呂曉，葉可，馬旭軍，吳凱玥，黃蓉，艾洪蓮

（中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074）

植物內(nèi)生真菌作為重要的與植物互作微生物類群，在與植物長(zhǎng)期的協(xié)同進(jìn)化過程中形成了特殊的互惠共生關(guān)系，具有極高的生物多樣性［1］.從內(nèi)生真菌中分離得到的有生物活性天然產(chǎn)物數(shù)量和種類比任意其他微生物都多［2-3］.這促使內(nèi)生真菌成為了尋找活性成分的潛在資源，為植物資源的保護(hù)提供了思路［4-5］.湖北貝母（Fritillaria hupehensisHsiao et K.C.Hsia），是百合科貝母屬草本植物，其干燥鱗莖入藥. 微苦，性寒. 歸肺、心經(jīng)［6］. 用于熱痰咳嗽，痰核瘰疬，癰腫瘡毒. 本文以一株優(yōu)勢(shì)內(nèi)生真菌菌株Boeremia exigua為研究對(duì)象，對(duì)其固體發(fā)酵物的次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究.分離純化得到了9個(gè)單體化合物（圖1），均為細(xì)胞松弛素類化合物.進(jìn)一步的抗炎活性檢測(cè)顯示，與陽(yáng)性藥PDTC相比，化合物1、2和3有著較好的抗炎活性，IC50分別為8.42、22.05和6.26μM， 為該類真菌抗炎藥物的研發(fā)提供了物質(zhì)基礎(chǔ).

圖1 化合物1～9的結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of compounds 1-9

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

核磁共振波譜儀（AM600，德國(guó)Bruker）.旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（SB-1300，ELELA），中壓液相色譜（puriflash 430，法國(guó)Interchim）制備、半制備高效液相色譜（1260型，美國(guó)Agilent），酶標(biāo)儀（瑞士TECAN）.

正相柱色譜硅膠（80～100 目和200～300 目）和GF254薄層色譜板（青島海洋化工廠）；Sephadex LH-20凝膠材料（瑞典Amersham Bioscience）；反相柱色譜材料Chromatorex（40～75μm）（日本富士）；色譜柱為Agilent Zorbax SB-18（4.6 mm×150 mm，5μm）和Agilent Zorbax SB-C18 柱（9.4 mm×150 mm，5μm）.顯色方法為紫外燈下波長(zhǎng)254 nm和365 nm處觀察熒光，香草醛顯色及10%硫酸乙醇溶液顯色劑加熱顯色.

1.2 菌種分離純化及發(fā)酵培養(yǎng)

該內(nèi)生真菌分離自貝母新鮮植株的根部，貝母采自湖北省恩施州恩施市新塘鄉(xiāng)雙河社區(qū)，菌株自編號(hào)為貝21.通過ITS序列測(cè)定結(jié)果對(duì)比得知，該序列與Boeremia exigua的最大相似度達(dá)100%.基因庫(kù)登錄號(hào)為MT154621.1.故將其鑒定為Boeremia exigua.該菌株保藏于中南民族大學(xué)藥學(xué)院微生物菌種庫(kù).

其具體分離過程為：貝母新鮮塊根自來水沖洗干凈后切成小段，75%乙醇潤(rùn)洗60 s，無菌水漂洗3 次. 0.1%升汞浸泡消毒40 s，無菌水漂洗3 次.吸干水分，剪去貝母根部?jī)啥说那锌诤髲闹袆濋_.將這些小塊接至PDA培養(yǎng)基（含青鏈霉素混合液）中，置于25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng).待真菌長(zhǎng)出后，挑取菌絲進(jìn)行純化培養(yǎng)得單一菌株.

本研究采用大米固體發(fā)酵培養(yǎng). 培養(yǎng)基：每瓶大米50 g，加水50 mL，共340瓶，置于500 mL培養(yǎng)瓶中經(jīng)120 ℃高溫滅菌.培養(yǎng)條件：25 ℃下暗培養(yǎng)30 d.

