李春秀，李勛蘭，梁國(guó)魯，向素瓊,*，韓國(guó)輝,*

（1.重慶市農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)研究所，重慶 401329；2.西南大學(xué)園藝園林學(xué)院，重慶 400716）

香氣和營(yíng)養(yǎng)是重要的果實(shí)品質(zhì)，也是影響水果鮮食和加工質(zhì)量的重要因素[1]。香氣由大量揮發(fā)性有機(jī)化合物決定，柑橘果實(shí)中富含單萜、倍半萜及其含氧衍生物，還含有少量的醛、酯、醇和酮[2]。前人已對(duì)部分檸檬品種果實(shí)香氣成分、果皮精油成分等進(jìn)行了一些研究[3-6]。 但是關(guān)于抗病檸檬果實(shí)成熟過(guò)程中果皮香氣成分的變化還鮮見(jiàn)報(bào)道。酚類(lèi)物質(zhì)被認(rèn)為是重要的營(yíng)養(yǎng)化合物，因?yàn)樗鼈兪菨撛诳寡趸瘎┑闹饕獊?lái)源，可預(yù)防一些常見(jiàn)疾病，如心血管疾病、癌癥和其他與年齡有關(guān)的退行性疾病[1]。Xi Wanpeng等[7]研究檸檬果實(shí)不同組織中酚類(lèi)物質(zhì)的差異，結(jié)果表明不同果實(shí)組織酚類(lèi)含量順序?yàn)楣ぃ救竟猓痉N子＞果汁。高煒等[8]比較常見(jiàn)的黃檸檬類(lèi)和青檸檬類(lèi)果實(shí)中酚類(lèi)物質(zhì)的差異，結(jié)果表明青檸檬果皮中酚酸總量最高，尤力克檸檬果皮中類(lèi)黃酮總量最高。Dong Xinying等[9]研究尤力克檸檬果實(shí)酚類(lèi)物質(zhì)的周年變化，結(jié)果表明果皮中酚酸總量在6月份最高，類(lèi)黃酮總量在8月份最高。抗病是柑橘重要的育種目標(biāo)，抗病品種可以減少化學(xué)農(nóng)藥殘留對(duì)人體健康和環(huán)境的不利影響，有利于促進(jìn)柑橘產(chǎn)業(yè)綠色發(fā)展[10]。黃脈病是一種危害檸檬的主要病毒性病害，目前已對(duì)我國(guó)檸檬產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展造成嚴(yán)重威脅，篩選培育抗耐黃脈病檸檬種質(zhì)是解決這一問(wèn)題的根本途徑。香水檸檬（Citrus limon(L.) Burm.F.）和泰吹檸檬（Citrus jambhiriLush.）是已篩選出對(duì)黃脈病具有明顯抗耐性的優(yōu)異檸檬種質(zhì)。香水檸檬原產(chǎn)東南亞，其果型修長(zhǎng)，大而無(wú)核，果皮味清甜，香氣濃郁；泰吹檸檬原產(chǎn)印度，常作藥用。關(guān)于上述2個(gè)檸檬品種果實(shí)中植物化學(xué)成分的研究還鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究以香水檸檬和泰吹檸檬為材料，比較分析其不同成熟階段果皮中揮發(fā)性成分和酚類(lèi)物質(zhì)含量，為后續(xù)檸檬果實(shí)資源利用和抗病種質(zhì)創(chuàng)新提供支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

以香水檸檬和泰吹檸檬果實(shí)的果皮為實(shí)驗(yàn)材料，于2019年采自重慶市農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)資源圃，果園面積為1.33 hm2，種植果樹(shù)900余株，果園栽培管理水平一致，于花后130～186 d，每14 d取一次果，每次隨機(jī)取15個(gè)果實(shí)，共采摘5 次。采果時(shí)選擇生長(zhǎng)一致植株，從東、南、西、北4個(gè)方向選取大小均勻、果型正常的健康果實(shí)。檸檬采摘后，洗凈，四分法切開(kāi)果實(shí)，分離果皮和果肉。果皮在液氮中研磨成粉末，于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

