郭長(zhǎng)英 李慧冬 陳子雷 盧 琦 毛江勝 丁蕊艷

（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（濟(jì)南），山東省食品質(zhì)量與安全檢測(cè)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250100）

辣椒在16世紀(jì)后期傳入我國(guó)，目前已成為我國(guó)種植面積最大的蔬菜，總產(chǎn)量達(dá)到6 400多萬t，占全國(guó)蔬菜總產(chǎn)值的11.36%[1]。辣椒是消費(fèi)功能最多的蔬菜之一，有菜用、調(diào)味、藥用等功能。此外，據(jù)報(bào)道，食用辣椒和因?yàn)樾呐K病、呼吸道疾病引起的死亡呈現(xiàn)典型負(fù)相關(guān)[2～3]。

氟嗎啉是由沈陽化工研究院于1994年研制開發(fā)的第一個(gè)具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)且商品化的新型殺菌劑，其對(duì)霜霉、疫霉病害有良好的防治效果[4～6]，因此，被廣泛應(yīng)用于辣椒的種植過程中。氟嗎啉殘留檢測(cè)方法主要有QuEChERS或固相萃取技術(shù)結(jié)合液相色譜法[7]、氣相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法[8～9]、液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法（LC—MS/MS）[10]。其中，液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法因其較高的靈敏度、較強(qiáng)的分離能力和較廣的適應(yīng)性等優(yōu)勢(shì)，已成為農(nóng)藥殘留分析的首選檢測(cè)方法。GB 2763—2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[11]已制定81種農(nóng)藥在辣椒中的最大殘留限量（MRL），但是尚未制定氟嗎啉在辣椒中的最大殘留限量。與此同時(shí)，有關(guān)氟嗎啉在辣椒中的殘留檢測(cè)方法及對(duì)我國(guó)居民的膳食風(fēng)險(xiǎn)研究尚未見報(bào)道。本文通過用1年時(shí)間在山東、浙江、安徽、北京、廣西、湖南6地的最終殘留試驗(yàn)研究了氟嗎啉在辣椒中的殘留水平，并通過其中浙江、湖南2地的殘留消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)研究了氟嗎啉在辣椒中的殘留消解動(dòng)態(tài)，同時(shí)結(jié)合氟嗎啉在我國(guó)的登記情況和我國(guó)居民的膳食結(jié)構(gòu)，對(duì)普通人群的膳食風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了評(píng)估，以期為氟嗎啉在辣椒上的合理使用及最大殘留限量的制定提供依據(jù)。

一、材料與方法

（一）儀器與試劑Agilent 6460液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司）；IKA T25高速勻漿機(jī)（德國(guó)IKA公司）；SIGMA 2K高速離心機(jī)（美國(guó)Sigma公司）。

氟嗎啉標(biāo)準(zhǔn)品（1 000μg/mL），由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所提供。50%錳鋅·氟嗎啉可濕性粉劑（沈陽化工研究院）。乙腈和甲醇（色譜純，美國(guó)Thermo Fisher公司）；氯化鈉（分析純，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)有限公司）；純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

（二）檢測(cè)條件

1.液相條件。色譜柱為Agilent Poroshell 120 EC—C18（150 mm×3.0 mm，2.7μm）；流動(dòng)相A相為0.1%甲酸水溶液（體積分?jǐn)?shù)），B相為甲醇，流速0.3 mL/min，進(jìn)樣量2μL，柱溫35℃，運(yùn)行時(shí)間6 min。采用梯度洗脫程序，梯度變化見表1。

表1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜梯度洗脫程序

2.質(zhì)譜條件。電離模式為ESI；掃描方式為正離子掃描；檢測(cè)方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；干燥氣溫度325℃；干燥氣流速8 L/min；鞘氣溫度375℃；鞘氣流速11 L/min；霧化器壓力為35 psi。定量離子為m/z372.2/285，定性離子為m/z372.2/165，碰撞能量20 eV/40 eV，去簇電壓130V。

