沈曉靜，黃璐璐，聶凡秋，王 青，楊俊滔，顏成慧，姜薇薇,

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院，食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南昆明 650201；2.云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明醫(yī)科大學(xué)，云南昆明 650500；3.隆陽(yáng)區(qū)壩灣民族中學(xué)，云南保山 678000）

咖啡為茜草科（Rubiaceae）咖啡屬（Coffea）植物，主要分布在南美、中美洲、非洲和亞洲等國(guó)家，全球超過(guò)80個(gè)國(guó)家種植[1]。根據(jù)《中華本草》記載，咖啡具有醒神、利尿、健胃的功效，主治精神倦怠、食欲不振，常作為醒神、利尿和健胃藥使用?，F(xiàn)代研究表明，咖啡中含有生物堿、酚酸類、黃酮類、萜類等多種活性成分，具有肝臟保護(hù)、神經(jīng)保護(hù)、抗氧化、抗糖尿病等多種藥理活性[2-3]。

我國(guó)咖啡種植以小粒咖啡為主且99%以上分布在云南。云南小?？Х葍?nèi)含物質(zhì)豐富，除咖啡因、綠原酸、葫蘆巴堿等成分外，還含有包括mascarosides I～I(xiàn)I[4]，paniculoside VI[4]、cofaryloside I[4]、villanovane Ⅰ[4]、caffarolides A～H[5]、caffruenol A-B[6]、caffruones A-D[6]和caffruolide A-B[7]等在內(nèi)的一些新型萜類化合物。其中，caffarolides C、D和F被證實(shí)具有一定的體外激活血小板聚集活性[5]；caffruenol AB和caffruolide A-B具有抑制脂多糖誘導(dǎo)的264.7巨噬細(xì)胞NO產(chǎn)生的作用[7]。隨著對(duì)咖啡的深入研究，咖啡的附加值不斷提高。近年來(lái)，基于咖啡副產(chǎn)品中含有豐富的酚酸、類黃酮、萜類、生物堿等生物活性成分，可作為抗氧化、保護(hù)肝臟和神經(jīng)等天然可持續(xù)活性成分來(lái)源，使得咖啡副產(chǎn)品的研究越來(lái)越受到研究者的關(guān)注[8-10]。Campa等報(bào)道了咖啡葉中含有酚類化合物[11]；Chen對(duì)咖啡葉中豐富的生物堿、黃酮、酚酸、萜類等的化學(xué)成分和抗氧化、抗炎、抗菌等藥理活性進(jìn)行了綜述[12]，并研究了咖啡葉加工方式和葉齡對(duì)其化學(xué)成分和活性的影響[13]。另外，付曉萍等[14-15]發(fā)現(xiàn)云南小?？Х裙さ拇痔嵛飳?duì)受損人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞有一定的保護(hù)和恢復(fù)作用，還具有潛在的抗氧化效果，并發(fā)現(xiàn)其中的主要花青素為矢車菊素-3-葡萄糖苷和矢車菊素-3-蕓香糖苷。

咖啡花作為咖啡種植產(chǎn)業(yè)中的主要副產(chǎn)物通常被丟棄。然而，已有的研究發(fā)現(xiàn)咖啡花化學(xué)成分豐富，Stashenko等[16]采用GC-MS分析了小?？Х然ㄖ械膿]發(fā)和半揮發(fā)成分成分，結(jié)果共確定了150個(gè)化合物，以正十五烷含量最高，香葉醇次之。此外，Nguyen等[17]對(duì)咖啡花中的活性成分進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)咖啡花中酚類化合物含量高，因此咖啡花可作為獲取天然抗氧化活性成分的原料。另外，咖啡花中還含有咖啡因、葫蘆巴堿?？Х纫蚓哂薪档突忌窠?jīng)退行性疾病的風(fēng)險(xiǎn)[18-19]；葫蘆巴堿則可預(yù)防糖尿病和腎損傷，同時(shí)還具有治療神經(jīng)退行性疾病的作用[20-21]。Pinheiro等[22]通過(guò)HPLC分析了不同干燥和提取方式下咖啡花中的葫蘆巴堿、綠原酸、沒食子酸和咖啡因4種活性成分的含量，其中以咖啡因和葫蘆巴堿含量最高；并采用ABTS和DPPH實(shí)驗(yàn)評(píng)估了抗氧化活性，證實(shí)了咖啡花具有抗氧化活性并可作為制作茶飲料潛在的原料。目前對(duì)咖啡花的研究報(bào)道尚少，但從已有的報(bào)道可以看出，咖啡花作為潛在的生物活性化合物來(lái)源，具有廣闊的應(yīng)用前景。