1.3 提取分離

將發(fā)酵后的固體培養(yǎng)基用甲醇浸泡3 次，每次6 h.合并提取液，減壓濃縮蒸干有機(jī)試劑后，用水溶解，并用乙酸乙酯萃取3次，將乙酸乙酯部分合并濃縮得到粗浸膏900 g.浸膏經(jīng)正相硅膠柱層析（四氟層析柱，100 mm ×1000 mm，氯仿-甲醇：100∶0 →0∶100）梯度洗脫得到6 個(gè)組分（A～E）. 組分B 經(jīng)中壓液相色譜（色譜柱型號(hào)：YMC-Pack ODS-A，S-5 μm，12 nm，AA12S05-2510 WT，水-甲醇：80∶20 →0∶100）分離，得到4 個(gè)亞組分B1～B4.B2 中有結(jié)晶析出，清洗后得到化合物1.將晶體母液經(jīng)制備型高效液相色譜分離（色譜柱型號(hào)：YMC-Pack ODS-A，S-5 μm，12 nm，AA12S05-1510 WT，水-乙腈80 ∶20 →0∶100）得到化合物2. B3 經(jīng)正相硅膠柱層析（四氟層析柱，石油醚-丙酮80∶20 →0∶100）分離得到5 個(gè)組分（B3-1～B3-5）.B3-3 再經(jīng)制備行高效液相色譜分離純化得到化合物4. B3-5 經(jīng)凝膠柱色譜分離得到8 個(gè)組分（B3-5a～B3-5h）. B3-5h 經(jīng)高效液相色譜（色譜柱型號(hào)：YMC-Pack ODS-A，S-5 μm，12 nm，AA12S05-1510 WT，水-乙腈80∶20 →0∶100）分離純化，得到化合物3 和5.組分C 經(jīng)中壓液相色譜（色譜柱型號(hào)：YMC-Pack ODS-A，S-5 μm，12 nm，AA12S05-2510 WT，水-甲醇：80∶20 →0∶100）分離得到6 個(gè)亞組分（C1～C-6）.C2 經(jīng)正相硅膠柱層析（四氟層析柱，氯仿-甲醇80∶20 →0∶100）得到7個(gè)組分（C2-1～C2-7），C2-6和C2-7經(jīng)制備型高效液相色譜（色譜柱型號(hào)：YMC-Pack ODS-A，S-5 μm，12 nm，AA12S05-1510 WT，水-乙腈80∶20 →0∶100）分離純化，得到化合物6、7、8和9.

2 抗炎活性檢測(cè)

采用Lipopolysaccharide（LPS）誘導(dǎo)的RAW 264.7 巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO 的炎癥效應(yīng)來檢測(cè)化合物1～9 的抗炎活性. 在含10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素和100 g/mL 鏈霉素的dulbecco′s modified eagle medium（DMEM）培養(yǎng)基于恒溫培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)（5%CO2，37 ℃）.將RAW 264.7 細(xì)胞（5×105細(xì)胞/mL）接種到96孔多孔板中培養(yǎng)12 h后，用不同濃度的測(cè)試化合物（10～40 mM）處理2 h，然后在有無脂多糖（500 ng/mL）的情況下孵育24 h.除去培養(yǎng)基，在每孔中加入100 μmol/mL 3-（4，5）-dimethylthiahiazo（-zy1）-3，5-di- phenytetrazoliumromide（MTT） 溶 液（0.5 mg/mL），隨后在37 ℃下培養(yǎng)4 h，每個(gè)孔用150 μL DMSO 溶解晶體.酶標(biāo)儀570 nm 處測(cè)吸光度，細(xì)胞存活率為對(duì)照的百分比來表示.使用Griess 試劑盒收集細(xì)胞上清液，以測(cè)量上清液中NO 的產(chǎn)生.使用酶標(biāo)儀在540 nm處測(cè)量吸光度.陽(yáng)性對(duì)照藥為Pyrrolidinedithiocarbamate（簡(jiǎn)稱PDTC）.