（三）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制將1 000μg/mL的氟嗎啉標(biāo)準(zhǔn)品溶液用甲醇稀釋配制得到1、0.5、0.2、0.1、0.01、0.001μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述液相、質(zhì)譜檢測(cè)條件下進(jìn)行測(cè)定，以氟嗎啉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)x，監(jiān)測(cè)離子峰面積為縱坐標(biāo)y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。外標(biāo)法定量。

基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，用辣椒空白樣品提取液稀釋，配制成系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（四）樣品提取與凈化稱取10 g辣椒樣品于50 mL離心管中，加入乙腈20 mL，高速勻漿1 min，再加入5 g氯化鈉，以3 000 r/min離心5 min，靜置分層。取1 mL上層有機(jī)相，加入1 mL甲醇水（V∶V＝1∶1）混勻，過0.22μm濾膜待測(cè)。

（五）田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)依據(jù)NY/T 788—2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[12]和《農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》[13]設(shè)置試驗(yàn)小區(qū)，小區(qū)間設(shè)保護(hù)帶，另設(shè)空白對(duì)照小區(qū)。50%錳鋅—氟嗎啉可濕性粉劑在辣椒上推薦使用劑量為58.5～97.5 g a.i./hm2（制劑量900～1 500 g/hm2），在辣椒發(fā)病初期施藥，施藥次數(shù)3次，施藥間隔7～10 d，施藥方法為噴霧，安全間隔期3 d。

采樣方式：采用隨機(jī)的方法在小區(qū)內(nèi)采集10個(gè)以上采樣點(diǎn)辣椒（總質(zhì)量≥1 kg），剁碎分取500 g樣品裝入容器中，容器內(nèi)外各貼上標(biāo)簽，保存在—20℃冰箱中待測(cè)。

1.最終殘留試驗(yàn)。設(shè)置高劑量和低劑量2個(gè)處理組。低劑量為50%錳鋅—氟嗎啉97.5 g a.i./hm2（制劑量1 500 g/hm2），藥液量為0.067 L/m2。高劑量為低劑量的1.5倍，其他條件相同。于辣椒生長(zhǎng)至1/2大小時(shí)施藥三四次，施藥間隔7 d，末次施藥后3、5、7 d采樣。

2.殘留消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)。在辣椒生長(zhǎng)至1/2大小時(shí)，按最終殘留試驗(yàn)高劑量施藥1次，分別在施藥后2 h及1、3、5、7、10、14、21 d采樣。

（六）膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估采用公式（1）、公式（2）計(jì)算。

公式（1）、公式（2）中，NEDI為國(guó)家估算每日攝入量 （mg/kg bw）；Fi為某一食物的居民日均攝入量（kg）；STMRi為氟嗎啉在某一食物中的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值（mg/kg）；bw為中國(guó)居民的平均體重（kg）；RQ為風(fēng)險(xiǎn)商，RQ值越高表示接觸農(nóng)藥的風(fēng)險(xiǎn)越高，RQ＞100%表示存在不可接受的較大風(fēng)險(xiǎn)；ADI為每日允許攝入量（mg/kg bw）[14～16]。

二、結(jié)果與討論

（一）液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件的優(yōu)化將氟嗎啉標(biāo)準(zhǔn)品采用流動(dòng)注射進(jìn)樣，分別采用電噴霧正、負(fù)離子（ESI+/ESI—）模式對(duì)其進(jìn)行母離子掃描。結(jié)果表明，當(dāng)使用ESI+模式掃描時(shí)，氟嗎啉的準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+響應(yīng)值較準(zhǔn)分子離子峰[M—H]—高，故采用ESI+模式，得到氟嗎啉的分子離子為m/z372.2。同時(shí)對(duì)子離子、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，選出響應(yīng)值最高的2組離子對(duì)，并獲得各離子對(duì)的最優(yōu)錐孔電壓和碰撞能量，將響應(yīng)值最大的一組離子對(duì)設(shè)為定量離子對(duì)，響應(yīng)強(qiáng)度相對(duì)較弱的一組離子對(duì)設(shè)為定性離子對(duì)。