多糖（polysaccharides）是由10個(gè)以上單糖經(jīng)糖苷鍵結(jié)合而成的大分子化合物，廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物中。多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，具有不同的構(gòu)象和相對(duì)分子質(zhì)量，以及鏈內(nèi)和鏈間氫鍵的二級(jí)結(jié)構(gòu)?，F(xiàn)代研究表明，多糖具有抗氧化[23-24]、抗衰老[25]、免疫調(diào)節(jié)[26]、抗炎[27]、抗腫瘤[28]等藥理活性。多糖的生物活性與其純度、化學(xué)結(jié)構(gòu)、溶解度等有關(guān)。近年來(lái)，多糖的生物活性成為天然藥物的研究熱點(diǎn)，也是發(fā)掘新型藥物和開發(fā)功能性食品的渠道，因此多糖在醫(yī)藥領(lǐng)域和食品領(lǐng)域具有重要地位。我國(guó)云南是咖啡種植的主要產(chǎn)區(qū)，咖啡花具有潛在的開發(fā)價(jià)值，但是目前對(duì)云南咖啡花的開發(fā)研究較少，咖啡花潛在的價(jià)值未能挖掘。因此本文以云南小?？Х然樘骄繉?duì)象，開展對(duì)其活性多糖的研究，旨在深入挖掘云南小粒咖啡的綜合利用價(jià)值。

本文以多糖得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)采自云南省保山市的咖啡花進(jìn)行多糖提取工藝的優(yōu)化及其抗氧化能力進(jìn)行測(cè)定，為進(jìn)一步的開發(fā)具有生物活性的多糖提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，并為進(jìn)一步開發(fā)和研究云南小?？Х群吞岣咂涓郊又堤峁﹨⒖肌?/p>

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

咖啡花 云南省保山市；無(wú)水乙醇 天津化學(xué)試劑有限公司；蒽酮 純度98.0%，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；濃硫酸、鹽酸 重慶川東化工有限公司；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2,2′-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）、2,4,6-三吡啶基三嗪（TPTZ）、蘆丁 純度98.0%，上海瑞永生物科技有限公司；水溶性維生素E 純度98.0%，合肥博美生物科技有限公司；六水合三氯化鐵 分析純，西隴科學(xué)股份有限公司；過(guò)硫酸鉀 分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠；PBS緩沖液、醋酸鈉緩沖液 廈門海標(biāo)科技有限公司。

FA2104N型電子天平、722-分光光度計(jì) 上海箐華科技有限公司；KQ-250DB超聲儀、SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵 鞏義市予華儀器有限公司；旭曼-1000Y多功能粉碎機(jī) 永康市鉑歐五金制品有限公司；800電動(dòng)離心機(jī) 金壇市富華儀器有限公司；VFD-3000真空冷凍干燥機(jī) 北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 咖啡花多糖的提取 參考鄭婷婷等[29]的方法，并加以修改。將采自云南保山市的咖啡花在室溫下陰干后，采用粉碎機(jī)粉碎并過(guò)80目篩后備用。稱取咖啡花粉末2.0 g，加入20.0 mL純水，浸泡30 min，40 ℃下100 W超聲30 min，冷卻至室溫，經(jīng)真空抽濾后保留濾液。在濾液中加入乙醇至濃度為80%進(jìn)行沉淀，靜置12 h。4000 r/min離心10 min后棄去上清液，沉淀加水溶解后-80 ℃下凍干，得粗多糖。配制5 mg·mL-1的咖啡花多糖溶液，備用。

