朱曉晨

經(jīng)血液傳播是臨床疾病傳播途徑之一,是嚴(yán)重影響公共衛(wèi)生健康的重要途徑［1］。HIV、HBV、HCV 是現(xiàn)目前血液傳播疾病中最常見的三種病原體,據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)顯示全球HIV 感染者多達(dá)3350 萬,HBV 感染者更是高達(dá)21 億,HCV 感染者有2 億。另外,據(jù)我國相關(guān)資料顯示,HBV 病原體人群攜帶率占比約為11%,臨床上HCV 感染率在3.6%左右［2］。世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表示,全球每年HIV、HBV、HCV 感染率仍呈不斷上升的趨勢,其感染原因主要是由于診療過程中輸入不健康的血液所致。鑒于此,臨床更加側(cè)重血液安全問題,并不斷對血液傳播病原體檢測方法改進(jìn)及深入研究,從而確保臨床用血的安全性［3］。本次將2018 年12 月～2019 年12 月 的37997例無償獻(xiàn)血者納入研究,旨在探討血篩酶聯(lián)免疫吸附法HIV-HBVHCV 陰性標(biāo)本再行NAT 的安全性。具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年12 月～2019 年12 月的37997 例無償獻(xiàn)血者納入研究,其中男27122 例,女10875 例；年齡18～65 歲,平均年齡(32.12±10.96)歲。納入研究無償獻(xiàn)血者均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》,對本次研究知情,并簽署知情相關(guān)同意書。

1.2 方法 血液篩查標(biāo)本采集后實(shí)施離心處理,將血漿分離后將血清放置于4～8 ℃的冰箱中加以保存,24 h內(nèi)在應(yīng)用ELISA 法實(shí)施2 次檢測,將不合格的標(biāo)本剔除,選取各項(xiàng)血液指標(biāo)均合格的血液標(biāo)本,在72 h 內(nèi)實(shí)施病毒NAT。

試劑、儀器：①ELISA：HIV、HBV、HCV 檢測試劑均由北京萬泰和英科新創(chuàng)提供,試劑經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理部委批準(zhǔn)合格產(chǎn)品；②NAT 試劑：HIV、HBV、HCV NAT 試劑盒(PCR-熒光法)主要是由北京萬泰提供；③儀器：瑞士哈美頓FAME24/20 全自動(dòng)酶免疫分析儀、Co-Brilliant AEX 系列全自動(dòng)核酸提取。

檢測方式：實(shí)施2 次ELISA對血液標(biāo)本進(jìn)行篩查,對篩查結(jié)果作進(jìn)一步判定,針對NAT 檢測結(jié)果呈陽性,但是ELISA 檢測結(jié)果呈陰性的血液樣本,實(shí)施二次采集酶聯(lián)免疫標(biāo)本及NAT 標(biāo)本(1 例2 管),在實(shí)施2 次ELISA 檢測后仍呈陰性者；再實(shí)施NAT 平行檢測,將2 次NAT 標(biāo)本放置于生物安全柜中開蓋,并放置于樣本架上,經(jīng)由Co-Brilliant AEX 系列全自動(dòng)核酸提取實(shí)施操作檢測,并將兩份血液樣本實(shí)施平型混合。將混樣標(biāo)本放置于NAT 儀中實(shí)施檢測,應(yīng)用NAT 系統(tǒng)檢測6 份混樣標(biāo)本,對混樣檢測的陽性孔再實(shí)施單管分項(xiàng)拆分檢測,并對HIV、HBV、HCV 三項(xiàng)檢測結(jié)果進(jìn)行觀察,再NAT 呈陽性者確診為陽性。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)分析兩次檢測結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 ELISA 檢測結(jié)果分析 37997 份無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本ELISA 檢測顯示有465 份陽性樣本,其陽性檢出率為1.22%。見表1。

表1 37997 份無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本的ELISA 檢測結(jié)果分析(份,%)

2.2 ELISA 檢測陰性標(biāo)本再行NAT 的結(jié)果分析37532 份血清ELISA 檢測陰性標(biāo)本再行NAT 后,顯示存在39 份陽性標(biāo)本,陽性檢出率為0.10%。見表2。

表2 37532 份ELISA 檢測陰性標(biāo)本再行NAT 的結(jié)果分析(份,%)