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：分子式為C29H37NO5，白色粉末.1H NMR（CD3OD，600 MHz）：δH7.27（2H，t，J= 7.4 Hz，H-3′，5′），7.19（1H，t，J=7.4 Hz，H-4′），7.14（2H，d，J=7.4 Hz，H-2′，6′），6.93（1H，dd，J=15.7，4.4 Hz，H-21），5.83（1H，ddd，J=15.0，9.9，1.6 Hz，H-13），5.78（1H，dd，J=15.7，1.8，H-22），5.29（H1，s，H-12a），5.24（1H，m，H-14），5.09（1H，s，H-12b），4.45（1H，m，H-20），3.80（1H，d，J= 11.0 Hz，H-7），3.39（1H，m，H-8），3.37（1H，m，H-3），3.21（1H，m，H-5），2.85（1H，dd，J=5.3，2.7 Hz，H-4），2.80（2H，m，H-10），2.09（1H，m，H-19a），1.91（1H，m，H-15a），1.72（1H，m，H-17a），1.66（1H，m，H-19b），1.56（1H，m，H-15b），1.45（1H，m，H-18a），1.28（1H，m，H-18b），1.22（1H，m，H-16），0.88（3H，d，J =6.6 Hz，H-24），0.86（3H，d，J =6.8 Hz，H-11），0.58（1H，m，H-17b）.13C NMR（CD3OD，150 MHz）：δc174.0（C-1），166.4（C-23），154.7（C-21），151.5（C-6），138.3（C-1′），136.7（C-14），131.0（C-6′），131.0（C-2′），129.6（C-3′），129.6（C-5′），128.7（C-13），127.9（C-4′），119.5（C-22），114.3（C-12），85.4（C-9），71.5（C-7），71.1（C-20），54.8（C-3），49.4（C-8），49.0（C-4），44.0（C-10），43.2（C-19），36.6（C-17），35.4（C-15），34.5（C-16），32.8（C-5），21.5（C-18），20.7（C-24），14.1（C-11）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］數(shù)據(jù)基本一致，故化合物1被確定為Cytochalasin B.

化合物2：分子式為C29H37NO5，白色粉末.1H NMR（CD3OD，600 MHz）：δH7.31（2H，t，J =7.6 Hz，H-3′，5′），7.23（1H，m，H-4′），7.14（1H，m，H-21），7.12（2H，m，H-2′，6′），6.10（1H，ddd，J =15.2，10.1，1.8 Hz，H-13），5.97（1H，dd，J =15.7，2.0 Hz，H-22），5.22（1H，m，H-14），4.57（1H，m，H-20），3.87（1H，m，H-7），3.56（1H，s，H-4），3.51（1H，dd，J =9.9，5.3 Hz，H-3），3.24（1H，t，J=10.1，H-8），3.00（1H，dd，J=13.0，5.3 Hz，H-10a），2.69（1H，dd，J =13.0，9.9 Hz，H-10b），2.08（1H，m，H-15a），1.96（1H，m，H-19a），1.74（1H，m，H-17a），1.67（1H，m，H-15b），1.63（3H，s，H-12），1.58（1H，m，H-19b），1.58（2H，m，H-18），1.28（3H，s，H-11），1.27（1H，m，H-16），0.89（3H，d，J =6.7 Hz，H-24），0.59（1H，m，H-17b）.13C NMR（CD3OD，150 MHz）：δc174.6（C-1），166.4（C-23），155.3（C-21），138.8（C-1′），136.4（C-14），135.1（C-6），131.0（C-2′），131.0（C-6′），129.8（C-3′），129.8（C-5′），129.2（C-13），127.9（C-4′），126.7（C-5），119.5（C-22），85.8（C-9），71.7（C-7），70.6（C-20），60.6（C-3），50.4（C-8），44.1（C-10），43.5（C-15），36.9（C-17），35.3（C-19），34.7（C-16），21.3（C-18），20.8（C-24），17.6（C-11），14.7（C-12）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］數(shù)據(jù)基本一致，故化合物2被確定為Cytochalasin B2.