1.2.2 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備和咖啡花多糖含量的測(cè)定 參考蒽酮-硫酸法[30]繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別配制0.0、25.0、50.0、100.0、150.0和200.0 μg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取不同濃度的上述葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00 mL，加入1.00 mL純水，置于25 mL具塞試管。加入5.0 mL 2.1 mg·mL-1蒽酮-硫酸溶液搖勻，冰水浴冷卻，沸水浴加熱7 min，迅速置于冰水浴中冷卻至室溫。以去離子水作為空白對(duì)照，在625 nm處進(jìn)行比色測(cè)定吸光度A。以無(wú)水葡萄糖含量為橫坐標(biāo)（0.0、25.0、50.0、100.0、150.0、200.0 μg），吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=0.0051X-0.0092（R2=0.9970）（式中：Y為吸光值，X為葡萄糖量，μg）。

精密吸取一定體積上述配制的5 mg/mL的咖啡花多糖溶液于25 mL具塞試管，加入純水補(bǔ)至2.00 mL。加入5.0 mL 2.1 mg·mL-1蒽酮-硫酸溶液搖勻，冰水浴冷卻，沸水浴加熱7 min，迅速置于冰水浴中冷卻至室溫。以去離子水作為空白對(duì)照，在625 nm處進(jìn)行比色測(cè)定吸光度A。根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算咖啡花多糖得率，每個(gè)樣品重復(fù)3次，結(jié)果以平均值表示，計(jì)算公式如下：

式中：X為V體積咖啡花多糖溶液中多糖含量，μg；V為多糖溶液測(cè)定的體積，mL；5為配制的咖啡花多糖溶液濃度5 mg·mL-1；m1為凍干咖啡花粗多糖總質(zhì)量，g；ms為稱取咖啡花樣品的質(zhì)量，g。

1.2.3 單因素實(shí)驗(yàn) 在超聲輔助提取咖啡花多糖的過(guò)程中，影響多糖得率的重要因素主要有超聲溫度、超聲時(shí)間、液料比、超聲功率、浸泡時(shí)間和醇沉濃度，分別對(duì)各個(gè)因素進(jìn)行試驗(yàn)。

超聲溫度選取40、50、60、70、80 ℃五個(gè)水平；超聲時(shí)間選取30、60、90、120、150 min五個(gè)水平；液料比10:1、15:1、20:1、25:1、30:1 mL/g五個(gè)水平；超聲功率選取100、125、150、175、200 W五個(gè)水平；浸泡時(shí)間選取30、60、90、120、150 min五個(gè)水平；乙醇濃度選取75%、80%、85%、90%、95%五個(gè)水平，分別進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)。當(dāng)篩選其中一個(gè)參數(shù)時(shí)，其余因素分別為：超聲溫度40 ℃、超聲時(shí)間30 min、液料比10:1 mL/g、超聲功率 100 W、浸泡時(shí)間30 min以及醇沉濃度80%。

1.2.4 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn) 根據(jù)Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，以咖啡花多糖得率為響應(yīng)變量，從單因素試驗(yàn)結(jié)果中選取3個(gè)多咖啡花多糖得率影響最大的因素，見表1。以咖啡花多糖得率為指標(biāo)優(yōu)化超聲溫度、超聲時(shí)間和超聲功率。

表1 響應(yīng)面分析因素和水平Table 1 Response surface analysis factors and levels

1.2.5 抗氧化能力實(shí)驗(yàn)

1.2.5.1 DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn) 參考文獻(xiàn)[31]描述的方法進(jìn)行DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)。取3.9 mL 0.075 mmol/L DPPH反應(yīng)液與100 μL不同濃度多糖溶液混合。室溫下暗處反應(yīng)30 min，于515 nm下分別測(cè)量吸光值，以蘆丁為陽(yáng)性對(duì)照，DPPH自由基清除率計(jì)算式為：I%=[（A0–As）/A0]×100（式中：As為樣品溶液的吸光度；A0為未加樣品溶液的吸光度），抗氧化活性以50%抑制率（IC50）表示。