采用甲醇—水作為流動(dòng)相對(duì)氟嗎啉進(jìn)行梯度洗脫，氟嗎啉在LC—MS/MS上的保留時(shí)間為4.94 min。結(jié)果表明，水相中加入甲酸不僅可以改善色譜峰形，還可以提高目標(biāo)化合物的離子化效率[17]。經(jīng)研究比較，在水相中加入0.1%的甲酸，氟嗎啉出峰效果最好（見圖1），因此選擇0.1%甲酸水—甲醇為液相的流動(dòng)相。

圖1 氟嗎啉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1μg/mL）的色譜圖

（二）方法的線性范圍及檢出限結(jié)果表明，在0.001～1μg/mL范圍內(nèi)，氟嗎啉的峰面積與對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為y＝2 243 712x+45 709，相關(guān)系數(shù)R2為0.996 8。氟嗎啉的定量限為0.01 mg/kg （以最低添加濃度為定量限），以3倍信噪比計(jì)算氟嗎啉的檢出限為0.02μg/kg。

（三）方法的準(zhǔn)確度與精密度在空白辣椒樣品中添加氟嗎啉標(biāo)準(zhǔn)溶液，以回收率評(píng)價(jià)方法的準(zhǔn)確度，以回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）評(píng)價(jià)方法的精密度。分別向空白辣椒樣品中添加氟嗎啉的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，添加水平為0.01、0.10、1.00 mg/kg，每個(gè)添加水平設(shè)置5份平行樣品，結(jié)果見表2。氟嗎啉在辣椒中的添加回收率在83%～104%，RSD在4%～6%之間，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。雖然有文獻(xiàn)報(bào)道[8]采用QuEChERS—?dú)庀嗌V—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定黃瓜中氟嗎啉的定量限可以達(dá)到0.005 mg/kg，回收率達(dá)到94%～97%，RSD在6%～10%之間，但是辣椒的基質(zhì)效應(yīng)高于黃瓜，且采用氣相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定氟嗎啉的保留時(shí)間為24.3 min，而本方法保留時(shí)間僅為4.9 min，在滿足分析要求的情況下大大縮減了檢測(cè)時(shí)間。

表2 氟嗎啉在辣椒中添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

（四）氟嗎啉在辣椒中的消解動(dòng)態(tài)按試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行操作和取樣測(cè)定，分別得到50%錳鋅—氟嗎啉可濕性粉劑在湖南和浙江2地辣椒上的消解動(dòng)態(tài)結(jié)果（見圖2和表3）。由試驗(yàn)數(shù)據(jù)及分析結(jié)果可知，氟嗎啉在辣椒中的殘留量隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低，其消解過程基本符合動(dòng)力學(xué)一級(jí)降解模型。其動(dòng)力學(xué)一級(jí)方程分別為：Ct＝0.146 7e—0.201t（浙江）；Ct＝0.381 8e—0.168t（湖南）；半衰期（t1/2）分別為3.4 d和4.1 d，均較短，說明氟嗎啉屬于易降解農(nóng)藥（t1/2＜30 d）[18]。此結(jié)論與其他學(xué)者文獻(xiàn)中的研究結(jié)論一致，如王春偉等[19]研究了氟嗎啉在人參根、莖、葉和土壤中的殘留動(dòng)態(tài)，得出其半衰期為12.58～19.69 d，為易降解農(nóng)藥；鄭鴻薇[20]對(duì)氟嗎啉在黃瓜植株體內(nèi)的代謝進(jìn)行了系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)氟嗎啉在施藥后38 d消解率達(dá)98.3%，半衰期為6.30 d，為易降解農(nóng)藥；閆小軍[21]開展的田間試驗(yàn)結(jié)果表明，氟嗎琳在煙葉和植煙土壤中的半衰期分別為11.85～13.72 d和15.26～15.68 d，說明氟嗎琳在煙田中的降解較快，屬較易降解農(nóng)藥。

圖2 氟嗎啉在辣椒中的消解趨勢(shì)

表3 氟嗎啉在辣椒中的消解動(dòng)態(tài)參數(shù)