化合物3：分子式為C29H37NO5，無色油狀.1H NMR（CDCl3，600 MHz）：δH7.33（2H，t，J =7.5 Hz，H-3′，5′），7.26（1H，m，H-4′），7.14（2H，m，H-2′，6′），7.04（1H，dd，J =15.7，3.9 Hz，H-21），6.08（1H，ddd，J=15.1，10.0，1.9 Hz，H-13），5.93（1H，dd，J =15.7，2.0 Hz，H-22），5.30（1H，ddd，J =15.1，10.9，3.7 Hz，H-14），4.54（1H，s，H-20），3.68（1H，t，J=7.1 Hz，H-3），3.13（1H，dd，J=10.0，5.4 Hz，H-8），2.85（1H，d，J=5.8 Hz，H-4），2.78-2.80（2H，m，H-10），2.74（1H，d，J =5.4 Hz，H-7），2.33（1H，m，H-5），2.08（1H，m，H-15a），1.93（1H，m，H-19a），1.72（1H，m，H-15b），1.63（1H，m，H-19b），1.62（1H，m，H-17a），1.49（1H，m，H-18a），1.24（1H，m，H-18b），1.23（3H，s，H-12），1.22（1H，m，H-16），1.01（3H，d，J =7.2 Hz，H-11），0.87（3H，d，J=6.6 Hz，H-24），0.65（1H，m，H-17b）.13C NMR（CDCl3，150 MHz）：δc172.6（C-1），164.7（C-23），152.6（C-21），137.0（C-1′），136.0（C-14），129.4（C-2′），129.4（C-6′），129.1（C-3′），129.1（C-5′），127.3（C-4′），126.5（C-13），118.8（C-22），84.6（C-9），70.5（C-20），61.1（C-7），57.5（C-6），54.0（C-3），49.2（C-4），46.1（C-8），45.2（C-10），41.9（C-15），36.1（C-5），35.4（C-17），34.8（C-19），33.2（C-16），20.5（C-24），20.2（C-18），19.7（C-12），12.9（C-11）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］數(shù)據(jù)基本一致，故化合物3被確定為Cytochalasin F.

化合物4：分子式為C29H37NO5，白色粉末.1H NMR（CD3OD，600 MHz）：δH7.27（2H，d，J =7.5 Hz，H-3′，5′），7.19（3H，m，H-2′，4′，6′），6.99（1H，dd，J =15.6，5.7 Hz，H-21），5.91（1H，ddd，J =15.0，10.2，2.0 Hz，H-13），5.78（1H，dd，J =15.6，1.6 Hz，H-22），5.57（1H，m，H-7），5.26（1H，ddd，J =15.0，10.8，3.1 Hz，H-14），4.39（1H，m，H-20），4.07（2H，br s，H-12），3.45（1H，m，H-3），3.42（1H，m，H-8），2.95（1H，m，H-5），2.88（2H，m，H-10），2.75（1H，t，J=4.4 Hz，H-4），2.11（1H，m，H-15a），1.89（1H，m，H-19a），1.75（1H，m，H-17a），1.69（1H，m，H-15b），1.58（1H，m，H-19b），1.44（1H，m，H-18a），1.37（1H，m，H-18b），1.31（1H，m，H-16），1.09（3H，d，J=7.3 Hz，H-11），0.89（3H，d，J =6.6 Hz，H-24），0.62（1H，m，17b）.13C NMR （CD3OD，150 MHz）：δc174.2（C-1），166.5（C-23），154.3（C-21），145.1（C-6），138.6（C-1′），135.6（C-14），131.0（C-2′），131.0（C-6′），129.6（C-3′），129.6（C-5′），129.6（C-13），127.8（C-4′），126.7（C-7），120.0（C-22），88.6（C-9），71.7（C-20），63.3（C-12），57.2（C-3），51.0（C-4），46.6（C-8），44.2（C-10），42.6（C-15），36.2（C-17），35.5（C-19），35.0（C-16），34.4（C-5），21.6（C-18），20.7（C-24），13.1（C-11）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］數(shù)據(jù)基本一致，故化合物4被確定為Cytochalasin Z2.

