí)接種，也有一種有效的預(yù)防和減少HPV感染的防治辦法。