環(huán)己酮、C7～C30正構(gòu)烷烴混標(biāo)、正己烷、甲醇、甲酸（均為色譜純） 美國(guó)Sigma公司；氯化鈉（分析純） 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；沒(méi)食子酸、原兒茶酸、綠原酸、咖啡酸、橙皮素、橙皮苷、圣草酚、蘆丁、木犀草素、香葉木素、甜橙黃酮、川陳皮素、 橘皮素 成都克洛瑪生物科技有限公司；圣草次苷、蕓香柚皮苷、花旗松素 上海源葉生物科技有限公司；0.22 μm微孔有機(jī)濾膜 上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

2010 Qplus氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gas chromatographymass spectrometry，GC-MS）儀、AOC-5000 Plus自動(dòng)進(jìn)樣器、LC20-AD高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀、Shim-pack GIST-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm） 日本島津公司；Rxi-5MS石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm） 美國(guó) Restek公司；50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取頭 美國(guó) Supelco公司；頂空瓶、聚四氟乙烯隔墊密封瓶蓋 上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；KQ5200DE超聲波清洗器 江蘇昆山市超聲儀器有限公司；3K15高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Sigma公司。

1.3 方法

1.3.1 揮發(fā)物質(zhì)的測(cè)定

稱(chēng)取1 g果皮粉末加入5 mL飽和氯化鈉溶液于20 mL頂空瓶中混勻，加入20 μL正己烷（內(nèi)含266 μg環(huán)己酮），用聚四氟乙烯隔墊密封瓶蓋旋緊備用，每份樣品3個(gè)平行。揮發(fā)物通過(guò)固相微萃?。╯olid-phase microextraction，SPME）方法富集，實(shí)驗(yàn)前萃取頭250 ℃老化處理1 h，平衡時(shí)間6.21 min，萃取溫度42 ℃，萃取時(shí)間45 min，解吸附時(shí)間3.4 min。

GC條件：Rxi-5MS石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；程序升溫：34 ℃保持2 min，以5 ℃/min升至100 ℃，以3 ℃/min升至110 ℃，以10 ℃/min升至230 ℃，保持2 min；進(jìn)樣口溫度230 ℃，分流比50∶1；載氣氦氣，流速1.3 mL/min[11]。

MS條件：電子電離，電子能量70 eV；傳輸線(xiàn)溫度250 ℃；離子源溫度200 ℃；質(zhì)量掃描范圍m/z55～500。

通過(guò)將待測(cè)化合物的質(zhì)譜圖與NIST 2008譜庫(kù)的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖對(duì)照，并與文獻(xiàn)[3,12-15]中相應(yīng)化合物的保留指數(shù)比較，進(jìn)行定性分析。化合物含量通過(guò)內(nèi)標(biāo)法計(jì)算[3]，結(jié)果以鮮質(zhì)量計(jì)，用μg/g表示。

1.3.2 香氣值的計(jì)算

參照Z(yǔ)hang Wenlin等[2]的方法，按下式計(jì)算：

1.3.3 酚類(lèi)物質(zhì)的測(cè)定

參照Chen Jiajing等[16]的方法，稱(chēng)取0.2 g檸檬果皮粉樣品加入6 mL體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶液，40 ℃超聲60 min，4 ℃、4 000 r/min離心15 min，取上清液，用80%甲醇溶液定容到6 mL，每份樣品重復(fù)提取3 次，HPLC進(jìn)樣前經(jīng)0.22 μm微孔有機(jī)濾膜過(guò)濾。

HPLC條件：色譜柱為Shim-pack GIST-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相A體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸溶液；流動(dòng)相B甲醇；梯度洗脫程序：0～20 min，63%～50% A、37%～50% B；20～35 min，50%～20% A、50%～80% B；35～40 min，20%～0% A、80%～100% B；40～50 min，0% A、100% B；50～60 min，63% A、37% B，流速 0.7 mL/min；柱溫25 ℃；進(jìn)樣體積10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)為黃烷酮283 nm，黃酮、多甲氧基黃酮330 nm，黃酮醇367 nm。通過(guò)比較樣品中各檢測(cè)峰和標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間及光譜特性進(jìn)行定性，使用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行定量[17]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有樣品均設(shè)3個(gè)重復(fù)，結(jié)果以±s表示。采用Excel 2010和SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 香水檸檬和泰吹檸檬成熟過(guò)程中果皮揮發(fā)性成分及含量