化合物5：分子式為C29H37NO4，白色粉末.1H NMR（CDCl3，600 MHz）：δH7.32（2H，t，J=7.5 Hz，H-3′，5′），7.26（1H，m，H-4′），7.19（2H，d，J =7.5 Hz，H-2′，6′），7.07（1H，dd，J =15.6，6.4 Hz，H-21），5.91（1H，m，H-13），5.88（1H，m，H-22），5.51（1H，m，H-7），5.30（1H，ddd，J =14.4，10.7，3.1 Hz，H-14），4.45（1H，m，H-20），3.32（1H，d，J =10.1 Hz，H-3），3.13（1H，m，H-4），2.92（1H，m，H-5），2.89（2H，m，H-10），2.74（1H，t，J=3.1，H-8），2.11（1H，m，H-15a），1.89（1H，m，H-19a），1.77（3H，s，H-12），1.76（1H，m，H-17a），1.68（1H，m，H-15b），1.58（1H，m，H-19b），1.47（1H，m，H-15b），1.38（2H，m，H-18），1.25（1H，m，H-16），1.23（3H，d，J =7.3 Hz，H-11），0.88（3H，d，J=6.6 Hz，H-24），0.72（1H，m，H-17b）.13C NMR（CDCl3，150 MHz）：δc171.8（C-1），165.0（C-23），151.6（C-21），140.4（C-6），138.0（C-1′），134.5（C-14），129.2（C-2′），129.2（C-6′），129.1（C-3′），129.1（C-5′），128.6（C-13），127.1（C-4′），124.3（C-7），120.2（C-22），86.6（C-9），71.6（C-20），56.0（C-3），51.8（C-8），46.1（C-4），44.3（C-10），41.3（C-19），34.8（C-17），34.7（C-15），34.5（C-16），33.1（C-5），20.6（C-18），20.4（C-12），20.2（C-24），14.3（C-11）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］數(shù)據(jù)基本一致，故化合物5被確定為Cytochalasin T.

化合物6：分子式為C29H37NO5，白色粉末.1H NMR（CD3OD，600 MHz）：δH7.32（2H，t，J =7.5 Hz，H-3′，5′），7.23（1H，m，H-4′），7.17（2H，m，H-2′，6′），6.09（1H，ddd，J=15.2，9.7，2.0，H-13），5.59（1H，ddd，J=15.2，10.8，3.5 Hz，H-14），5.32（1H，s，H-12a），5.04（1H，s，H-12b），4.19（1H，m，H-21），3.87（1H，d，J =9.7 Hz，H-7），3.68（1H，m，H-20），3.37（1H，m，H-3），3.00（1H，dd，J= 19.4，6.7 Hz，H-22a），2.89（1H，t，J =9.7 Hz，H-8），2.85（1H，m，H-5），2.82（1H，m，H-22b），2.77（1H，dd，J =13.2，5.9 Hz，H-10a），2.46（1H，m，H-4），2.44（1H，m，H-10b），2.16（1H，m，H-15a），1.71（1H，m，H-15b），1.47（1H，m，H-19a），1.41（1H，m，H-16），1.35（2H，m，H-18），1.20（1H，m，H-17a），1.20（1H，m，H-17b），0.96（3H，d，J =6.6 Hz，H-24），0.67（3H，d，J =6.7 Hz，H-11）.13C NMR（CD3OD，150 MHz）：δc208.8（C-23），176.3（C-1），150.6（C-6），139.5（C-14），138.6（C-1′），130.8（C-2′），130.8（-6′），129.7（3′），129.7（C-5′），127.8（C-4′），127.7（C-13），114.7（C-12），75.3（C-20），72.3（C-7），70.5（C-21），64.5（C-9），54.9（C-3），49.0（C-8），48.0（C-4），44.0（C-10），42.4（C-15），40.4（C-22），35.3（C-17），32.7（C-16），32.4（C-5），30.5（C-19），23.1（C-18），22.9（C-24），13.2（C-11）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］數(shù)據(jù)基本一致，故化合物6被確定為Multriostratin B.