（五）氟嗎啉在辣椒中的最終殘留量及膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估1年6地的樣品試驗(yàn)結(jié)果表明，于末次施藥后3、5、7 d采樣的辣椒樣品中氟嗎啉殘留中值分別為0.17、0.091、0.055 mg/kg；殘留最大值分別為0.30、0.27、0.15 mg/kg。總體上看，在相同的施藥劑量和施藥次數(shù)條件下，隨著采樣間隔時(shí)間的延長(zhǎng)，各試驗(yàn)點(diǎn)辣椒中氟嗎啉的殘留量均隨之下降。

由于辣椒屬于生長(zhǎng)較快的作物，試驗(yàn)根據(jù)3 d采收間隔樣品殘留數(shù)據(jù)評(píng)估氟嗎啉在辣椒中的長(zhǎng)期膳食風(fēng)險(xiǎn)。參考世界衛(wèi)生組織（WHO）的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)[22]，中國(guó)居民日均辣椒消費(fèi)量（0.008 2 kg）。參考GB 2763—2021，氟嗎啉ADI值為0.16mg/kg bw。中國(guó)居民的平均體重為63 kg。根據(jù)公式（1）和公式（2）計(jì)算得出，氟嗎啉在辣椒中的風(fēng)險(xiǎn)商RQ為0.013 8%，遠(yuǎn)低于100%?；陲L(fēng)險(xiǎn)評(píng)估最大化原則，對(duì)氟嗎啉所有登記作物進(jìn)行膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。查詢中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)可知，氟嗎啉在我國(guó)已登記用于番茄、辣椒、黃瓜、馬鈴薯、葡萄、荔枝、人參等7種作物。將所有登記作物進(jìn)行攝入量和食品中農(nóng)藥最大殘留限量查詢，結(jié)果見表4。氟嗎啉在所有登記作物中風(fēng)險(xiǎn)商RQ為4.721 9%，遠(yuǎn)低于100%。因此，氟嗎啉在辣椒中的殘留量對(duì)我國(guó)一般人群健康不會(huì)產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。

表4 氟嗎啉在所有登記作物中的長(zhǎng)期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

王春偉等[19]以20%氟嗎啉可濕性粉劑為供試農(nóng)藥，在集安和撫松2地，以333.33～666.67 ga.i./hm2劑量施藥，施藥后21、28、35、60 d采集人參根、莖、葉樣品，最終殘留結(jié)果表明，2地21～60 d采集的人參根、莖、葉中氟嗎啉殘留量均＜0.10 mg/kg。王春偉等參照我國(guó)規(guī)定的氟嗎啉在黃瓜、葡萄、荔枝上的最大殘留限量值及試驗(yàn)數(shù)據(jù)，建議20%氟嗎啉可濕性粉劑在鮮人參和干人參中的最大殘留限量值分別設(shè)定為0.20、0.50 mg/kg，安全間隔期為21 d。雖然此研究與本文試驗(yàn)作物不同，但試驗(yàn)方法相仿，且同樣得到了氟嗎啉在作物中風(fēng)險(xiǎn)商值很小，屬可接受水平，沒有明顯膳食風(fēng)險(xiǎn)的結(jié)論。

三、結(jié)論

本文建立了辣椒中氟嗎啉的液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜分析方法。采用建立的方法對(duì)浙江、湖南2地開展殘留消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)的辣椒樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，氟嗎啉在辣椒中的殘留消解動(dòng)態(tài)符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，其在浙江、湖南試驗(yàn)點(diǎn)的半衰期分別為3.4、4.1 d，降解速率較快。通過對(duì)6地開展最終殘留試驗(yàn)的辣椒樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，末次施藥后間隔3 d采集的辣椒樣品中氟嗎啉殘留中值為0.17 mg/kg，殘留最大值為0.30 mg/kg。經(jīng)膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，氟嗎啉殘留量對(duì)我國(guó)一般人群不會(huì)產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。目前，我國(guó)尚未制定辣椒中氟嗎啉的最大殘留量，其他國(guó)家同樣未制定。依據(jù)MRL為最大殘留量的2倍并向上進(jìn)位的制定原則，推薦氟嗎啉在辣椒上的最大殘留限量為0.7 mg/kg。