香水檸檬和泰吹檸檬果皮香氣成分的GC-MS總離子流圖如圖1所示。2個(gè)品種檸檬在5個(gè)成熟階段共檢測(cè)出86種揮發(fā)性成分，分為6 大類(lèi)，包括18種單萜、28種倍半萜、10種醛類(lèi)、20種醇類(lèi)、6種酯類(lèi)和4種酮類(lèi)（表1）。同一品種不同成熟階段檢測(cè)出的揮發(fā)性成分種類(lèi)數(shù)差異較?。幌闼畽幟驶ê?30～186 d，果皮中檢出61～70種揮發(fā)性成分；泰吹檸檬花后130～186 d，果皮中檢出45～48種揮發(fā)性成分。果實(shí)成熟過(guò)程中，揮發(fā)性成分總含量發(fā)生顯著變化，隨著果實(shí)逐步成熟，2個(gè)品種檸檬揮發(fā)性成分總含量均呈先下降后上升的趨勢(shì)；香水檸檬果皮中揮發(fā)性成分總含量在花后144 d下降至最低（19 620.8 μg/g），花后158 d上升至最高（52 460.6 μg/g）， 花后158 d以后香水檸檬果皮揮發(fā)性成分總含量無(wú)顯著差異；泰吹檸檬果皮中揮發(fā)性成分總含量在花后158 d下降至最低（30 973.6 μg/g），花后186 d上升至最高（56 243.5 μg/g）。2個(gè)品種檸檬5個(gè)發(fā)育階段果皮中含量最高的成分均是D-檸檬烯，其含量在2個(gè)品種果實(shí)成熟過(guò)程中均發(fā)生顯著變化，花后130、144、158、172 d和186 d香水檸檬果皮中D-檸檬烯含量分別為21 305.6、9 444.8、35 100.1、32 399.2 μg/g和26 452.3 μg/g，泰吹檸檬果皮中D-檸檬烯含量分別為30 040.1、30 440.0、23 634.9、23 653 μg/g和36 341.4 μg/g。香水檸檬果皮中含量較高的成分還有香葉醛、橙花醛、癸醛、β-紅沒(méi)藥烯、(E)-α-香檸檬烯、(Z)-β-羅勒烯和(E)-β-羅勒烯，泰吹檸檬果皮中其他含量較高的成分為檜烯、β-月桂烯、γ-松油烯、香茅醛、4-萜烯醇、α-松油醇和紫蘇醇。

圖1 香水檸檬和泰吹檸檬果皮香氣成分總離子流圖Fig. 1 Total ion current chromatograms of aroma components from peels of two lemon cultivars