化合物7：分子式為C29H37NO6，無色針晶.1H NMR（CD3OD，600 MHz）：δH7.26（2H，t，J =7.6 Hz，H-3′，5′），7.19（1H，m，H-4′），7.13（2H，m，H-2′，6′），6.88（1H，dd，J =15.7，3.5 Hz，H-21），5.85（1H，dd，J =15.0，1.8 Hz，H-13），5.84（1H，dd，J =15.7，2.2 Hz，H-22），5.28（1H，s，H-12），5.19（1H，ddd，J=15.0，10.9，3.5 Hz，H-14），4.49（1H，m，H-20），3.79（1H，d，J =10.6 Hz，H-7），3.59（1H，m，H-19），3.40（1H，m，H-3），3.38（1H，m，H-8），3.22（1H，m，H-5），2.87（1H，dd，J =5.3，2.5 Hz，H-4），2.79（2H，d，J=6.0 Hz，H-10），2.09（1H，m，H-15a），1.64（1H，m，H-15b），1.54（1H，m，H-18a），1.54（1H，m，H-17a），1.44（1H，m，H-18b），1.16（1H，m，H-16），0.89（3H，d，J =6.6 Hz，H-24），0.87（3H，d，J =6.8 Hz，H-11），0.62（1H，m，H-17）.13C NMR（CD3OD，150 MHz）：δc174.0（C-1），166.2（C-23），151.4（C-21），151.4（C-6），138.1（C-1′），136.6（C-14），131.1（C-2′），131.1（C-6′），129.6（C-3′），129.6（C-5′），128.8（C-13），127.8（C-4′），119.6（C-22），114.4（C-12），85.5（C-9），75.2（C-19），74.5（C-20），71.5（C-7），54.7（C-3），44.0（C-10），43.3（C-15），35.1（C-16），33.8（C-17），32.8（C-5），31.0（C-18），20.7（C-24），14.1（C-11）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］數(shù)據(jù)基本一致，故化合物7被確定為Zopfiellasins C.

化合物8：分子式為C29H37NO6，白色固體.1H NMR（CD3OD，600 MHz）：δH7.27（2H，t，J =7.5 Hz，H-3′，5′），7.19（1H，t，J=7.5 Hz，H-4′），7.14（2H，d，J =7.5 Hz，H-2′，6′），7.03（1H，dd，J =15.6，5.1 Hz，H-21），5.84（1H，dd，J =15.6，1.7 Hz，H-22），5.77（1H，ddd，J =15.0，9.7，1.6 Hz，H-13），5.30（1H，s，H-12），5.25（1H，ddd，J =15.0，10.9，3.6 Hz，H-14），5.09（1H，s，H-12），4.13（1H，m，H-20），3.80（1H，d，J=11.0 Hz，H-7），3.72（1H，t，J=7.1 Hz，H-19），3.39（1H，m，H-3），3.31（1H，m，H-8），3.19（1H，m，H-5），2.83（1H，d，J =6.0 Hz，H-4），2.14（1H，m，H-15a），1.70（1H，m，H-18），1.68（1H，m，H-15b），1.62（1H，m，H-17a），1.50（1H，m，H-18b），1.34（1H，m，H-16），0.89（3H，d，J =6.6 Hz，H-24），0.87（3H，d，J =6.8 Hz，H-11），0.80（1H，m，H-17）.13C NMR（CD3OD，150 MHz）：δc173.9（C-1），166.2（C-23），151.5（C-6），151.0（C-21），138.3（C-1′），136.4（C-14），131.0（C-2′），131.0（C-6′），129.6（C-3′），129.6（C-5′），128.9（C-13），127.9（4′），121.1（C-22），114.3（C-12），85.4（C-9），76.1（C-20），74.3（C-20），71.2（C-7），54.9（C-3），43.9（C-10），43.2（C-15），33.5（C-16），32.9（C-5），30.6（C-17），29.7（C-18），20.5（C-24），14.3（C-11）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］數(shù)據(jù)基本一致，故化合物8被確定為Zopfiellasins D.