1.2.5.2 ABTS+自由基清除實(shí)驗(yàn) 參考文獻(xiàn)[32]描述的方法進(jìn)行ABTS+自由基清除實(shí)驗(yàn)。分別取2 mL的多糖溶液加入到2 mL ABTS+自由基溶液中，均勻混合后，室溫反應(yīng)6 min，測(cè)定734 nm下紫外吸收，蘆丁為陽(yáng)性對(duì)照。ABTS+自由基清除能力計(jì)算公式如下：I（%）=[（A0–As）/A0]×100（式中：As為樣品溶液的吸光度；A0為未加樣品溶液的吸光度）標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過(guò)測(cè)定不同濃度Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制（I%=0.0247C-0.0046，R2=0.9937），樣品的ABTS抗氧化活性表示為mmol Trolox/g。

1.2.5.3 FRAP法 參考文獻(xiàn)[33]描述的方法進(jìn)行FRAP抗氧化能力測(cè)定。取5.0 mL TPTZ、5.0 mL 20 mmol/L FeCl3和50 mL醋酸鈉緩沖溶液（300 mmol/L，pH3.6）配制成FRAP工作液；100 μL樣品與300 μL水和3.0 mL FRAP工作液混合，放置于37 ℃的水浴鍋中反應(yīng)30 min；于595 nm下測(cè)定吸光度。以FeSO4為標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（A=0.572C-0.008，R2=0.9974），蘆丁為陽(yáng)性對(duì)照，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算還原能力，以mmol FeSO4/g多糖表示。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)均重復(fù)三次，取平均值。采用Design Expert 8.0.6軟件進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。超聲溫度對(duì)咖啡花多糖得率的影響：超聲溫度40～80 ℃，多糖得率為1.0048%～1.7982%。在40～70 ℃范圍內(nèi)，咖啡花多糖得率隨超聲溫度的升高而逐漸升高，至70 ℃時(shí)達(dá)到最大，超過(guò)70 ℃后得率開始下降。這可能是由于在高溫條件下咖啡花多糖的結(jié)構(gòu)遭到破壞而造成多糖得率下降，這在文獻(xiàn)[29,34-35]也有相似報(bào)道。超聲溫度選擇為70 ℃。

圖1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig.1 Results of single factor experiments

超聲時(shí)間對(duì)咖啡花多糖得率的影響：超聲時(shí)間30～150 min，多糖得率為1.0369%～1.5853%，多糖得率隨超聲時(shí)間的增加而升高，至90 min時(shí)達(dá)到最大，90 min后，隨超聲時(shí)間的增加，得率開始下降。這是由于短時(shí)間的超聲提取不利于多糖的充分溶解，而長(zhǎng)時(shí)間的超聲提取又會(huì)使多糖降解反而導(dǎo)致得率下降，這在文獻(xiàn)[29,34-35]也有相似報(bào)道。因此，超聲時(shí)間選擇為90 min。

液料比對(duì)咖啡花多糖得率的影響：料液比對(duì)多糖得率的影響較小，液料比10:1～30:1 mL/g時(shí)多糖得率為1.1790%～1.3357%。多糖得率隨液料比的升高而升高，至25:1 mL/g時(shí)達(dá)到最大，25:1 mL/g后，隨液料比的升高，得率反而下降。溶劑較少會(huì)導(dǎo)致多糖不能充分的溶出而使多糖得率較低；較多的溶劑又會(huì)使多糖溶解而不易沉淀析出，同時(shí)也會(huì)因溶劑吸收超聲波輻射而導(dǎo)致得率降低，這在文獻(xiàn)[29,34-35]也有相似報(bào)道?？紤]到液料比對(duì)得率的影響較小，為了節(jié)省試劑用量，因此，液料比選擇為10:1 mL/g。

超聲功率對(duì)咖啡花多糖得率的影響：超聲功率選取100～200 W，多糖得率為1.1185%～1.8583%，多糖得率隨超聲功率的增大而升高，至175 W時(shí)達(dá)到最大，175 W后，隨超聲功率的增大，得率反而下降。超聲功率增加可以有效地破壞細(xì)胞和組織使多糖溶解于溶劑中，因此增大超聲功率有利于多糖的析出；但是，較大的超聲波所產(chǎn)生的破碎效應(yīng)和熱效應(yīng)同時(shí)會(huì)增加咖啡花中的雜質(zhì)溶出，熱效應(yīng)又使多糖成分破壞從而引起多糖得率降低，這在文獻(xiàn)[36-37]也有相似報(bào)道。因此，超聲功率選擇為175 W。