檸檬果皮中揮發(fā)性成分主要為萜烯類(lèi)、醇類(lèi)和醛類(lèi)等，各類(lèi)化合物的含量因品種和成熟階段不同而變化（圖2、表1）。萜烯類(lèi)是檸檬果皮中含量最高的香氣成分，萜烯類(lèi)包括單萜和倍半萜，在2個(gè)品種檸檬中單萜和倍半萜分別占揮發(fā)性成分總量的51.6%～89.1%和1.9%～8.5%，除花后158 d和172 d外，香水檸檬果皮中單萜含量均低于泰吹檸檬，而倍半萜含量均高于泰吹檸檬。成熟期對(duì)2個(gè)品種檸檬果皮中單萜含量有顯著影響，隨果實(shí)成熟，香水檸檬單萜含量呈明顯的先下降后上升再下降變化，泰吹檸檬單萜含量呈先下降后上升的趨勢(shì)，D-檸檬烯是2種檸檬果皮中含量最豐富的單萜；成熟期對(duì)香水檸檬果皮中倍半萜含量有顯著影響，隨果實(shí)成熟，香水檸檬果皮中倍半萜含量呈先下降后上升再下降變化，其含量在花后158 d最高（4 451.2 μg/g），而泰吹檸檬果實(shí)成熟過(guò)程中倍半萜含量無(wú)顯著變化，2個(gè)檸檬品種果皮中主要的倍半萜均為β-石竹烯、(E)-α-香檸檬烯和β-紅沒(méi)藥烯。醛類(lèi)和醇類(lèi)是檸檬果皮中含量最豐富的含氧化合物，在2個(gè)品種檸檬中醛類(lèi)和醇類(lèi)含量分別占揮發(fā)性成分總量的3.1%～36.7%和1.6%～7.0%，香水檸檬果皮中醛類(lèi)含量為泰吹檸檬的3.5～11.1 倍，而醇類(lèi)含量?jī)H為泰吹檸檬的28.2%～48.0%。果實(shí)成熟過(guò)程中2個(gè)品種檸檬果皮醛類(lèi)含量均發(fā)生顯著變化，隨果實(shí)成熟，香水檸檬果皮中醛類(lèi)含量整體呈上升趨勢(shì)，其含量在花后186 d達(dá)到最高（9 869.3 μg/g），而泰吹檸檬果皮中醛類(lèi)的含量呈先下降后上升的趨勢(shì)；不同成熟期香水檸檬果皮中醇類(lèi)含量差異不顯著，泰吹檸檬果皮中醇類(lèi)含量在花后158 d顯著下降，花后186 d顯著上升。檸檬果皮中酯類(lèi)和酮類(lèi)的含量均較低，在2個(gè)品種檸檬中酯類(lèi)和酮類(lèi)含量占揮發(fā)性成分總量的比例均低于1%；除花后186 d外，香水檸檬果皮中酯類(lèi)的含量均高于泰吹檸檬，香水檸檬果皮中未檢出酮類(lèi)，而泰吹檸檬果皮中酮類(lèi)含量為4.8～362 μg/g。成熟期對(duì)2個(gè)品種檸檬果皮中酯類(lèi)和酮類(lèi)的含量有顯著影響，隨果實(shí)成熟，香水檸檬果皮中酯類(lèi)含量呈先上升后下降的趨勢(shì)；泰吹檸檬果實(shí)成熟過(guò)程中酯類(lèi)和酮類(lèi)含量均呈先下降后上升的趨勢(shì)。

圖2 不同成熟階段檸檬果皮揮發(fā)性化合物類(lèi)別和含量Fig. 2 Changes in types and contents of volatile components in peels during lemon fruit maturation

表1 不同成熟階段香水檸檬和泰吹檸檬果實(shí)果皮揮發(fā)性成分（鮮質(zhì)量）Table 1 Volatile component contents in peels of two lemon cultivars during maturation (on a fresh mass basis )μg/g