化合物9：分子式為C29H37NO6，白色粉末.1H NMR（CD3OD，600 MHz）：δH6.93（2H，d，J =8.5 Hz，H-2′，6′），6.89（1H，dd，J =15.7，4.1 Hz，H-21），6.67（2H，d，J =8.5 Hz，H-3′，5′），5.83（1H，ddd，J=15.0，9.7，1.6 Hz，H-13），5.76（1H，dd，J =15.7，1.8 Hz，H-22），5.28（1H，s，H-12a），5.21（1H，ddd，J =15.0，10.9，3.6 Hz，H-14），5.10（1H，s，H-12b），4.49（1H，m，H-20），3.79（1H，dd，J =10.8，1.6 Hz，H-7），3.38（1H，m，H-8），3.36（1H，m，H-5），3.23（1H，m，H-3），2.84（1H，dd，J =5.2，2.5 Hz，H-4），2.72（1H，dd，J =13.7，6.0 Hz，H-10a），2.66（1H，dd，J =13.7，5.3 Hz，H-10b），2.08（1H，m，H-15a），1.91（1H，m，H-19a），1.70（1H，m，H-15b），1.64（1H，m，H-17a），1.54（1H，m，H-19b），1.45（1H，m，H-18a），1.27（1H，m，H-16），1.20（1H，m，H-18b），0.92（3H，d，J =6.7 Hz，H-24），0.87（3H，d，J =6.6 Hz，H-11），0.56 （1H，m，H-17b）.13C NMR（CD3OD，150 MHz）：δc174.0（C-1），166.5（C-23），157.5（C-4′），154.8（C-21），151.5（C-6），136.6（C-14），132.1（C-2′），128.7（C-13），128.6（C-1′），119.2（C-22），116.3（C-3′），116.3（C-5′），114.3（C-12），85.5（C-9），71.5（C-7），71.1（C-20），54.9（C-3），49.9（C-8），48.2（C-4），43.2（C-10），42.8（C-19），36.6（C-17），35.3（C-15），34.6（C-16），32.9（C-5），21.4（C-18），20.7（C-24），14.2（C-11）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］數(shù)據(jù)基本一致，故化合物9被確定為Cytochalasin Z5.

4 抗炎活性檢測(cè)結(jié)果

本文對(duì)分離到的化合物單體1～9均進(jìn)行了抗炎活性的檢測(cè)，其中化合物1、2和3有較好的抗炎活性，IC50分別為8.42，22.05和6.26μM，如表1所示.

表1 化合物1～3的抗炎活性Tab.1 The anti-inflammatory activity of compounds 1-3

5 結(jié)語(yǔ)

從湖北貝母內(nèi)生真菌Boeremia exigua中分離得到的9 個(gè)單體化合物，均為Cytochalasan 類化合物.這類化合物的特點(diǎn)是有高度氫化的異吲哚母核，并駢連碳環(huán)或者內(nèi)酯等大環(huán)［15］. 而且Cytochalasan 類化合物有著廣泛的生物活性，例如抗炎，殺線蟲，抗病原微生物，以及細(xì)胞毒等活性［16］.本文報(bào)道了3個(gè)具有良好抗炎活性的Cytochalasan 類化合物的結(jié)構(gòu)，其IC50值分別為8.42、22.05 和6.26 μM，為抗炎藥物的開發(fā)提供了潛在的先導(dǎo)化合物.