浸泡時(shí)間對(duì)咖啡花多糖得率的影響：浸泡時(shí)間對(duì)多糖得率的影響較小，浸泡時(shí)間30～150 min，多糖得率為1.1827%～1.4609%。30～90 min范圍內(nèi)，多糖得率隨浸泡時(shí)間的增加而升高，至90 min時(shí)達(dá)到最大，90 min后，隨浸泡時(shí)間的增加，得率略有下降，且趨于平緩。浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)可利于多糖在超聲過(guò)程中的析出，并減少能耗。但是過(guò)長(zhǎng)的浸泡并不能帶來(lái)較高的得率，過(guò)長(zhǎng)的浸泡也會(huì)使其他成分析出影響多糖得率。這與文獻(xiàn)[38]報(bào)道相似?？紤]到浸泡時(shí)間的影響較小，為了節(jié)省時(shí)間，浸泡時(shí)間選擇為30 min。

醇沉濃度對(duì)咖啡花多糖得率的影響：醇沉濃度對(duì)多糖得率的影響較小，醇沉濃度75%～95%，多糖得率為0.9703%～1.2806%。多糖得率隨乙醇濃度的升高而升高，至85%時(shí)達(dá)到最大，85%后，隨乙醇濃度的升高，得率反而下降。水提醇沉是利用多糖不溶于醇的性質(zhì)而使其沉淀析出。當(dāng)隨著乙醇的加入量增加，多糖因不溶于乙醇而沉淀析出，得率增大，當(dāng)醇沉濃度超過(guò)85%以后，并不能提高多糖得率，反而造成試劑的浪費(fèi)。這與文獻(xiàn)[38]報(bào)道相似。為簡(jiǎn)化操作，本文采用直接加入乙醇調(diào)節(jié)醇濃度的方法進(jìn)行沉淀，同時(shí)，由于80%與85%多糖得率差別不大，但可節(jié)約試劑減少浪費(fèi)。因此，醇沉濃度選擇為80%。

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果 超聲溫度、超聲時(shí)間和超聲功率影響較大，因此在上述單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，對(duì)超聲溫度、超聲時(shí)間和超聲功率三個(gè)條件進(jìn)行響應(yīng)面法優(yōu)化，結(jié)果見表2。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Design and results of response surface experiment

以多糖得率（Y）為考察響應(yīng)指標(biāo)，建立其與超聲溫度、超聲時(shí)間和超聲功率三個(gè)因素的回歸模型，得到二次回歸方程為：

2.2.2 方差的顯著性檢驗(yàn) 對(duì)上述回歸模型進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果見表3。

表3 多糖得率方差分析結(jié)果Table 3 Results of variance analysis of yield of polysaccharides

由表3方差分析結(jié)果得，總模型顯著（P＜0.0001），該模型達(dá)到極顯著水平，表明不同因素間的差異顯著；根據(jù)回歸方程一次項(xiàng)系數(shù)絕對(duì)值大小可知，各因素對(duì)總多糖得率的影響順序?yàn)椋篈＞B＞C，即超聲溫度＞超聲時(shí)間＞超聲功率。失擬項(xiàng)P=0.5764＞0.05，失擬項(xiàng)檢驗(yàn)不顯著，說(shuō)明未知因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響較小，殘項(xiàng)主要由隨機(jī)誤差引起，表明模型選擇適當(dāng)正確。AB的影響顯著（P＜0.05），A2、B2、C2的影響極顯著（P＜0.01），在整個(gè)模型中，模型中的調(diào)整系數(shù)R2Adj=0.9277，說(shuō)明92.77%的響應(yīng)值變化可以通過(guò)模型進(jìn)行解釋，決定系數(shù)R2=0.9684，表明模型可信度高，且模型與實(shí)驗(yàn)擬合良好，可用此模型進(jìn)行分析與預(yù)測(cè)[39-42]。