續(xù)表1 μg/g

2.2 香水檸檬和泰吹檸檬成熟過(guò)程中特征香氣成分

根據(jù)現(xiàn)有報(bào)道列出檸檬果皮香氣成分的香氣閾值，并計(jì)算2個(gè)品種檸檬不同成熟階段果皮的香氣值，將香氣值大于1的香氣成分確定為檸檬的特征香氣成分（表2）。香水檸檬和泰吹檸檬果皮中分別鑒定出26種和22種特征香氣成分，2種檸檬果皮中共有的特征香氣成分有19種，香水檸檬果皮特有的特征香氣成分為辛醛、十二醛、薰衣草醇、香芹醇、橙花醇、香葉醇和乙酸香葉酯，泰吹檸檬果皮特有的特征香氣成分為紫蘇醇、香茅醇和乙酸香茅酯。香氣值可以評(píng)價(jià)香氣成分對(duì)樣品整體香氣的貢獻(xiàn)，特征香氣成分的香氣值越大，對(duì)樣品香氣的貢獻(xiàn)越大。香氣值較高的12種特征香氣成分包括癸醛（香氣值489 500.0～900 550.0）、十二醛（香氣值142 336.4～399 345.8）、香葉醛（香氣值30 721.0～39 774.0）、芳樟醇（香氣值25 475.0～36 425.0）、橙花醛（香氣值19 190.0～25 325.0）、(E)-β-羅勒烯（香氣值4 941.2～32 223.5）、(Z)-β-羅勒烯（香氣值4 438.3～25 578.3）、β-石竹烯（香氣值1 842.2～9 050.0）、β-月桂烯（香氣值1 303.0～8 087.9）、乙酸香葉酯（香氣值2 511.1～7 522.2）、辛醛（香氣值2 046.0～4 801.0）和壬醛（香氣值1 646.0～3 267.0），對(duì)香水檸檬果皮的整體香氣貢獻(xiàn)較大。癸醛（香氣值43 400.0～80 650.0）、芳樟醇（香氣值37 000.0～65 125.0）、β-月桂烯（香氣值6 520.2～27 185.9）、香茅醛（香氣值5 782.6～18 402.2）、乙酸香茅酯（香氣值2 029.9～8 931.6）、γ-松油烯（香氣值1 002.3～4 518.5）、D-檸檬烯（香氣值1 777.1～2 732.4）、香茅醇（香氣值1 271.0～2 516.1）和β-石竹烯（香氣值1 496.9～1 673.4），對(duì)泰吹檸檬果皮的整體香氣貢獻(xiàn)較大。

表2 檸檬果實(shí)成熟過(guò)程中特征香氣成分的香氣值Table 2 Odor units of character impact components in peels during lemon fruit development

香水檸檬果皮中(E)-β-羅勒烯和(Z)-β-羅勒烯的香氣值遠(yuǎn)高于其他萜烯類(lèi)，D-檸檬烯雖然含量最高但其香氣值僅為710.1～2 639.1，香水檸檬果皮中(E)-β-羅勒烯和(Z)-β-羅勒烯的香氣值在花后186 d最高，D-檸檬烯的香氣值在花后158 d最高。泰吹檸檬果皮中香氣值最高的萜烯類(lèi)為β-月桂烯，其香氣值在花后186 d達(dá)到最高。檸檬果皮香氣成分中醛類(lèi)化合物的香氣值最高，對(duì)檸檬果實(shí)整體香氣貢獻(xiàn)最大。特征香氣成分中醛類(lèi)化合物有7種，包括3種萜烯醛（香茅醛、橙花醛和香葉醛）和4種脂肪醛（辛醛、壬醛、癸醛和十二醛），其中癸醛的香氣值最高，2個(gè)品種檸檬果皮中癸醛的香氣值均在花后144 d下降，香水檸檬花后144 d后癸醛香氣值持續(xù)上升，而泰吹檸檬花后144～172 d癸醛香氣值變化不大，花后172 d后急劇上升，2個(gè)品種癸醛香氣值均在花后186 d上升至最高。除香茅醛外，香水檸檬果皮中其他醛類(lèi)化合物的香氣值均高于泰吹檸檬。特征香氣成分中醇類(lèi)化合物主要是萜烯醇，其中芳樟醇的香氣值最高，隨果實(shí)成熟，

香水檸檬果皮中芳樟醇香氣值持續(xù)上升，而泰吹檸檬在花后158 d降至最低后開(kāi)始逐漸上升，香水檸檬和泰吹檸檬果皮中芳樟醇香氣值均在花后186 d達(dá)到最高，分別為36 425.0和65 125.0。特征香氣成分中酯類(lèi)化合物有2種，香水檸檬和泰吹檸檬果皮中各含1種，分別為乙酸香葉酯和乙酸香茅酯，香水檸檬果皮中乙酸香葉酯香氣值在花后172 d最高，泰吹檸檬果皮中乙酸香茅酯香氣值在花后186 d最高。

