羅燕娜，王靜靜，李旭東，張愛萍，趙 亮

（第六師農(nóng)業(yè)科學研究所，新疆 五家渠 831300）

雙孢蘑菇又稱白蘑菇、洋蘑菇，隸屬擔子菌亞門層菌綱傘菌目傘菌科蘑菇屬。因其口感爽滑、蛋白質(zhì)含量高、脂肪含量低，又有助消化、降血壓、防癌抗腫瘤、增強免疫力等功效，深受消費者喜愛。

雙孢蘑菇是世界第一大菇，栽培規(guī)模大，普及地區(qū)廣，現(xiàn)有100多個國家和地區(qū)生產(chǎn)，在發(fā)達國家雙孢蘑菇栽培已進入工業(yè)化生產(chǎn)時代。我國的雙孢蘑菇栽培始于20世紀20至30年代，生產(chǎn)地主要在上海。1958年改用牛糞栽培后，栽培面積迅速擴大，目前栽培規(guī)模僅次于美國，名列世界第二，但是多數(shù)產(chǎn)區(qū)仍處于季節(jié)性、零散、廣種薄收的初級生產(chǎn)水平階段[1]。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 菌株

雙孢蘑菇菌種A15為本實驗室從蘑菇種植戶大棚采集的一潮菇，通過組織分離、純化、擴繁后保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基配方：麥粒200 g，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀1 g，硫酸鎂0.5 g，蛋白胨1 g，瓊脂20 g，加水1 000 mL[2]。

原種培養(yǎng)基配方5 種，分別為配方A：麥粒32.5%，高粱粒65.0%，石膏1%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%；配方B：谷子57.5%，高粱粒40.0%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%；配方C：麥粒19.5%，高粱粒78.0%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%；配方D：谷子37.5%，高粱粒60.0%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%；配方E（CK）：麥粒97.5%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%。

栽培種培養(yǎng)基配方2種，分別為配方Z1：麥粒25.0%，高粱粒72.5%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%；配方Z2：麥粒19.5%，高粱粒78.0%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%；配方Z3（CK1）：麥粒97.5%，石膏1.0%，輕質(zhì)碳酸鈣1.5%。

1.2 試驗方法

1.2.1 母種培養(yǎng)基制備方法

稱取麥粒200 g，用800 mL左右的開水煮沸1 h，過濾收集汁液，用少量的涼水溶解蛋白胨和瓊脂粉，然后和其他輔料一起加入過濾好的汁液，燒開后關(guān)火，期間不停地攪拌，避免粘鍋。將攪拌好的培養(yǎng)料裝入試管，塞緊試管塞，121 ℃高壓蒸汽滅菌30 min，擺斜面，冷卻備用。

目前世界各國在分析波磨對車輛通過的影響時，主要采用三維彈性體滾動接觸理論來進行蠕滑計算并分析車輛的動力學性能。其中精度最好、使用最多的是荷蘭學者Kalker創(chuàng)立的三維彈性體非線性滾動接觸理論，但是由于Kalker在分析時做了幾個方面的假設(shè)，其中最重要的一條假設(shè)就是整個滾動過程是穩(wěn)態(tài)的，因此其具有局限性。在穩(wěn)態(tài)滾動接觸的過程中，接觸斑的形狀、大小保持不變，因此蠕滑率、法向力、切向力也保持不變。但如果在滾動過程中，接觸斑的形狀、大小產(chǎn)生較大變化，從而導致蠕滑率、法向力、切向力隨時間變化發(fā)生較大的改變，這種情況就是非穩(wěn)態(tài)滾動接觸。

1.2.2 原種培養(yǎng)基制備方法

根據(jù)配方計算出各原料所需要的量，按照如下方法制備：稱取麥粒，裝入網(wǎng)兜，用50%的咪鮮胺1 000倍液浸泡麥粒16～18 h，清洗3～4次后，在開水中（加入0.2%石灰）煮沸20 min左右，直至麥粒無白心，撈出晾涼，拌入輔料，然后裝入容量300 mL的廣口組培瓶，預(yù)濕滅菌土，濕度控制在55%～60%，用滅菌土封面，蓋上蓋子，123 ℃高壓蒸汽滅菌2.5 h，冷卻待用[3]。

1.2.3 栽培種培養(yǎng)基制備方法

制作流程與原種培養(yǎng)基基本相同，只是不用滅菌土封面，最后裝入12 cm×24 cm聚丙烯蘑菇菌種袋。

1.2.4 接種培養(yǎng)

采用組織分離法制備雙孢蘑菇母種：選取個頭大、菇形圓整、菇蓋厚、色白、無病蟲害的一潮菇，在超凈工作臺內(nèi)，用酒精棉球消毒后，使用滅菌小刀切取菌蓋與菌柄交界處組織，然后接種到試管內(nèi)，塞緊試管塞，25 ℃恒溫培養(yǎng)。10 d后轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)皿內(nèi)進行純化，然后再轉(zhuǎn)接到試管進行擴繁。

雙孢蘑菇原種接種時，采用1支母種接3瓶原種的比例，每個配方各接種80瓶，注明配方、品種和接種日期，25 ℃恒溫培養(yǎng)。

雙孢蘑菇栽培種接種時，采用1瓶原種（用原種培養(yǎng)基配方C培養(yǎng)）接20袋栽培種的比例，每個栽培種培養(yǎng)基配方各接種700袋，注明配方、品種和接種日期，25 ℃恒溫培養(yǎng)。

