胡云峰，李岢祎，胡開蕾，陳君然，朱彥華，郝詩琦

（1.天津科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，天津 300457；2.早康枸杞股份有限公司，寧夏 中衛(wèi) 750001）

疲勞是人體運(yùn)動能力和機(jī)體功能暫時下降的一種現(xiàn)象，隨著生活節(jié)奏加快，該現(xiàn)象越來越明顯，因此尋找安全、有效、無毒副作用的抗疲勞物質(zhì)是目前研究的熱點(diǎn)之一[1]。Zhao等[2]研究發(fā)現(xiàn)，能源物質(zhì)過度消耗、代謝物堆積等是產(chǎn)生疲勞的重要原因之一。天然活性成分如多糖、多酚、黃酮等具有提高免疫力、抗氧化等多種功效，其中多糖還可作為能源物質(zhì)迅速補(bǔ)充人體糖類損耗，具有良好的抗疲勞效果[3]。秦汝蘭等[4]用山刺玫果多糖灌胃小鼠，結(jié)果顯示山刺玫果多糖具有較好的緩解疲勞作用，可顯著延長小鼠力竭游泳時間、減少體內(nèi)乳酸及血尿素氮含量等。

枸杞（Lycium barbarum L.）被稱為“地道藥材”，所含有的枸杞多糖等活性物質(zhì)具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫能力、增強(qiáng)機(jī)體耐力、抗氧化等多種功能[5-6]。熟制枸杞是一種基于美拉德反應(yīng)，在特定溫度、濕度條件下將枸杞加熱熟制而成的黑褐色枸杞產(chǎn)品[7]。研究發(fā)現(xiàn)，美拉德反應(yīng)能有效提高多糖的抗菌[8]、抗氧化[9]等功能特性。韓苗苗[10]研究發(fā)現(xiàn)熟制后的龍眼提取物抗氧化、抗腫瘤、免疫刺激活性均有所增加。劉興龍等[11]研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)美拉德反應(yīng)制備的黑參多糖，可通過提高實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶的活力、增加肝糖原的儲備量發(fā)揮較好的抗疲勞作用。因此本文以熟制枸杞提取物為材料進(jìn)行抗疲勞效果研究，為熟制枸杞的進(jìn)一步開發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

實(shí)驗(yàn)動物：健康雄性KM小鼠，體重18 g～22 g，斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司。

枸杞：寧夏早康枸杞股份有限公司；西洋參粉：吉林集安市春及參茸有限公司；肝糖原測定試劑盒、超氧化物歧化酶測定試劑盒、血乳酸測定試劑盒、血清尿素氮測定試劑盒：美康生物科技股份有限公司；無水乙醇（分析純）：天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠。

1.2 主要儀器與設(shè)備

紫外可見分光光度計（TU-1810）：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；高速臺式冷凍離心機(jī)（TCL-16M）：長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；恒溫游泳箱（XSC）：淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司；轉(zhuǎn)輪式疲勞儀（ZB-200）：成都泰盟科技有限公司；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DL-101）：天津市中環(huán)實(shí)驗(yàn)電爐有限公司。

1.3 方法

1.3.1 枸杞熟制與其提取物的制備

取枸杞，加入枸杞總質(zhì)量30%的蒸餾水后，置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中60℃熟化48 h。采用水提醇沉法進(jìn)行提?。簩⑹旎蟮蔫坭讲捎脽崴?0 min，減壓濃縮后，加入80%的乙醇溶液進(jìn)行沉淀，蒸餾水透析48 h后真空冷凍干燥得到熟制枸杞提取物粉末[12]。