2.3 2個(gè)檸檬品種成熟過(guò)程中的酚類(lèi)成分

本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了檸檬果實(shí)中16種酚類(lèi)成分，包括4種酚酸、7種黃烷酮、2種黃酮和3種多甲氧基黃酮（圖3、表3）。4種酚酸在2種檸檬果皮中均檢出，分別為沒(méi)食子酸、原兒茶酸、綠原酸和咖啡酸，其中原兒茶酸、綠原酸和咖啡酸為主要的酚酸，沒(méi)食子酸含量較低。除綠原酸外，香水檸檬其他3種酚酸的含量均高于泰吹檸檬，而2種檸檬果皮酚酸總量差異不大。隨果實(shí)成熟，酚酸總量呈下降趨勢(shì)，香水檸檬酚酸總量由511.56 μg/g下降到330.45 μg/g，泰吹檸檬酚酸總量由515.47 μg/g下降到399.81 μg/g。

圖3 16種酚類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖Fig. 3 HPLC chromatograms of 16 phenolic standards

表3 不同成熟階段檸檬果皮酚類(lèi)成分（鮮質(zhì)量）Table 3 Phenolic contents in peels of two lemon cultivars during maturation (on a fresh mass basis)μg/g

黃烷酮中圣草次苷、蕓香柚皮苷、橙皮苷和蘆丁在2個(gè)品種檸檬果皮中均檢出，花旗松素和橙皮素僅在泰吹檸檬成熟早期果皮中檢出，2個(gè)品種檸檬果皮均未檢出圣草酚。泰吹檸檬果皮中圣草次苷、蕓香柚皮苷、橙皮苷和蘆丁的含量均高于香水檸檬，橙皮苷是2種檸檬果皮中含量最豐富的黃烷酮，泰吹檸檬果皮中橙皮苷含量為香水檸檬的7.57～18.70 倍。果實(shí)成熟過(guò)程中2個(gè)品種檸檬果皮中橙皮苷的含量均發(fā)生顯著變化，香水檸檬果皮中橙皮苷的含量呈先下降后上升再下降的趨勢(shì)，而泰吹檸檬果皮成熟過(guò)程中橙皮苷含量呈下降趨勢(shì)。2種黃酮中，木犀草素含量較豐富，香葉木素含量較低。香水檸檬果皮中香葉木素含量較高，泰吹檸檬果皮中木犀草素含量較高。果實(shí)成熟過(guò)程中，香水檸檬果皮木犀草素含量變化不顯著，而泰吹檸檬果實(shí)成熟過(guò)程中果皮中木犀草素含量顯著下降。3種多甲氧基黃酮分別為甜橙黃酮、川陳皮素和橘皮素，均在泰吹檸檬果皮中檢出，而香水檸檬果皮中未檢出甜橙黃酮。橘皮素是香水檸檬果皮中含量最高的多甲氧基黃酮，泰吹檸檬果實(shí)中含量最高的多甲氧基黃酮為川陳皮素，泰吹檸檬果皮中3種多甲氧基黃酮含量均明顯高于香水檸檬，泰吹檸檬果皮中多甲氧基黃酮總量為香水檸檬的20.94～118.75 倍；果實(shí)成熟過(guò)程中，香水檸檬果皮川陳皮素和橘皮素含量在花后130～172 d保持穩(wěn)定，花后186 d顯著下降，泰吹檸檬果皮甜橙黃酮、川陳皮素和橘皮素含量在成熟前期均顯著下降，花后178 d以后無(wú)顯著變化。泰吹檸檬果皮中類(lèi)黃酮總量遠(yuǎn)高于香水檸檬，果實(shí)成熟過(guò)程中，香水檸檬類(lèi)黃酮總量呈波動(dòng)變化，其含量在花后186 d顯著下降，泰吹檸檬果皮中類(lèi)黃酮總量一直呈下降的趨勢(shì)。