3 討論

當(dāng)前,在對血液樣本進(jìn)行篩查時(shí)常應(yīng)用的NAT 系統(tǒng)主要包括Taqman PCR、TMA 技術(shù)［4］。以往,TMA技術(shù)是應(yīng)用最為廣泛的NAT 技術(shù),從2010 年起,自從對無償獻(xiàn)血者血液樣本實(shí)施單人份NAT 后,促使分析靈敏度顯著提升,據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)可達(dá)到HIV-1 RNA 45 IU/ml、HBV-DNA 10 IU/ml、HCV-RNA 3 IU/ml 的水平［5］。另外,NAT 技術(shù)鑒別試劑分析靈敏度又可達(dá)到d-HIV-1 50 IU/ml、d-HBV 8.5 IU/ml、d-HCV 3.2 IU/ml的水平,明顯看出血液篩查技術(shù)在現(xiàn)如今已經(jīng)足夠成熟［6］。

在90 年代初期,歐美部分較為發(fā)達(dá)的國家已在無償獻(xiàn)血中實(shí)施NAT 技術(shù),在此過程中還對HIV、HBV及HCV 作進(jìn)一步篩查,在應(yīng)用期間也明確證實(shí)了NAT技術(shù)篩查后,可以避免血液傳播疾病發(fā)生,進(jìn)而提升血液輸送的安全性［7］。但據(jù)本次研究顯示,本地區(qū)37997 分無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本實(shí)施ELISA 檢測后顯示有465 份陽性樣本,其陽性檢出率為1.22%,檢出率較高,出現(xiàn)這種情況的原因可能是受到地區(qū)間病毒流行率、血清學(xué)ELISA 試劑選擇、檢測標(biāo)本數(shù)量、NAT 技術(shù)設(shè)備和模式等多種因素影響所致。由此也證明了在血清學(xué)ELISA 檢測合格的血液中仍舊存在血液傳遞疾病幾率［8,9］。

本次研究中顯示,應(yīng)用NAT 技術(shù)對血液樣本進(jìn)行篩查具有較高靈敏度,但因混合性樣品檢測模式會(huì)間接性降低NAT 技術(shù)篩查系統(tǒng)本身的靈敏度,進(jìn)而造成NAT 技術(shù)系統(tǒng)的靈敏度高于混合檢測情況下NAT 技術(shù)篩查系統(tǒng)的靈敏度［10］。究其原因可能是：①由于NAT技術(shù)本身就存在一定的假陽性率；②NAT 技術(shù)在取樣過程中存在誤差,但因單項(xiàng)NAT 技術(shù)陽性標(biāo)本病毒在載量方面存在不足之處,進(jìn)而導(dǎo)致病毒樣品未均勻分布,基于這種情況造成每次取樣病毒數(shù)量均有所不同,進(jìn)而對NAT 結(jié)果造成了較大影響［11,12］。

本次研究結(jié)果顯示,37997 份無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本ELISA 檢測顯示有465 份陽性樣本,其陽性檢出率為1.22%；這一結(jié)果提示應(yīng)用血清學(xué)ELISA 檢測可以對存在問題的血清進(jìn)行篩查,進(jìn)而避免血液傳播疾病發(fā)生［13］。而37532 份血清ELISA 檢測陰性標(biāo)本再行NAT 后,顯示存在39 份陽性標(biāo)本,陽性檢出率為0.10%,這一結(jié)果又可以進(jìn)一步證實(shí)血液樣本哪怕是經(jīng)血清學(xué)ELISA 篩查后仍存在一定的輸血感染風(fēng)險(xiǎn),而再行NAT 可以篩查出存在風(fēng)險(xiǎn)的血液,在血清學(xué)篩查過程中具有較高的安全性保障,如若將ELISA和NAT技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用,對臨床醫(yī)療而言具有至關(guān)重要的價(jià)值,可以將其作為無償獻(xiàn)血血液樣本篩查過程中的重要技術(shù)［14］。

綜上所述,對獻(xiàn)血者血液實(shí)施血清學(xué)ELISA 檢測后,即便是合格血液仍存在一定的輸血傳播疾病風(fēng)險(xiǎn),輸血傳染疾病主要是以HBV 為主,對獻(xiàn)血者血液再進(jìn)行NAT 可以有效提升血液篩查質(zhì)量,從而最大限度的避免輸血傳播疾病的發(fā)生,進(jìn)一步提升輸血安全性。