觀察內(nèi)容及方法：（1）接種后24～ 48 h，觀察記錄雙孢蘑菇A15母種在5個原種培養(yǎng)基配方上的萌發(fā)時間，以及原種在3個栽培種培養(yǎng)基配方上的萌發(fā)時間；（2）培養(yǎng)過程中，觀察記錄原種、栽培種菌絲長勢與顏色，及時挑出污染瓶（袋），并記錄數(shù)量；（3）培養(yǎng)過程結(jié)束，記錄菌絲長滿的時間，計算滿瓶或滿袋所用時間和污染率。

1.3 栽培試驗

將雙孢蘑菇菌絲生長情況較好的配方Z1和配方Z2培養(yǎng)出來的栽培種各取500袋，做栽培試驗。試驗地點在昌吉市泰源食用菌專業(yè)合作社的8號和6號智能溫室，以其購買的進口菌種為對照，播種面積：8號智能溫室配方Z1栽培種和進口菌種各240 m2；6號智能溫室配方Z2栽培種和進口菌種各240 m2；播種量均為730 g/m2。記錄出菇產(chǎn)量。具體觀察內(nèi)容及方法：分別統(tǒng)計各配方栽培種前兩潮菇的產(chǎn)量和總產(chǎn)量，并計算出單位面積產(chǎn)量，第一潮菇記錄出菇第1天至第7天的產(chǎn)量，第二潮菇記錄出菇第8天至第14天的產(chǎn)量，總產(chǎn)量為30 d的出菇總量。

2 結(jié)果與分析

2.1 母種在培養(yǎng)基上的生長情況

經(jīng)觀察，雙孢蘑菇組織分離并接種到試管后，其菌絲萌發(fā)時間需要48～72 h，在培養(yǎng)皿內(nèi)純化后，轉(zhuǎn)接試管進行擴繁，此時，菌絲萌發(fā)時間需24～36 h，長滿試管需12～15 d，菌絲顏色潔白，生長勢強。

2.2 原種在不同培養(yǎng)基上的生長情況

原種培養(yǎng)基配方A和配方C培養(yǎng)出來的雙孢蘑菇原種比配方E（CK）生長速度快，菌絲顏色白、密集且污染率較低（見表1）。培養(yǎng)出來的原種松散度好，不易結(jié)塊，轉(zhuǎn)接率高。

原種培養(yǎng)基配方B和D培養(yǎng)出來的雙孢蘑菇原種與配方E（CK）相比菌絲萌發(fā)時間相同，但生長速度緩慢，菌絲稀疏、長勢較弱且邊緣不整齊，培養(yǎng)出來的原種松散度較差，結(jié)塊多，污染率較高，與對照相比，無明顯優(yōu)勢（見表1）。

表1 不同配方培養(yǎng)基雙孢蘑菇原種生長情況

2.3 栽培種在不同培養(yǎng)基上的生長情況

栽培種培養(yǎng)基配方Z2培養(yǎng)的雙孢蘑菇栽培種菌絲萌發(fā)時間早，滿袋所需時間最短，菌絲濃密、長勢強，且顏色較白，其次是栽培種培養(yǎng)基配方Z1，配方Z3（CK1）的培養(yǎng)效果最差，菌絲長勢較弱，且麥粒攤晾的時間不易掌握，若含水量過高，容易導致栽培種袋子底部積水，影響菌絲生長；若含水量過低，菌絲長勢弱，袋口容易感染木霉菌，滿袋所需時間比栽培種培養(yǎng)基配方Z2多出1周時間（見表2）。

表2 不同配方培養(yǎng)基雙孢蘑菇栽培種生長情況

2.4 栽培試驗

栽培種培養(yǎng)基配方Z1和配方Z2菌絲生長情況較好，各取500袋，分別栽培到8號和6號智能溫室，記錄總產(chǎn)量，并根據(jù)播種面積計算出單位面積產(chǎn)量。由于溫控系統(tǒng)出了問題，第三潮菇損失嚴重，出菇總量統(tǒng)計結(jié)果如表3所示。在相同的栽培面積和管理條件下，栽培種培養(yǎng)基配方Z2的栽培種與進口菌種前兩潮菇產(chǎn)量僅相差5.5個百分點，總產(chǎn)量僅相差4.1個百分點，平均單產(chǎn)僅相差1.0 kg/m2。

表3 雙孢蘑菇栽培試驗產(chǎn)量統(tǒng)計

3 小結(jié)與討論

現(xiàn)有的雙孢蘑菇培養(yǎng)基原材料多為麥粒，麥粒菌種具有營養(yǎng)豐富、菌絲生長快、轉(zhuǎn)接率高等優(yōu)點，但是在制作和培養(yǎng)過程中，若滅菌不徹底，或煮制時間過長，麥粒爆裂，很容易感染木霉菌，導致污染率較高[4]。本試驗用高粱粒做主要原料，麥粒占少部分，制備雙孢蘑菇的原種和栽培種，由于高粱粒不易感染木霉菌，且外殼較厚，煮制過程中不易破裂，污染率明顯降低；攤晾時表面水分揮發(fā)快，制作時間縮短，提高了工作效率；同時采用混合培養(yǎng)基，營養(yǎng)更全面，菌絲生長速度和長勢明顯優(yōu)于純麥粒的培養(yǎng)基；而且由于高粱粒的顆粒要小于麥粒，菌種的轉(zhuǎn)接率更高，因而在播種時，用種量也能相應(yīng)地減少。在栽培試驗中，栽培種培養(yǎng)基配方Z2培養(yǎng)出來的栽培種出菇產(chǎn)量與進口菌種僅相差1%，經(jīng)計算，菌種成本相較進口菌種可節(jié)約25%以上。所以，在制作雙孢蘑菇的原種時，可以選擇原種培養(yǎng)基配方A或配方C，在制作雙孢蘑菇的栽培種時，可以選擇原種培養(yǎng)基配方B作為參考，從而提高雙孢蘑菇菌種的質(zhì)量和制作效率。