3 討 論

3.1 檸檬成熟過(guò)程中香氣成分的變化

大多數(shù)水果其未成熟階段果實(shí)中主要的香氣成分為醇類(lèi)和醛類(lèi)，而成熟階段果實(shí)中主要的香氣成分轉(zhuǎn)變?yōu)轷ヮ?lèi)和酮類(lèi)[18]。如草莓未成熟果實(shí)中主要的香氣成分為C6醛類(lèi)，而1/3紅和全紅果實(shí)中主要的香氣成分為呋喃酮和酯類(lèi)[19]。杏果實(shí)發(fā)育早期果皮中醛類(lèi)和醇類(lèi)含量最豐富，占果皮香氣成分總量的58%～81%，隨果實(shí)發(fā)育和成熟，醛類(lèi)和醇類(lèi)含量大量下降，酮類(lèi)含量顯著上升，果實(shí)成熟時(shí)，果皮中酮類(lèi)含量占香氣成分總量的59%以上[20]。也有一些果實(shí)發(fā)育過(guò)程中以一類(lèi)化合物占優(yōu)勢(shì)，如不同成熟度芒果果皮中含量最高的香氣成分均為萜烯類(lèi)[21]。本研究結(jié)果也顯示不同發(fā)育階段檸檬果皮中主要的香氣成分均為萜烯類(lèi)。萜烯類(lèi)化合物中以單萜烯含量最豐富，與Settanni等[22]的研究結(jié)果一致。隨果實(shí)成熟，香水檸檬單萜含量呈明顯的先下降后上升再下降變化，泰吹檸檬果皮中單萜含量呈先下降后上升的趨勢(shì)，與Soumaya等[23]的研究結(jié)果一致。香水檸檬果皮中倍半萜含量變化與單帖含量變化相同，泰吹檸檬果皮中倍半萜含量在果實(shí)成熟中并沒(méi)有顯著變化。Ledesma-Escobar等[24]的研究結(jié)果則顯示波斯青檸果實(shí)成熟過(guò)程中倍半萜含量呈下降趨勢(shì)，不同檸檬果皮中倍半萜含量隨果實(shí)成熟變化的趨勢(shì)不同，可能與其自身倍半萜合成代謝差異有關(guān)。在本研究中香水檸檬果皮中醛類(lèi)隨果實(shí)成熟進(jìn)行呈上升的趨勢(shì)，是與其果實(shí)成熟相關(guān)的香氣組分，該結(jié)果與Hijaz[25]、Yi Lunzhao[26]等的研究結(jié)果基本一致。香水檸檬和泰吹檸檬果皮的特征香氣成分主要為萜類(lèi)、醛類(lèi)、醇類(lèi)和酯類(lèi)，與Zhang Wenlin等[2]的研究結(jié)果相同，各類(lèi)特征香氣成分中醛類(lèi)的香氣值最高，與楊榮華[27]的研究結(jié)果相同。癸醛是2個(gè)品種檸檬果皮中香氣值最高的特征香氣成分，癸醛具有柑橘味和甜香味[12]，2個(gè)品種檸檬果皮癸醛香氣值均在花后186 d上升至最高，對(duì)2個(gè)品種檸檬果皮香味貢獻(xiàn)最大，香水檸檬果皮中香氣值其次的成分依次為十二醛、香葉醛、芳樟醇和橙花醛，分別具有脂肪香味、柑橘味、花香味和檸檬味[2,12]，泰吹檸檬果皮中香氣值其次的成分依次為芳樟醇、香茅醛、β-月桂烯和乙酸香茅酯，分別具有花香味、檸檬味、脂香味和果香味[15]，這些特征香氣成分的香氣值均在香水檸檬和泰吹檸檬花后172～186 d果皮中達(dá)到最高，對(duì)2個(gè)品種檸檬果皮香味也具有重要貢獻(xiàn)。香水檸檬和泰吹檸檬果皮中分別含有7種和3種特有特征香氣成分，2個(gè)品種果皮中特有的特征香氣成分大多屬于醇類(lèi)，薰衣草醇（薰衣草味）、香芹醇（薄荷味）、橙花醇（花香味）和香葉醇（果香味）是香水檸檬果皮特有的特征香氣成分，紫蘇醇（青香味）和香茅醇（玫瑰味）是泰吹檸檬果皮特有的特征香氣成分。共有特征香氣成分的香氣值差異和各自特有的特征香氣成分是2個(gè)品種檸檬果皮香氣差異的原因。