1.3.2 動物實(shí)驗(yàn)條件及分組

健康雄性KM小鼠約40只，正常飼養(yǎng)3 d，日光燈明暗交替12 h，期間自由飲食和飲水，室溫（20±2）℃，相對濕度（50±5）%。分組前所有小鼠進(jìn)行游泳測試，篩選游泳能力正常的小鼠繼續(xù)喂養(yǎng)。取狀態(tài)良好的健康小鼠隨機(jī)分為3組（每組10只）：空白組、西洋參對照組、熟制枸杞提取物組。熟制枸杞提取物粉末和西洋參粉分別在灌胃前用蒸餾水配制成同濃度溶液，熟制枸杞提取物組、西洋參對照組灌胃劑量為1 000 mg/kg BW，空白組灌胃等體積的蒸餾水，連續(xù)灌胃40 d。

1.3.3 力竭跑籠實(shí)驗(yàn)

參考Marras等[13]的小鼠力竭實(shí)驗(yàn)進(jìn)行改良，連續(xù)灌胃21 d后，將小鼠放到轉(zhuǎn)輪式疲勞儀中。各組小鼠實(shí)驗(yàn)前先進(jìn)行訓(xùn)練，訓(xùn)練3次后，以5 min內(nèi)休息10次為力竭指標(biāo)，進(jìn)行力竭跑籠實(shí)驗(yàn)。

1.3.4 小鼠生化指標(biāo)檢測

末次給藥30 min后，不負(fù)重游泳90 min后停止，待小鼠休息30 min后采血測定血乳酸濃度、尿素氮濃度、超氧化物歧化酶活力，最后對小鼠進(jìn)行解剖取肝臟，測定肝糖原含量[14-15]。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析采用SPSS 25.0軟件，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05表示組間具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 熟制枸杞提取物對小鼠體重的影響

小鼠體重的變化反映了熟制枸杞提取物對小鼠健康狀況的影響，小鼠體重增加或減少過快，都不利于其健康。熟制枸杞提取物對小鼠體重影響見圖1。

圖1 熟制枸杞提取物對小鼠體重影響Fig.1 Effect of extracts from cooked Lycium barbarum on body weight of mice

小鼠初始體重為（20±2）g。由圖1可知，經(jīng)過30 d喂養(yǎng)后，各組小鼠最終體重?zé)o顯著性差異。各組小鼠喂養(yǎng)期間精神狀態(tài)良好，表明熟制枸杞提取物并不會影響小鼠正常生長。

2.2 熟制枸杞提取物對小鼠力竭跑籠時間的影響

運(yùn)動耐力的下降是疲勞最直接和最客觀的表現(xiàn)[16]。熟制枸杞提取物對小鼠力竭跑籠時間的影響見圖2。

圖2 熟制枸杞提取物對小鼠力竭跑籠時間影響Fig.2 Effect of extracts from cooked Lycium barbarum on exhaustive cage running time of mice

從力竭跑籠實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，與空白組相比，熟制枸杞提取物組的小鼠力竭跑籠時間顯著延長（P＜0.05），熟制枸杞提取物組小鼠力竭跑籠時間為（41.5±4.99）min，為空白組的2.66倍，這與胡馨予等[17]研究枸杞活性成分抗疲勞作用結(jié)果相似，說明熟制枸杞提取物能提高小鼠運(yùn)動耐力。

2.3 熟制枸杞提取物對小鼠肝糖原含量的影響

肝糖原是機(jī)體內(nèi)的糖儲備，當(dāng)機(jī)體血糖濃度降低時，肝糖原可迅速分解釋放入血液中，以維持血糖水平的穩(wěn)定，而當(dāng)肝糖原耗盡時，會影響運(yùn)動的持久力，因此肝糖原含量可作為反映疲勞程度的重要指標(biāo)[18-19]。熟制枸杞提取物對小鼠肝糖原含量的影響見圖3。

圖3 熟制枸杞提取物對小鼠肝糖原含量的影響Fig.3 Effect of extracts from cooked Lycium barbarum on liver glycogen content of mice

由圖3可以看出，各組的肝糖原含量從高到低依次為熟制枸杞提取物組、西洋參對照組、空白組，熟制枸杞提取物組小鼠肝糖原含量是空白組的2.30倍，顯著增加了運(yùn)動后小鼠肝糖原含量，可見熟制枸杞提取物對肝糖原含量有調(diào)節(jié)作用，對維持肝糖原的儲備量有積極作用，可延緩疲勞現(xiàn)象的出現(xiàn)。