2.2.3 響應(yīng)曲面及等高線 各因素交互作用對(duì)咖啡花多糖得率影響的響應(yīng)面圖見圖2。由超聲溫度和超聲時(shí)間兩者的交互作用可知，二者交互作用顯著；當(dāng)超聲溫度不變時(shí)，咖啡花多糖的得率隨超聲時(shí)間的增加先上升后下降；當(dāng)超聲時(shí)間不變時(shí)，咖啡花多糖得率隨超聲溫度的升高先增大后減小。由超聲溫度和超聲功率兩者的交互作用可知，當(dāng)超聲溫度不變時(shí)，咖啡花多糖的得率隨超聲功率的增加先上升后下降；當(dāng)超聲功率不變時(shí)，咖啡花多糖得率隨超聲溫度的升高先增大后減小。由超聲時(shí)間和超聲功率兩者的交互作用可知，當(dāng)超聲時(shí)間不變時(shí)，咖啡花多糖的得率隨超聲功率的增加先上升后下降；當(dāng)超聲功率不變時(shí)，咖啡花多糖得率隨超聲時(shí)間的升高先增大后減小。

圖2 各因素交互作用對(duì)多糖得率影響的三維曲面和等高線Fig.2 Three-dimensional surface plot and contour map for the interactive effects of four extraction parameters on yield of polysaccharides

因此，以多糖得率作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)對(duì)超聲時(shí)間、超聲溫度和超聲功率三個(gè)條件的響應(yīng)面法優(yōu)化結(jié)果為：超聲溫度69.56 ℃、超聲時(shí)間92.99 min和超聲功率174.01 W，預(yù)測(cè)此條件下2.290%。根據(jù)實(shí)際情況操作選取超聲溫度69.5 ℃、超聲時(shí)間93.00 min和超聲功率175W、浸泡時(shí)間30 min、液料比10:1 mL/g和乙醇濃度80%進(jìn)行4次平行試驗(yàn)，平均得率為2.292%±0.061%?；窘咏囼?yàn)所獲得的理論值，表明預(yù)測(cè)值和真實(shí)值之間有很好的擬合性，因此本研究中利用響應(yīng)面獲得的優(yōu)化工藝參數(shù)準(zhǔn)確可靠[43]。

2.3 抗氧化能力實(shí)驗(yàn)結(jié)果

DPPH實(shí)驗(yàn)是一種高效、靈敏的植物抗氧化能力評(píng)價(jià)模型，被測(cè)樣品的自由基清除能力與其潛在的提供質(zhì)子能力相關(guān)；ABTS實(shí)驗(yàn)被廣泛用于估計(jì)植物樣品的抗氧化能力，其可以測(cè)試樣品中的親脂性和親水性成分的抗氧化活性；FRAP法通過(guò)將Fe3+-TPTZ還原為Fe2+-TPTZ來(lái)評(píng)估天然產(chǎn)物的還原能力[44-45]?？Х然ǘ嗵强寡趸瘜?shí)驗(yàn)結(jié)果見表4，咖啡花多糖對(duì)DPPH自由基、ABTS+自由基均表現(xiàn)出了一定的抗氧化活性，但與蘆丁相比，其抗氧化活性較低。

表4 咖啡花多糖的抗氧化活性Table 4 Antioxidant activities of polysaccharides from coffee flowers

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以云南小?？Х然樵希捎贸曒o助提取云南小?？Х然ǘ嗵牵ㄟ^(guò)對(duì)超聲時(shí)間、超聲溫度、液料比、超神功率、浸泡時(shí)間和醇沉濃度6個(gè)因素考察的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)超聲時(shí)間、超聲溫度和超聲功率對(duì)咖啡花多糖的提取具有重要的影響。再通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化超聲時(shí)間、超聲溫度和超聲功率，確定咖啡花多糖的最佳工藝條件為：超聲溫度69.5 ℃，超聲時(shí)間93 min，超聲功率175 W，液料比10:1 mL/g，浸泡時(shí)間30 min，乙醇濃度80%。該條件下多糖得率為2.292%±0.061%。該方法能有效提高咖啡花多糖的得率，同時(shí)縮短了提取時(shí)間和減少乙醇的使用量?？寡趸瘜?shí)驗(yàn)結(jié)果表明，咖啡花多糖顯示弱抗氧化能力。本研究將為進(jìn)一步的開展咖啡花多糖分離純化以及活性功能研究提供參考，也將為咖啡的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)和支撐。