3.2 檸檬成熟過(guò)程中酚類(lèi)成分的變化

酚類(lèi)廣泛存在于果蔬中，具有抗氧化、抗炎、 抗菌和抗衰老等生物活性，對(duì)人類(lèi)營(yíng)養(yǎng)和健康有重要貢獻(xiàn)[28]。Dong Xinying等[9]研究表明檸檬果皮中主要的酚酸為對(duì)-香豆酸和阿魏酸，主要的類(lèi)黃酮是圣草次苷和橙皮苷。而Xi Wanpeng等[7]研究表明檸檬果皮中主要的酚酸為咖啡酸和綠原酸，主要的黃烷酮為橙皮苷，主要的多甲氧基黃酮為川陳皮素，本研究結(jié)果與其較為一致。多甲氧基黃酮是柑橘特有的一類(lèi)高度甲氧化的黃酮類(lèi)化合物，因具有甲基基團(tuán)而表現(xiàn)出弱極性，更容易通過(guò)細(xì)胞膜運(yùn)輸，表現(xiàn)出更強(qiáng)的生物活性[29]，本研究中泰吹檸檬花后186 d果皮中甜橙黃酮、川陳皮素和橘皮素含量分別為76.25、447.37 μg/g和137.82 μg/g，香水檸檬花后186 d果皮中僅檢測(cè)到川陳皮素，其含量為5.57 μg/g，而Zhao Ziyan等[30]在尤力克檸檬果皮中未檢測(cè)出以上3種多甲氧基黃酮，泰吹檸檬果皮中有高含量的多甲氧基黃酮，具有較高的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值，適合進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。隨果實(shí)成熟香水檸檬和泰吹檸檬果皮中酚酸總量和類(lèi)黃酮總量均呈下降趨勢(shì)，與Dong Xinying[9]和Multari[31]等的研究結(jié)果相同，而與徐貴華等[32]報(bào)道隨成熟度提高蜜橘果皮中酚酸含量先升高后降低的結(jié)果不同，這可能與柑橘品種、取樣時(shí)期、生長(zhǎng)環(huán)境和提取方法等因素有關(guān)。

4 結(jié) 論

本研究通過(guò)分析2個(gè)抗病檸檬品種不同成熟階段果皮中的揮發(fā)物和酚類(lèi)成分發(fā)現(xiàn)，品種和成熟期是影響檸檬果皮中揮發(fā)物和酚類(lèi)成分的重要因素。2個(gè)品種檸檬果皮共檢出86種揮發(fā)性成分，可分為6 類(lèi)，2種檸檬相比，香水檸檬果皮中倍半萜和醛類(lèi)含量較高，泰吹檸檬果皮中單萜和醇類(lèi)含量較高，香水檸檬果皮中單萜、倍半萜、醛類(lèi)、酯類(lèi)的含量在成熟期間發(fā)生顯著變化，單萜、倍半萜呈先下降后上升再下降的變化趨勢(shì)，酯類(lèi)呈先上升后下降的趨勢(shì)，醛類(lèi)呈上升趨勢(shì)；泰吹檸檬果皮中單萜、醇類(lèi)、醛類(lèi)、酯類(lèi)和酮類(lèi)的含量在成熟期間發(fā)生顯著變化，單萜、醇類(lèi)、醛類(lèi)、酯類(lèi)和酮類(lèi)均呈先下降后上升的趨勢(shì)。2種檸檬果皮中共檢測(cè)出15種酚類(lèi)物質(zhì)，包括4種酚酸、6種黃烷酮、2種黃酮和3種多甲氧基黃酮，2個(gè)品種檸檬果皮中酚酸總量差異不大，泰吹檸檬果皮中類(lèi)黃酮總量明顯高于香水檸檬，隨成熟度提高，香水檸檬和泰吹檸檬果皮中酚酸總量和類(lèi)黃酮總量均顯著下降。香水檸檬和泰吹檸檬果皮中含有豐富的植物化學(xué)成分，是優(yōu)良的品種資源，適合進(jìn)一步用于雜交育種和開(kāi)發(fā)利用。