2.4 熟制枸杞提取物對小鼠血乳酸濃度的影響

長時間的劇烈運(yùn)動將導(dǎo)致機(jī)體相對缺氧和糖酵解作用加快，產(chǎn)生大量的乳酸，造成疲勞[20]。熟制枸杞提取物對小鼠血乳酸濃度的影響如表1所示。

羅瓊等[21]研究表明枸杞粗提物可提高小鼠的乳酸脫氫酶總活力，能減少乳酸的產(chǎn)生并加速運(yùn)動后乳酸的清除，維持機(jī)體正常pH值。卓長清等[22]研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動后體內(nèi)乳酸含量與疲勞程度呈正相關(guān)，血乳酸水平在一定程度上反映了機(jī)體的有氧代謝能力。由表1數(shù)據(jù)可知，與空白組相比，熟制枸杞提取物顯著降低了運(yùn)動后小鼠血乳酸的濃度，其血乳酸濃度降低了37.74%，由此可見熟制枸杞提取物能加快代謝產(chǎn)物的清除，減少乳酸生成，使肌肉中H+濃度維持穩(wěn)定，避免機(jī)體產(chǎn)生延遲性酸痛。

表1 熟制枸杞提取物對小鼠血乳酸濃度的影響Table 1 Effect of cooked extracts from Lycium barbarum on blood lactate concentration of mice

2.5 熟制枸杞提取物對小鼠尿素氮濃度的影響

機(jī)體運(yùn)動過程中，蛋白質(zhì)及氨基酸的分解代謝加強(qiáng)，蛋白質(zhì)的代謝產(chǎn)物尿素氮將有所增加，因此尿素氮與人體疲勞程度以及負(fù)荷量的大小密切相關(guān)[23-25]。熟制枸杞提取物對小鼠尿素氮濃度的影響見表2。

表2 熟制枸杞提取物對小鼠尿素氮濃度的影響Table 2 Effect of cooked extracts from Lycium barbarum on urea-nitrogen concentration of mice

由表2可知，與空白組相比，熟制枸杞提取物顯著降低了小鼠血清中尿素氮的濃度（P＜0.05），表明其能減緩由劇烈運(yùn)動引起的蛋白質(zhì)的過量分解，提高機(jī)體對劇烈運(yùn)動的負(fù)荷能力。

2.6 熟制枸杞提取物對小鼠超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力的影響

熟制枸杞提取物對小鼠SOD活力的影響見表3。

表3 熟制枸杞提取物對小鼠SOD活力的影響Table 3 Effect of cooked extracts from Lycium barbarum on SOD of mice

體內(nèi)自由基堆積會引起氧化應(yīng)激，減弱機(jī)體運(yùn)動能力，SOD作為抗氧化劑，可清除氧自由基保護(hù)細(xì)胞免受損傷并緩解疲勞[26-27]。由表3可知，熟制枸杞提取物使小鼠血清中的SOD活力大幅度增加，與空白組相比增加了40.98%，可見熟制枸杞提取物可提高小鼠SOD活力，減少自由基的堆積，加快體內(nèi)過氧化物的清除，起到緩解疲勞的作用。

3 結(jié)論

劑量為1 000 mg/kg BW的熟制枸杞提取物可顯著提升小鼠的抗疲勞能力，與空白組及西洋參對照組相比，使小鼠力竭跑籠時間延長了165.60%、肝糖原含量提高了130%、血乳酸和尿素氮含量則分別降低了37.74%和53.62%、血清中超氧化物歧化酶活力增加了40.98%。熟制枸杞提取物能夠顯著提高小鼠的肝糖原含量，降低血乳酸和尿素氮濃度，同時還能顯著提高體內(nèi)抗氧化酶活性，進(jìn)而提高小鼠機(jī)體運(yùn)動負(fù)荷能力，起到抗疲勞的作用。